全 文 ：作者简介:肖兵，男，研究方向:中药质量控制，E － mail:292554762@ qq． com
通信作者:许妍，女，主任药师，研究方向:中药质量控制，E － mail:1332408991@ qq． com
HPLC法测定乳宁丸中菝葜皂苷元的含量
肖兵1，2，吴燕红1，朱卫丰2，许妍1
(1．江西省药品检验检测研究院，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029;
2．江西中医药大学，江西 南昌 330004)
摘要:目的 建立中药乳宁丸中菝葜皂苷元含量的高效液相色谱(HPLC)法，提高其质量控制方法。方法 采
用 Waters SunFire C18柱(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)，以甲醇 －水(90:10)为流动相，流速为 1． 0 mL·min
－1，应用蒸发
光散射检测器检测，漂移管温度 55 ℃，调节气体压力为 350 kPa。结果 菝葜皂苷元在进样量为 1． 18 ～ 5． 90 μg范
围内与峰面积对数值呈对数线性关系(r = 0． 999 5)，平均回收率为 97． 46%，ＲSD = 1． 37%(n = 9)。结论 该方法
准确，专属性好，可用于乳宁丸的质量控制。
关键词:乳宁丸;菝葜皂苷元;高相液相色谱;含量测定
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:2095 －5375(2016)04 －0212 －003
doi:10． 13506 / j． cnki． jpr． 2016． 04． 007
Determination of sarsasapogenin in Ｒuning Pill by HPLC
XIAO Bing1，2，WU Yanhong1，ZHU Weifeng2，XU Yan1
(1． Jiangxi Institute for Drug Control，Jiangxi Provincial Engineering Ｒesearch Center
for Drug and Medical Device Quality，Nanchang 330029，China;2． Jiangxi University
of Traditional Chinese Medcine，Nanchang 330004，China)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for the determination of sarsasapogenin in Ｒuning Pill．Methods
The Waters SunFire C18 column(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)was used with the mobile phase of methanol － water
(90∶10)． The flow rate was 1． 0 mL·min －1，the evaporative light scattering detector was adopted for the detection whose
drift tube temperature was 55 ℃ and the gas pressure was 350 kPa． Ｒesults The sample size of sarsasapogenin in the
range of 1． 18 ～ 5． 90 μg showed a good logarithmic linear relationship with the integral value of the peak area(r =
0． 999 5)． The average recovery was 97． 46%，the ＲSD was 1． 37%(n = 9)． Conclusion The method was accurate and
specific which can be used for the quality control of Ｒuning Pill．
Key words:Ｒuning Pill;Sarsasapogenin;HPLC;Determination
乳宁丸是由石刁柏经加工制成的中药独家品种
制剂，具有温肺祛痰、活血化瘀的功能［1 － 2］。临床上
用于痰瘀互结，乳腺结块，肿胀疼痛及乳腺小叶增生
属上述证候者。有文献表明石刁柏药材中含有皂苷
类的有效成分［3 － 4］，其制剂乳宁丸也可能存在抗肿
瘤的功效，然而现行的石刁柏及乳宁丸质量控制技
术粗糙，法定标准落后，难以控制药品的内在质量，
因此本文建立了乳宁丸中菝葜皂苷元含量的高效液
相色谱(HPLC)测定方法，以提高乳宁丸的质量控
制水平。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 LC － 20AD型高效液相色谱仪(日本岛
津);BT25S电子天平(德国赛多利斯);Milli － Q Di-
rect16 超纯水仪。
1． 2 试药 菝葜皂苷元对照品(中国药品生物制
品检定所，批号:110744 － 200509);乳宁丸(江西半
边天药业有限公司，批号:150401、140602、150403);
甲醇为色谱纯;水为超纯水。
2 试验方法
2． 1 色谱条件 色谱柱:Waters SunFire C18柱(4. 6
·212· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2016 Vol． 35，No． 4
mm ×250 mm，5 μm);流动相:甲醇 －水(90∶10);流
速 1． 0 mL·min －1;蒸发光散射检测器;漂移管温度
55 ℃;气体压力为 350 kPa。在此条件下，菝葜皂苷
元色谱峰与相邻峰之间的分离度良好，色谱图见
图 1。
A．菝葜皂苷元对照品;B．供试品;C．阴性样品
图 1 HPLC色谱图
2． 2 对照品溶液制备 精密称取菝葜皂苷元对照
品适量，加甲醇溶解制成每 1mL含有 0． 236 0 mg的
溶液。
2． 3 供试品溶液制备 取本品 65 丸，研细，精密称
取 15 g，加甲醇 150 mL 至索氏提取装置中，加热回
流提取 6 h，提取液回收甲醇;残渣加水 40 mL 使溶
解，用水饱和正丁醇振摇提取 3 次，每次 40 mL，合
并正丁醇液，蒸干，用甲醇 5 mL溶解，加 2 mol·L －1
的盐酸 35 mL，水浴 80 ℃水解 12 h;水解液用三氯
甲烷振摇提取 3 次，每次 40 mL，回收三氯甲烷，蒸
干，残渣用甲醇溶解并稀释至 10 mL 量瓶中，摇匀，
滤过，取续滤液，即得。
2． 4 阴性样品溶液制备 取不含石刁柏的其他样
品，按乳宁丸制备工艺及上述供试品溶液制备方法
制备阴性样品溶液。
2． 5 线性关系考察 精密称取对照品适量，加甲醇
制成每 1 mL含 0． 236 0 mg 的溶液，精密吸取上述
对照品溶液 5、10、15、20、25 μL，分别注入液相色谱
仪，测定峰面积，以峰面积积分值对数(Y)对进样量
对数(X)进行线性回归，得线性回归方程:Y =
1． 468 3X + 2． 045 8，r = 0． 999 7，表明菝葜皂苷元在
1． 18 ～ 5． 90 μg范围内具有良好的线性关系。
2． 6 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液
(0. 236 0 mg·mL －1)10 μL，按上述色谱条件，重复
进样 5 次，测得菝葜皂苷元的峰面积平均值为
399． 93，计算 ＲSD值为 0． 6%。
2． 7 重复性试验 精密称取乳宁丸(批号:
150401)5 份，照供试品溶液制备法测定菝葜皂苷元
的含量，其平均含量为 180 μg·g －1，ＲSD为 0． 8%，
重复性良好。
2． 8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，按上述色谱条件，分别于 0、2、4、6、8、10 h测定，
记录峰面积，计算 ＲSD为 0． 7%，表明稳定性良好。
2． 9 回收率试验 精密称取 9 份已知含量的样品
(批号:150401)7． 5 g，并精密加入菝葜皂苷元对照
品适量，照“供试品溶液制备”项下方法制备并测定
含量，回收率平均值为 97． 46%，ＲSD 为 1． 37%，见
表 1。
表 1 回收率试验
取样量
(g)
已知含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
7． 501 3 1． 350 23 1． 062 00 2． 400 17 98． 86
7． 512 5 1． 352 25 1． 062 00 2． 369 31 95． 77
7． 508 6 1． 351 55 1． 062 00 2． 367 07 95． 62
7． 582 3 1． 364 81 1． 368 80 2． 725 96 99． 44
7． 602 1 1． 368 38 1． 368 80 2． 703 51 97． 54 97． 46 1． 37
7． 583 6 1． 365 05 1． 368 80 2． 701 21 97． 62
7． 529 6 1． 355 33 1． 620 00 2． 930 00 97． 20
7． 511 5 1． 352 07 1． 620 00 2． 948 29 98． 53
7． 553 6 1． 359 65 1． 620 00 2． 923 93 96． 56
2． 10 样品测定 取 3 批样品(批号:150401、
140602、150403)照“供试品溶液制备”项下方法制
备供试品溶液，精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，
测定菝葜皂苷元含量，测定结果见表 2。
表 2 3 批乳宁丸样品含量测定
样品批号 150401 140602 150403
菝葜皂苷元含量(μg /丸) 45． 0 45． 2 46． 0
3 讨论
3． 1 试验过程中考察了水解时间对菝葜皂苷元含
量的影响，分别选取 4、8、12、24 h 的水解时间，经比
较发现从 4 h 到 12 h，菝葜皂苷元的含量呈上升的
趋势，而 24 h与 12 h相比，含量并没有增加，试验表
明 12 h即可水解完全。
3． 2 石刁柏收载于《江西省中药材标准》2014 年
版，其薄层鉴别鉴别项下只进行天冬酰胺的薄层鉴
别［5］;而制剂乳宁丸含量测定项下只测定总氮量，
因此标准太低，不能有效控制药材和制剂的质量。
石刁柏中含有甾体皂苷类化合物等活性成分，其中
皂苷类成分具有抗氧化［6 － 8］、抗真 (下转第 229 页)
·312·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2016 Vol． 35，No． 4
几率远低于液体制剂，因此 BHT在氯化丁基橡胶中
已严格控制了浓度情况下，其所制成的胶塞将无需
再进行提取试验和迁移试验，这一浓度的使用是安
全的。
3． 3 相关文献及预试验均发现注射用帕瑞昔布钠
对高湿较稳定，因此影响因素试验重点设计了本品
较不稳定的高温与光照条件。
3． 4 加速试验中有关物质有较明显的增多，后期与
参比制剂加速试验比较发现其增长主要是由于原料
药中伐地昔布的降解产生［9］，与包材无关。
3． 5 通过对采用该材料进行的相容性试验证明，氯
化丁基胶塞及中性硼硅玻璃管制注射剂瓶与药液和
冻干制品均具有较好的相容性，对产品的质量无明
显影响，因此可选用此包材。
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(上接第 213 页)
菌［9］、降血脂［10］和抗肿瘤［11 － 12］等药理活性，目前已
知的皂苷类成分主要有菝葜皂苷和原薯蓣皂苷，由
于菝葜皂苷元为几种主要皂苷的母核皂苷元，故通
过测定水解得到菝葜皂苷元的方式来反应总皂苷的
含量。本文通过高效液相色谱 －蒸发光散射检测器
来检测菝葜皂苷元的含量方法可靠，能很好地反应
乳宁丸的内在质量，为提高乳宁丸的质量控制水平
提供了依据。
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