全 文 ：云南不同地点短葶飞蓬中野黄芩苷含量比较
史云东 1 , 沈 涛2, 3 ,贾琳 1 , 金 航 2＊　(1.玉溪师范学院资源环境学院 ,云南玉溪 653100;2.云南省农业科学院药用植物研究所 ,云
南昆明 650223;3.云南大学生命科学学院,云南昆明 650091)
摘要　[目的 ]比较云南不同产地短葶飞蓬中野黄芩苷的含量 ,为短葶飞蓬的良种选育及 GAP栽培提供依据。 [方法 ]用 HPLC法测定
短葶飞蓬中野黄岑苷的含量 ,色谱条件为:岛津Shim-packVP-ODS液相色谱柱(150.0mm×4.6mm, 5μm);流动相甲醇-0.1%磷酸水
溶液(40∶60, V/V);流速 1.0ml/min;检测波长 335nm;柱温 25℃;进样量 10μl。 [结果] 8个产地的短葶飞蓬中野黄芩苷的含量差异较
大 ,昭通巧家药山短葶飞蓬野黄芩苷含量最高(2.628%),昆明双龙镇短葶飞蓬野黄芩苷含量最低(1.597%)。 [结论 ]该方法精密度、重
现性好 ,适于短亭飞蓬中野黄岑苷含量的测定 ,为云南短葶飞蓬的良种选育及 GAP栽培提供了依据。
关键词　短葶飞蓬;野黄芩苷;含量比较;HPLC法
中图分类号　S567　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2011)05-02664-02
ComparisonoftheContentofScutelarininErigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz.fromDifferentPlacesofYunnanProvince
SHIYun-dongetal　(ColegeofResourceandEnvironment, YuxiNormalUniversity, Yuxi, Yunnan653100)
Abstract　[ Objective] TodeterminethecontentofscutelarininErigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz.fromdiferentplacesofYunnan
Province.[ Method] ThecontentofscutelarinwasdeterminedbyHPLC, andtheHPLCconditionswereproposedasfolows:columnofShim-
packVP-ODS(150.0mm×4.6mm, 5μm), mobilephaseofCH3OH- 0.1%phosphoricacid(40∶60, V/V), flowrateof1.0ml/min, col-umntemperatureof25℃anddetectionwavelengthof335nm.[ Result] Erigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz.fromdifferentplacesofYunnan
Provincediferedfromeachotherinscutelarin, andthosefromYaoshan, ZhaotongandShuanglongTownofKunmingwererichest(2.628%)
andlowest(1.597%)inscutelarin, respectively.[ Conclusion] Goodinprecisionandrepeatability, themethodestablishedinthiscaseisinfa-
vorofthedeterminationofscutelarininErigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz., andthisstudyprovidesbasisforthebreedingofimproved
varietyandGAPcultivationofErigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz..
Keywords　Erigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz.;Scutelarin;Comparisonofcontent;HPLC
基金项目　云南省科技创新强省计划项目(2007C0219Z-10)。
作者简介　史云东(1974-),男 ,云南玉溪人 ,讲师 ,从事生物技术教学
与研究 , E-mail:syd@yxnu.net。 ＊通讯作者, 副研究员 ,博
士生导师 , E-mail:jinhang2009@126.com。
收稿日期　 2010-11-24
　　短葶飞蓬 [ Erigeronbreviscapus(Vant.)HandMaz.]又
名灯盏花 ,是菊科飞蓬属植物 [ 1] ,在我国云南曲靖 、昆明 、楚
雄 、大理 、文山等地均有分布 ,其分布海拔为 1 630 ～3 280m,
常生长于开阔的山坡 、草地及林缘地带 [ 2] 。短葶飞蓬全草可
入药 ,已被 《中国药典 2010版 》收录 [ 3] ,具有活血通络 、祛风
散寒等多种功效 ,常用于治疗由于缺血所致的脑部及心血管
疾病 [ 4] 。研究发现 ,短亭飞蓬中主要的活性成分为黄酮类
(Flavonoids)物质 ,其中以野黄芩苷(Scutelarin)为代表性化
合物 [ 5] 。野黄芩苷具有抑制癌细胞生长 ,降低血液胆固醇含
量 ,预防急性心肌梗死等作用 [ 6-7] 。因此 ,植株中野黄芩苷
含量的高低是评价短葶飞蓬药材质量好坏的重要依据 [ 3] 。
笔者测定了云南省内不同地点短葶飞蓬中野黄芩苷的含量 ,
并进行比较 ,以期为短葶飞蓬的良种选育及 GAP栽培提供
依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　研究对象。短亭飞蓬于 2009年 5月采自云南昆明 、
腾冲 、文山 。
1.1.2　主要试剂。野黄芩苷对照品(批号:110842-200605),
购自中国药品生物制品检定所;甲醇 ,色谱纯 ,由 Fisher公司
生产;水为超纯水;其他试剂均为市售分析纯。
1.1.3　主要仪器。岛津 LC-10 ATVP高效液相色谱仪 ,由岛
津公司生产;SY3200-T超声波清洗仪 ,由上海声源超声波仪
器设备有限公司生产;电子分析天平(感量:0.1mg),由美国
奥豪斯公司生产。
1.2　方法
1.2.1　材料预处理。将采集的样品保育于云南省农科院药
用植物研究所资源圃内 ,每个产地选取 15株全草 , 50 ℃烘
干 ,单株粉碎 ,过 80目筛 ,备用。
1.2.2　HPLC条件 [ 3] 。色谱柱为岛津 Shim-packVP-ODS液
相色谱柱 (150.0 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇
-0.1%磷酸水溶液(40∶60, V/V);流速为 1.0 ml/min;检测
波长为 335nm;柱温为 25 ℃;进样量为 10μl。
1.2.3　对照品溶液的制备。精密称取野黄芩苷对照品 10.0
mg,置于 10 ml容量瓶中 ,加适量甲醇定容 ,摇匀 ,配制成 1.0
mg/ml的对照品溶液。
1.2.4　供试溶液的制备。精密称取短葶飞蓬粉末 0.4 g放
入具塞试管中 ,加入适量甲醇 , 45 ℃条件下水浴锅中静置 1
h,超声 45 min(重复 3次),将提取液浓缩并转移至 10 ml容
量瓶中 ,定容 ,用 0.22μm滤膜过滤 ,即得供试品溶液。
1.2.5　方法学考察。
1.2.5.1　线性关系考察。精密吸取 1 ml对照品溶液 ,置于
5ml容量瓶中 ,定容稀释。分别吸取 4、5、6、7、8、9、10 μl进
样 ,以峰面积为纵坐标(y),进样体积为横坐标(x)绘制标准
曲线 [ 8] ,计算回归方程 。
1.2.5.2　精密度试验 。精密吸取 0.2 mg/ml的野黄芩苷对
照品溶液 ,按 “1.2.2”中色谱条件测定 ,计算野黄芩苷色谱
峰峰面积相对标准偏差(RSD)。
1.2.5.3　稳定性试验。称取短葶飞蓬粉末 0.4 g,按 “1.2.
4”中方法制备成样品溶液 ,分别于第 0、2、4、6、8h进样 ,计算
野黄芩苷峰面积 RSD。
1.2.5.4　重现性试验。精密称取 6份 0.4 g样品粉末 ,按
“1.2.4”中方法制备成样品溶液 ,分别进行分析 ,计算峰面积
RSD。
责任编辑　刘群燕　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(5):2664-2665, 2746
1.2.5.5　加标回收率试验。精密称取 6份已知含量的样品
粉末各 0.4g,在每份中精确加入浓度为 1.0 mg/ml的野黄芩
苷对照品溶液各 1 ml,按 “1.2.2”中色谱条件测定 ,计算平均
回收率和 RSD。
1.2.6　样品含量测定。将 8个产地共 120株短葶飞蓬样品
粉末分别按 “1.2.4”中方法制备成样品溶液 ,分别进样 ,计算
样品中野黄岑苷含量。
2　结果与分析
2.1　方法学考察结果
2.1.1　线性关系 。计算得回归方程为 y=0.445 3x-
0.018 0, R2 =0.999 8,表明野黄芩苷在 0.8 ～ 2.0 μg/ml浓
度范围内 ,与峰面积线性关系良好。
2.1.2　精密度。计算得野黄岑苷峰面积 RSD为 0.4%(n=
6),表明仪器精密度良好。
2.1.3　稳定性。计算得野黄岑苷峰面积 RSD为 1.9%(n=
5),表明样品溶液在 8h内稳定。
2.1.4　重现性。计算得野黄芩苷峰面积 RSD为 2.3%(n=
6),表明方法重现性良好。
2.1.5　回收率。计算得野黄芩苷平均回收率为 97.3%,
RSD为 1.8%。
2.2　样品含量测定结果　对照品和样品 HPLC色谱图如图
1所示。不同产地短亭飞蓬中野黄岑苷含量测定结果见
表 1。
　　由表 1可知 , 8个产地中 ,昭通巧家药山的短葶飞蓬中
野黄芩苷含量最高 ,为 2.628%;昆明双龙镇的短葶飞蓬野黄
芩含量最低 ,为 1.597%。
　注:同列 a.对照品;b.样品;A.野黄岑苷。
　Note:a.Comaprativescutelarin;b.Sample;A.Scutelarin.
图 1　对照品和样品的 HPLC色谱图
Fig.1　HPLCChromatogramofcomprativeScutelarinandsample
表 1　不同产地短葶飞蓬中野黄芩苷含量
Table1　ThemeancontentsofscutelarininErigeronbreviscapusa-
mongdifferentplace %
产地
Location
平均含量
Meancontent
含量变异系数
CV
昆明双哨乡 1.904ab 20.716
昆明双龙镇 1.597a 25.432
禄劝县雪山乡 1.635a 33.573
禄劝县转龙镇 2.165ab 26.947
昆明筇竹寺 1.994ab 30.924
昭通巧家药山 2.628b 20.716
腾冲芒棒乡 2.402ab 40.934
文山丘北县 2.419ab 24.624
平均 2.078 34.201
　注:表中同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
　Note:Diferentlowercaseletersmeansignificantdiferenceat0.05level.
3　结论与讨论
试验中对比研究了甲醇 -水(40∶60, V/V)、甲醇 -0.1%
磷酸水溶液(40∶60, V/V)为流动相的效果 ,结果表明:以甲醇
-0.1%磷酸水溶液为流动相 ,样品峰之间具有较好的分离
度 ,且峰型较好 ,故选其为该试验的流动相。野黄芩苷在 335
nm下有最大吸收值 ,故选取 335 nm为野黄芩苷的检测
波长。
野黄芩苷易溶于甲醇 [ 9] ,故选取甲醇为提取剂。目前超
声波提取法已被广泛应用于中草药有效成分的提取 ,该方法
具有高效 、快速的特点 [ 10] 。通过多次预试验对超声波不同
提取时间进行对比研究 ,结果表明 ,每次用 10 ml甲醇超声
45 min平行提取 3次 ,短葶飞蓬中的野黄芩苷提取较完全 。
短葶飞蓬是一个广布种 ,由于各地生境的差别 ,加之地
理隔离等因素的影响 ,使植株在形态 、生理诸多方面发生变
化 [ 11] 。该试验对云南 8个产地短葶飞蓬中野黄芩苷的含量
进行了测定 ,结果表明 ,各产地间短葶飞蓬野黄芩苷的含量
有差异 ,且均高于《中国药典 2010版 》规定的野黄芩苷的标
准(0.3%)[ 3] 。由试验结果还可知 ,不同产地的短亭飞蓬中
野黄芩苷含量总体变异系数为 34.201%,同一产地内植株间
野黄芩苷含量变异系数为 20.716% ～ 40.934%,表明除环境
作用外 ,个体间的差异对药材整体质量也有影响。一些产地
相距较远的短葶飞蓬中野黄芩苷含量有差异 ,但未达到显著
水平 ,说明产地间距离不是影响野黄芩苷含量的唯一因素。
不同产地短葶飞蓬中野黄芩苷含量的差异有待从药材生长
环境 、个体性状等方面进一步探讨 。
参考文献
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(下转第 2746页)
266539卷 5期　　　　　　　　　　　　　　　史云东等　云南不同地点短葶飞蓬中野黄芩苷含量比较
凇天气出现的日数年代际变化总体呈下降趋势 ,在近 48年
中 ,六盘水各站雨凇天气总日数为 1516日。 20世纪 60年代
雨凇日数最多 ,全市共出现 357 d, 70、80年代雨凇日数也较
多 ,分别为 351、347 d, 60 ～ 80年代雨凇日数占总数的
69.7%。进入 90年代以来雨凇日数明显减少 ,仅为 233 d,
2000 ～ 2008年出现日数最少 ,共出现了 228d。可见 , 20世纪
90年代以来是近 48年来六盘水雨凇天气过程的少发期。
表 1　六盘水各年代雨凇日数的分布
Table1　DistributionofglazedaysineveryageofLiupanshui
年代Age 总日数∥dTotaldays
平均日数∥dAveragedays
各年代距平//dAnomalyofeveryage
各年代总日数占 48年总日数的比例∥%Proportionofeveryagedaysintotaldaysin48years
60 357 39.6 +35 23.6
70 351 35.1 +29 23.2
80 347 34.7 +25 22.9
90 233 23.3 -89 15.3
2000～ 2008 228 28.5 -94 15.0
2.3　气候变暖对六盘水雨凇灾害天气的影响　利用 1961 ～
2008年月平均气温资料 ,统计六盘水市 11月 ～翌年 3月平
均气温距平序列 ,分析六盘水市冬季气温变化特征。结果表
明 , 20世纪 80年代末以前 ,六盘水市冬季气温虽有些波动 ,
但没有出现明显的趋势变化 , 80年代末以后 ,六盘水冬季气
温明显增高 , UF曲线和 UB曲线在临界线内存在几个交点 ,
表明六盘水冬季气温存在明显的突变现象 ,比较明显的突变
点是 1989年 ,且通过了显著水平的信度检验 ,即 1989年之后
六盘水冬季气温呈由冷向暖的趋势转变。统计发现 , 1961 ～
1989年冬季气温距平值为 -0.2 ℃, 1990 ～ 2008年冬季气温
距平值为 0.3 ℃,突变后气温升高了 0.5 ℃。
　　从前面的分析发现 , 20世纪 80年代末以来 ,六盘水冬季
气温呈明显的增加趋势 ,为了进一步分析气候变化对雨凇灾
害天气产生的影响。采用 Mann-Kendal突变检测法分析了
近 48年的雨凇日数的突变性质 。由图 3可见 , UF曲线和
UB曲线在临界线内存在几个交点 ,比较明显的突变点发生
在 1989年 ,且通过了 0.05显著水平的信度检验。 1989年以
前变化趋势不明显 , 1989年以后六盘水雨凇日数呈明显的下
降趋势 ,表明气候变暖前后六盘水雨凇日数的差异十分显
著 ,随着冬季气温增高 ,雨凇日数明显减少 。统计发现 1989
年以前年平均雨凇日数为 36 d, 1989年以后为 24 d。
注:2条虚直线为 0.05显著水平上的检验值 U(U=±1.96)
Note:TwodotedstraightlinesrepresenttestvalueU(U ±1.96)are
significantatthelevelof0.05.
图 3　六盘水雨凇日数的 Mann-Kendall统计量
Fig.3　Mann-KendalstatisticofglazedaysinLiupanshui
3　结论
(1)由于六盘水各测站所处的地理位置及海拔高度不
同 ,雨凇天气差异显著 。出现雨凇日数最多的是水城 ,平均
为 21.1 d/a;盘县为 5.7d/a;出现频次最少的是六枝 ,为 4.8
d/a。六盘水 11月 ～翌年 3月各月都有雨凇出现 ,但主要出
现在 12月 ～翌年 2月 ,其中 1月出现的雨凇日数最多。
(2)近 48年六盘水雨凇日数呈下降趋势 , 20世纪 60 ～
80年代雨凇日数较多 ,进入 90年代以来雨凇日数明显减少 ,
90年代至今是近 48年来六盘水雨凇天气过程的少发期。
(3)20世纪 80年代末以前 ,六盘水市冬季气温虽有些
波动 ,但没有出现明显的趋势变化 , 80年代末以后 ,冬季气温
明显增高 ,存在明显的突变现象 ,比较明显的突变点是 1989
年;分析发现六盘水雨凇日数的突变也发生在 1989年 ,表明
气候变化对雨凇日数的变化影响较大 ,随着冬春季气温增
高 ,雨凇日数明显减少 , 1989年以前年平均雨凇日数为 36 d,
1989年以后为 24 d。
参考文献
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