全 文 ：• 799 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年4月第27卷第4期 CJTCMP , April 2012, Vol . 27, No. 4
TLC-生物自显影法导向分离菝葜中抗氧化活性成分
周艳林1,2，闵建国2,3，王力生2，孟杰2，刘华钢1，邹节明2
（1广西医科大学药学院，南宁 530021；2桂林三金药业股份有限公司，桂林 541004；3广西师范大学
化学化工学院，桂林 541004）
摘要：目的：采用薄层色谱-生物自显影法导向分离菝葜中的抗氧化活性成分，为建立“谱-效”相关质控标
准奠定基础。方法：用1,1-二苯基-2-苦肼基自由基乙醇溶液（DPPH）和传统显色剂显色，检识主要抗氧化活性成
分，选择性进行导向分离鉴定。结果：经反复柱层析，从菝葜的丙酮提取物中分离鉴定了白黎芦醇（Ⅰ）、落新
妇苷（Ⅱ）、黄杞苷（Ⅲ）和Helicioside A（Ⅳ）4个主要抗氧化活性成分。结论：该方法用于菝葜主要抗氧化活
性成分的导向分离具有操作简便的优点，分离得到1个二苯乙烯化合物（Ⅰ）和3个二氢黄酮醇苷类化合物（Ⅱ、
Ⅲ、Ⅳ），其中化合物（Ⅳ）为首次从该属植物中获得。
关键词：菝葜；抗氧化活性成分；分离；薄层色谱-生物自显影；1,1-二苯基-2-苦肼基自由基
基金资助：“十二五”国家科技重大专项（No.2011ZX09201-201-17）
Isolation of antioxidant activity constituents from Smilax china guiding by
TLC-bioautography
ZHOU Yan-lin1,2, MIN Jian-guo2,3, WANG Li-sheng2, MENG Jie2, LIU Hua-gang1, ZOU Jie-ming2
( 1School of Chinese Pharmacy, Guangxi University of Medicine, Nanning 531002, China; 2Guilin Sanjin Pharmaceutical
Co. Ltd., Guilin 541004, China; 3School of Chemistry and Chemical Engineering, Guangxi Normal University,
Guilin 541004, China)
Abstract: Objective: To isolate the major antioxidant activity constituents of Smilax china guiding by TLC-
bioautography, aid to establish a‘spectrum-effect’quality control standard. Methods: By Thin-layer chromatography, developing
and spraying with 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) solution in ethanol and classical stained reagents, separately. Isolating the
major antioxidant components by column chromatograph on silica and Sephadex LH-20. Results: Four compounds were isolated
and identifi ed as resveratrol (Ⅰ), astilbin (Ⅱ), engeletin (Ⅲ) and Helicioside A (Ⅳ) from the acetone extract of Smilax china L..
Conclusion: TLC-bioautography proved to be simple on screening of the components with antioxidant potency from Smilax china,
and Helicioside A was isolated from Smilax speices for fi rst time.
Key words: Smilax china; Antioxidant activities; Isolation; TLC-bioautography; DPPH
Fund assistance: National‘Twelfth Five-Year’Science and Technology Key Support Program of China
(No.2011ZX09201-201-17)
·论著·
通讯作者：邹节明，桂林三金药业股份有限公司，邮编：541004，电话：0773-5842588，E-mail：zjm@sanjin.com.cn
菝葜为百合科菝葜属菝葜Smilax china L.的干燥
根茎，收载于《中华人民共和国药典》2010版，味甘，
微苦涩，性平，归肝肾经。具有祛风利湿，解毒散瘀
之功效[1]。菝葜是三金片、金刚藤糖浆、银屑颗粒等
复方和单方制剂的主要原料，在中医临床上分别用
于治疗泌尿系感染、妇科盆腔炎和附件炎、银屑病等
均具有确切疗效。Si Eun Lee等[2]研究发现菝葜提取
物具有良好清除自由基和抗氧化酶活性作用。
薄层色谱—生物自显影技术[3]（TLC-Bioautography）
是一种集色谱分离、鉴定和活性测试于一体的药物
筛选和评价方法，综合了分光光度法与薄层色谱分
离技术两者的优点，虽然国外有采用1,1-二苯基-2-
苦肼基自由基（DPPH）显色，结合分光光度法筛选
天然抗氧化剂的研究报道[3]，但国内近年才有利用
TLC-生物自显影技术应用于中药质量评价的研究，
《中华人民共和国药典》（2010年版）也首次引入了
该检测方法。本研究尝试采用TLC-生物自显影法进
行导向分离，选择性提取分离鉴定菝葜中的抗氧化
活性成分，为建立以药效成分为指标的谱效相关质
量标准及药效部位工艺优化研究提供参考，亦为现
行活性物质筛选探讨一种高效便捷的方法。
材料
1. 仪器 薄层色谱摄像系统（Reprostar 3 and
Win Cats4，瑞士CAMAG），加热板（TLC Plate Heater
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III，瑞士CAMAG）；X-5显微熔点测定仪（北京泰克
仪器有限公司），温度计未校正；Bio-Rad FTS-135型
红外光谱仪；Bruker AM-400及DRX-500核磁共振
仪；VG Auto Spec-3000质谱仪。
2. 药材与试剂 菝葜药材于2011年5月由钟小清
高工采自广西永福县，经广西植物研究所李光照研
究员鉴定为百合科菝葜属植物菝葜Smilax china L.，
原植物标本（No.sj20110501）保存于桂林三金药业股
份有限公司标本室。硅胶GF254高效薄层板（Merck，
瑞士），柱层析用硅胶（200-300目，青岛海洋化工
厂），Sephadex LH-20（上海化学试剂厂分装），1,1-
二苯基-2-苦肼基自由基（1,1-dipheny-z-picrylhydrazyl,
DPPH）购自Sigma公司，其余试剂均为分析纯。
方法与结果
1. TLC-生物自显影筛选菝葜主要抗氧化活性部
位 取菝葜药材粉末3份，每份2g，分别加乙酸乙酯、
丙酮、乙醇25mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩
至约2mL，作为供试品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ
B）试验，吸取上述供试品溶液各5μL，分别点于同一
硅胶GF254高效薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲
醇-水（15:40:22:10）10℃以下放置的下层溶液为展开
剂，展开，取出，晾干。
先置紫外光灯（254nm）下检视，薄层色谱图见
图1A；参考文献[3]方法，再以0.04% DPPH的无水乙
醇溶液浸泡显色，取出，晾干，于40℃下加热30min
后，在可见光下检视，薄层色谱图见图1B。
约为0.50，0.70，0.95），鉴于在硅胶板上能较好分
离，可以通过硅胶层析加以分离纯化，为开展导向
分离提供了基础。
2. 导向分离 取菝葜干燥根茎粗粉1kg，用丙
酮浸提，减压回收溶剂，适量水混悬，用乙酸乙酯萃
取，得到乙酸乙酯萃取物，经硅胶柱层析，用氯仿∶
甲醇（10:1-7:3）梯度洗脱，TLC跟踪，合并，分成馏
份Fr.1-4，Fr.2再经硅胶反复柱层析和重结晶，依次
得到化合物Ⅰ（90mg），化合物Ⅱ（125mg），化合物Ⅲ
（63mg）。Fr.3经硅胶柱色谱，Sephadex LH-20纯化，
重结晶得到化合物Ⅳ（110mg）。分离流程见图2及所
得化合物结构式见图3。
3. 结构鉴定
3.1 化合物Ⅰ 白色粉末（甲醇），熔点（mp）
212℃-213℃。核磁共振氢谱（1H-NMR）［（CD3）
2CO，400MHz］δ：6.25（1H，d，J=2.0Hz，H-4），
6.53（2H，d，J=2.0Hz，H-2，6），6.83（2H，dd，
J=9.2，1.8Hz，3’，5’），6.87（1H，d，J=16.5Hz，
H-α），7.00（1H，d，J=16.5Hz，H-β），7.41（2H，
dd，J=9.2，1.8Hz，2’，6’），8.22（2H，s，3，5-OH），
A 254nm下检视图谱 B DPPH显色图谱
注：1.乙酸乙酯超声提取物，2.丙酮超声提取物，3.乙醇超声提
取物。
1 2 3 1 2 3
图1 菝葜不同溶剂提取物254nm下检视图及DPPH显色图谱
HO
OHO
OH
O
OH
O
OH
A stilb in
HO
OH
OH
R e sve ra tro l
OHOH
OHO
OH O
OH
O
O
OHOH
OH
E n ge let in
O OH
O
HO
O
OH
H elic io s id e A
O
HO
HO OH
OH
Ⅰ Ⅱ
Ⅲ Ⅳ
图3 菝葜分离所得化合物的结构式
㦱㨰ⱘϭ䝂䍙ໄᦤপ⠽
⸙㛊᷅ሖᵤ ∃ˈӓ-⬆䝛ẃᑺ⋫㜅ˈ
⼎䏾Ẕ⌟ᡫ⇻࣪៤ߚ

9Ή110Ή1 8Ή2 7Ή3
⸙㛊᷅ሖᵤˈ
⷇⊍䝮-ϭ䝂ẃᑺ⋫㜅ˈ
TLC ⼎䏾Ẕ⌟ᡫ⇻࣪៤ߚ

࣪ড়⠽ II,III
ড໡䞡㒧᱊
࣪ড়⠽ I
Sephadex LH-20 ሖᵤ,
⬆䝛-∈(1:1)
7Ή37Ή3
䞡㒧᱊
8Ή2
࣪ড়⠽ IV
⸙㛊᷅ሖᵤˈ
∃ӓ-⬆䝛ẃᑺ⋫㜅ˈ

TLC ⼎䏾Ẕ⌟ᡫ⇻࣪៤ߚ
图2 菝葜分离流程图
10: 9:1 8:2 7:3
8:2 7:8 7:3
在该优选的展开体系下，3种不同溶剂超声处理
的菝葜提取液，薄层色谱在GF254板上显示多个荧光
淬灭斑点，且经TLC-生物自显影显色显黄色斑点，
表明至少有3个主要的抗氧化活性成分（比移值Rf
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8.49（H，s，4’-OH）；核磁共振碳谱13C-NMR（（CD3）
2CO，100MHz）δ：140.8（C-1），105.6（C-2，6），159.6
（C-3，5），102.6（C-4），129.9（C-1’），128.7（C-2’，
6’），116.3（C-3’，5’），158.1 （C-4’），126.3
（C-α），129.0 （C-β）。NMR数据与文献[4]报道的
3,4’,5-三羟基-二苯乙烯一致，故化合物Ⅰ鉴定为反式
白黎芦醇。
3 . 2 化合物Ⅱ 白色针晶（甲醇），mp：
190℃-192℃；红外光谱IR（cm-1）：3405（-OH），
1647，1603，1524，1473（-Ar），1294，1262，1173，
1150，1116，1088，1066，1038，824；紫外光谱UV
（nm）：201.6，292.6；质谱FAB-MS：286[M-Rham-
OH]-，449[M-H]-；1H-NMR（DMSO-d6，500MHz）δ：
5.28（1H，d，J =10.5 Hz，H-2），4.74（1H，d，J =10.5
Hz，H-3），5.88（1H，s，H-6），5.90（1H，d，J =1.3
Hz，H-8），7.32（2H，d，J =8.3 Hz，H-2’，6’），6.78
（2H，d，J =8.3 Hz，H-3’，5’），4.52（1H，br s，
Rham H-1），1.04（3H，d，J =6.1 Hz，Rham H-6）；
13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δ：81.6（C-2），75.7
（C-3），194.6（C-4），162.3（C-5），95.1（C-6），163.5
（C-7），96.1（C-8），167.0（C-9），101.1（C-10），
127.0（C-1’），114.8（C-2’），145.2（C-3’），146.0
（C -4’），115.4（C -5’），119.0（C -6’），100.1
（C-1”），70.5（C-2”），70.2（C-3”），69.1（C-4”），
71.1（C-5”），17.8（C-6”），与文献[5]报道的落新妇
苷基本一致，故化合物Ⅱ鉴定为落新妇苷。
3 . 3 化合物Ⅲ 淡黄色针晶（甲醇），mp :
169℃-171℃；IR（cm-1）：3423（-OH），1642，1518，
1467（-Ar），1382，1257，11649，1086，1060，1035，
979，833；UV（nm）：204.0，292 .0；FAB -MS：
270[M-Rha-OH]-，433[M-H]-；1H-NMR（DMSO-d6，
500MHz）δ: 5.23（1H，d，J=10.0Hz，H-2），4.64（1H，
d，J=10.0Hz，H-3），5.87（1H，d，J=1.7Hz，H-6），
5.89（1H，d，J=1.7Hz，H-8），6.73（2H，s，H-2’，
6’），6.88（1H，s，H-4’），4.73（1H，d，J=1.7Hz，
Rham H-1），1.04（3H，d，J=6.2Hz，Rham H-6）；
13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δ：81.6（C-2），76.0
（C-3），194.8（C-4），163.5（C-5），95.1（C-6），167.0
（C-7），96.1（C-8），162.3（C-9），100.4（C-10），126.6
（C-1’），115.3（C-2’，6’），129.1（C-3’，5’），157.9
（C-4’），101.1（C-1”），70.1（C-2”），70.5（C-3”），71.7
（C-4”），69.1（C-5”），17.8（C-6”），与文献[6]报道的
黄杞苷基本一致，故化合物Ⅲ鉴定为黄杞苷。
3.4 化合物Ⅳ 淡黄色针晶（甲醇）；mp：
252℃-254℃; IR（cm-1）：3284，1676，1619，1519，
1502，1452，1412，1350，1292，1149，1080，821。UV
（nm）：195.0，226.6，283.6.FAB-MS：449[M-H] -，
286[M-162（Glc）-2H]-。1H-NMR（C5D5N，500MHz）
δ：7.28（2H，d，J =8.5 Hz，H-2’，6’），6.77（2H，d，J
=8.5 Hz，H-3’，5’），6.34（1H，d，J =1.2 Hz，H-6），
6.01（1H，d，J =1.2 Hz，H-8），4.99（1H，d，J =11
Hz，H-2），4.34（1H，J =11 Hz，H-3），4.78（1H，d，
J =7.2 Hz，H-1”），3.26-3.51（6H，Glc-H）；13C-NMR
（C5D5N，125MHz）δ：82.4（d，C-2），72.7（d，C-3），
191.3（s，C-4），160.2（s，C-5），97.9（d，C-6），164.9
（s，C-7），97.2（d，C-8），163.5（s，C-9），103.5（s，
C-10），127.7（s，C-1’），129.4（d，C-2’，6’），114.9
（d，C-3’，5’），163.9（s，C-4’），102.0（d， C-1”），
73.4 （d，C-2”），77.4（d，C-3”），69.6 （d，C-4”），
76.1（d，C-5”），60.7（t，C-6”），与文献[7]报道的
Helicioside A基本一致，故化合物Ⅳ鉴定为Helicioside
A，为首次从菝葜属植物中分离得到。
4. 导向分离鉴定化合物TLC-生物自显影图谱
分别取分离鉴定所得化合物适量，加甲醇分别配制
成浓度为1mg/mL的对照品溶液，照方法1项下点板、
展开、显色，在紫外光灯（254nm）下及显色后薄层色
谱图分别见图4A、图4B。
A 254nm下检视图谱 B DPPH下显色图谱
注：1.白黎芦醇，2.落新妇苷，3.黄杞苷，4.Helicoside A，5.菝葜
的丙酮超声提取物。
图4 导向分离鉴定成分254nm下检视图及DPPH下显色图谱
经导向分离纯化所得4个成分在优选的3氯甲烷-
乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）展开体系下，分离
良好（化合物Ⅰ-Ⅳ的比移值Rf分别约为0.75，0.27，
0.34，0.13），从TLC-生物自显影显色结果分析，相同
浓度下化合物Ⅰ、Ⅱ清除DPPH自由基能力要比化合物
Ⅲ、Ⅳ更强；该薄层鉴别体系可以作为菝葜抗氧化活
性成分鉴别方法。
讨论
1. 对比了乙酸乙酯、丙酮、乙醇3种不同溶剂提
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取效果，以及不同展开体系薄层分离效果，发现以三
氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）10℃以下放
置下层溶液较好，可见多个黄色斑点，其中丙酮提取
物斑点相对清晰。通过TLC-生物自显影技术，结合柱
层析分离技术，导向分离其抗氧化活性成分，分离纯
化得到4个主要成分，经鉴定1个为二苯乙烯化合物，3
个为二氢黄酮醇苷类化合物，均为多酚类的衍生物。
2. 分离所得的4个化合物在相同浓度相同点样量
下，经DPPH显色，虽然均显示具有抗氧化活性，但通
过显色灵敏度及斑点大小直观观察，其中以白黎芦
醇和落新妇苷的抗氧化活性更为显著，而同为二氢
黄酮醇苷的黄杞苷和Helicioside A的抗氧化活性比落
新妇苷要弱些，从构效关系上分析，是否与落新妇苷
结构中所含有邻酚羟基相关，尚待作深入研究。
3. 现行菝葜的药典标准中，仍以不具专属性的水
解产物薯蓣皂苷元作为其鉴别控制指标，似乎与其
主要物质基础缺乏相关性，建议建立能够切实反映
“谱-效”关系的专属性质量控制标准，提高完善现
行药典标准。
参 考 文 献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(2010版).北京:中国医
药科技出版社,2010:290
State Pharmacopoeia Committee of China.Pharmacopoeia of the
People,s Republic of China(2010).Beijing:China Medical Science
Press,2010:290
[2] Si Eun Lee,Eun Mi Ju,Jeong Hee Kim.Free radical scavenging
and antioxidant enzyme fortifying activities of extracts from Smilax
China root.Experimental and Molecular Medicine,2001,33(4):263-
268
[3] 谷丽华,吴弢,张紫佳,等.应用薄层色谱-生物自显影技术评
价乌药等三种中药的抗氧化活性.药学学报,2006,41(10):
956-962
GU Li-hua,WU Tao,ZHANG Zi-jia,et al.Evaluation of antioxidant
activity of Radix Linderae and other two Chinese drugs using TLC-
bioautography.Acta Pharmaceutica Sinica,2006,41(10):956-962
[4] 干国平,于伟,刘炎文.菝葜化学成分的研究.时珍国医国药,
2007,18(6):1404-1405
GAN Guo-ping,YU Wei,LIU Yan-wen.Studies on chemical
constituents of Smilax china L.Lishizhen Medicine and Materia
Medica Reasearch,2007,18(6):1404-1405
[5] Qizen Du,Lei Li,Gerold Jerz.Purification of astilbin and
isoastilbin in the extract of smilax glabra rhizome by high-speed
counter current chromatography.Journal of Chromatography
A,1077:98-101
[6] Jing Xu,Xian Li,Peng Zhang,et al .Antiinflammatory
constitiuents from the roots of smilax bockii.Arch.Pharm.
Res,2005,28(4):395-399
[7] Ken-Ichi Morimura,Asuka Gatayama,Reiki Tsukimata,et al.5-O-
glucosyldihydroflavones from the leaves of Helicia cochinchinensis.
Phytochemistry,61:2681-2685
（收稿日期：2011年11月24日）
中会奖[2012]011号
关于2011年度中华中医药学会科学技术奖、
李时珍医药创新奖的奖励决定
（中华中医药学会第五届常务理事会审议通过）
各有关单位：
为了奖励在我国中医药科研工作中取得优秀成果的集体和个人，根据《中华中医药学会科学技术奖奖励办
法》、《李时珍医药创新奖奖励办法》中有关规定，经中华中医药学会组织专家进行评审和公示，并经中华中
医药学会常务理事会确认，决定授予“补肾活血法治疗帕金森病的基础及应用研究”等10项科研成果中华中
医药学会科学技术奖一等奖；授予“基于‘虚邪瘀’理论的风湿病学科体系建立及相关研究”等39项科研成果
中华中医药学会科学技术奖二等奖；授予“丹参、当归等治疗乳腺增生病的研究”等60项科研成果中华中医药
学会科学技术奖三等奖；授予首都医科大学附属北京中医医院刘红旭教授、香港浸会大学刘良教授、湖南中医
药大学尤昭玲教授李时珍医药创新奖。广大中医药科技工作者要向获奖者学习，求真务实、勇于创新，为维护
和增进人民健康做出新的贡献。
中华中医药学会
二○一二年三月