全 文 ：棣棠花组织培养与快速繁殖技术研究
张茹琴　(青岛农业大学农学与植物保护学院 , 山东青岛266109)
摘要　[目的]提高棣棠花育苗繁殖速度。[ 方法] 以棣棠花嫩茎为外植体 ,进行组织培养与快速繁殖研究。[结果] 在MS+2.0 mg/L
6-BA+0.2 mg/L NAA培养基中 ,簇生芽分化数最多 ,质量最好 ,分化率达 100%;在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1 mg/ LNAA培
养基中 ,增殖倍数最高 ,为 11.87;在 1/2 MS+0.1 mg/L NAA培养基中生根效果最好 ,每个嫩茎基部有 3～ 5条根;炼苗成功后移栽成活率
达 96%。[结论] 诱导簇生芽的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA ,继代培养的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5
mg/L KT+0.1 mg/L NAA ,再生苗在 1/2 MS+0.1 mg/ LNAA的培养基上生根效果较好。
关键词　棣棠花;嫩茎;组织培养;快速繁殖
中图分类号　S 603.6　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)17-07877-02
Study on the Tissue Culture and Rapid Multiplication of Kerria japonica
ZHANGRu-qin　(College of Agronomy and Plant Protection , Qingdao Agricultural University , Qingdao, Shandong 266109)
Abstract　[ Objective] The research aimed to improve the nursery propagation rate of Kerria japonica.[Method] Tender stem of K.japonica was used
as explants to investigate the rapid propagation technology.[ Result] InMS+2.0 mg/L 6-BA+0.2mg/LNAAmedium , the number of clustered bud dif-
ferentiation was the highest , the differentiation rate reached to 100%, and the quality of clustered bud was the best;In MS+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L
KT+ 0.1 mg/L NAA medium , the proliferation multiples of the budwas the highest , reached 11.87;1/2MS+0.1 mg/L NAAmedium was the best for
rooting , there were 3-5 roots in every tender stem;the transplanted survival rate was 96%.[ Conclusion] MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA was
the optimal medium to induce clustered bud during tender stem culture;The best medium for subculture was MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1
mg/L NAA , and medium 1/2 MS+0.1 mg/L NAA have a better effect on regeneration seedlings rooting.
Key words　Kerria japonica;Tender stem;Tissue culture;Tissue culture;Rapid propagation
作者简介　张茹琴(1972-),女 ,甘肃定西人 ,博士 ,讲师 ,从事植物抗
病性研究。
收稿日期　2009-03-09
　　棣棠花[ Kerria japonica (Linn.)DC.]为蔷薇科棣棠属落
叶丛生小灌木。高 1.5～ 2.0m ,冠幅2.0 m左右。小枝绿色 ,
光滑 ,有纵棱。单叶互生 ,叶片卵状或卵状椭圆形 ,长 2.0～
8.0 cm 。花金黄色 ,两性 ,单生侧枝顶 ,花瓣 5 ,花期 4 ～ 6月。
生长于海拔 200～ 3 000 m的山区沟谷 、山涧 、岩旁或灌木丛
中。重瓣棣棠花在我国各地庭院均有栽培 ,棣棠花偶见[ 1] 。
棣棠花是一种具有较高观赏价值 、推广应用前景好的野生花
卉[ 2] 。据《全国中草药汇编》记载 ,棣棠花以嫩枝叶及花入
药 ,性苦 、涩 ,味平 ,花有化痰止咳的功效 ,茎 、叶具有祛风利
湿 、解毒的功效 ,用于治疗风湿关节痛 、小儿消化不良;外用
治痈疖肿毒 、荨麻疹 、湿疹等。但棣棠花结实能力差 ,种子繁
殖困难 ,分株 、扦插育苗速度极慢 。为此 ,笔者研究了棣棠花
组织培养与快速繁殖技术 ,旨在提高棣棠花育苗繁殖速度。
1　材料与方法
1.1　材料处理　材料来源于青岛农业大学南门前园林花
园 ,取棣棠花当年生嫩茎 15 cm左右 ,剪去小叶 ,用自来水冲
洗干净 ,将嫩茎切成 0.5 ～ 1.0 cm长小段 ,在超净工作台上用
70%酒精浸泡 10 s后 ,转入 1%次氯酸钠溶液中浸泡 2 min ,
然后用无菌水冲洗 5次 ,用消毒滤纸将枝条表面水分吸干 ,
接种在诱导培养基上 。
1.2　培养基　诱导簇生芽分化的培养基为MS+500 mg/L
LH+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂 ,pH值 5.0 ,附加各种不同浓度
配比的激素 ,具体见表 1;继代培养基为MS+30 g/L蔗糖+8
g/L琼脂 ,pH值 5.0 ,附加各种不同浓度配比的激素 ,具体见
表 2;生根培养基为 1/2MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂 ,pH值
5.0 ,附加各种不同浓度配比的激素 ,具体见表 3。培养基在
压力 1.5 kg/cm2 、121 ℃湿热条件下灭菌 20 min。培养温度
(20±2)℃,每日光照 14 h ,强度 2 000 lx[ 3] 。
2　结果与分析
2.1　簇生芽诱导　棣棠花嫩茎切段分化能力较强 ,培养 3
周后从茎节处逐渐分化出幼芽 ,35 d 后簇生芽数量为 3 ～ 5
个 ,长 1 ～ 3 cm 。由表 1可知 ,在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2
mg/L NAA的培养基中 ,簇生芽分化数量最多 ,质量最好 ,分
化率达 100%;在其他激素配比的培养基上 ,簇生芽都有不同
程度的分化 ,但都不及该组合理想。
表 1　不同激素配比对棣棠花簇生芽分化的影响
Table 1　Effect of different hormone proportion on the clustered bud differ-
entiation of K.japonica
NAA
mg/ L 6-BAmg/ L
接种数
Inoculated
number
分化数
Differentiated
number
分化率∥%
Differentiation
rate
0 1.0 24 　　　15 　　　　60.0
0.1 1.0 24 12 50.0
0.2 1.0 24 17 70.0
0 2.0 24 22 90.0
0.1 2.0 24 21 88.0
0.2 2.0 24 24 100.0
0 3.0 24 17 80.0
0.1 3.0 24 19 77.0
0.2 3.0 24 13 55.0
0.2 4.0 24 3 12.5
2.2　继代增殖培养　将初代培养所得的簇生嫩茎切成
0.5～ 1.0 cm长的小段转入增殖培养基上培养 ,4周后增殖结
果因激素配比不同而异 。嫩茎增殖倍数随细胞分裂素浓度
的增高而增大 ,但浓度超过 2.0 mg/L时又会抑制芽苗的增
殖 ,且有少量玻璃化现象产生。由表 2可见 ,在 MS+1.0
mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1 mg/L NAA的培养基中 ,增殖
倍数最高 ,为 11.87 ,且芽苗健壮。
2.3　生根培养　将继代培养所得的嫩茎切下转入生根培养
基中培养 ,20 d后观察 ,以 1/2 MS+0.1 mg/L NAA的培养基
生根效果最好(表 3),每个嫩茎基部有根 3 ～ 5条 ,长 2 ～ 3
安徽农业科学, Journal of Anhui Agri.Sci.2009, 37(17):7877-7878　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　金琼琼　责任校对　张士敏
cm ,成为完整的再生植株。
2.4　移栽　将生根后的试管苗不开盖在温室中放置 6 d
表2　不同激素配比对棣棠花再生嫩茎增殖的影响
Table 2　Effect of different hormone proportion on the propagation of
regenerative tender stem of K.japonica
NAA
mg/ L 6-BAmg/L KTmg/ L
接种块数
Number of
inoculated plantlets
4周后苗数
Number of plant
lets after 4 weeks
增殖倍数
Proliferation
times
0.05 　0.5 　0 24 　　　69 　 2.86
0.10 1.0 0 24 187 7.78
0.10 2.0 0 24 199 8.31
0.05 0 0.5 24 52 2.16
0.10 0 1.0 24 103 4.27
0.10 0 2.0 24 196 8.15
0.05 0.5 0.5 24 141 5.85
0.10 1.0 0.5 24 285 11.87
0.10 0.5 1.0 24 200 8.33
0.20 1.0 1.0 24 158 6.57
表 3　不同生长素组合对棣棠花生根的影响
Table 3　Effect of different auxin combinations on the rooting of K.japonica
IBA
mg/ L NAAmg/L
接种数
Inoculated
number
平均根数
Average number
of roots
生根率∥%
Rooting
rate
0 　 0 24 1.9 　　　　68.8
0 0.5 24 2.7 82.4
0.5 0 24 3.2 85.7
0 0.1 24 4.3 100.0
0.1 0 24 3.2 97.8
0.1 0.1 24 2.6 95.5
后 ,逐渐开盖放置 3 d ,完全开盖后放置 3d ,然后移栽于蛭石∶
森林土为 1∶1(体积比)的基质中 ,用塑料薄膜覆盖 , 2周后检
查 ,成活率达 90%左右。20 d后将成活的幼苗移至森林土∶
田园土为 1∶1(体积比)的基质中 ,株行距为 15 cm×20 cm ,注
意湿度和遮阴 , 30 d后成活率达 96%。当移栽苗长至 20 ～ 25
cm时 ,带土移栽至大田里 ,灌足水 ,缓苗 1 周后开始旺盛
生长 。
3　小结与讨论
试验结果表明 ,细胞分裂素 6-BA和生长素 NAA的浓度
配比对外植体的诱导具有显著影响 ,在棣棠花分化培养阶
段 ,MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA对丛生芽的诱导率
较高 ,为 100.0%。在增殖培养阶段 ,细胞分裂素 6-BA是对
芽苗增殖产生明显影响的因素 ,但当浓度较高时会使芽苗出
现玻璃化现象 。
在整个试验中 ,生长素NAA对芽分化的影响并不十分
明显 ,但对根的发育有显著影响 ,再生嫩茎在 1/2 MS+0.1
mg/L NAA的培养基上生根率达 100%,且新根发育良好 。植
株苗外形美观 、色泽深绿 ,移栽后生长良好。移栽过程中最
重要的是要保持土壤湿润 ,对幼苗要遮阴 ,避免阳光直射 ,基
质的 pH 值不能超过 6.0 ,才能使幼苗有较高的成活率和较好
的长势。
参考文献
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的 2 ,4-D对胚性愈伤组织的诱导有抑制作用且容易导致愈
伤组织的褐化现象 ,只有当 2 , 4-D浓度为 2.0mg/L时 ,胚性
愈伤组织的诱导率达最大值 ,得到最好的培养效果 。
2.2.2　6-BA浓度对愈伤组织诱导的影响。单独使用 6-BA
容易使外植体产生玻璃化 ,影响愈伤组织的形成 ,当在含一
定浓度的 6-BA与 2 , 4-D培养基上培养 30 ～ 40 d后 ,愈伤组
织即可发生 。
3　讨论
3.1　羽毛针禾组织培养中褐变问题　在羽毛针禾无菌苗
的叶片诱导愈伤组织时褐变现象非常严重 ,因此 ,该试验采
取了一些措施:①在培养的初期 , 间隔几天的时间将外植
体转移到新鲜的培养基上 , 以消除有毒物质的危害;②幼
龄材料一般都比成龄材料褐变轻 ,在羽毛针禾刚长出幼叶
时就进行试验;③采用暗培养 ,光照可以激活多酚氧化酶使
褐变加剧。以上措施都不能完全避免褐变 ,羽毛针禾组织
培养中褐变的克服还需进一步尝试 。
3.2　羽毛针禾愈伤组织培养的生长周期问题　在该试验
中 ,虽然由羽毛针禾的无菌苗成功诱导出了愈伤组织 ,但诱
导周期过长 ,达到 2个月左右 。这是目前该试验遇到的一
大难点 ,下一步将结合其他激素进行合理的激素配比试验 ,
以达到缩短诱导愈伤组织生长周期的目的 。
参考文献
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