全 文 ：高效液相色谱法测定单面针中木兰花碱的含量
吴润菁， 王欢， 祝晨蔯， 林朝展
（广州中医药大学临床药理研究所， 广东广州 510405）
单面针基源为芸香科花椒属 （Zanthoxylum
Linn．） 植物蚬壳花椒 Zanthoxylum dissitum Hemsl．，
又名山枇杷、 白三百棒、 九百锤、 大叶花椒等， 其
根、 茎及叶均为药用， 具有活血散瘀、 理气止痛等功
效， 民间常用于治疗腰腿疼痛、 跌打损伤、 疝气痛等
症［1］。 单面针主要含有生物碱、 香豆素、 酰胺、 萜类
等化学成分， 其中生物碱大多具有生理活性［2－4］。 单面
针为妇科千金胶囊、 妇科千金片等的主要原料药， 对
妇科疾病疗效确切。 目前， 该药材质量控制缺乏明确
指标成分。 据报道， 花椒属大多含有木兰花碱［2］， 该
成分在花椒属多个植物中含量较高且易检识［5－6］， 具有
抗炎［7］、 抗菌［8］、 降压［9］等药理作用， 但目前还未见单
面针药材中该成分含量测定方法的研究报道。 本研究
选用木兰花碱为指标成分， 采用正交实验法对单面针
药材中木兰花碱的提取工艺进行优选， 建立单面针药
材中该成分的含量测定方法， 以期为单面针药材质量
评价方法的建立提供更多的依据， 现报道如下。
1 仪器与试药
1． 1 仪 器 Agilent 1260 高 效 液 相 色 谱 仪
（HPLC）、 G4212B 二极管阵列检测器、 G1330B 自
动进样器、 G1316A 柱温箱、 LC－1260 色谱工作站
（安捷伦科技有限公司）； MODEL HN1006 超声清
洗机 （中国华南超声设备厂）； 旋转蒸发仪 （上海
亚荣生化仪器厂）； Sartorius 电子天平 （北京赛多
利斯仪器系统有限公司）。
1． 2 试药 木兰花碱 （成都曼斯特生物科技有限公
司， 批号： MUST－12022901）； 乙腈为色谱纯 （美国
Honeywell 公司）； 水为自制超纯水 （Millipore 超纯
水机）， 其他试剂均为分析纯。 单面针药材为市售药
材， 经广州中医药大学祝晨蔯研究员鉴定为芸香科花
椒属植物单面针 Zanthoxylum dissitum Hemsl．。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件和系统适应性试验 色谱柱 ：
Kromasil C18 （4．6 mm × 250 mm， 5 μm）； 流动相： 乙
腈－0．1 mol ／L磷酸二氢钠溶液 （体积比为 11∶89）； 流
速 1．0 mL ／min； 检测波长 268 nm； 进样量为 10 μL；
柱温 25℃。 在此色谱条件下， 木兰花碱保留时间为
16．1 min， 与邻峰分离度大于 1．5， 峰形对称， 按木兰
花碱计算理论塔板数不低于 25 000， 结果见图 1。
2． 2 对照品储备液的制备 取干燥至恒定质量的
木兰花碱适量， 精密称定， 加甲醇充分溶解并定容
至 25 mL， 制成浓度为 0．50 mg ／ mL 木兰花碱对照
品储备液， 备用。
2． 3 供试品提取工艺考察
2． 3． 1 正交实验 ［10］ 以木兰花碱为指标， 选择提
取溶剂、 溶剂用量、 提取时间、 提取次数作为考察
因素， 通过单因素考察， 每个因素选取 3 个水平，
采用 L9（34） 安排实验， 因素水平安排见表1。
摘要： 【目的】 建立单面针药材中木兰花碱的含量测定方法， 为该药材质量评价方法的建立提供基础。 【方法】 采用高效液相
色谱法， 色谱柱为 Kromasil C18 （4．6 mm × 250 mm， 5 μm）； 流动相为乙腈－0．1 mol ／ L 磷酸二氢钠 （体积比为 11∶89）； 检测
波长 268 nm； 柱温 25℃。 【结果】 木兰花碱在 20 ～ 300 μg ／ mL 范围内线性关系良好 ， r 为 0．999 9； 理论塔板数不低于
25 000； 样品中木兰花碱检测无干扰， 与邻峰分离度大于 1．5， 样品含量在 0．74 ～ 6．61 mg ／ g 之间， 平均含量为 2．99 mg ／ g，
加样回收率为 97％以上， sR为 0．81％。 【结论】 所建方法简单可行， 重复性好， 可用于单面针药材的质量控制。
关键词： 单面针 ／化学； 木兰花碱 ／分析； 色谱法， 高压液相
中图分类号： R284．1 文献标志码： A 文章编号： 1007－3213 （2014） 03－0443－05
DOI： 10． 13359 ／ j． cnki． gzxbtcm． 2014． 03． 028
收稿日期： 2013－11－11
作者简介： 吴润菁 （1989－ ）， 女， 硕士研究生； E－mail： kongzhiyi＠163．com。
通讯作者： 林朝展 （1980－ ）， 男， 博士， 副教授； E－mail： linchaozhan＠sina．com。
基金项目： 国家药品标准提高暨 2015 版药典科研基金项目
广州中医药大学学报
Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine
2014 年 5 月第 31 卷第 3 期
May 2014，Vol． 31，No． 3 443
表 1 单面针中木兰花碱提取因素水平设计表
Table 1 Factors and levels of orthogonal test for
magnoflorine in Z． dissitum
表 2 正交试验直观分析结果
Table 2 Results of orthogonal test for magnoflorine in Z． dissitum
水平
1
A
φ甲醇 ／ ％
80
3 20
2 50
D
n提取 ／次
1
2
3
B
n溶剂用量 ／倍
20
40
30
C
t提取 ／ min
15
30
45
试验号
BA
1 11
极差 0．56 0．47
C
1
0．15
均值 3 1．09 1．04 1．23
2 1 2 2
3 1 3 3
4 2 1 2
5 2 2 3
均值 2 1．65 1．51 1．34
w3次试验木兰花碱含量 ／ （mg·g－1）
w木兰花碱含量 ／ （mg·g－1）
1 2 3
1．19 1．21 1．17 1．19
1．52 1．47 1．43 1．47
0．74 0．76 0．72 0．74
1．66 1．71 1．67 1．68
1．79 1．83 1．81 1．81
6 2 3 1 1．45 1．48 1．43 1．46
7 3 1 3 1．29 1．30 1．19 1．26
8 3 2 1 1．09 1．07 1．11 1．09
9 3 3 2 0．93 0．91 0．95 0．93
均值 1 1．13 1．32 1．30
因 素
D
1
0．11
1．23
2
3
3
1
1．34
2
2
3
1
1．31
2． 3． 2 最佳提取工艺选择 取单面针干燥粉末
（编号 S1） 1．0 g， 精密称定， 按 L9（34）正交表要求，
加入适量的溶剂， 超声提取， 提取液过滤， 滤液减
压浓缩至干， 残渣用甲醇溶解并定容至 25 mL， 摇
匀， 进样前过 0．45 μm微孔滤膜过滤。 采用高效液
相色谱法测定含量， 对木兰花碱进行直观分析和方
差分析。 表 2结果显示： 影响木兰花碱含量的主次
因素为 A＞B＞C＞D， 即提取溶剂＞溶剂用量＞提取时
间＞提取次数； 最佳实验条件为 A2B2C2D2， 即采
用 30 倍量的体积分数 50％甲醇超声提取 2 次， 每
次 30 min。 表 3 结果表明： 各因素没有显著性影
响。 综合直观和方差分析， 虽提取时间和提取次数
略有影响， 但随着时间和次数的增多， 木兰花碱含
量下降， 说明时间太长对生物碱有一定的破坏， 且
从节省时间和溶媒方面考虑 ， 选择最佳工艺为
A2B2C1D1， 即用 30 倍量的体积分数 50％甲醇超
声提取药材 15 min。
图 1 对照品 （A） 和单面针样品 （B） 的 HPLC 色谱图
Figure 1 HPLC results for reference substance （A） and samples of Z． dissitum （B）
t ／ min t ／ min
广州中医药大学学报 2014 年第 31 卷
A B
444
吴润菁， 等． 高压液相色谱法测定单面针中木兰花碱的含量
表 3 正交实验方差分析结果
Table 3 Variance analysis of orthogonal test
偏差平方和
0．541
因素
提取溶剂
0．323溶剂倍量
误差 0．920
自由度
2
2
6
提取时间 0．015 2
提取次数 0．056 2
F 比
1．764
1．053
0．049
0．183
F 临界值
5．14
5．14
5．14
5．14
表 4 加样回收率试验结果
Table 4 Results of recovery test
m取样量 ／ g
0．5002
序号
1
0．50012
6 0．5000
m样品中含量 ／ mg
0．87
0．87
0．87
5 0．5001 0．87
m加入量 ／ mg
0．80
0．80
0．80
0．80
m测定量 ／ mg
1．64
1．65
1．66
1．64
p回收 ／ ％ p平均回收 ／ ％ sR ／ ％
98．2
98．3 0．81
98．8
99．4
98．2
3 0．5000 0．87 0．80 1．62 97．0
4 0．5002 0．87 0．80 1．64 98．2
第 3 期
2． 3． 3 最佳工艺验证 由于优化的提取工艺不包
括在正交设计表中， 因此需进一步验证。 称取药材
1．0 g， 按上述最佳方案进行验证试验， 平行测定
3 份， 计算木兰花碱的含量为 1．74 mg ／ g， 相对标
准偏差 （sR） 为 0．80％。 结果显示： 该提取工艺含
量稳定可行。
2． 3． 4 供试品溶液的制备 取单面针药材粉末
（60℃干燥， 过 4 号筛） 约 1．0 g， 精密称定， 加体
积分数 50％甲醇 30 mL 超声提取 15 min， 提取液
过滤， 滤液水浴上蒸干， 残渣加甲醇充分溶解并定
容至 25 mL， 摇匀， 即得供试品溶液， 进样前通过
0．45 μm微孔滤膜过滤。
2． 4 线性关系考察 精密吸取对照品储备液 80、
200、 400、 600、 800、 1 000、 1 200 μL， 分别置
于 2 mL 容量瓶中， 加甲醇稀释并定容至刻度， 分
别精密吸取上述对照品溶液进样测定， 以峰面积积
分值 （Y） 对进样浓度 （X） 进行线性回归， 得回
归方程 Y ＝62．644X －131．84， r ＝0．999 9， 在 20 ～
300 μg ／ mL范围内线性关系良好。
2． 5 最低检测浓度测定 不断稀释对照品溶液，
分别进样测定， 计算信噪比， 最低检测限和最低定
量限分别以信噪比 3 和 10 为限， 结果得最低检测
限为 4 μg ／ mL， 最低定量限为 10 μg ／ mL。
2． 6 精密度考察
2． 6． 1 仪器精密度试验 精密吸取同一对照品溶
液 ， 重复进样 6 次 ， 记录峰面积并计算 sR 为
0．18％， 表明仪器精密度良好。
2． 6． 2 方法精密度考察
2． 6． 2． 1 重复性试验 分别取同一批单面针药材
粉末约 1．0 g， 共 6 份， 精密称定， 制备供试品溶
液， 进样测定， 计算木兰花碱含量的 sR为 0．69％，
结果表明方法重复性良好。
2． 6． 2． 2 中间精密度考察 在不同时间， 称取同
一批单面针药材干燥粉末约 1．0 g， 共 6 份， 精密
称定， 在相同操作下制备并测定， 计算木兰花碱含
量的 sR 为 0．67％， 表明中间精密度良好。 由不同
分析人员， 称取同一批单面针药材干燥粉末 1．0 g，
共 6份， 精密称定， 制备测定， 计算木兰花碱含量
的 sR为 1．21％， 表明中间精密度良好。
2． 7 稳定性试验 取同一供试品溶液， 分别于配
制后 0、 2、 4、 8、 12、 24 h 测定， 计算木兰花碱
含量的 sR为 1．52％， 表明样品在 24 h内稳定。
2． 8 加样回收率试验 分别称取已知含量的同一
批单面针药材粉末约 0．5 g， 共 6 份， 精密称定，
各加入对照品适量后， 制备供试品， 进样测定， 结
果见表 4。
2． 9 样品含量测定 取各批次单面针药材粉末
（60℃干燥， 过 4 号筛） 约 1．0 g， 精密称定， 制备
供试品， 每批次平行 3份， 进样测定， 外标法［11］计
算含量， 10批样品含量测定， 结果见表 5。
445
表 5 单面针中木兰花碱的含量测定结果 （N＝3）
Table 5 Results of content determination for magnoflorine in Z． dissitum
药材来源样品编号
湖南张家界1
sR ／％
采收时间
2012．06
平均含量
2 湖南张家界 2012．05
3 湖南吉首 2012．07
4 湖南怀化 2011．12
5 贵州 （具体地区不详） 2011．11
10 广东广州 2013．03
收集部位
茎
茎
茎
茎
茎
茎
w木兰花碱 ／ （mg·g－1） sR ／％
1．74 0．8
3．80 2．1
1．05 2．0
1．37 1．9
0．74 1．6
4．95 1．9
2．99
70．2
6 安徽亳州 2013．03 茎 0．79 1．4
7 云南文山 2013．03 茎 6．61 1．2
8 广西 （具体地区不详） 2013．03 茎 4．23 2．7
9 广西贵港 2013．02 茎 4．58 0．5
广州中医药大学学报 2014 年第 31 卷
3 讨论
本研究采用正交实验以木兰花碱为指标， 对提
取药材的溶剂、 溶剂用量、 提取时间、 提取次数
4 个因素进行考察， 每个因素设置了 3 个水平， 最
终确定供试品最佳提取工艺为加 30 倍量的体积分
数 50％甲醇超声提取 15 min。
测试 10 批样品结果显示： 木兰花碱在单面针
中的含量较高， 且不同产地间单面针中木兰花碱的
含量存在较大差异。 然而本研究仅对单面针中木兰
花碱进行测定分析， 未对单面针中其他有效成分的
含量进行研究， 且收集药材产地和批次较少， 研究
还不够全面。 由于不同的产地、 不同的采收期、 不
同生长年限、 不同药用部位等药材的含量可能有所
不同， 所以很难仅用单一成分和不同的产地去评价
药材的质量， 因此还有待于对单面针药材更多不同
产地、 不同采收期、 不同年限、 不同药用部位等样
品进行研究， 并寻找更多有效成分评价药材的质
量。
本研究建立了 HPLC法测定单面针中木兰花碱
的含量， 所建方法简单可行， 重复性好， 为单面针
质量评价提供了一种可借鉴的方法， 以期为单面针
药材质量评价方法的建立提供更多的依据。
参考文献：
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【责任编辑： 黄玲】
446
Simultaneous Determination of Protocatechuic Acid， Catechin and
Epicatechin in Caulis Spatholobi by Fast Liquid Chromatography
ZHANG Min， LIU Cuiting， YAN Ping， LU Jincai， ZHAN Ruoting
（Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering， Ministry of Education Key Laboratory of Chinese Medicinal
Resource from Lingnan， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006 Guangdong， China）
Abstract： Objective To establish a method for simultaneous determination of protocatechuic acid， catechin and
epicatechin in Caulis Spatholobi by fast liquid chromatography． Methods The fast liquid chromatography was
performed on Phenomenex Kinetex XB－C18 column （4．6 mm×100 mm， 2．6 μm） with acetonitrile－acetic acid－
water as mobile phase by isocratic elution （10∶90） ． The flow rate was 1．3 mL ／ min， the column temperature
was 25℃， the detection wavelength was 260 nm， and the injection volume was 2 μL． Results The linearity of
protocatechuic acid， catechin and epicatechin was in the range of 0．091 6～ 0．549 6 μg （r＝0．999 7）， 0．772 ～
3．86 μg （r＝0．999 4） and 0．670 5 ～ 4．023 μg （r＝0．999 7）， respectively， and their average recoveries were
102．96％ （sR＝1．62％）， 99．44％ （sR＝2．68％） and 97．34％ （sR＝1．88％） ． Conclusion The established method is
simple and fast for the determination of protocatechuic acid， catechin and epicatechin in Caulis Spatholobi，
which will supply reference for the quality control of Caulis Spatholobi．
Key words： Caulis Spatholobi ／ chemistry； Catechin ／ analysis； Fast liquid chromatography
Determination of Magnoflorine in Zanthoxylum dissitum Hemsl． by HPLC
WU Runjing， WANG Huan， ZHU Chenchen， LIN Chaozhan
（Institute of Clinical Pharmacology， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510405 Guangdong， China）
Abstract： Objective To develop a practical method for content determination of magnoflorine in Zanthoxylum
dissitum Hemsl．， thus to provide evidence for the quality assessment of Z． dissitum． Methods The separation
and detection were carried out with high performance liquid chromatography （HPLC） on Kromasil C18 （ 4．6
mm ×250 mm， 5 μm） column． The mobile phase consisted of acetonitrile －0．1 mol ／ L sodium dihydrogen
phosphate solution （volume ratio being 11∶89）， the wavelength was set at 268nm， and the column temperature
was 25℃． Results The linear range of magnoflorine was 20－300 μg ／ mL， with the correlation coefficient being
0．999 9． The number of theoretical plates was higher than 25 000． Magnoflorine in the samples was stable and
could be detectable without interference． The resolution of consecutive peaks was higher than 1．5． The content of
magnoflorine in the samples was 0．74－6．61 mg ／ g， and the average content was 2．99 mg ／ g． The recovery was
above 97％ and the relative standard deviation （sR） was 0．81％． Conclusion The established method is simple，
accurate and reproducible， which can be used to control the quality of Z． dissitum．
Key words： Zanthoxylum dissitum Hemsl． ／ chemistry；
Magnoflorine ／ analysis； Chromatography， high performance liquid
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（Continued from page 442）
吴润菁， 等． 高压液相色谱法测定单面针中木兰花碱的含量第 3 期 447