全 文 ：作用于卵巢 ,促进卵泡的发育成熟 ,受下丘脑促性腺
激素释放激素及卵巢雌激素的协同作用来共同调控。
在本实验中 ,经过中药滋补肾精方的治疗 , E2水平有
所提高 ,同时 FSH和 LH的水平也有所提高 ,而没有
出现 E2抑制 FSH、LH的现象。此可能是由于中药滋
补肾精方在提高 E2水平的同时 ,也可能作用于大鼠
垂体促进了 FSH和 LH的分泌;此外 ,也可能上调了
垂体的基础分泌 。其作用机制需要进一步探讨。
中医学理论认为:阳化气阴成形 、形不足者温之
以气 、精不足者补之以味 。本实验中所用滋补肾精
的金锁二仙饮[ 9] ,具有滋阴补阳 、补气补血的功效 ,
由金樱子 、锁阳 、淫羊藿 、仙茅 、当归 、巴戟天 、熟地
黄 、山茱萸等药物组成。其中熟地黄 、山茱萸 、山药
等滋补肾阴以生精;金樱子 、巴戟天 、菟丝子等温补
肾阳 ,以助肾中精气的化生及生殖之精的生成;当
归 、黄芪等气血双补。全方具有滋温并用 、阴阳并
补 、补肾气填肾精之功 。
参考文献:
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收稿日期:2009-11-12;修回稿 2009-12-14
(编辑　陶　珠)
文章编号:1001-6910(2010)03-0017-03 ·实验研究·
敦煌三味蛇床方对肾虚不孕模型大鼠卵巢
MMP-9 mRNA表达的影响
李淑梅 1 ,燕恒毅 1 ,刘喜平2
(1.定西市人民医院 ,甘肃 定西 743000;2.甘肃中医学院 ,甘肃 兰州 730000)
摘要　目的:探讨敦煌三味蛇床方对排卵障碍性不孕症卵巢基质
金属蛋白酶 -9(明胶酶 -BMMP-9)mRNA表达的影响。方法:
采用雄激素致不孕大鼠模型(ASR模型),观察敦煌三味蛇床方对
不孕模型大鼠卵巢、子宫形态结构的影响,以原位杂交方法观察对
肾虚不孕模型大鼠卵巢MMP-9mRNA表达的影响。结果:敦煌
三味蛇床方大 、中剂量组卵巢MMP-9mRNA表达明显在颗粒细
胞和窦状卵泡膜细胞中有大量表达;其表达面积和表达强度明显
优于模型组和阳性组(P<0.01),但与正常组相比差别有统计学意
义。结论:敦煌三味蛇床方能促进卵巢基质金属蛋白酶 -9mRNA
的表达,从而促进卵泡的发育和卵巢的排卵。
关键词:敦煌三味蛇床方 /药效学　排卵障碍性不孕症 /药物
作用　MMP-9 mRNA　疾病模型 ,动物
中图分类号:R711.6　　文献标志码:B
　　敦煌三味蛇床方源于敦煌遗书 S.4433[ 1] ,由蛇
床子 、五味子 、远志 3味药物组成。有临床观察表
明 ,该方可促使排卵型月经恢复正常 ,在治疗排卵障
碍性不孕方面有显著疗效 [ 2] 。为进一步揭示该方
的作用机制 ,笔者观察了该方对肾虚不孕模型大鼠
基质金属蛋白酶 -9(明胶酶 -BMMP-9)mRNA
表达的影响。
1　材料与方法
1.1　动　物
SD大鼠 80只 ,雌性 ,体质量 180 ～ 220 g,由甘
肃中医学院科研实验中心提供 ,检验报告编号为兰
大动检(06)第 004号 ,动物许可证号为 SCXK(甘)
2004-0006。
1.2　药物与试剂
敦煌三味蛇床方由蛇床子 、五味子 、远志组成。
药材购自甘肃中医学院附属医院 ,经鉴定符合 《药
·17·　　中医研究　 2010年 3月　第 23卷　第 3期　TCMRes.March2010Vol.23No.3　　
典 》规定 。按一定比例混合 ,常规制备为煎液 ,浓缩
至每毫升含生药 1 g,消毒灭菌保存备用;克罗米芬 ,
广州康和药业有限公司产品 ,批号 H44021970;丙酸
睾丸酮注射液 , 25 mg/mL,上海制药厂产品 ,批号
20020311。 MMP-9原位杂交检测试剂盒 ,购自武
汉博士德公司;4%多聚甲醛固定液等 。
1.3　模型的建立
参照文献方法 [ 3-4]制作无排卵大鼠模型 ,即
雄激素致不孕大鼠模型 ASR。取第 9日龄雌性 SD
大鼠 70只(实验组)于颈背部皮下注射丙酸睾丸酮
1.25mg/只(0.05 mL/只)。第 22日龄断奶 ,自然
光照 ,室温维持在 20℃左右 ,由专人喂养。第 70日
龄大鼠体质量约 150 g,阴道开口 ,连续阴道涂片 2
个性周期(1个性周期 5 d)。阴道上皮无性周期变
化提示无排卵大鼠模型制作成功 。同样取第 9日龄
雌性 SD大鼠 10只(正常对照组),于颈背部皮下注
射等量中性茶油 ,至第 70日龄大鼠阴道开口 ,连续
阴道涂片 2个性周期 ,观察其阴道上皮细胞有无性
周期变化。经涂片观察实验组 70只参与造模大鼠 ,
其中有 54只无性周期变化保留备用 ,余 16只有性
周期变化 ,被剔除 。正常对照组大鼠 10只注射中性
茶油 ,全部具有有规律的性周期变化 ,被保留备用。
1.4　分组与给药
将造模成功的 54只大鼠随机分为模型对照组
(10只),敦煌三味蛇床方小 、中 、大剂量组 (各 11
只),克罗米芬组(11只), 同时设正常对照组 (10
只)。从第 80天开始分别按临床用药量(以 60 kg
人为标准 ,按照体表面积剂量换算)计算大鼠给药
剂量。模型对照组和正常对照组给予蒸馏水
12 mL/(kg·d)灌胃;敦煌三味蛇床方小 、中 、大剂
量组分别按煎液 6, 12, 24 mL/(kg·d)灌胃;克罗米
芬组给予 4.5 mg/(kg· d)灌胃 。各组大鼠每天灌
胃 1次 ,连续灌胃 28d, 4周后检测指标 。
1.5　检测指标
1.5.1　卵巢 、子宫形态结构
连续灌胃 28 d后 ,将大鼠断头处死 ,剖腹取出
双侧卵巢和子宫 ,观察卵巢 、子宫形态;将卵巢 、子宫
剥离干净后放入福尔马林溶液中固定 ,各级酒精脱
水 ,石蜡包埋 、切片(厚约 4 μm)。卵巢以苏木素伊
红常规染色 ,子宫以 HE常规染色。光镜下观察并
行电脑摄像 。
1.5.2　卵巢 MMP-9mRNA表达
取出卵巢剥离干净 ,放入 4%多聚甲醛中固定 ,
各级酒精脱水 ,石蜡包埋 ,切片(厚 10 ～ 20 μm),进
行 MMP-9原位杂交显微镜检并电脑摄像 ,图像分
析卵巢 MMP-9mRNA信号表达强度。将所测结果
按试剂盒说明书计算 ,表达面积以 mm2计算。灰度
值越大 ,表达强度越弱。
1.6　统计学方法
采用 SPSS13.0统计分析软件处理。计量资料
数据以均数 ( x)±标准差 (s)表示 , 组间比较采用
t检验 。以 P<0.05为差别有统计学意义 。
2　结　果
2.1　敦煌三味蛇床方对不孕模型大鼠卵巢 、子宫形
态结构的影响
模型对照组卵巢苍白 ,表面见卵泡但数目少 ,卵
泡较小 ,无黄体;子宫较小 ,色泽欠红润 ,子宫内膜厚
度均较薄 ,血管稀少 ,间质致密。正常对照组 、克罗米
芬组及敦煌三味蛇床方大 、中剂量组大鼠卵巢色泽鲜
红 ,卵泡数目明显多于模型对照组 ,卵泡明显增大 ,表
面见较多黄体;子宫外观粗大发紫 。正常对照组和敦
煌三味蛇床方大 、中剂量组子宫内膜较厚 ,血管较丰
富 ,间质疏松 ,但克罗米芬组子宫内膜较薄 ,腺体发育
差 ,腺腔狭小 ,间质致密 ,间质细胞呈梭形 ,间质血管
比较少见 ,存在有子宫内膜发育迟缓的现象。
2.2　敦煌三味蛇床方对不孕模型大鼠卵巢
MMP-9 mRNA表达的影响
模型对照组大鼠卵巢 MMP-9 mRNA表达不明
显 ,在颗粒细胞中偶见表达。敦煌三味蛇床方大 、中
剂量组大鼠卵巢 MMP-9 mRNA表达明显 ,在颗粒细
胞和窦状卵泡膜细胞中有大量表达。正常对照组大
鼠卵巢 MMP-9mRNA表达最明显 ,在颗粒细胞和窦
状卵泡膜细胞中均有显著表达。克罗米芬组大鼠卵
巢 MMP-9 mRNA有表达 ,但与正常组和敦煌三味蛇
床方大 、中剂量组对比 ,差别有统计学意义。
模型对照组 MMP-9mRNA的表达 ,无论在表达
面积和表达强度上都不及正常对照组 、克罗米芬组和
敦煌三味蛇床方大 、中 、小剂量组 。敦煌三味蛇床方
大 、中剂量组 MMP-9 mRNA的表达优于克罗米芬
组 ,但不及正常对照组 ,差别有统计意义(P<0.05)。
提示敦煌三味蛇床方能较好促进卵巢基质金属蛋白
酶 -9 mRNA的表达 ,从而促进卵泡的发育和卵巢的
排卵。见表 1。
表 1　各组大鼠卵巢 MMP-9mRNA表达对比　 x±s
组　别 动物数 表达面积 /mm2 　平均灰度
正常对照组 10 0.650±0.065＊ 136.38±7.13＊
模型对照组 10 0.145±0.184 184.77±8.42
克罗米芬组 11 0.206±0.045# 171.47±4.13#
小剂量组 11 0.241±0.107 160.65±8.61
中剂量组 11 0.458±0.115＊#■ 157.95±9.55＊#■
大剂量组 11 0.532±0.026＊#■ 146.75±6.35＊#■
　注:与模型对照组对比 , ＊ P<0.05;与正常对照组对比 , #P<0.05;与克罗
米芬组对比 , ■ P<0.05。
·18· 　　中医研究　 2010年 3月　第 23卷　第 3期　TCMRes.March2010Vol.23No.3　　
3　讨　论
卵巢排卵是一个复杂的生理过程 ,包括细胞的
增殖 、分化 、卵子成熟形成成熟卵泡 、卵泡壁破裂释
放出卵子和黄体形成等过程 。基质金属蛋白酶 -9
是该家族中第 2个亚家族的一个成员 。与其他
MMP成员一样 , MMP-9参与机体的许多生理功
能 ,如细胞的迁移 、分化 、增殖 、凋亡 、生殖过程及胚
胎发育等[ 5] 。基质金属蛋白酶 MMPs家族能够降解
几乎所有的细胞外基质(ECM)成分 ,可能参与卵泡
的破裂 ,如成熟卵泡的破裂主要与纤溶酶的激活相
关 ,该酶能激活卵泡结缔组织胶原酶溶解卵泡壁胶
原而形成破口 [ 6] 。它在排卵机制中的作用已被重
视 。有关参与卵巢周期性排卵过程研究显示 ,
MMP-9mRNA在排卵前卵泡的颗粒细胞中表达 ,
是排卵前卵泡的主要明胶酶。测定动情前期大鼠卵
巢中排卵前卵泡中有大量 MMP-9 mRNA的表达 。
这些基因表达增强的意义在于保证蛋白水解酶消化
卵泡壁从而促进卵子的排放 ,并可能为排卵后的黄
体形成过程创造必要的条件 [ 7] 。由此可见 ,在卵泡
的发育和卵巢的排卵过程中 ,基质金属蛋白酶 -
MMP-9起着非常重要的作用 。
中医学的肾 -天癸 -冲任 -胞宫与现代医学的
下丘脑 -垂体 -卵巢轴有一定的相似性。叶天士
谓:“精之藏 ,其本在肾 ,而精之主宰则在心。”子宫
与肾 ,同居下焦 ,心脑居上焦最高之处 ,肾精的泌藏 、
胞脉胞络的疏畅 ,从表面看来似乎是子宫肾脏的作
用 ,但实际上是肾精氤蕴之气触发心脑 ,心脑下达排
泄信息后 ,子宫方能行其藏或泄的作用。故肾精亏
虚 、心肾不交应为排卵障碍性不孕的关键病机 ,补肾
益精 、宁心安神应为治疗排卵障碍性不孕的基本思
路与方法。敦煌蛇床三味方中蛇床子苦温入肾 ,可
温肾助阳 ,为君药;五味子补肾固精 ,宁心安神 ,助蛇
床子补肾益精 ,为臣药;远志交通心肾 ,安神定志 ,为
佐药。全方共奏补肾益精 、宁心安神之效 。全方药
少力专 ,组方严谨。现代研究亦表明 ,方中蛇床子可
使子宫及卵巢重量增加[ 8] ,它的提取物中含有睾丸
酮和雌二醇 ,有类似于性激素样的作用 。
本研究结果显示 ,经敦煌三味蛇床方干预后的
模型大鼠卵巢色泽鲜红 ,卵泡数目增多 ,卵泡明显增
大 ,表面见较多黄体;子宫外观粗大发紫;子宫内膜
也较厚 , 血管较丰富 , 间质疏松;能增强 MMP-
9mRNA在卵巢的颗粒细胞中和卵泡中的表达 ,且作
用显著优于模型对照组和克罗米芬组。因此 ,敦煌
三味 蛇 床 方 促 排 卵 的 作 用 机 制 可 能 与
MMP-9 mRNA基因表达增强 ,保证了蛋白水解酶
消化卵泡壁促进卵子的排放有关 。相关机制笔者将
进一步探讨研究。
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收稿日期:2009-09-04;修回日期:2009-12-16
(编辑　陶　珠)
中医药防治代谢综合征高峰论坛暨高级研修班征文通知
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1.代谢综合征的中医病因病机;2.代谢综合征的中医证候学;3.代谢综合征的药物疗法;4.代谢综合征的中医药防治新思路 、新观点 、新方法 、新技术;5.治疗代谢综合征的单方 、验
方 、成方;6.代谢综合征的非药物疗法;7.代谢综合征与靶器官疾病如心脑血管病之间的关系;8.高尿酸血症与代谢综合征;9.单纯高血压 、高血脂 、高血糖之间的关系。
二 、征文要求
1.所投稿件应为未经正式发表的论文 ,字数限 5 000字以内 ,附 400 ～ 600字的论文摘要 ,正文及摘要字体均用小四号宋体。 2.来稿请注明作者姓名 、单位 、通讯地址 、电话 、E-mail、邮政
编码。 3.论文请以 A4纸打印后邮寄一份并同时发送电子邮件。 4.截稿日期:2010年 3月 30日(以当地邮戳和电子邮件收件日期为准)。
三 、联系方式
通讯地址:北京市朝阳区樱花园东街甲四号中华中医药学会信息管理部收。邮编:100029。电子信箱:hylw0106@126.com。电话:010-64214947, 84257895。传真:010-64214947。联
系人:庄乾竹 、康宁。
·19·　　中医研究　 2010年 3月　第 23卷　第 3期　TCMRes.March2010Vol.23No.3