全 文 ：棉团铁线莲镇痛抗炎有效部位研究
杨林，林鹏* ，钱娇玲，龙静，李伟娟，东建丽
(兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050)
摘 要:目的:研究棉团铁线莲镇痛抗炎作用的有效部位。方法:以有机溶剂法提取棉团铁线莲根及根
茎不同化学部位，分别采用小鼠热板法、小鼠醋酸扭体法及二甲苯致小鼠耳廓肿胀法观察棉团铁线莲不
同化学部位的镇痛抗炎效果。结果 镇痛实验结果表明，芳香水、总多糖及总黄酮能显著提高小鼠痛域
值;芳香水、总皂苷及总黄酮能显著减少小鼠的扭体次数且能明显延长小鼠出现扭体反应的时间;抗炎
实验结果表明，总生物碱、芳香水和总黄酮能显著降低小鼠耳肿胀度，其高剂量组的抑制率分别高达
84． 40%、64． 63%和 54． 12%。此外，各提取部位的镇痛抗炎效果均表现出明显的剂量依赖关系。结
论:棉团铁线莲镇痛活性部位主要为芳香水、总黄酮及总皂苷，而抗炎活性部位主要为芳香水和总生物
碱，镇痛抗炎作用可能是由多个部位联合作用的结果。
关键词:棉团铁线莲; 有效部位;镇痛;抗炎
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2013)03 － 0023 － 04
收稿日期:2013 － 02 － 02 修回日期:2013 － 03 － 20
基金项目:甘肃省自然科学研究基金计划(No． 0916RJZA007) ;2010 年
兰州理工大学国家大学生创新计划
作者简介:杨林(1974 －) ，男，博士，副教授，主要从事中药新药、化学新
药的研究开发。
* 通讯作者:林鹏(1986 －) ，男，硕士研究生。研究方向:微生物与生化
药学。
棉团铁线莲(Clematis hexapetala Pall．)系毛茛科
铁线莲属植物，又名黑薇、山蓼、棉花子花、野棉花等。
分布于朝鲜、蒙古、西伯利亚东部及我国东北、内蒙古
草原、山西、河北、陕西、甘肃东部和山东等地［1］。历
版《中国药典》均将其作为威灵仙的来源植物之一［2］，
主要用于治疗风湿痹痛、关节不利、祛风除湿、通经活
络、止痛抗癌等症［3 － 4］。现代药理学研究表明，棉团铁
线莲根及根茎具有抑菌、抗癌、镇静、止痛、抗炎、抗利
尿、利胆、免疫抑制、松弛平滑肌以及对心脑血管系统
的影响等多种药理作用［5］。作为古今镇痛抗炎要药，
棉团铁线莲根及根茎含有多种类型的化学成份［6］，而
未见对其镇痛抗炎有效部位及其有效成分的研究报
道［7 － 8］。因此，本文对棉团铁线莲根及根茎镇痛抗炎
有效部位进行了筛选研究，为棉团铁线莲的深入研究
和相关药物开发提供科学依据。
1 实验材料
1． 1 实验动物
SPF级昆明种雌性小鼠，体质量 18 ～ 22g，购于兰
州大学实验动物中心，许可证号:SCXK(甘)2009 －
0004。
1． 2 实验药材
棉团铁线莲根及根茎，于 2009 年 8 月采自甘肃省
合水县连家砭林区，经原植物形态及显微特征鉴定为
毛茛科铁线莲属植物棉团铁线莲(Clematis hexapetala
Pall．) ，标本现存于兰州理工大学生命科学与工程学
院天然药物研究与开发实验室。根及根茎干燥后粉碎
成粗粉，备用。
1． 3 仪器及试剂
DZF －6020 型真空干燥箱(上海博讯) ;旋转蒸发
器 RE － 5205 (上海雅荣) ;AB104 － N 电子天平
(Mettle － Toledo) ;ES － 2002H 电子天平(长沙湘平) ;
RCY －2 型热板测痛仪(上海欣曼)。醋酸、甲醇、正丁
醇、氯仿、乙醚、石油醚、氨水、丙酮、二甲苯等试剂均为
分析纯。1mL、2mL 注射器;注射针头及小鼠灌胃针;
0. 7mm打孔器。
2 实验方法
2． 1 棉团铁线莲根及根茎不同化学部位的制备
2． 1． 1 总多糖的制备
称取棉团铁线莲根及根茎干燥粗粉 234g，6 倍体
积石油醚脱脂 2 次，挥去残留石油醚后，以 8 倍体积蒸
馏水，煮沸提取 3 次，趁热过滤，合并滤液并浓缩至
500mL。Sevag法除蛋白 3 次，水层加乙醇至含醇量为
80%醇沉过夜，离心，将沉淀用少量蒸馏水溶解后再次
醇沉，离心得沉淀，真空干燥后得总多糖，置 4℃冰箱
备用。
2． 1． 2 总皂苷的制备
称取棉团铁线莲根及根茎粗粉 234g，6 倍体积
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Acta Chinese Medicine and Pharmacology
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60%乙醇水浴回流提取 3 次，回收溶剂后将提取物分
散于少量水中，以 1 /3 体积石油醚、乙醚分别萃取 3
次，水浴挥去残存溶剂，以水饱和正丁醇反复萃取，回
收正丁醇后萃取物溶于少量甲醇，滴入 20 倍体积乙
醚 －丙酮(1∶ 1)混合液中，收集沉淀，挥去残存溶剂，
真空干燥后得总皂苷，置 4℃冰箱备用。
2． 1． 3 总黄酮的制备
称取棉团铁线莲根及根茎粗粉 234g，6 倍体积石
油醚脱脂 2 次，挥去残存石油醚后，以 6 倍体积 95%
乙醇水浴回流提取 3 次。提取液趁热过滤，合并，静置
过夜，过滤除去析出的蜡状物。回收乙醇，将提取物分
散于 500mL蒸馏水，以 1 /3 体积乙酸乙酯反复萃取，
回收乙酸乙酯，真空干燥后得总黄酮，置 4℃ 冰箱
备用。
2． 1． 4 总生物碱的制备
称取棉团铁线莲根及根茎粗粉 234g，6 倍体积
95%乙醇水浴回流提取 3 次，回收乙醇后将提取物分
散于 500mL蒸馏水中，盐酸调 pH 值至 2，以 1 /3 体积
氯仿萃取 5 次，水层以氨水调 pH 值至中性，以 1 /3 体
积氯仿萃取 6 次，再调水液 pH值至 11，以 1 /3 体积氯
仿萃取 6 次，合并中性和碱性氯仿萃取液，回收氯仿，
真空干燥后，得总生物碱置 4℃冰箱备用。
2． 1． 5 芳香水的制备
称取棉团铁线莲根及根茎粗粉 234g，置挥发油提
取器中，加 500mL蒸馏水，油浴加热至沸腾，调小功率
保持微沸状态，提取 8h，收集所提芳香水，密封后置
4℃冰箱备用。
2． 1． 6 实验动物分组及给药方案
按体质量均衡随机原则，将雌性小鼠按体质量分
为 18． 0 ～ 20． 5g 和 20． 5 ～ 22． 0g 两个单位组;分别取
每个单位组的小鼠 60 只，以随机数字表法分为 6 个处
理组;每个处理组(10 只)再按单双号分为 12 个小组，
即每个小组 5 只;合并两个单位组的 12 个小组，得到
12 个实验组，每个实验组动物 10 只。将实验小鼠分
别标记为:阴性对照组;阿司匹林阳性药物对照组;总
多糖高、低剂量组;总皂苷高、低剂量组;总黄酮高、低
剂量组;总生物碱高、低剂量组以及芳香水高、低剂量
组，共 12 组。
阴性对照组每天灌胃给予 0． 5%的吐温 80 水溶
液 0． 5mL;阳性对照组灌胃给予 0． 68mg /mL阿司匹林
肠溶片(规格:50mg)药液 0． 5mL (给药量相当于成人
的日剂量;小鼠体质量以 20g计，用转换因子进行人与
小鼠剂量的换算，即给药量与小鼠体质量比为
0. 017mg /g)。其余各给药组分别灌胃给予 0． 5mL /只
相应供试药液(供试药液的配置:将各提取部位以
0. 5%的吐温 － 80 水溶液配置成高剂量组相当于生药
材 0． 468g /mL 和低剂量组相当于生药材 0． 234g /
mL)。
2． 2 镇痛活性研究
2． 2． 1 小鼠热板实验
取体质量 18 ～ 22g雌性小鼠，用热板测痛仪(水温
49． 5 ～ 50． 5℃，室温 20℃)预测小鼠痛域。凡舔后足
时间小于 5 s或大于 30 s或跳跃者弃之不用［9］。将筛
选合格的小鼠按“实验动物分组”项下分组，给药前重
复测其正常痛阈值，取两次痛阈平均值，作为该鼠给药
前痛阈值。实验前禁食 12h，连续给药 7 天，于末次给
药后 15、30、45、60、90、120min 分别测定各鼠痛域值。
若小鼠在热板上 60 s 仍无添后足反应，取出按 60 s
计。记录结果并计算痛域提高百分率。
痛阈提高百分率(%)=
给药后痛阈值 －给药前痛阈值
给药前痛阈值
× 100%
2． 2． 2 小鼠扭体实验
取体质量 18 ～ 22g 雌性小鼠，按“实验动物分组”
项下分组。实验前禁食 12h，连续给药 7 天，于末次用
药后 30min，腹腔注射 0． 6%醋酸溶液 0． 2mL，观察并
记录各小鼠腹腔注射醋酸至出现扭体反应(腹部收缩
内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行)的开始时间及 15min
内出现扭体反应的次数，并计算扭体抑制率［10］。
扭体抑制率(%)=
阴性对照组平均扭体次数 －给药组平均扭体次数
阴性对照组平均扭体次数
×
100%
2． 3 抗炎活性研究
参照文献［11］，取体质量 18 ～ 22g雌性小鼠，按“实
验动物分组”项下分组。实验前禁食 12h，连续给药 7
天，于末次给药 30min 后，于小鼠右耳两面涂二甲苯
0． 1mL /只致肿，左耳不涂为正常耳。1h 后处死小鼠，
用 0． 7mm打孔器冲下左右耳相同部位耳片，精密称定
耳片重量，以两耳片重量差作为肿胀度，计算各用药组
耳肿胀抑制率。
耳肿胀抑制率(%)=
给药组耳肿胀度 －对照组耳肿胀度
给药组耳肿胀度
× 100%
2． 4 数据统计
实验数据用统计学软件 SPSS作单因素方差分析，
组间比较。所得实验数据用(珋x ± s)表示，采用方差分
析检验差异显著性，P ＜ 0． 05 具有统计学意义，P ＜
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0. 01 认为有显著差异。
3 实验结果
3． 1 镇痛实验结果
3． 1． 1 小鼠热板实验结果
小鼠热板实验数据表明(见表 1) ，与阴性对照组
相比，芳香水对提高小鼠痛阈值效果最为显著，其高低
剂量组均对小鼠痛阈提高百分率有显著影响。总多糖
的效果略低于芳香水，其高剂量组在 120min内均表现
出显著效果，低剂量组在给药 90min 后也表现出显著
的效果。总黄酮的效果次之，给药后高低剂量组痛阈
提高百分率均随时间推移而逐渐提高。其高剂量组在
120min内也均有显著效果，但低剂量组的效果并不明
显。总皂苷和总生物碱的效果相对较弱，两者的高剂
量组在给药 90min 后才表现出明显的效果，低剂量组
的效果均不明显。
表 1 小鼠热板实验结果(n = 10，珋x ± s)
组别
给药后不同时间的痛阈提高百分率(%)
15min 30min 45min 60min 90min 120min
阴性对照组 －4．017 9 ±22． ．395 5 9．526 6 ±13．389 1 0．570 1 ±18．026 3 －2．336 3 ±17．294 5 1．929 8 ±18．024 1 4．034 5 ±14．718 4
阿司匹林组 67．989 0 ±11．865 9＊＊29．394 4 ±13．962 1 33．745 4 ±15．593 0* 33．917 6 ±16．857 3* 41．292 6 ±17．505 3* 66．218 0 ±16．197 2＊＊
总多糖高剂量组 66．795 3 ±13．509 9＊＊56．312 4 ±16．780 3＊＊ 57．284 3 ±17．433 7＊＊ 58．458 2 ±18．736 0＊＊63．596 7 ±19．930 7＊＊ 59．979 6 ±19．003 0＊＊
总多糖低剂量组 42．468 4 ±14．261 0＊＊21．519 0 ±15．896 5 26．880 8 ±17．433 7 38．381 6 ±19．777 5* 56．517 5 ±19．930 7＊＊ 60．736 9 ±18．002 2＊＊
总皂苷高剂量组 29．170 6 ±11．865 9* 25．548 1 ±14．302 7 26．515 7 ±15．198 1 24．837 9 ±16．455 9 48．146 4 ±17．932 4＊＊ 55．269 6 ±16．197 2＊＊
总皂苷低剂量组 14．047 1 ±12．155 3 18．693 2 ±14．717 3 19．332 6 ±16．669 6 22．460 5 ±16．455 9 34．623 5 ±19．099 9* 36．931 5 ±15．811 5＊＊
总黄酮高剂量组 44．794 8 ±12．507 7＊＊54．318 4 ±13．962 1＊＊ 56．572 1 ±15．198 1＊＊ 51．063 4 ±17．346 0＊＊61．850 7 ±17．505 4＊＊ 71．209 0 ±15．811 5＊＊
总黄酮低剂量组 22．982 2 ±12．155 3 30．630 5 ±14．302 7 26．814 4 ±15．593 0 22．570 1 ±16．857 3 31．204 2 ±21．038 8 35．458 8 ±16．666 8
总生物碱碱高剂量组 41．137 3 ±11．865 9＊＊39．373 5 ±13．962 1* 8．501 2 ±15．198 1 38．969 9 ±16．857 3* 42．327 7 ±17．505 4＊＊ 46．618 5 ±15．811 5＊＊
总生物碱碱低剂量组 43．518 1 ±12．155 3＊＊28．560 6 ±14．302 7 14．207 7 ±15．198 1 17．441 0 ±17．954 9 27．998 5 ±17．684 3 25．923 9 ±15．811 5
芳香水高剂量组 85．560 3 ±13．509 9＊＊83．464 1 ±13．962 1＊＊ 75．368 5 ±16．073 0＊＊ 61．060 9 ±16．857 3＊＊66．870 5 ±19．099 9＊＊ 68．121 7 ±15．811 5＊＊
芳香水低剂量组 40．665 3 ±12．507 7＊＊78．368 1 ±14．302 7＊＊ 44．731 9 ±15．198 1＊＊ 33．272 6 ±16．857 3* 34．508 4 ±17．932 4 31．864 4 ±16．666 8
注:与阴性对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
3． 1． 2 小鼠扭体实验结果
小鼠扭体实验数据显示(见表 2) ，与阴性对照组
相比，芳香水对抑制小鼠扭体次数的效果最强，其高、
低剂量组扭体抑制率分别高达 61． 39%和 49． 75%;总
皂苷高低剂量组、总黄酮高低剂量组以及总生物碱高
剂量组对小鼠扭体次数也表现出显著的抑制效果。对
于延迟小鼠扭体反应开始时间，芳香水高低剂量组、总
皂苷高低剂量组和总黄酮高剂量组的作用均有显著的
统计学意义，而总生物碱和总多糖的效果并不明显。
结果表明，芳香水和总皂苷对抑制小鼠扭体次数和开
始时间都有显著的作用。总黄酮的抑制作用也较为明
显，能有效减少小鼠的扭体次数。总生物碱的作用次
之，而总多糖的抑制效果最弱。此外，各部位均表现出
明显的浓度依赖关系。
3． 2 抗炎实验结果
小鼠耳廓肿胀实验数据显示(见表 3) ，总生物碱
高剂量组和芳香水高剂量组对小鼠耳廓肿胀的抑制率
高达 84． 40%和 64． 63%，其次，芳香水低剂量组和总
黄酮高剂量组的抑制率也达到 57． 87%和 54． 12%。
结果表明，芳香水及总生物碱对小鼠耳肿胀有显著的
抑制作用，且浓度依赖关系也较为显著。总黄酮也表
现出一定的抑制效果，总皂苷次之，而总多糖没有表现
出抑制作用。
表 2 小鼠扭体实验结果(n = 10，珋x ± s)
组别
给药后
扭体开始
时间(min)
扭体次
数(次)
扭体抑
制率(%)
阴性对照组 3． 995 ± 0． 667 40． 30 ± 4． 83 —
阿司匹林组 5． 040 ± 0． 640＊＊ 33． 25 ± 4． 40* 17． 49%
总多糖高剂量组 4． 738 ± 0． 726 38． 50 ± 1． 38 4． 47%
总多糖低剂量组 4． 195 ± 0． 723 36． 17 ± 14． 29 10． 25%
总皂苷高剂量组 5． 323 ± 0． 950＊＊ 21． 80 ± 5． 16＊＊ 45． 91%
总皂苷低剂量组 5． 233 ± 1． 096＊＊ 23． 60 ± 4． 42＊＊ 41． 44%
总黄酮高剂量组 5． 894 ± 0． 615＊＊ 21． 50 ± 3． 44＊＊ 46． 65%
总黄酮低剂量组 4． 653 ± 0． 647 25． 44 ± 6． 23＊＊ 36． 87%
总生物碱碱高剂量组 4． 622 ± 0． 560 26． 18 ± 6． 52＊＊ 35． 04%
总生物碱碱低剂量组 3． 903 0 ± 0． 687 35． 70 ± 4． 32 11． 41%
芳香水高剂量组 5． 982 ± 0． 900＊＊ 15． 56 ± 2． 13＊＊ 61． 39%
芳香水低剂量组 5． 250 ± 0． 858＊＊ 20． 25 ± 1． 982＊＊ 49． 75%
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表 3 小鼠耳肿胀实验结果(n = 10，珋x ± s)
组别 肿胀度(mg) 抑制率(%)
阴性对照组 9． 613 ± 4． 177 6 －
阿司匹林组 5． 900 ± 4． 159 6 38． 62%
总多糖高剂量组 10． 583 ± 3． 521 6 － 10． 10%
总多糖低剂量组 11． 583 ± 1． 614 2 － 20． 50%
总皂苷高剂量组 6． 520 ± 3． 603 0 32． 17%
总皂苷低剂量组 8． 070 ± 5． 483 1 16． 05%
总黄酮高剂量组 4． 410 ± 3． 945 3* 54． 12%
总黄酮低剂量组 5． 275 ± 2． 848 4 45． 12%
总生物碱高剂量组 1． 500 ± 0． 983 6＊＊ 84． 40%
总生物碱低剂量组 6． 500 ± 8． 327 5 32． 38%
芳香水高剂量组 3． 400 ± 1． 643 2＊＊ 64． 63%
芳香水低剂量组 4． 050 ± 5． 491 6* 57． 87%
注:与阴性对照组比，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;肿胀度(mg)=肿胀
耳 －空白耳
4 讨论
研究结果显示，棉团铁线莲芳香水、总多糖以及总
黄酮均能够显著提高热板实验中小鼠的痛阈提高百分
率、药效稳定且持续时间长。小鼠醋酸扭体实验中，芳
香水、总皂苷及总黄酮均能显著减少小鼠扭体次数且
对于延迟扭体反应开始时间也有明显的作用。二甲苯
致小鼠耳肿胀实验中，总生物碱高剂量组和芳香水高
剂量组的抑制效果最为显著，抑制率高达 84． 40%和
64． 63%，其次总黄酮也表现一定的抗炎效果。研究结
果表明，棉团铁线莲芳香水的镇痛和抗炎作用均较为
显著和稳定;总多糖、总黄酮以及总皂苷主要表现为镇
痛活性;总生物碱则主要表现为抗炎活性。
周效思等研究证实毛茛科植物威灵仙(Clematis
chinensis Osbeck)水提液有显著的镇痛抗炎作用［12］。
徐先祥等对威灵仙总皂苷进行提取研究，结果表明威
灵仙总皂苷具有显著的镇痛抗炎作用，并认为威灵仙
皂苷类成分可能为其镇痛抗炎作用的主要物质基
础［13］。但对于东北铁线莲和棉团铁线莲镇痛抗炎的
物质基础尚未见报道。本文对《中国药典》威灵仙收
载品种之一的棉团铁线莲从化学成份类型的角度对其
镇痛抗炎作用有效部位进行了初步的药效学筛选研
究;并结合东北铁线莲镇痛抗炎有效部位药效学筛选
的研究结果［14］，提示中药威灵仙镇痛抗炎作用并不仅
仅是某一部位单独作用的效果，而是由多个部位联合
作用的结果。传统临床多使用威灵仙水煎液镇痛抗
炎，本研究结果对威灵仙的临床应用和进一步研发具
有提示作用。
参考文献:
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北京:科学出版社，1989:156 － 158．
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Screening of Anti － inflammatory and Analgesia Effective
Fractions in Clematis Hexapetala
YANG Lin，LIN Peng，QIAN Jiao － ling，LONG Jing，LI Wei － juan，DONG Jian － li
(School of Life Science and Engineering，Lanzhou University of Technology，Lanzhou 730050，China)
Abstract:Objective:To investigate the anti － inflammatory and analgesia effect of different fractions of Clematis hexap-
etala． Methods:Use organic solvent to extract Clematis hexapetala and its different chemical fractions． Hot plate and
acetic acid writhing test in mice were used to evaluate the pain releasing effect of Clematis hexapetala，and the anti － in-
flammatory effect was observed by ear swelling induced by xylene． Results:The aqua aromatic，total polysaccharide and
total flavanone could obviously enhance mice＇s threshold of pain;the aqua aromatic，total saponin and total flavanone
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中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
2013 年第 41 卷第 3 期
Vol. 41，No. 3，2013
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could obviously inhibit acetic acid － induced － wring reaction in mice． In addition，total saponin could obviously inhibit
ear tumefaction，and their high dose group of inhibition rate was as high as 84． 40%，64． 63% and 54． 12%，respective-
ly． Conclusion:Clematis hexapetala＇s aqua aromatic，total flavanone and total saponin are the effective parts for analge-
sia and the total alkaloids and aqua aromaticand are the effective parts for anti － inflammation． The results indicate that
the anti － inflammatory and analgesia effects of Clematis hexapetala may be exerted by plurality of many parts together．
Key words:Clematis hexapetala;Effective fraction;Anti － inflammation;
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
Analgesia
关黄柏 DNA限制性片段引物筛选
于英君，张天雷*
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:通过 AFLP指纹图谱构建筛选适宜关黄柏( Cortex Phellodendri Chinensis，下同) 的特定引
物，改多态性引物可以直接应用于不同种群黄柏遗传多样性分析。方法:采用适宜的总 DNA 提取方法
获得目的基因组，通过限制性内切酶和连接酶消化，预扩增和选择性扩增等手段对 64 种引物组合进行
凝胶分析。结果:变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果显示，3 － 1，3 － 2，3 － 3，3 － 5，5 － 6，6 － 1，6 － 5，8 －
5，9 － 7，9 － 8。10 对引物组合多态性丰富。结论: 该方法适用于关黄柏遗传多样性实验分析。
关键词:关黄柏; AFLP;引物筛选
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2013)03 － 0027 － 04
收稿日期:2013 － 01 － 12 修回日期:2013 － 03 － 09
基金项目:黑龙江省研究生创新基金(No． YJSCX2011 － 446HLJ)
作者简介:于英君(1953 －) ，男，教授，博士研究生导师。主要研究方向:中药有效成分抗肿瘤作用及延缓衰老作用。
* 通讯作者:张天雷(1987 －) ，男，硕士研究生。专业:中西医结合基础。
AFLP(扩增片段长度多态性)技术是一项广泛应
用分子标记技术，AFLP 被认为是迄今为止最有效的
分子标记。通过分析生物体内的 DNA 片段扩增的长
度多态性来诊断生物体内在基因排布与外在形状表现
规律的技术［1］。它结合了 RFLP 和 PCR 技术特点，具
有 RFLP技术的可靠性和 PCR 技术的高效性。由于
AFLP扩增可使某一品种出现特定的 DNA 谱带，而在
另一品种中可能无此谱带产生，因此，这种通过引物诱
导及 DNA扩增后得到的 DNA多态性可做为一种分子
标记。
1 实验材料与方法
1． 1 实验材料
实验对象关黄柏，采自黑龙江中医药大学药用植
物园栽培品(记为 Z) ，黑龙江省阿城市横头山(记为
A)及黑龙江省尚志市帽儿山(记为 M)三个种群。其
中 Z随机采集幼嫩枝叶样品共 20 个个体，A随机采集
幼嫩枝叶共 20 个个体，M 随机采集幼嫩枝叶 1 个个
体。经黑龙江中医药大学王振月教授鉴定合格。
1． 2 实验所用选择性扩增引物组合
结果见表 1。
表 1 选择性扩增引物对选择表
EM 1 2 3 4 5 6 7 8
3 AAC /CAA AAC /CAC AAC /CAG AAC /CAT AAC /CTA AAC /CTC AAC /CTG AAC /CTT
4 AAG /CAA AAG /CAC AAG /CAG AAG /CAT AAG /CTA AAG /CTC AAG /CTG AAG /CTT
5 ACA /CAA ACA /CAC ACA /CAG ACA /CAT ACA /CTA ACA /CTC ACA /CTG ACA /CTT
6 ACT /CAA ACT /CAC ACT /CAG ACT /CAT ACT /CTA ACT /CTC ACT /CTG ACT /CTT
7 ACC /CAA ACC /CAC ACC /CAG ACC /CAT ACC /CTA ACC /CTC ACC /CTG ACC /CTT
8 ACG /CAA ACG /CAC ACG /CAG ACG /CAT ACG /CTA ACG /CTC ACG /CTG ACG /CTT
9 AGC /CAA AGC /CAC AGC /CAG AGC /CAT AGC /CTA AGC /CTC AGC /CTG AGC /CTT
10 AGG /CAA AGG /CAC AGG /CAG AGG /CAT AGG /CTA AGG /CTC AGG /CTG AGG /CTT
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2013 年第 41 卷第 3 期
Vol. 41，No. 3，2013
中 医 药 学 报
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