全 文 ：78. 0(C －3) ，71． 5(C － 4) ，78． 0(C － 5) ，62． 7(C －
6)波谱数据与文献［4］报道的数据一致，鉴定化合物
3 为白曼陀罗太灵 J(DaturametelinsJ)。
化合物 4 为淡黄色不定形粉末。L － B、Molish 反
应阳性。ESI － MS m /z 639［M + Na］+ ． 13C NMR
(100MHz，MeOD)δ:205． 7(C － 1) ，127． 6(C － 2) ，
147． 8(C －3) ，34． 4(C －4) ，141． 6(C －5) ，128． 4(C －
6) ，64． 8(C － 7) ，36． 4(C － 8) ，40． 5(C － 9) ，51. 0
(C －10) ，24． 6(C － 11) ，40． 8(C － 12) ，43． 6(C －
13) ，53． 2(C －14) ，25． 0(C －15) ，28． 2(C － 16) ，52． 3
(C － 17) ，12． 3(C － 18) ，18． 9(C － 19) ，39． 5(C －
20) ，13． 9(C －21) ，80． 2(C －22) ，30． 8(C － 23) ，160．
6(C －24) ，123． 6(C － 25) ，168． 6(C － 26) ，63． 6(C －
27) ，20． 9(C －28) ，103． 8(C －1) ，75． 0(C －2) ，78． 0
(C －3) ，71． 6(C －4) ，78． 0(C －5) ，62． 7(C － 6)波
谱数据与文献［5］报道的数据一致，鉴定化合物 4 为
DaturataturinA。
化合物 5 为白色不定形粉末。ESI － MS m /z 314
［M + H］+ ． 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ:7． 34(2H，d，
J = 8． 6，H －2，6) ，6． 71(2H，d，J = 8． 6，H － 3，5) ，5． 78
(1H，dd，J = 12． 5，H －7) ，6． 58(1H，d，J = 12． 5Hz，H －
8) ，6． 99(2H，d，J = 8． 4，H － 2，6) ，6． 70(2H，d，J =
8. 4，H － 3，5) ，2． 68(2H，t，J = 7． 6，H － 7) ，2． 36
(2H，d，J = 7． 6，H － 8)． 13CNMR(100MHz，MeOD)δ:
127． 7(C － 1) ，130． 6(C － 2，6) ，116． 3(C － 3，5) ，
160. 6(C － 4) ，141． 8(C － 7) ，118． 4(C － 8) ，169． 2
(C －9) ，131． 3(C －1) ，130． 7(C －2，6) ，116． 7(C －
3，5) ，156． 9(C － 4) ，35． 8(C － 7) ，42． 6(C － 8) ，
56． 4(OCH3 － 3)波谱数据与文献［6］报道的数据一
致，鉴定化合物 5 为 N －对香豆酰酪胺(Trans － N －
p － coumaroyltyramine)。
化合物 6 为无色无定形粉末。Amorphous powder．
ESI － MS m /z 314［M + H］+ ． 13C NMR(100MHz，
MeOD)δ:132． 3(C － 1，2) ，129． 9(C － 3，6) ，133． 6(C
－4，5) ，66． 7(C － 1，1″) ，31． 7(C － 2，2″) ，20． 3(C －
3，3″) ，14． 1(C －4，4″) ，169． 3(C － 1α，2α)。波谱数
据与文献［7］报道的数据一致，鉴定化合物 6 为邻苯
二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate)。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典［M］．北京:化学工业出版
社，2010:138．
［2］ 金泽，王玉琳，姜珊珊，等． 洋金花对帕金森病模型大鼠脑纹状体
组织 SOD、GSH － Px影响的实验研究［J］． 中医药信息，2013，30
(2) :87 － 90．
［3］ 杨炳友．洋金花治疗银屑病有效部位的化学成分和药理作用研究
［D］．哈尔滨:黑龙江中医药大学，2005:35 － 45．
［4］ Lei Ma，Chuan － Ming xie，Li － Hong Hu． Daturametelins H，I，and J:
Three New Withanolide Glycosides from Datura metel L．［J］． CHEM-
istry and BIODIVER － SITY，2006(3) :71 － 72．
［5］ K． Shingu，S． Y ahara，T． Nohara，Chem． Pharm［J］． Bull，1990(38) :
3485．
［6］ 杨炳友，夏永刚，匡海学．洋金花的化学成分研究［J］．中国天然药
物，2010(8) :429 － 432．
［7］ 戴好富，梅文莉，PROKSCH Peter，等． 南海海绵 Hyrtios erectus 的
肿瘤细胞毒活性成分研究［J］． 中国海洋药物，2006:25(5) :1 －
5．
棉团铁线莲总皂苷抗肿瘤活性研究Ⅱ
杨林，钱娇玲* ，蒲利红，束长宇，林鹏
(兰州理工大学，甘肃 兰州 730050)
摘 要:目的:在前期研究确定了棉团铁线莲总皂苷抗肿瘤活性的基础上，进一步阐明其活性部位，提高
棉团铁线莲皂苷的抗肿瘤活性。方法:用大孔树脂对棉团铁线莲总皂苷进行分段。MTT法研究各段体
外抗肿瘤活性。结果:棉团铁线莲根总皂苷 150g，分段后得到洗脱物共 23． 88g，占上样量的 15． 92%。
不同浓度的乙醇梯度洗脱物对 Hep － G2 均有不同程度的抑制作用，其中乙醇浓度 55% ～95%范围洗脱
物对 Hep － G2 的抑制率均大于 60%，而这一范围的洗脱物质量只占洗脱物总质量的 5． 82%。表明小
极性的皂苷对 Hep － G2 有较强的抑制作用。结论:棉团铁线莲皂苷的抗肿瘤活性主要集中在 55% ～
95%乙醇洗脱部分，通过除去活性较小的大极性部位，有望大幅提高棉团铁线莲皂苷抗肿瘤活性。
关键词:棉团铁线莲总皂苷;大孔树脂分段;抗肿瘤活性
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2013)02 － 0051 － 03
收稿日期:2012 － 12 － 10 修回日期:2012 － 12 － 29
基金项目:甘肃省自然科学研究基金计划(0916RJZA007) ;2010 年兰州理工大学国家大学生创新计划
作者简介:杨林(1974 －) ，男，副教授，硕士研究生导师。研究方向:中药学。
* 通讯作者:钱娇玲(1987 －) ，女，硕士研究生。研究方向:微生物与生化药学。E － mail:qianjiaoling@ 163． com
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2013 年第 41 卷第 2 期
Vol. 41，No. 2，2013
中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
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棉团铁线莲(Clematis hexapetala Pall．)为毛茛科
铁线莲属植物，干燥根及根茎入药，是中药威灵仙药材
主要来源植物之一，在我国主要分布于东北及西北几
个省区，甘肃东部分布较多，是甘肃产的唯一威灵仙药
用的来源植物［1 － 2］。具有镇痛、抗利尿、抗疟、降血糖、
降血压、利胆等作用［3］。临床上主要用于治疗风湿痹
痛、屈伸不利、四肢麻木、跌打损伤以及胃癌、食管癌、
体表良性肿瘤等［4 － 5］。棉团铁线莲根化学成分主要是
原白头翁素、白头翁素、白头翁内酯、甾醇、糖类、皂苷、
酚类、氨基酸及生物碱、有机酸、蒽醌等物质［6］。研究
表明［7 － 9］，棉团铁线莲皂苷具有明显的体内外抗肿瘤
活性。本文用大孔树脂将棉团铁线莲总皂苷进行分段
处理，并将各段以 Hep － G2 细胞为研究对象进行体外
抗肿瘤活性测定，阐明各段洗脱物活性，为进一步提高
棉团铁线莲皂苷抗肿瘤活性提供数据支持，为威灵仙
类抗肿瘤药物的开发研究奠定基础。
1 材料
1． 1 样品
棉团铁线莲(2010 年 8 月采自甘肃省合水县连家
砭林区，经原植物及显微组织鉴定，为毛茛科铁线莲属
植物棉团铁线莲 Clematis hexapetala Pall．，标本保存于
兰州理工大学生命科学与工程学院天然药物研究与开
发实验室。)
1． 2 供试肿瘤细胞
人肝癌细胞株 Hep － G2 引自兰州大学细胞培
养室。
1． 3 试剂与仪器
旋转蒸发仪(上海亚荣) ;真空干燥箱(上海博
讯) ;电子分析天平(Mettler － To ledo) ;酶联免疫检测
仪(BioTek) ;CO2培养箱(Binder) ;96 孔细胞培养板
(Costar) ;0． 22μm针孔滤器(GIBCO) ;超净工作台(上
海博讯) ;高压灭菌锅(上海博讯) ;倒置显微镜(O-
LYMPUS) ;血球计数板;RPMI － 1640(美国 GIBCO 公
司) ;无支原体新生小牛血清(杭州四季青) ;胰蛋白酶
(鹏程生物) ;噻唑兰(MTT，鹏程生物) ;丝裂霉素
(MMC，浙江海正药业) ;乙醇(工业级) ;二甲基亚砜，
盐酸，甲醇等均为分析纯。
2 方法
2． 1 棉团铁线莲总皂苷的提取
干燥的棉团铁线莲根粉碎成粗粉，称取 5 000g，用
料液比 1∶ 6 的石油醚回流脱脂 3 次，每次 2h，药渣依
次分别以 95%，80%，70%，60%，50%的乙醇水浴回
流提取 3 次，每次 1h，抽滤，收集滤液，减压回收乙醇，
得不同浓度乙醇提取物。将不同浓度乙醇提取所得的
浸膏分别分散于足量蒸馏水中，1 /3 体积的石油醚萃
取 3 次，水层减压除去残余石油醚，再依次用氯仿、乙
酸乙酯萃取除杂。合并水层，1 /3 体积正丁醇萃取 6
次，正丁醇层减压回收正丁醇，即得到棉团铁线莲总皂
苷粗品。
2． 2 棉团铁线莲总皂苷大孔树脂分段
将新购的 D101 大孔吸附树脂 1500g装入玻璃柱，
用 95%乙醇浸泡 24h，95%乙醇冲洗至流出液加 2 倍
水不产生浑浊，蒸馏水洗至无醇味，5%盐酸溶液冲洗，
浸泡 2h后，蒸馏水洗至中性，5%的氢氧化钠溶液冲
洗，浸泡 2h，蒸馏水洗至中性［10］。
称取棉团铁线莲总皂苷 150g，加适量蒸馏水使其
完全溶解，加在处理好的大孔树脂柱上，先用蒸馏水洗
脱，除去大部分水溶性杂质，然后依次用 5%，10%的
乙醇洗脱，洗脱液颜色由深变浅，至几乎无洗出物时停
止。之后依次用 15%，20%，25%，30%，35%，40%，
45%，50%，55%，60%，65%，70%，75%，80%，85%，
90%，95%的乙醇洗脱，分别收集 15% ～ 95%的洗脱
液，回收乙醇，50℃干燥，恒重，得 17 个乙醇洗脱部分。
2． 3 各乙醇洗脱部分体外抗肿瘤试验(MTT法)
取对数生长期的人肝癌细胞 Hep － G2，用 0． 25%
胰蛋白酶消化，用含 10%小牛血清的 RPMI － 1640 培
养液调节细胞浓度至 1 × 105个 /mL，分别接种于 96 孔
细胞培养板中，每孔加入细胞悬液 100μL，置 5% CO2、
37℃培养箱中过夜，次日细胞贴壁后加药，药物设 2 个
浓度，使其终浓度依次为 1mg /mL 和 0． 5mg /mL，同时
设不加药的阴性对照组和 25μg /mL 的丝裂霉素组，每
组设 5 个重复，每孔加样 100μL 加药培养 48h 后，每
孔加入 5mg /mLMTT20μL，继续培养 4h，然后快速翻板
法弃去孔内液体，每孔加 100μL DMSO，振荡 10min，使
形成的甲瓒结晶充分溶解，于酶标仪上在 490nm 波长
处检测各孔的 OD 值。按公式计算各组的抑制率，抑
制率(RI)= 1 －(药物组 OD值 /阴性对照组 OD值)×
100%。
3 结果
3． 1 棉团铁线莲总皂苷大孔吸附树脂分段结果
利用大孔树脂对棉团铁线莲总皂苷进行分段，结
果见表 1，棉团铁线莲皂苷主要集中在 15% ～ 55%乙
醇洗脱部分，共 22. 75g，占洗脱物总质量的 95. 27%。
说明棉团铁线莲根中的皂苷类成分主要为极性较大的
皂苷，低极性的皂苷类成分含量很少。
3． 2 17 个乙醇洗脱部分体外抗肿瘤活性
将棉团铁线莲 17 个不同乙醇洗脱部分(15% ～
95%)配置成 1mg /mL 和 0． 5mg /mL 待测液，用 MTT
法测定其抗肿瘤活性，结果见表 2，棉团铁线莲总皂苷
经大孔树脂柱分段后，除 40%乙醇洗脱部分在浓度为
0． 5mg /mL 时未表现出抗肿瘤活性外，其他各乙醇洗
脱部分在浓度为 0． 5mg /mL和 1mg /mL时均表现出不
同程度的抗肿瘤活性，而且各乙醇洗脱部分在浓度为
1mg /mL时的抑制率均大于 0． 5mg /mL 时的抑制率。
洗脱物在浓度为 0． 5mg /mL 时，80%乙醇洗脱物的抗
肿瘤活性最大;在浓度为 1mg /mL时，95%乙醇洗脱物
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Acta Chinese Medicine and Pharmacology
2013 年第 41 卷第 2 期
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的抗肿瘤活性最大。当乙醇浓度在 55% ～ 95%的范
围内，乙醇洗脱物对人肝癌细胞 Hep － G2 生长的抑制
率都大于 60%，表明小极性的皂苷成分对 Hep － G2 有
较强的抑制作用，但是这一浓度范围内的洗脱物质量
很少，只占总洗脱物质量的 5． 82%。
表 1 棉团铁线莲皂苷大孔树脂不同浓度乙醇洗脱结果
Tab1． The result ofClematis hexapetala Pall． total saponins by sepatating with macroporous resin
乙醇浓度 15% 20% 25% 30% 35% 40% 45% 50% 55%
所得皂苷(g) 1． 67 3． 98 2． 56 2． 6 3． 63 5． 62 1． 41 1． 02 0． 26
占洗脱物总量比例 7． 34% 17． 49% 11． 25% 11． 43% 15． 96% 24． 7% 6． 19% 4． 48% 1． 14%
乙醇浓度 60% 65% 70% 75% 80% 85% 90% 95%
所得皂苷(g) 0． 20 0． 12 0． 14 0． 23 0． 20 0． 09 0． 09 0． 06
占洗脱物总量比例 0． 88% 0． 53% 0． 62% 1． 01% 0． 88% 0． 39% 0． 39% 0． 26%
表 2 棉团铁线莲总皂苷 17 个大孔树脂乙醇洗脱部位
对 Hep － G2 细胞的抑制率(珋x ± s，n = 3)
Tab． 2 Theinhibitory rate to Hep － G2 of 17 eluate of
Clematis hexapetala Pall． total saponins
浓度
1mg /mL 0． 5mg /mL
OD值 抑制率(%) OD值 抑制率(%)
15% 0． 291 ±0． 116※※ 47． 24 0． 444 ±0． 059※※ 19． 69
20% 0． 350 ±0． 025※※ 37． 29 0． 520 ±0． 019※※ 5． 93
25% 0． 289 ±0． 017※※ 47． 67 0． 457 ±0． 013※ 17． 25
30% 0． 247 ±0． 021※※ 55． 27 0． 389 ±0． 060※※ 29． 50
35% 0． 292 ±0． 026※※ 47． 13 0． 437 ±0． 044※※ 20． 87
40% 0． 478 ±0． 042※※ 13． 51 0． 657 ±0． 017 0
45% 0． 349 ±0． 004※※ 36． 80 0． 448 ±7． 057※※ 18． 76
50% 0． 239 ±0． 018※※ 56． 78 0． 353 ±0． 054※※ 36． 02
55% 0． 156 ±0． 009※※ 66． 27 0． 225 ±7． 029※※ 51． 21
60% 0． 129 ±0． 019※※ 72． 22 0． 147 ±0． 023※※ 68． 22
65% 0． 132 ±0． 004※※ 71． 46 0． 147 ±0． 016※※ 68． 29
70% 0． 121 ±0． 006※※ 73． 84 0． 139 ±0． 026※※ 69． 95
75% 0． 115 ±0． 008※※ 75． 24 0． 329 ±0． 032※※ 28． 86
80% 0． 112 ±0． 015※※ 75． 89 0． 128 ±0． 012※※ 72． 40
85% 0． 119 ±0． 011※※ 74． 27 0． 133 ±0． 023※※ 71． 17
90% 0． 108 ±0． 007※※ 76． 76 0． 253 ±0． 039※※ 45． 23
95% 0． 139 ±0． 014※※ 69． 95 0． 151 ±0． 016※※ 67． 28
注:与空白对照组比较差异显著，※※P ＜ 0． 01。
4 讨论
本文在已确定棉团铁线莲皂苷具有抗肿瘤活性的
基础上，为了进一步阐明活性部位，用大孔树脂对其进
行分段处理;并用 MTT法对各梯度乙醇洗脱物做体外
抗肿瘤活性研究。结果表明，棉团铁线莲皂苷抗肿瘤
活性主要集中在 55%及以上浓度乙醇洗脱部位，且对
肿瘤细胞的抑制率均在 60%以上;活性较强的乙醇洗
脱物质量只占总洗脱物质量的 5． 82%，有望通过除去
大部分活性不明显的皂苷，大幅提高棉团铁线莲皂苷
的体内外抗肿瘤活性;棉团铁线莲皂苷中 55%及以上
浓度乙醇洗脱物中有望找到高活性抗肿瘤化合物。
参考文献:
［1］ 中华人民共和国药典委员会．中国药典(一部) ［S］．北京:化学工
业出版社，2000:204．
［2］ 张蕴毅，张宏伟，李佩芬． 威灵仙的解痉抗炎镇痛作用［J］． 中成
药，2001，23(11) :808 － 811．
［3］ 吴依娜，贺文娟．中药材威灵仙的化学成分和药理研究概述［J］．
中国医药导报，2008，7(5) :27 － 28．
［4］ 夏光成，李德华．抗癌动、植、矿物彩色图鉴及其应用［M］． 天津:
天津科技翻译出版公司，2000:129．
［5］ 张余生，陈兔林．炮制对威灵仙镇痛抗炎作用的影响［J］．中药材，
2001，24(11) :815 － 816．
［6］ 巴达日呼，房玉良．蒙药才棉团铁线莲化学成分和药理研究进展
［J］．中国民族民间医药，2009，18(15) :129．
［7］ 杨林，姚广玉，薛鸿燕，等． 棉团铁线莲总皂苷抗肿瘤作用研究
［J］．中医药学报，2011，39(2) :21 － 24．
［8］ 赵英，王春梅，王宝贵．铁线莲皂甙体内抗肿瘤作用研究［J］．中国
中药杂志，2005，30(18) :1452 － 1453．
［9］ 邱光清，张敏，杨燕军．威灵仙总皂甙的抗肿瘤作用［J］．中药材，
1999，22 (7) :351 － 352．
［10］ 耿宝琴，雍定国，徐继红，等．威灵仙治疗胆囊炎的试验研究［J］．
浙江医科大学学报，1997，26(11) :13 － 16．
Antitumor Activities of Total Taponins from Clematis Hexapetala Pall Ⅱ
YANG Lin，QIAN Jiao － ling，PU Li － hong，SHU Chang － yu，LIN Peng
(Lanzhou University of Technology，Lanzhou 730050，China)
Abstract:Objective:On the basis of researching the antitumor activity of Clematis hexapetala Pall． total saponins ，its
active site would be expounded further to improve its antitumor activity． Methods:Clematis hexapetala Pall． total sapo-
nins was separated into some sections by macroporous resin，and its antitumor activity was studied by MTT． Results:Af-
ter separating by macroporous resin，quality of eluate was 23． 88g and accounted for 15． 92% of all sample quality 150g．
The ethanol eluate of different concentrations had different degrees inhibition to Hep － G2，and inhibitory rate of eluate
in range from 55% ～95% ethanol was more than 60% to Hep － G2，then quality of these eluate was small，only accoun-
ted for 5． 82% of all eluate． The above results showed that small polar saponins had a stronger inhibitory effect on Hep
－ G2． Conclusion:The antitumor activity of Clematis hexapetala Pall． total saponins mainly concentrates on 55% ～95%
ethanol elution part，and its antitumor activity is enhanced hopefully by clearing of big polar．
Key words:Clematis hexapetala Pall． total saponins;Macroporous resin separation;Antitumor activity
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Vol. 41，No. 2，2013
中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
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