全 文 ：超声提取还阳参多糖实验方法的研究＊
孙进华　董梅娟　倪　艳■
(山西省中医药研究院·太原 030012)
摘　要　目的:筛选还阳参多糖的最佳超声提取因素。方法:用正交试验法进行提取因素的研究 , 考察超
声时间 、料液比及超声次数对还阳参多糖提取效率的影响 , 并用紫外-可见分光光度法对还阳参多糖的
提取液进行了含量测定。结果:还阳参多糖的最佳提取因素为加20倍水 , 超声3 次 ,每次 20 分钟。结论:
该方法简单且多糖收率高 , 可用于还阳参多糖的提取。
主题词　还阳参/分析　还阳参多糖/分离和提纯　超声提取
＊国家自然科学基金资助项目 No.30873367
■通讯作者
　　还 阳参 为菊 科植 物屠 还 阳参(crepis turczaniowii
C.A.Mey)的全草 , 别名屠还阳参 、驴打滚儿草 , 主要分布在
山西 、内蒙古一带 , 资源丰富 ,为当地民间习用草药材。本品
味苦 ,性微寒 , 具有止咳平喘 、清热解毒 、益气等功效 ,常用于
治疗支气管炎 、肺结核 、喘息性慢性支气管炎和无名肿毒等
疾病 ,疗效显著[ 1 ,2] 。多糖类成分为还阳参中水溶性主要成
分之一 , 具有多种生物学活性 , 进一步研究还阳参多糖具有
重要意义。本文研究了采用超声提取法提取还阳参中多糖
的可行性 ,并用正交实验设计 , 以还阳参多糖的含量为指标 ,
对影响还阳参多糖提取率的多个因素进行了考察 ,以优选出
超声提取还阳参多糖的最佳因素。
1　实验材料
仪器:UV-721 紫外分光光度计:上海第三分析仪器厂;
CX-150 型超声反应机:北京市天海双龙医疗设备有限责任
公司;BP211D分析天平:德国赛多利斯。试药:还阳参:采集
于山西省山阴县玉井镇 ,经山西省药品检验所专家鉴定为菊
科植物屠还阳参的全草;葡萄糖对照品:中国药品生物制品
检定所 ,批号:110833-200503;苯酚 、浓硫酸均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　正交设计　
还阳参药材质地轻泡 , 多糖多为水溶性 , 故本试验采用
3 个因素 ,超声处理时间(A)、超声次数(B)、料液比(C), 其因
素水平见表 1 ,据 L9(34)正交表进行实验 ,见表 2。
表 1 因素水平表
水平　　 超声时间(min)
A
超声次数
B
料液比
C
1　　 10 1 1:20
2　　 15 2 1:40
3　　 20 3 1:60
2.2　还阳参多糖的含量测定　以葡萄糖为标准品 , 采用苯
酚-硫酸法测定还阳参的多糖含量。
2.2.1　样品溶液的制备　分别取还阳参粗粉 18 份 , 每份
0.2g ,精密称定 , 按表 2 正交实验设计方案(n =2), 重复两
次 ,提取液过滤 ,滤液移至 500ml 容量瓶中 , 加水至刻度 , 摇
匀 ,作为备用样品溶液。
2.2.2　对照品溶液的制备　精密称取 105℃干燥至恒重的
无水葡萄糖 25mg , 置 250ml容量瓶中加水溶解并定容至刻
度 , 摇匀 , 即得对照品溶液(每 1ml 中含无水葡萄糖
0.1089mg)。
2.2.3　苯酚试液的配制　取苯酚 100g , 加铝片 0.1g 和碳酸
氢钠 0.05g , 蒸馏 , 收集沸腾时馏分。 称取 5g , 加水 100ml溶
解 ,置棕色瓶内放冰箱中备用。
2.2.4　标准曲线的绘制　精密吸取葡萄糖对照品溶液 0、
0.2、0.4 、0.8 、1.0ml , 分别置于 10ml具塞试管中 ,依次加蒸馏
水使最终体积为 2.0ml , 各管再加入 1.0ml苯酚试掖 , 混匀 ,
迅速加入 5.0ml的浓硫酸 , 摇匀 ,静置 10 分钟 , 40℃水浴保温
15分钟后 , 取出 ,迅速冷却至室温 , 于 490nm 处测定吸光度 ,
以多糖的含量(C ,mg/ml)为横坐标 , 以吸光度(A)为纵坐标 ,
绘制标准曲线。回归方程如下式:A=0.0463C-0.0206 , r=
0.993 , 表明多糖在 0.002722～ 0.01361mg ml范围内具有良好
线性关系。
2.2.5　样品含量测定　精密吸取样品溶液 1ml ,按标准曲线
制备项下的方法 , 自“加 5%苯酚溶液 1ml起” ,依法测定吸光
度 ,从标准曲线上读出样品溶液中还阳参多糖含量 , 按干燥
品计算。还阳参多糖的测定结果见表 2。
表 2 正交实验结果
试验号 A B C D 多糖含量(%)
1 1 1 1 1 8.95
2 1 2 2 2 12.84
3 1 3 3 3 15.46
4 2 1 2 3 12.43
5 2 2 3 1 17.87
6 2 3 1 2 19.49
7 3 1 3 2 16.53
8 3 2 1 3 18.84
9 3 3 2 1 19.53
K1 37.25 37.91 47.28 46.35
K2 49.79 49.55 44.80 48.86
K3 54.90 54.48 49.86 46.73
R 17.65 16.57 5.06 2.51
·139·中国中医药科技 2010年 3 月第 17卷第 2 期 Mar.2010 Vol.17 No.2
表 3 方差分析表
因素 方差来源 离差平方和 自由度 方差 F P
A 54.99 2 27.50 45.06 <0.05
多糖 B 48.26 2 24.13 39.55 <0.05
含量 C 4.27 2 2.14 3.50
D 1.22 2 0.61 1
2.3　结果　对表 2 进行直观分析可知 , 极差大小显示各因
素的影响作用 , 依次为 A>B>C , 且还阳参药材质地较轻 ,
0.2g药材粗粉需要近 20 倍的水才能将其淹没 , 故还阳参多
糖的最佳提取因素为 A3B3C1 , 即加 20 倍水 , 超声 3 次 , 每次
20 分钟。由表 3 方差分析结果可知 , 以多糖含量为评价指
标 ,超声时间(A)与超声次数(B)有显著性差异 , 而料液比
(C)无显著性差异。
2.4　方法学考察
2.4.1　回收率试验　称取 6 份还阳参粗粉各 0.2g , 精密称
定 ,按照优选出的最佳条件制备样品溶液 , 精密吸取样品溶
液0.5ml各加 0.3ml葡萄糖对照品溶液 , 按标准曲线制备项
下的方法 , 测定吸光度 , 最后测定结果为平均回收率为
99.38%和 RSD为 1.50%。
2.4.2　重复性试验　称取 5 份还阳参粗粉各 0.2g , 精密称
定 ,按优选出的最佳条件制备样品溶液 , 按照 2.2.4 项下的
方法测定吸光度。结果样品中多糖的平均含量为 19.35%,
RSD为 1.43%。
3　讨论　超声提取技术用于中药制剂领域具有简便快速 、
高效节能 、重复性好 、不影响提取物的活性等许多传统方法
无法比拟的优点 , 多糖类成分是近年来中药天然药物研究领
域中倍受关注的一类重要成分 ,其药理作用广泛 , 独特的活
性和低毒特点在临床应用中具有极大的潜力[3] 。还阳参多
糖作为还阳参中水溶性主成分之一 , 具有多种生物活性 , 对
正常细胞没有毒副作用 , 进一步研究开发还阳参多糖具有重
要意义。
本实验首次采用超声提取法从还阳参中提取多糖 , 与常
规还阳参多糖热水提取法[4]相比 , 全程中无需高温 , 避免了
高温对还阳参多糖分子结构的破坏 , 操作简单快捷 , 并能从
还阳参中充分提取多糖 , 为还阳参的质量评价和进一步研究
还阳参多糖的成分结构及生物活性奠定基础。
　　参考文献
1　倪艳 ,刘振权.还阳参止咳平喘活性部位的研究.时珍国医国药 ,
2007 , 18(3):519.
2　国家药典委员会.中药大辞典.上海:上海科学技术出版社 , 1975:
1106.
3　方积年 ,丁侃.天然药物-多糖的主要生物活性及分离纯化方法.
中国天然药物 , 2007, 5(5):338.
4　李德华 ,董梅娟 ,倪艳.还阳参多糖提取工艺的研究.中国中医药
科技 , 2008 ,15(5):370. (收稿:2009-03-16)
鹿茸在不同体质小儿抽动-秽语综合征治疗中的选择应用＊
董慧敏　(河北省唐县中医院·唐县 072350)
＊河北省中医药管理局计划内科研项目No.20082818
获河北省中医药学会科技进步二等奖No.2008242
1　临床资料　
1.1　诊断标准　依据《诸福棠实用儿科学》(第 7版 , 人民卫生出版
社)标准。
1.2　排除标准　①其他精神 、神经因素发病及其他原因引起的肌肉
痉挛;②颅脑外伤及异物 、肿瘤 、癫痫;③微量元素的缺乏或中毒;④
有其他慢性病 、遗传病及影响本病疗效观察的疾病者;⑤对本汤剂
过敏或不能耐受者;⑥治疗期间未按方案服药 、依从性差者;或应用
其它可能影响本病治疗效果观察的药物者。
1.3　一般资料　入选病例 30例 ,男 26例 ,女 4例;年龄 3～ 15岁;病
程 0.5～ 5年。分为阳虚体质(形体白胖 ,面色淡白无华 ,平素怕寒 、
喜暖 ,四肢倦怠 ,便溏 ,尿清长 ,舌体胖嫩 , 边有齿痕 , 苔润 ,脉沉迟而
弱)8例 ,非阳虚体质 22例。
2　治疗方法　阳虚体质组:予固本熄风汤(由龙骨 、牡蛎 、钩藤 、全
蝎 、玄参 、熟地 、白芍 、甘草组成 ,本院煎药室浓煎 100ml 为 1日量)加
鹿茸 0.05g kg 冲服 ,每日 1剂。非阳虚体质组:单纯应用固本熄风
汤 ,同上。治疗 1 、3个月及停药后 6个月进行症状计分 、判定疗效。
统计学处理:采用 χ2 和 t 检验。
3　结果
3.1　疗效标准　显效:症状积分总分值≤2 分。有效:症状积分总
分值≤4且>2分。无效:症状积分总分值>4分。
3.2　两组疗效比较　两组疗效相当 ,无统计学差异。
3.3　两组症状积分比较　见表 1。
表 1 两组症状积分比较(x±s ,分)
组别 n 症状积分
阳虚体质组 8
治疗前 8.23±2.61
治疗 1个月 5.33±1.79＊
治疗 3个月 0.49±0.28＊＊
停药 6个月 0.65±0.16＊＊
非阳虚体质组 22
治疗前 7.98±2.34
治疗 1个月 4.96±0.87＊
治疗 3个月 0.51±0.32＊＊
停药 6个月 0.58±0.27＊＊
　　与本组治疗前比较＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;与非阳虚体质组
疗后比较 P>0.05
4　体会　抽动-秽语综合征是儿科常见病。我院自 1998年始应用
固本熄风合剂(固本熄风汤+鹿茸)治疗该病 , 方以通补督脉(阳中
求阴)、滋补阴液(阴平阳秘)治其本 , 平肝熄风治其标 , 收效显著。
其中鹿茸对难治性复发性病例尤可提高疗效。 但鹿茸为珍稀药材 ,
且价格昂贵 ,不适于广泛应用。故近年来本课题组从中医体质辨证
论治 ,将本病分为阳虚体质和非阳虚体质进行针对性治疗。本文结
果表明 ,加鹿茸的阳虚体质组和不加鹿茸的非阳虚体质组疗效相
当。提示 ,在临床治疗小儿抽动-秽语综合征时 ,只对阳虚体质者
加鹿茸即可 ,这样既可收到较好疗效 , 又达到了节约资源 , 减少医药
支出 ,减少患者经济负担的目的。 (修回:2009-12-23)
·140· 中国中医药科技 2010 年 3月第 17 卷第 2期 Mar.2010 Vol.17 No.2