全 文 ：西北林学院学报 2009 , 24(6):121 ～ 123
Journal o f No r thw est Fo restry Univer sity
外源激素影响杜仲叶中次生代谢物含量的研究
①何文广1 , 　苏印泉1＊ , 　徐咏梅2 , 　任　钊1 , 　张付远3 , 　彭金年4
(1.西北农林科技大学 林学院 ,陕西杨陵　712100;2.沈阳宜事达化工有限公司 ,辽宁 沈阳　110117;
3.江西高峰生态农林开发有限公司 ,江西 赣州　341800;4.赣南医学院药学系 ,江西 赣州　341000)
摘　要:通过在杜仲叶面喷施 ABT 生根粉和赤霉素 ,研究其对杜仲叶中次生代谢物京尼平甙酸 、
绿原酸 、总黄酮 、杜仲胶含量的影响 。结果表明:ABT 生根粉处理后 ,杜仲叶中京尼平甙酸的含量
在较长时间段内增加 ,增加幅度超过了 9%;绿原酸 、总黄酮和杜仲胶的含量减少 ,减少幅度较大。
赤霉素在不同的时期 ,对杜仲叶中京尼平甙酸 、绿原酸 、总黄酮和杜仲胶的含量影响效果不同 ,变化
幅度较喷施 ABT 生根粉的小 。
关键词:杜仲;外源激素;次生代谢物
中图分类号:S789.4　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-7461(2009)06-0121-03
Effects of Ex ternal Ho rmones on Secondary Metabolites
in the Leaf of Eucommia ulmoides
HE Wen-guang1 , SU Yin-quan1 ,XU Yong-mei2 ,REN Zhao1 ,
ZHANG Fu-yuan3 ,PENG Jin-nian4
(1.Co llege o f F orest ry , Northwet A&F Universi ty , Yang l ing , Shaan xi　712100 , China;2.Shenyang Eas tar Chem ica l Co., Ltd.,
Shen yang , Liaonin g　110117 , Ch ina;3.J iang xi Gao feng Ecolog ica l Farming and Forest ry Development Limi ted Corporat ion ,
Ganzhou , J ian g xi 　341800 , Ch ina;4.Department o f Pharmacy , Gannan Med ical Col leg e , Ganzhou , J ian g xi 　341000 , Ch ina)
Abstract:The effects of ex t ra ho rmones , such a ABT and GA 3 on the contents of secondary metabolites in
the leaves of Eucommia ulmoides were invest igated.The results showed that ABT can increase the content
of geniposidic acid in a long t ime , the range of variation w as mo re than 9%, but most of the t ime , it w ould
decrease the contents of chlorog enic acid , to tal f lavonoids and gut ta-percha , the range o f variation w as
large too.GA 3 exhibited different impacts on each metabolite wi th less chang ampli tude.
Key words:Eucommia ulmoides;ex ternal hormone;secondary me tabo li te
　　杜仲(Eucommia ulmoides)已有很多年的研究
历史[ ] ,是很有前途的医用和工业原料 。提高杜仲
次生代谢物含量的研究是杜仲开发利用工作的主要
内容之一 ,如果能够找到简便有效的方法提高杜仲
有用次生代谢物的含量 ,无疑大大提高了杜仲的经
济利用价值 ,也有助于简化杜仲有效成分(包括绿原
酸 、京尼平甙 、京尼平甙酸 、桃叶珊瑚甙 、总黄酮 、松
脂醇二葡萄糖甙 、杜仲醇 、杜仲胶等)的提取工艺 ,降
低生产成本 ,提高杜仲在市场中的竞争力[ 1-2] 。
有关外源激素对药用植物离体培养的研究很
多 ,但深入探讨外源激素对药用植物中的次生代谢
物含量影响的研究甚少 ,目前直接以提高杜仲次生
代谢物含量为目的的化控技术研究罕有报道。崔玲
华等[ 3] 研究了外源激素对杜仲胶含量的影响 ,对杜
仲叶中其他成分变化情况却未涉及 ,笔者选用 ABT
生根粉和赤霉素 ,对杜仲叶中次生代谢物含量的影
响进行了初步研究 。
1　材料与方法
1.1　材料
试验材料为西北农林科技大学林学院苗圃 1 a
生杜仲盆栽苗。
① 　收稿日期:2008-11-19　修回日期:2009-06-11
　基金项目:中日(NEDO项目)合作课题(160109);陕西省日元贷款生态环境监测项目(14220302)
　作者简介:何文广 ,男 ,在读硕士 ,从事植物资源开发利用研究。＊通讯作者:苏印泉 ,男 ,教授 ,主要从事植物资源开发利用研究。 E-mail:syq009@126.com。
1.2　主要仪器与试剂
仪器　主要有日本岛津 LC-10ATvp型高效液
相色谱仪 、SPD-10A 紫外光度检测器 、02810281 型
电热恒温水浴锅 、101-1型干燥箱 、SHB-Ⅲ循环水式
多用真 空泵 、RE-52A 型 旋 转蒸 发仪 、Model
C9860A 型超声波提取机 、UV-2000型紫外可见分
光光度计 。
试剂　主要有赤霉素(90%,上海国药集团)、
ABT 生根粉(95%,上海国药集团)、分析纯甲醇 、分
析纯乙醇 、色谱纯甲醇 、芦丁(95%)、NaNO 2 、Al
(NO 3)3 、N aOH 、京尼平甙酸标准品(中国科学院药
检所)、绿原酸标准品(中国科学院药检所)。
1.3　方 法
1.3.1　激素喷施方法　于 7:00-9:00将 50 mg ·
L-1的 ABT 生根粉和赤霉素喷施于盆栽杜仲叶面 ,
对照喷施清水 ,各处理喷施总量一致。每 10 d喷施
1次 ,喷施后 10 d采杜仲叶片 ,每盆采大小一致的叶
片 3片 ,每处理共采 60片叶 ,采后立即杀青 ,冷藏待
用。
1.3.2　次生代谢物提取　称取样品 4 g ,将样品碾
成丝绵状 ,60%乙醇采用回流法在 80℃条件下水浴
加热 ,提取 2次 ,每次 2 h ,过滤 ,滤液合并浓缩 ,用甲
醇定容至 100 mL 的容量瓶中 ,测定活性成分的含
量[ 4] 。滤渣再继续提取杜仲胶 。
1.3.3　杜仲胶提取　杜仲胶的制备采用改进碱浸
法[ 5-6] 。
1.3.4　次生代谢物含量测定　绿原酸 、京尼平甙酸
的含量用反相高效液相色谱法测定[ 7-8] ;总黄酮含量
采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法[ 9] 测定;标准曲线方
程为:A=12.23C-0.021 7(C为浓度 , A 为吸光
度),曲线范围为 0.01 ～ 0.05 mg ·mL -1 ,相关系数
r=0.999 8 ;杜仲胶含量采用重量法测定。
2　结果与分析
2.1　外源激素对杜仲叶中京尼平甙酸含量的影响
由图 1可知 ,喷施 ABT 生根粉和赤霉素后 ,杜
仲叶中京尼平甙酸含量与对照相比 ,有增加同时也
有减少 ,且变化幅度很大。其中 ,喷施 ABT 生根粉
后 ,8月 13日到 9月 4日 ,京尼平甙酸含量增加 ,增
幅超过 9%,特别是 8月 13 日 ,京尼平甙酸含量增
加了 28.84%。而喷施赤霉素后 ,京尼平甙酸含量
的变化处于一种波动状态 ,变化幅度相对较小 。
2.2　外源激素对杜仲叶中绿原酸含量的影响
研究表明 , ABT 生根粉和赤霉素对绿原酸含量
的影响程度相对于京尼平甙酸而言较小 ,增减都在
7%以内(图 2)。喷施 ABT 生根粉后 ,样品中绿原
酸含量相对于对照 ,除了 9月 4日稍有增加外 ,其余
时期均减少;喷施赤霉素后 ,绿原酸含量相对于对照
而言波动较大。
图 1　外源激素对杜仲叶中京尼平
甙酸合成积累的影响
Fig.1　Effect of external hormones on
dynamic accumu lat ion of geniposidic acid
in E.ulmoides leaves
图 2　外源激素对杜仲叶中绿原酸合成积累的影响
Fig.2　Effect of extern al horm ones on dy namic
accum ulation of chlorogenic acid
in E.ulmoides leaves
2.3　外源激素对杜仲叶中总黄酮含量的影响
由图 3可知 ,喷施 ABT 生根粉和赤霉素后 ,杜
图 3　外源激素对杜仲叶中总黄酮积累的影响
Fig.3　Effect of extern al horm ones on dy namic
accumu lation of total f lavon oid s
in E.ulmoides leaves
122 西北林学院学报 24 卷　
仲叶中总黄酮的含量减小 ,且减小的幅度较大 ,平均
超过 6%,8月 13日高达 14%左右。
2.4　外源激素对杜仲叶中杜仲胶含量的影响
喷施 ABT 生根粉后 ,杜仲叶中杜仲胶含量减
少 ,特别是 8月 13日和 9月 4日 ,杜仲胶含量减少
了 15%以上;喷施赤霉素后 ,杜仲胶含量有增加也
有减少 ,变化幅度相对较小(图 4)。
图 4　外源激素对杜仲叶中杜仲胶积累的影响
Fig.4　Ef fect of ex ternal hormones on dynamic
accumulation of gu t ta-percha
in E.u lmoid es leaves
3　结论与讨论
外源激素对杜仲叶中次生代谢物的含量会产生
影响 ,但影响程度不同。喷施 ABT 生根粉在很长
一段时间使杜仲叶中京尼平甙酸含量增加 ,在一定
生长期内使绿原酸 、总黄酮和杜仲胶的含量减少 。
喷施赤霉素后 ,在不同时期对杜仲叶中京尼平甙酸 、
绿原酸 、总黄酮和杜仲胶的含量影响处于波动状态 。
表明外源激素能对杜仲叶中次生代谢物的合成积累
产生影响 ,关键是按照生产目的 ,掌握好喷施时间和
浓度 。
　　1 a生杜仲叶中绿原酸含量较多年生杜仲高 ,达
到 8%左右 ,这与秦振栋等[ 10] 报道的 1 a 生杜仲叶
中绿原酸含量有相似之处。
植物外源激素的使用是一个非常复杂的问题 ,
因为外源激素的使用影响杜仲叶内某些激素的平
衡 ,而且这种关系的改变必然引起其生理的甚至生
态上的反应[ 11] 。因此 ,要达到某一种生产目的时 ,
不同植物所需的外源激素的浓度 、配比 、喷施时期等
均不一样 ,有必要进行进一步研究 ,找出最佳的外源
激素使用方案。
参考文献:
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123第 6 期 何文广等　外源激素影响杜仲叶中次生代谢物含量的研究