全 文 ：2(X) 7 年 9 月第 30 卷第 3 期
S e P
.
2 (X) 7
,
V OI
.
30
,
N .o 3
成都中医药大学学报
~
d of C】l e n目 u U n ive sr i yt of CT M
高效液相色谱法测定紫花地丁中秦皮乙素的含量
陈胡兰 汤沛然 张梅 赵波
成都中医药大学。 四川 成都 l6 0() 7 5
摘 要 : 目的 : 采用高效液相色讲 (刊阮C ) 法建立 中药材紫花地丁 中秦皮 乙素的含圣浏定方 法 。 方
法 : 使用 hT ~
HY pesr a
一 key sot gn BD S C
l。高效液相色谙柱 , 以 甲醉 一 0 . 1% 磷酸 ( 1 5 : 85 ) 为流动相 , 检
浏波长 34 9 ln 。 结果 : 秦皮 乙素在 0 . 27 2 一 1 . 632 此 范围内成良好的线性关系 , r 二 0 . 9993 ; 平均回收率为
9
.
89 %
, 五5刀 = 2 . 63 % ( n 二 6) 。 结论 : 该方法操作简便 , 准确性高 , 重复性好 , 可用 于紫花地丁中秦皮
乙素的含童浏定 。
关键词 : 紫花地丁 ; 秦皮 乙素 ; HPL C
中图分类号 : 2R 84 · 1 ; 9R 31 · 6 献标识码 : A 文章编号 : 1恻 一 06 68 ( 2以刀 ) 03 一 05 7 一 03
紫花地丁为荃菜科 (物众记e ae ) 植物紫花地丁
vi 山 ye do esn i。 M山on 的干燥全草〔’ 〕 , 其功能为清热解毒 , 凉血消肿 , 用于疗疮肿毒 , 痈疽发背 , 丹
毒 , 毒蛇咬伤 , 临床应用广泛 。 全国大部分地区均
产 , 如四川 、 云南 、 贵州 、 · 湖北 、 湖南 、 广西 、 重
庆 、 江苏 、 浙江 、 安徽 、 福建 、 陕西 、 山西 、 河
北 、 甘肃和东北地区 z[] 。 据文献报道 , 紫花地丁中
含有香豆素类成分秦皮乙素 3[] 。 本文采用高效液相
色谱法对紫花地丁中的秦皮乙素含量进行了测定 。
实验结果表明 , 该方法简便 , 准确 , 重复性好 , 可
作为紫花地丁中秦皮乙素含量测定的方法 。
1 仪器 、 药品与试剂
1
.
1 仪器
w
~
26 95 se p ar
a it on M od ulL
e 高效液相色谱
仪 , W a t e招 29 % 外。协山od e sA仆 y 检测器 , Em po w e r
P r o 色谱工作站 , B1P 2 is 型 S a rt o ir u 。 电子天平 ,
CQ25 0 超声波清洗机 , D sY 一 l 一 2 孔恒温水浴锅 。
1
.
2 药品
秦皮乙素对照品 ( 中国药品生物制品检定所
1 1 074 1 一 20 506 ) ; 紫花地丁 : 分别购于吉林 、 陕西 、
重庆万县 , 由成都中医药大学裴瑾博士鉴定为茧菜科
植物紫花地丁 U沁坛 押山机` 瓶泪加 的全草 。
1
.
3 试剂
甲醇为色谱纯 ; 水为重蒸水 ; 磷酸为分析纯 。
2 含且测定
2
.
1 色谙条件
色谱柱 : hT ~
HY p。 过 一 key sotn g B DS C l : 高效液相色谱柱 ( 150 ~ x 4 . 6 一 5 卿 ) , 流动相 :
甲醇 一 0 . 1% 磷酸 ( 15 : 85 ) ; 流速 : 1 . 0 m l / m运 ;
柱温 : 30 ℃ 。 检测波长 : 349 lun ; 理论板数以秦皮乙素峰计算不低于 3〕沉〕 , 秦皮乙素对照品溶液和紫
花地丁供试品 Hr LC 图 , 见图 1。
2 月力 ` 0 0 已加 8 D 0 , O丈门】 份2 0 0 , 二胜
. 皮乙宜加 . 昌万 .
{
一
{
圈 1 . 皮乙资对照品落液和嫂花地丁供试品 Hr LC 圈
2
.
2 对照品溶液制备
精密称取秦皮乙素对照品适量 , 用 甲醇溶解 ,
制得 54 . 4 卜岁 mL 的秦皮乙素对照品溶液 。
2
.
3 供试品溶液的制备
2
.
3
.
1 提取时间的考察
精密称取陕西产紫花地丁粉末约 0 . 1 9 , 置 50
mL 平底烧瓶中 , 精密加人甲醇 25 m L , 称定重量 。加热回流提取 l h , 放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补
足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 。 吸取续滤液 s mL , 置
10 mL 量瓶中 , 用甲醇定容至刻度 。 取该溶液 10泌 , 注人高效液相色谱仪 , 测定 。 实验结果见表
l
, 图 2 。
农 1 提取时间的考案
提取时间 (五) 0 . 5
峰面积 35 9 17
旦2里
49 3习 知 35 1 5 13为
基金项目 : 四川省中医药管理局科研基金资助项 目 (编号 : 2 0( 拓 13 )
作者简介 : 陈胡兰 , 女 , 197 4 年生 ; 在读博士 , 讲师 , 研究方向 : 中药及其复方物质基础及质童标准化研究 。
DOI : 10. 13593 /j . cnki . 51 -1501 /r . 2007. 03. 020
成都中医药大学学报 20 7 年第 30 卷
圈 2 不同提取时间对秦皮乙农含一的影晌
由图可以看出 , 提取时间为 0 . s h 时峰面积最
低 , 其余时间的峰面积相差不大 , 为确保其他成分
不被破坏 , 选择提取时间为 l h 。
2
.
3
.
2 不同提取方法的考察
精密称取陕西产紫花地丁粉末 2 份 , 各约 0 . 1
g
, 按照 “ 2 . 3 . 1 ” 项下方法制备供试品溶液 , 分别
采用甲醇回流和甲醇超声提取制备样品 , 测定峰面
积 。 实验结果如图 3 所示 。
1
. 甲醇超声提取 2 , 甲醇回流提取
圈 3 不同提取方法的考察
从图可以明显看出 , 回流提取方法比超声提取
法所提取出的秦皮乙素含量高 。
2
.
4 线性关系考察
分别精密吸取秦皮乙素对照品溶液 5 泌 , or
汕 , 15 林L , 20 泌 , 25 泌 , 30 泌 注人高效液色
谱仪中 , 以甲醇 一磷酸 ( 1:5 85) 为流动相 , 流速
1 功 I了面 n , 进行等度洗脱 , 检测波长 349 lun , 记录
色谱图 , 依次测定峰面积 , 以峰面积 ( Y ) 对进样
量 ( X ) 进行 线性 回归 , 得 到 回归方程 : y 二
5 3398 1x + 832 8 7
, r 二 0
.
9993
。 结果表明 , 秦皮乙
素在 0 . 27 2 此 一 1 . 6 32 林g 范围内呈良好的线性关
系 。 数据见表 2 , 标准曲线见图 4 。
衰 2 标准曲线侧定橄据
编号 1 2 3 4 5 6
进样盈 (此 ) 0 . 27 2 a 54 0 . 8 16 1 . 0 95 1 . 36 1 . 632
峰面积 幻 , 9犯 3肠 5 18 5 1697 8 6 553 18 9 154 11 9 57 64 7
精密吸取对照品溶液 10 卜L , 注人高效液色谱
仪 , 重复进样 6 次 , 试验结果见表 3 。
衰 3 精密度实脸结果
编号 1 2 3 4 5 6 X 月巧D
峰面积 37 3印 8 37 3仪坟 3725 7 2 3 728 76 373 564 37 24 卯 37之理1 0 . 09 %
实验结果 : 6 次测定其峰面积 五5刀 = 0 . 09 % ,
说明仪器的精密度良好 。
2
.
6 稳定性试验
精密称取陕西产紫花地丁粉末约 0 . 1 9 , 按照
“
2
.
3
.
1
” 项下方法制备供试品溶液 。 精密吸取供试
品溶液 10 泌 , 分别在。 、 2 、 4 、 6 、 s 、 10 、 1 2 、 14
h 重复进样 , 测定 , 结果见表 4 。
衰 4 稼定性实脸结果
时间 oh Zh 扎 6 h s h 10h 12h 14 h 刀S D
峰面积 546 79 54 12 5 40四 5 4 9 5 54 19 到 6 10 54 7 6 54 7 37 .0 4 肠
结果表明供试品溶液在 14 h 内稳定性良好 。
2
.
7 重复性试验
精密称取陕西产紫花地丁粉末共 6 份 , 各约
.0 1 9
, 按照 “ 2 . 3 . 1 ” 供试品溶液的制备方法 , 制
成供试品溶液 , 分别进样 10 泌 , 测定 , 试验结果
见表 5 。
裹 5 , 盆性实脸结果
编号 1 2 3 4 5 6 月S D
取样皿 ( g ) 0 . 103 2 0 . 10 14 0 . 1工 7 0 . 1X() 8 0 . 0卯 8 0 . 10 12
峰面积 546 10 53 8 12 544 19 53 2 17 5 315 3 , 37 87 0 . 28 %
含 t (% ) 0 .洲吕 .0 34 9 O . M , 0 . 3铭 众 35 0 0 . 3功
6份样品测定结果 尺刃 = 0 . 28 % , 说明该方法
的重复性良好 。
2
.
8 加样回收试验
精密称取陕西产紫花地丁粉末共 6 份 , 各约
0
.
1 9
, 置 50 mL 圆底烧瓶中 , 分别精密加人甲醇
lZ .ml 和秦皮乙素对照品溶液 4
.
o .ml ( 0
.
05 28 m岁
mL )
, 称定重量 。 加热回流提取 l h , 放冷 , 再称
定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 。 吸
取续滤液 s .ml , 置 10 .ml 量瓶中 , 用甲醇定容至刻
度 。 分别取上述溶液 10 泌 , 注人高效液相色谱仪 ,
测定 。 结果见表 6 。
衰 6 加样回收率实验结果
样品中编 取样t 秦皮乙 添加 t 侧得 t 回收率 平均值 月5 。
号 ( g ) 索含盆 (吨 ) (吨 ) (% ) (% ) (% )
(叱 )
a l叮 8
0
.
1 185
0
.
102 6
0
.
1肠 9
0
.
10 15
0
.
10 10
a 37田
0
.
4 1月4
0
.
35 88
0
.
37 38
0
.
35 49
0
.
3犯 2
.0 2 112
a s刀 8
.0 63 5 1
.0 574 9
.0 57 86
.0 563 1
.0 56 13
98
.
43 肠
104
.
5%
10么 3 5%
96
.
95%
9 8
.
6%
9 8
.
56%
9
.
89 % 么 63 %
6 份样 品平 均 回 收 率为 9 . 89 % , 双S口 二
圈 4 秦皮乙索标准曲线
2
.
5 精密度试验
2
.
63%
, 回收率良好 。
(下转第 61 页 )
成都中医药大学学报 2 0 7 年第 30 卷
液漏斗中 , 加氯仿分 3 次振摇萃取 , 每次 25 znL 。
合并抓仿层萃取液 , 减压浓缩 , 残渣加人甲醇溶
解 , 转移至 or mL 容量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇
匀 。 用 0 . 45 卿微孔滤膜过滤 , 作为供试品溶液 。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10
泌注人高效液相色谱仪 , 按外标法计算供试品中
异啸皮吮含量测定结果见表 1 。 供试品高效液相色
谱图见图 1 。
衰 1 树五加中异喃皮暄含t 侧定
样品编号 含母 州少召 丑S。%
1 1
.
46 x 10
一
2 土 l . 26 x l o 一 4 1
.
1
1
.
23 x 10
一
2 土 1 . 03 x l o 一 4
l
。
43 X 10
一
2 士 .6 6 X 10 一 4
O乃
, 必 ·
l
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. 、 _ _介、了{
一 ,一一一下 , 一一一一 一一一飞一7巴 冲 李 性2 于
` 门 、 ~ .
_一 ~一 ~ ~ _~ z 一 _ 韶 、 、
之7介 花 5 : 三二
A 为异嚷皮淀
圈 1 供试品离效液相色谱圈
3 讨论
含刺五加的中成药很多 , 异嚓皮吮是刺五加安
神作用的主要成分之一 , 且很多含刺五加的中成药
均以异啸皮吮为对照品进行含量测定〔训 。 本文以
刺五加药材为供试品 , 以异嗓皮吮含量为指标 , 利
用 RT 一 Hr L C 法对其进行测定 。 该法可以反映刺五
加药材中异嗓皮陡的质量 , 重现性好 , 具有实用
性 。
参考文献
【1 陈新歉 , 金有豫 . 新编药物学 【M ] . 第 13 版 . 北京 :
人民卫生出版社 , 19 2 : 48 &
【2〕刘艳新 , 麻风华 , 王力 . 高效液相色谱法测定刺五加
脑灵液中异嗓皮陡含量 【J] . 中国药业 , 公刃 5 , 14
( 10 )
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42
.
【3 ] 播海峰 , 李云妓 . Hr LC 法测定强力宁片中异嘴皮陡的
含量 〔J〕 . 中草药 , 2以” , 35 ( 3 ) : 27 9 一 28 .0
〔4〕 赵陆华 , 屠颖 , 赵振宇等 . Hr LC 侧定刺五加软胶囊中
异嗓皮吮含量 【J] . 中草药 , 公刃3 , 34 ( 10) : 9 1 -
9 1.2
(收稿日期 : 2以刀供一 )
(上接第 59 页 )
2
.
9 样品测定
分别精密称取黑龙江 , 重庆万县 , 陕西产紫花
地丁粉末约 0 . 1 9 , 按照 “ 2 . 3 . 1 ” 项下方法制备供
试品溶液 。 精密吸取对照品和供试品溶液各 10 泌 ,
注人高效液相色谱仪 , 按选定色谱条件测定 , 采用
外标一点法计算紫花地丁中秦皮乙素含量 , 结果见
表 7 。
衰 7 不同产地策花地丁中秦皮乙索的含t ( n = 3)
含量 (% )
黑龙江
重庆万县
映西
0
.
367
.0 20 2
0
. 洲9
RS D
1
.
1
.
1
.
对不同产地紫花地丁中秦皮乙素的含量测定结
果表明 , 黑龙江产紫花地丁中秦皮乙素含量最高 。
3 讨论
3
.
1 试验过程中对不同极性的流动相 , 以及不同
比例的甲醇 一 0 . 1% 磷酸进行了考察 。 结果以甲醇
一 0
.
1% 磷酸 ( 15 , 85) 为最佳流动相组成 , 峰形对
称 , 分离度良好 。
3
.
2 不同产地紫花地丁中秦皮乙素的含量测定结
果表明 , 吉林产紫花地丁中秦皮乙素含量最高 。 其
药效相关性还需进一步研究 。
参考文献
〔l] 中国药典委员会 . 中华人民共和国药典 【5] . 么刃 5 年
版 . 一部 . 北京 : 化学工业出版社 . 20( )5 .
【2」中国科学院中国植物志编辑委员会 , 中国植物志 · 第
五十一卷 【M ] . 北京 : 科学出版社 , 19 1 : 63 .
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北京 : 北京医科大学 、 中国协和医科大学联合出版社 ,
19 95 : 侧习.
(收稿 日期 : 20 7仍一 》
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