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黄花铁线莲中香豆乙酸的抗炎活性研究



全 文 :2013 年 1 月 第 15 卷 第 1 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jan. 2013 Vol. 15 No. 1
△ [基金项目] 延安市科技局资助科研项目(2008 年)
* [通讯作者] 涂院海,E-mail:qifengqi@ 163. com
黄花铁线莲中香豆乙酸的抗炎活性研究

涂院海1* ,杨晓军2
(1. 延安大学附属医院,陕西 延安 716000;2. 延安大学化学与化工学院,陕西 延安 716000)
[摘要] 目的:研究延安本地植物黄花铁线莲化学成分香豆乙酸在风湿病治疗中的药用价值。方法:在获得
的 5 种化合物中,选香豆乙酸进行动物急性毒性及抗炎活性实验。结果:化合物香豆乙酸无急性毒性反应,且具有
良好的抗炎活性。结论:延安本地生长植物黄花铁线莲所提取化学成分香豆乙酸具有良好的抗炎活性,对治疗风湿
病关节炎有很好的药用价值。
[关键词]黄花铁线莲;化学成分;香豆乙酸;抗炎活性;风湿病
黄花铁线莲 Clematis intricata Bunge 是毛茛科铁
线莲属野生草本植物,在我国北方各省普遍生长,
别名狗豆蔓、萝萝蔓,商品名透骨草,以全草及叶
入药。夏秋采全草,晒干,摘叶晒干。味辛,性温,
有微毒,具有祛风除湿,活血止痛,消肿作用。外
用主治风湿性关节炎,民间常有用鲜草捣烂外敷治
疗关节、软组织肿痛[1-2]。
为了进一步挖掘中草药在风湿病治疗中的有效
途径,提高临床疗效,减少化学药带来的不良反应,
最终为进入临床应用研究奠定理论基础,作者采集
位于延安地区的野生植物黄花铁线莲全草,通过硅
胶和凝胶柱色谱分离,利用多种波谱技术鉴定化学
结构[3-4],获得 5 种化合物。选择其中 3 种成分进行
了动物急性毒性实验和抗炎活性实验,结果 3 种成
分均未发现急性毒性反应,且均具有良好的抗炎消
肿作用。本文仅对香豆乙酸(结构式见图 1)的动物
急性毒性、抗炎活性作单独报道,探讨其对风湿病
的药用价值。
图 1 香豆乙酸的化学结构式
1 材料
1. 1 药物与试剂
复方七叶皂苷钠凝胶(山东绿叶制药有限公司,
批号:20100953,阳性对照用) ,交叉菜胶(美国
Sigma公司) ,二甲苯(北京益利精细化学有限公司)。
香豆乙酸的制备:黄花铁线莲(采集自陕西省
志丹县,由延安大学生命科学院刘世鹏老师鉴定为
Clematis intricata Bunge,自然晒干至恒重,粉碎。
在超声波辐射下用 70%乙醇提取,提取液减压浓缩
得暗褐色浸膏。暗褐色浸膏用硅胶柱层析分离得到
香豆乙酸组分。
1. 2 动物与仪器
1. 2. 1 实验动物:ICR 小鼠,体重 18 ~ 22 g;SD 大
鼠,体重 80 ~ 110 g,由西安交通大学实验动物中心
提供,合格证号:0003240,许可证号:SCXK(陕)
2007-001。
1. 2. 2 仪器 1012-P电子分析天平(北京赛多利斯仪
器系统有限公司) ;YLS-7A 足趾容积测量仪(山东
医科大学) ;YLS-Q4 耳肿打耳器(山东医科大学)。
2 方法与结果
2. 1 急性毒性实验
取 ICR 小鼠 2 只,给药前禁食 12 h,按 16. 67
mg·mL -1最大浓度,按 0. 4 mL·(10g)- 1的最大给药
体积(折算给药剂量:666. 8 mg·kg -1) ,24 h内灌药
2 次,给药后观察小鼠一般情况。2 只小鼠给药后大
便正常,无死亡,活动自如,进食、饮水正常,也
无明显中毒反应,提示本品难以测出 LD50,故选择
最大受试药物量实验[5]。
最大受试药物量实验:取小鼠 40 只,雌雄各
半,体重 18 ~ 22 g,随机分为正常对照组及给药组,
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DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2013.01.013
2013 年 1 月 第 15 卷 第 1 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jan. 2013 Vol. 15 No. 1
每组各 20 只小鼠(雌雄各半) ,给药前禁食 12 h,
给药组以 33. 3 mg·mL -1浓度的香豆乙酸乳悬液,按
0. 4mL·(10g)- 1 (折算给药剂量:1 333. 6 mg·
kg -1) ,24 h内 2 次灌胃给药,给对照组同体积色拉
油,连续观察 14 d,详细记录小鼠行为活动、状态、
饮食、大小便及毛色、分泌物等。
结果给药后 0. 5 ~ 3 h,小鼠出现大汗、蜷缩等
现象,随后观察,小鼠大便正常呈湿润颗粒状,无
死亡,活动自如,进食、饮水均正常,皮毛光洁,
口、鼻、眼及肛门清洁无分泌物,连续观察两周,
体重有增加,给药前体重、第 7d、第 14d 体重见
表 1,给药组体重与对照组体重差异无统计学意义。
解剖小鼠,发现胸腔、腹腔未见异常液体,肠管未
见胀气,心、肝、脾、肺、肾等重要脏器未见颜色、
形态异常,没有出血点或其他病理改变,胃黏膜颜
色红润,无出血点或溃疡,尸检无异常。在此剂量
下未观察到香豆乙酸的急性毒性反应。
表 1 香豆乙酸急性毒性小鼠体重(x ± s,n = 20)
/ g
组别 n 给药前体重 给药后7 d体重
给药后
14 d体重
对照组 雄性 10 19. 94 ± 0. 72 25. 95 ± 1. 95 29. 86 ± 2. 78
雌性 10 19. 39 ± 0. 63 24. 91 ± 0. 81 29. 30 ± 1. 32
合计 19. 67 ± 0. 72 25. 43 ± 1. 55 29. 58 ± 2. 14
给药组 雄性 10 19. 50 ± 0. 69 24. 58 ± 1. 06 29. 15 ± 1. 84
雌性 10 19. 61 ± 0. 65 24. 85 ± 1. 36 29. 06 ± 1. 30
合计 19. 56 ± 0. 66 24. 72 ± 1. 19 29. 11 ± 1. 55
注:给药组与对照组比较,P > 0. 05
2. 2 抗炎活性实验
实验组通过角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及二甲苯
致小鼠耳肿胀,利用复方七叶皂苷钠乳膏作对照,观
察香豆乙酸外涂致炎部位对肿胀的减轻程度。
2. 2. 1 对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响 按方
法[6]取 SD大鼠 40 只,体重 80 ~ 110 g,雌雄各半。
随机分为 4 组,每组 10 只。分别为模型组,阳性药
组,香豆乙酸大、小剂量组。每鼠采用足趾容积测
量仪测量标记位置以下右后肢的容积(mL) ,作为致
炎前正常值,然后分别在大鼠右后肢足跖皮下注射
1%角叉菜胶混悬液 0. 1 mL /只致炎,即可涂药:大
剂量组每鼠右后肢足跖皮肤涂 0. 4 mL(浓度 16. 67
mg·mL -1) ,小剂量组每鼠右后肢足跖皮肤涂 0. 2
mL,阳性对照组每鼠右后肢足跖皮肤涂 0. 4 mL。给
药后 1 h,采用足趾容积测量仪测量标记位置以下的
右后肢的容积(mL) ,以后每隔 1 h 用以上方法测右
后肢足跖容积,共测量 5 h。计算肿胀度,肿胀度
(mL) =给药后足容积 -给药前足容积,各组与模
型对照组比较,组间进行 t检验,结果见表 2。由表
2 可见,与模型组比较,阳性药,香豆乙酸大、小
剂量组从致炎后 1 ~ 5 h均能明显抑制角叉菜胶致大
鼠足跖肿胀,提示香豆乙酸对化学性致炎有抑制
作用。
2. 2. 2 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 按文献方
法[7],取健康 ICR小鼠 40 只,体重 18 ~ 22 g,雌雄
各半,随机分为 4 组,每组 10 只,分别为模型组,
阳性药组(复方七叶皂苷钠凝胶) ,香豆乙酸大、小
剂量组。给小鼠右耳前后两面涂二甲苯约 50 μL,
左耳作为正常对照。即可涂药:大剂量组每小鼠右
耳前后两面皮肤涂 100 μL,小剂量组每小鼠右耳前
后两面皮肤涂 50 μL,阳性对照组每小鼠右耳前后
两面皮肤涂 100 μL。给药后 1 h后,将小鼠脱颈椎处
死,沿耳廓基线剪下两耳,用 9 mm打孔器在左右耳同
一位置打孔,电子天平上称重,右耳重量减去左耳重
量为肿胀度,计算肿胀百分率,肿胀百分率 =(右耳
表 2 KSHT-II对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响(x ± s,n = 10)
/mL
组别 致炎前容积
肿胀度
1 h 2 h 3 h 4 h 5 h
模型组 1. 324 ± 0. 054 0. 526 ± 0. 159 0. 889 ± 0. 222 0. 853 ± 0. 229 0. 877 ± 0. 316 0. 836 ± 0. 361
阳性药组 1. 301 ± 0. 076 0. 267 ± 0. 150** 0. 534 ± 0. 127** 0. 537 ± 0. 221** 0. 522 ± 0. 233* 0. 342 ± 0. 189**
大剂量组 1. 303 ± 0. 066 0. 356 ± 0. 148* 0. 331 ± 0. 103** 0. 444 ± 0. 110** 0. 469 ± 0. 165** 0. 481 ± 0. 128**
小剂量组 1. 319 ± 0. 052 0. 375 ± 0. 137* 0. 424 ± 0. 122** 0. 565 ± 0. 102** 0. 630 ± 0. 144* 0. 565 ± 0. 100*
注:与模型组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
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2013 年 1 月 第 15 卷 第 1 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jan. 2013 Vol. 15 No. 1
重量 -左耳重量 /左耳重量)× 100,组间比较,进
行 t检验,结果见表 3。从表 3 可以看出,香豆乙酸
大、小剂量组均能明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀,
提示香豆乙酸对急性炎症有一定的抑制作用。
表 3 KSHT-II对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(x ± s,n = 10)
组别 剂量 /mg·kg -1 右耳重 /mg 左耳重 /mg 肿胀百分率 /%
模型组 - 61. 69 ± 3. 87 41. 95 ± 2. 67 47. 11 ± 3. 93
阳性药组 5. 0 mL·kg -1 52. 12 ± 3. 04** 41. 07 ± 4. 15 27. 49 ± 7. 55**
香豆乙酸大剂量组 83. 35 51. 40 ± 3. 79** 41. 39 ± 2. 24 24. 11 ± 4. 25**
香豆乙酸小剂量组 41. 68 54. 04 ± 3. 80** 41. 16 ± 2. 78 31. 32 ± 3. 44**
注:与对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
3 结果
黄花铁线莲中提取的香豆乙酸通过动物急性毒
性实验,显示均无明显的毒性反应,给药组与对照
组比较,P > 0. 05。通过大鼠耳肿实验和小鼠足跖
肿实验,与复方七叶皂苷钠凝胶模型对照组对比,
有良好的抗炎消肿作用。与模型对照组比较,急性
毒性实验 P > 0. 05;抗炎活性大鼠足跖肿实验 P <
0. 05,P < 0. 01;小鼠耳肿实验 P < 0. 01。
4 讨论
风湿病涉及医学多学科领域,病因复杂,病程
长,疗效慢,且多数伴随骨关节、滑膜肿胀,属于
一组疑难杂症。临床治疗中因长期口服用药导致肝
肾及血液系统和胃肠道损害,是临床医生难于顾全
的疑难问题[8]。作者在多年风湿病临床工作中,通
过民间调查走访,翻阅资料,挑选陕北延安野生植
物黄花铁线莲为研究对象,着手开展了对其化学成
分、急性毒性和抗炎活性研究,分析黄花铁线莲单
体化合物在风湿病治疗中的作用。
黄花铁线莲属于透骨草体系的 1 种,不同来源
的透骨草,其疗效不完全一致[9-11]。资料调查有不
少学者应用黄花铁线莲植物外敷或配伍煎汁仪器导
入治疗风湿病及关节炎、腰腿痛、颈椎病等[1-2]。但
是将提纯的单体化学成分研究应用于风湿病临床尚
未见报道。通过对黄花铁线莲提取的化学成分香豆
乙酸进行动物急性毒性实验和抗炎活性实验,结果
证明未发现急性毒性反应。通过大、小鼠耳肿和足
跖肿实验,与复方七叶皂苷钠凝胶对比,有良好的
抗炎活性。
研究结果表明,延安本地野生黄花铁线
莲植
物中提纯的单体化学成分香豆乙酸无毒性,且具
有良好的抗炎活性,在风湿病治疗方面有较高的
药用价值,并消除了局部起水泡的不良反应,为
进一步实施我国黄花铁线莲中单体化合物体内外
用药研究与开发提供了有利的依据,有可能成为
高效、低毒、无内脏损害的治疗风湿病的理想
药物。
参考文献
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2013 年 1 月 第 15 卷 第 1 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jan. 2013 Vol. 15 No. 1
Study on Anti-inflammatory Activity of Coumadin Acetic Acid in Clematis intricata
TU Yuan-hai1,YANG Xiao-jun2
(1. Yanan University Affiliated Hospital,Yanan 716000,China;
2. Yanan University Chemistry and Chemical Engineering Institute,Yanan 716000,China)
[Abstract] Objective:To study coumadin acetic acid in Clematis intricata on the treatment of rheumatism
medicinal value. Methods:Choose coumadin acetic acid from the 5 kinds of compound to observe effects on animal
acute toxicity and anti-inflammatory activity experiment. Results:Compound coumaric acid had no acute toxicity
reaction,and had good anti-inflammatory activity. Conclusion:Coumadin acetic acid has good anti-inflammatory in
the treatment of rheumatism arthritis,which had very good medicinal value.
[Key words] Clematis intricata;Coumadin acetic acid;Anti-inflammatory;Activity rheumatism
(收稿日期 2011-12-12
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信息天地
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