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赛北紫堇的质量标准研究



全 文 :华西药学杂志
W C J·P S 2015,30(4)∶487 ~ 489
作者简介:普巴扎西(1984—) ,男,西藏拉萨,从事食品药品的检验工作。
* 通信作者(Correspondent author) ,Email:suwang571@ 126. com
赛北紫堇的质量标准研究
普巴扎西1,欧 洋2,张朝阳2,张 力2,阿 萍1,王 曙2*
(1.西藏自治区食品药品检验所,西藏 拉萨 810000;2.四川大学华西药学院,四川 成都 610041)
摘要:目的 完善赛北紫堇的质量标准。方法 采用对口药材采集、鉴别、检查和含量测定等方法。结果 建立了赛北紫堇
的 TLC鉴别方法和紫外 -可见分光光度法测定含量的方法;并在测定了 8 批次药材(包括 3 份对口药材)的基础上初步设定
了赛北紫堇所含总生物碱的含量限度。结论 所用方法操作简便、结果准确、重复性好,可作为赛北紫堇的质量控制方法。
关键词:赛北紫堇;总生物碱;性状描述;生药学鉴别;有效成分;定性分析;定量分析;薄层色谱法;紫外 -可见分光光度法
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 - 0103(2015)04 - 0487 - 03
DOI:10. 13375 / j. cnki. wcjps. 2015. 04. 035
Study on the quality standard of Corydalis impartiens
PUBA Zaxi1,OU Yang2,ZHANG Chao - yang2,ZHANG Li2,A Ping1,WANG Shu2*
(1. Institute for Food and Drug Control of Tibet,Lasha,Xizang,810000 P. R. China;2. West China School of Pharmacy,Sichuan
University,Chengdu,Sichuan,610041 P. R. China)
Abstract:OBJECTIVE To improve the quality standard of Corydalis impartiens(Pall.)Fisch. METHODS The original plant
and the resource were collected and identified,and then the total alkaloid in C. impartiens(Pall.)Fisch were determined. RESULTS
The research established a specific TLC method for the identification and a suitable UV - Vis method for the determination. The content
limit of total alkaloids in C. impartiens(Pall.)Fisch was set up on the base of content determination of eight batches of medicines
(concluding there local medicines). CONCLUSION The methods are simple,accurate,reproducible and can be used as the quality
control of C. impartiens(Pall.)Fisch.
Key words:Corydalis impartiens(Pall.)Fisch;Total alkaloids;Morphological description;Pharmacognosy identification;Effective
components;Qualitative analysis;Quantitative analysis;TLC;UV
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 - 0103(2015)04 - 0487 - 03
罂粟科紫堇属植物赛北紫堇 Corydalis impar-
tiens(Pall.)Fisch 的干燥全草,常用做藏药巴夏嘎
的替代品入药。赛北紫堇主要分布在四川、西藏、青
海、甘肃等省区,具有活血散淤、行气止痛、清热解毒
之功效[1]。赛北紫堇的现行药材标准收载于《四川省
中药材标准》中[2],其鉴别方法的专属性不强,且无含
量测定项,需进行修订。现通过 TLC 鉴别、UV 法测
定含量等方法研究药材并完善了质量标准。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
TSView显微照相机、ECLIPSE - E100 光学显微
镜(日本 Nikon) ;U1901 型双光束紫外可见分光光
度计(上海谱元仪器有限公司)。赛北紫堇药材经
鉴定为罂粟科紫堇属植物赛北紫堇 Corydalis impar-
tiens(Pall.)Fisch的干燥全草(表 1)。小檗碱对照
品(中国药品生物制品检定所) ;水为双蒸水;其余
试剂为分析纯。
表 1 赛北紫堇药材的来源
Table 1 Source of C. impartiens
No. 来源 购买或采集地 时间
1 市售 西藏藏医学院藏药厂 2012 - 6 - 25
2 市售 西藏雄巴拉曲神水藏药厂 2012 - 6 - 27
3 市售 西藏金珠雅砻药业 2012 - 6 - 25
4 市售 西藏自治区藏药厂 2012 - 6 - 26
5 市售 西藏自治区食品药品检验所 2012 - 6 - 26
6 采集 西藏拉萨市夺地乡 2012 - 6 - 30
7 采集 西藏山南地区素朱乡顶那村 2012 - 6 - 28
8 采集 西藏桑日县白堆乡黑龙村 2012 - 6 - 29
1. 2 原植物形态和药材性状
原植物为一年生或二年生草本,高 35 ~ 65 cm,
无毛。有细长的主根,并生有稀疏的须根。茎中空,
具棱,有分枝。基生叶多数,柄长 4 ~ 6 cm,基部成
鞘,叶片轮廓卵形,二至三回 3 出羽状分裂,末回裂
片倒卵形至倒披针形;茎生叶互生,疏离,均具柄,叶
片轮廓三角形,二至三回羽状全裂,小裂片狭卵形或
倒卵形,宽 2 ~ 4 mm。总状花序顶生或腋生,长
2. 5 ~ 8 cm,果时可达 14 cm,花多,上密下疏;苞片
长 2 ~ 7 mm,狭披针形,背面微被毛。花黄色,萼片
极小,膜质;花梗短,约长 3 mm;花瓣 4,2 轮,外轮 2
片上下分离,上花瓣长 0. 7 ~ 1 cm,边缘微具缺刻,
距粗,长 3 ~ 5 mm,微上弯,下花瓣背部微具鸡冠状
突起,先端具小尖头,内轮 2 片略短,距圆形,顶部吻
合,爪与外轮花瓣结合;蜜腺贯穿距地 1 /2;雄蕊 6,2
束;子房条形,柱头 2 裂。蒴果条状长圆形,下垂,长
0. 9 ~ 1. 2 cm,外观略呈节荚状,有 3 ~ 7 枚种子,排
成 1 列。种子近圆形,亮黑色,具光泽(图 1A)。主
根呈细圆锥状,长 5 ~ 10 cm,直径 3 mm。表面褐
色,具细皱纹,多生须根,根头部有棕褐色的须状基
生叶柄断痕;质脆易折,断面平坦,乳白色,髓部收缩
成空腔。茎干缩,直径 2 ~ 5 mm,具纵条棱及细纵
纹,表面绿色至深棕色,质轻易折裂,中空,内壁淡黄
白色。叶皱缩,具长柄,2 ~ 3 回羽状全裂,小裂片卵
形。花序总状,花小,黄色,囊管状,管口上缘具鸡冠
状小齿,其后部距微上弯;萼片极小,膜质。蒴果条
状长圆形,略呈节荚状,花柱宿存。种子 1 列,亮黑
色。气微,味微苦。(图 1B)。
A B
图 1 塞北紫堇的原植物(A)和药材(B)照片
Figure 1 Ideal plant type(A)and medicinal materials(B)of C.
impartiens
1. 3 显微鉴别、薄层鉴别及理化鉴别
1. 3. 1 粉末的显微鉴别 按显微鉴定法(《中国药
典》2010 年版中附录 IIC)[2]对样品粉末进行显微鉴
别,观察结果与文献[3]的基本一致。叶下表皮细胞
壁气孔为不定式,副卫细胞 4 ~ 6 个;花粉粒圆型,壁
稍厚,内含颗粒状物质,有 3 个萌发孔;茎表皮细胞
观呈多角形,壁稍厚,气孔为不定式,副卫细胞 3 ~ 4
个;断面观呈长方形,外层被有角质层;种皮表细胞
多角型,壁较厚,内含棕红色分泌物;果皮表皮细胞
呈长方形或多角形,壁较厚,呈浅黄色;木纤维较少,
多断裂,壁略显厚,胞腔明显;导管较多,多为螺纹导
管,少数有网纹导管(图 2)。
A B C D E F
图 2 赛北紫堇粉末气孔(A)、花粉粒(B)、种皮表皮细胞(C)、纤维(D)、螺纹导管(E)、网纹导管(F)的显微图
Figure 2 Powder characteristics diagrams of stoma(A),pollen grain(B),kind of skin epidermal cells(C),fiber(D),spiral vessel(E)and
reticulate vessel(F)from C. impartiens
1. 3. 2 薄层色谱鉴别 取 1. 0 g 赛北紫堇药材细
粉,置具塞锥形瓶中,加 25 mL甲醇,超声(150 kW,
40 kHz)30 min,滤过,滤液作为供试品溶液;另取
1. 0 g赛北紫堇对照药材细粉,同法制成对照药材溶
液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版中附录Ⅵ
B)[2],吸取 1 ~ 2 μL上述溶液分别点于同一硅胶 G
薄层板上,以石油醚 -乙酸乙酯 -二乙胺(10∶2∶
1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(365 nm)
下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的
位置上,显相同颜色的荧光斑点(图 3)。在此薄层
条件下,各斑点分离效果良好,Rf 值适中,重复性、
耐用性均较好。
1. 4 水分、总灰分及酸不溶性灰分的检查[2]
按水分测定法和灰分测定法(《中国药典》2010
年版中附录ⅨH 第一法和附录ⅨK)对 8 个批次的
赛北紫堇药材进行测定(表 2)。
1-5. 赛北紫堇药材
6-8. 赛北紫堇对照药材
1 2 3 4 5 6 7 8
图 3 赛北紫堇的薄层色谱图
Figure 3 TLC chromatogram of C. impartiens
1. 5 含量的测定[4]
1. 5. 1 溶液的制备 精密称定 2. 0 g赛北紫堇粉
884 华 西 药 学 杂 志 第 30 卷
表 2 赛北紫堇检查项的测定结果
Table 2 Results of the examination for C. impartiens
No. 水分 /% 总灰分 /% 酸不溶性灰分 /%
1 11. 56 12. 38 0. 80
2 10. 21 11. 14 0. 69
3 9. 95 11. 65 0. 46
4 11. 14 13. 72 0. 71
5 11. 07 12. 43 0. 53
6 12. 83 13. 24 0. 69
7 11. 72 13. 56 0. 44
8 12. 69 12. 91 0. 57
珔X 11. 40 12. 63 0. 61
末,置 100 mL锥形瓶中,加 30 mL 95%乙醇,超声处
理(30 min × 3) ,过滤,以 15 mL 95%乙醇分次洗涤
残渣,合并滤液与洗液,用 95%乙醇定容至 50 mL。
取 5 mL 溶液上样至已处理好的氧化铝柱(内径 10
mm、12 g中性氧化铝、80 mL 95%乙醇预洗)上,以
40 mL 95% 乙醇洗脱、过滤、洗涤和定容至 50 mL,
即为供试品溶液。精密称取 35. 7 mg 盐酸小檗碱,
用 95%乙醇溶解,定容至 50 mL,即得 714 μg·mL -1
盐酸小檗碱对照品溶液。
1. 5. 2 标准曲线的制备 精密量取 0、1、2、3、4、5、
6 mL盐酸小檗碱对照品溶液,分别置 100 mL 量瓶
中,用乙醇定容。以第 1 份未加盐酸小檗碱的空白
溶液为参比,按 UV 法(《中国药典》2010 年版中附
录ⅤA)于 410 nm处测定吸光度[2]。以吸光度为纵
坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程为:
Y = 8. 4 × 10 -3X - 5. 4 × 10 -3(r = 0. 9991,n = 7)。表
明 7. 14 ~ 42. 84 μg·mL -1盐酸小檗碱与吸光度呈良
好的线性关系。
1. 5. 3 重复性与稳定性试验 精密称定 2. 0 g 赛
北紫堇粉末 6 份,按“1. 5. 1”项方法制备供试品溶
液并测定吸光度。按标准曲线法计算得样品中总生
物碱的平均含量为 0. 83%,RSD = 0. 71%(n = 6) ,
表明该方法重复性良好。取 1 mL 盐酸小檗碱对照
品溶液,置 50 mL 量瓶中,用 95%乙醇定容。取供
试品和对照品溶液,在室温下自然放置,分别于 0、
1、2、4、8 h时测定吸光度。计算得对照品和供试品
吸光度的 RSD 分别为 0. 83%、0. 69%(n = 5)。表
明在实验条件下,对照品和供试品溶液的总生物碱
含量在 8 h 内稳定。
1. 5. 4 加样回收试验 精密称定 2. 0 g 赛北紫堇
粉末 6 份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入 2 mL 714
μg·mL -1盐酸小檗碱对照品溶液,按“1. 5. 1”项方法
制备供试品溶液并测定吸光度。计算得平均回收率
为 97. 29%,RSD = 0. 54%(n = 6)。
1. 5. 5 样品的测定 精密称定 2. 0 g 各编号赛北
紫堇粉末,按“1. 5. 1”项方法制备供试品溶液并测
定吸光度。按标准曲线法计算供试品溶液中总生物
碱的浓度,再计算药材中总生物碱的含量(表 3)。
表 3 赛北紫堇总生物碱的含量测定结果
Table 3 Determination of the total alkaloids for C. impartiens
No. A 总生物碱 /% 珔X /%
1 0. 273 0. 87 0. 955
2 0. 321 1. 02
3 0. 302 0. 96
4 0. 296 0. 94
5 0. 312 0. 99
6 0. 318 1. 01
7 0. 293 0. 93
8 0. 289 0. 92
2 讨论
曾分别考察了苯 -乙酸乙酯 -二乙胺(7∶2∶
0. 5)、环己烷 -乙酸乙酯 -异丙醇 -甲醇 -水 -三
乙胺(3∶3. 5∶1∶1. 5∶0. 5∶1)和石油醚 -乙酸
乙酯 -二乙胺(10∶2∶1)等 3 种展开系统。发现
前两种展开剂的展开效果重复性较差,且第 1 种展
开剂有一定的毒性;第 3 种展开条件的分离效果良
好,Rf值适中,重复性、耐用性均较好,因此,选择了
文中的展开剂为薄层条件。薄层色谱图上,1、7、8
号斑点与其他斑点比较稍淡,可能由于不同赛北紫
堇原植物的生长环境、采收时节、药材加工方式、药
材贮存环境的不同等原因,而导致不同赛北紫堇市
售药材中相关成分的含量不完全一样,因此,其薄层
展开效果有一定的差异。以平均值上浮 20%为标
准,拟定赛北紫堇药材中水分不得超过 14. 0%、总
灰分不得超过 16. 0%、酸不溶性灰分不得超过
0. 8%;以平均值下浮 20%为标准,拟定赛北紫堇药
材中总生物碱的含量不得少于 0. 7%。文中所用
TLC方法简单、有效、专属性强,UV法测定赛北紫堇
中总生物碱的含量具有精度高、稳定性好的特点,可
为赛北紫堇质量标准的最终制定提供参考。
参考文献:
[1] 四川省食品药品监管局.四川省中药材标准[M].成都:四川
科学技术出版社,2010:636 - 638.
[2] 中华人民共和国国家药典委员会. 中国药典[S]. 北京:中国
医药科技出版社,2010.
[3] 乌云苏都,白文庆.蒙药材北紫堇的生药研究[J].中国名族
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[4] 李吉昌,林跃华,龙清平,等. 紫外分光光度法测定赛北紫堇
中总生物碱含量[J].云南化工,2012,39(4) :19 - 21.
收稿日期:2014 - 03 - 10
984第 4 期 普巴扎西,等。赛北紫堇的质量标准研究