免费文献传递   相关文献

合阳蔓菁化学成分预试验及其药理活性研究



全 文 :FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2011年 第 36卷 第 3期
合阳蔓菁化学成分预试验及其药理
活性研究
陈易彬, 刘 艺 *
(陕西科技大学生命科学与工程学院,西安 710021)
摘要: 目的:采用系统预试法对合阳蔓菁中可能含有的化学成分进行了研究,并研究了其对小鼠
胃肠功能的影响。方法:采用试管反应法,对合阳蔓菁的石油醚、95%乙醇、酸性乙醇、水提液
进行研究,通过多种指示剂的显色反应或沉淀反应,鉴定了其可能含有的化学成分。采用甲基橙
实验和炭末推进法来研究合阳蔓菁水提液对小鼠胃排空和小肠运动功能的影响。结果:合阳蔓菁
中含有糖类、氨基酸、蛋白质、有机酸、生物碱、植物甾醇类等化学成分。合阳蔓菁促进小鼠胃
排空,增强小鼠小肠推进运动。结论:初步确定了合阳蔓菁含有的化学成分,结合药理学实验结
果,为其资源的进一步开发利用提供了实验基础。
关键词: 合阳蔓菁;化学成分;预实验;胃排空;小肠推进运动
中图分类号: TS 201.4 文献标志码: A 文章编号: 1005-9989(2011)03-0107-03
Preliminary test of chemical components and research of
pharmacological activity of Heyang Brassica rapa L.
CHEN Yi-bin, LIU Yi*
(College of Life Science and Engineering, Shaanxi University of Science & Technology,
Xi'an 710021)
Abstract: Objective: To study the chemical components of Heyang Brassica rapa L. by preliminary test, and to
investigate the effects on gastrointestinal function of mice. Methods: The extracted mixture of Heyang Brassica
rapa L. from petroleum ether, 95% ethanol, acidity ethanol and purified water were studied by test tube method.
The chemical constituents of Brassica rapa L. was primarily demonstrated by precipitation reaction or color
reaction with various indicator. The gastrointestinal function of Heyang Brassica rapa L. was observed by gastric
empting test with Methylorange in mice, and with small intestine propellant test with carbon particle in mice.
Results: Heyang Brassica rapa L. might contain sugars, amino acids, protein, organic acids, alkaloids, phytosterol.
Heyang Brassica rapa L. can promote the gastric empting function and the propellant function of small intestine in
mice. Conclusion: The results of preliminary test and pharmacology experimental provides foundation for further
study and application of Heyang Brassica rapa L.
Key words: Heyang Brassica rapa L.; Chemical components; preliminary test; gastric empty; intestinal propellant
movement
收稿日期: 2010-07-29
作者简介: 陈易彬(1955—),男,陕西合阳人,副教授, 研究方向为天然产物的纯化与修饰。
食品开发
·106·
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2011.03.028
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2011年 第 36卷 第 3期
蔓菁(Brassica rapa L.)为十字花科芸薹属植物,
蔓菁根入药用,性味平、辛、苦,具有开胃下气、
利湿解毒的功效[1]。合阳蔓菁生长于陕西关中渭北
旱塬地区,系当地传统种植的一种十字花科芸薹
属植物的根,为蔓菁的一个变种。合阳蔓菁形似
人参,富有营养,在当地有“蔓菁根,赛人参”,
“二三月的蔓菁赛人参”等民谚。合阳蔓菁在当地
民间被广泛食用,并具有明显的消食、下气、通
便作用,长期食用后能够改善人的气色,具有一
定的养颜作用。但其化学成分的研究至今尚无报
道,本研究采用系统预实法对其化学成分进行了
研究,并通过动物实验研究了其生物活性,为其
资源的开发利用提供了科学依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
合阳蔓菁:采于陕西省合阳县;昆明种小鼠,
体质量(22±2) g,雌雄不拘,陕西科技大学实验动
物中心;多潘立酮片:西安杨森制药有限公司,
批号:090522757。
1.2 实验试剂
95%乙醇、石油醚(沸程 60~90℃):A·R,天
津市富宇精细化工有限公司;去离子水:自制;
茚三酮试剂,双缩脲试剂、Fehling 试剂、α- 萘
酚、氯化钠明胶试剂、三氯化铁试剂、碘化汞
钾试剂、磷钼酸试剂、硅钨酸试剂、磷钨酸试
剂、盐酸 - 镁粉试剂、三氯化铝试剂、醋酸镁
试剂、溴酚蓝试剂、3,5-二硝基苯甲酸试剂、亚
硝酰铁氰化钠试剂、硼酸试剂、异羟肟酸铁试剂
等:自配。
1.3 实验仪器
电热恒温水浴锅:HH-1型,北京科伟永兴仪
器有限公司;电子天平:ALC-210.2,北京赛多利
斯仪器系统有限公司;旋转蒸发仪:RE-52A,上
海亚荣生化仪器厂;循环水式多用真空泵:SHB-
ⅢA,河南省太康科教仪器厂;三用紫外仪:
HL-2A,上海市安亭电子仪器厂;离心机:TD5A,
长沙英泰仪器有限公司;紫外 -可见分光光度计:
UV-1800,北京瑞利分析仪器公司。
1.4 实验方法
1.4.1 样品制备 取一定量合阳蔓菁,于电热恒
温鼓风干燥箱中 60℃恒温干燥,粉碎成粗粉即为
实验用粗粉。
1.4.2 水供试液的制备 称取实验品粗粉 20 g,
置加塞磨口锥形瓶中,加入去离子水 200 mL,
浸渍 24 h,过滤,滤液即为冷水供试液。剩余
滤渣在 60 ℃水浴加热 1 h,过滤,即为热水供
试液。
1.4.3 石油醚供试液的制备 称取实验品粗粉 5
g,置加塞磨口锥形瓶中,加入石油醚 50 mL,室
温浸渍过夜,过滤,滤液即为石油醚供试液。
1.4.4 乙醇、酸性乙醇供试液的制备 取实验品
粗粉 50 g,置 1 L圆底烧瓶中,加入 95%乙醇 500
mL,置水浴上加热回流 2 h,放冷,过滤即得乙醇
供试液。取 1/2乙醇供试液,减压浓缩至浸膏,加
入 1%盐酸乙醇溶液,振荡,过滤即得酸性乙醇供
试液。
1.4.5 合阳蔓菁水提液浸膏的制备 取实验品粗
粉 500 g,加入 3000 mL去离子水,加热煮沸 1 h,
过滤,滤渣再加入 2000 mL去离子水煮沸 1 h,过
滤,合并两次滤液,减压浓缩,即得合阳蔓菁水
提液浸膏(5 g/mL),于临用前用去离子水稀释至所
需浓度。
1.4.6 化学成分预试验方法 采用试管法,通过
多种指示剂的显色反应或沉淀反应来鉴别合阳蔓
菁的化学成分[2]。
1.4.7 对正常小鼠胃排空的影响[3] 昆明种小鼠 50
只,随机分成 5 个组,每组 10 只,即空白对照
组、合阳蔓菁低、中、高剂量组、阳性药物(多潘
立酮)对照组。各组均按 20 mL/kg体质量灌胃给药
或灌服蒸馏水,每天 1次,连续 7 d,禁食不禁水
16 h。于第 8 天给药 1 h后,给每只小鼠灌胃 0.5%
甲基橙溶液 0.2 mL。30 min 后脱颈椎处死小鼠,
剖腹取胃内容物,将其用 10 mL蒸馏水稀释,用
5%碳酸氢钠调 pH至 6.0~6.5,以 2000 r/min离心
10 min,取上清液用 UV1800型分光光度计于波长
420 nm处测定胃甲基橙吸光度,按下列公式计算
胃甲基橙残留率:
胃甲基橙残留率(%)= 胃甲基橙吸光度基数甲基橙吸光度×100
1.4.8 对小鼠小肠推进运动的影响[3] 昆明种小鼠
50只,分组及给药方法同 1.4.7,第 8 天给药后 1
h 每只小鼠灌服炭末混悬液 (含阿拉伯胶 10%,
活性炭 5%)0.2 mL。30 min 后脱颈椎处死,剖腹取
出整个胃肠道,铺直后测量幽门至炭末前沿的距
离及幽门至回盲部全长,按下列公式测定炭末推
进率:
炭末推进率(%)=幽门至炭末前沿距离幽门至回盲部全长 ×100
食品开发
·107·
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2011年 第 36卷 第 3期
2 结果与讨论
2.1 化学成分预试验
2.1.1 冷水供试液供蛋白质、多肽、氨基酸鉴定;
热水供试液供多糖、糖苷类、皂苷、鞣质、有机
酸鉴定;石油醚供试液供挥发油、油脂检查,结
果见表 1。
2.1.2 乙醇供试液作黄酮、蒽醌、酚类、香豆素、
内酯、萜类、强心苷、甾体等化合物检查、生物
碱检查,结果见表 2。
从表 1 和表 2 可以看出,合阳蔓菁主要含有
氨基酸、还原糖、多糖及糖苷类、有机酸、植物
甾体、三萜类、生物碱类等化学成分。由于鉴别
氨基酸、多肽的茚三酮反应强烈,而鉴别蛋白质
的双缩脲反应为负反应,推断合阳蔓菁中含有的
植物蛋白可能为不溶或微溶于水的球蛋白。由于
水提液以及醇提液颜色较深,对试管显色反应可
能有一定的干扰,实验中若先用活性炭脱色,再
进行显色反应鉴别,结果可能会更好。
2.2 对正常小鼠胃排空的影响
2.3 对小鼠小肠推进运动的影响
从表 3 和表 4 可以看出,中等剂量及以上的
合阳蔓菁对小鼠胃排空、小肠推进运动均有显著
影响,其中高剂量组对小鼠小肠推进运动有极显
著影响。
3 结论
通过化学成分预实验,提示合阳蔓菁中可能
含有氨基酸、还原糖、多糖及糖苷类、有机酸、
植物甾醇、三萜类、生物碱类等化学成分。通过
药理实验表明,合阳蔓菁能够促进正常小鼠胃排
空,增强小鼠小肠推进运动,具有增强肠胃运动,
提高胃动力的功能。
本实验首次对合阳蔓菁进行了化学成分预实
表 1 合阳蔓菁水提取液及石油醚提取液预试验结果
注:“+”示有此反应;“++”示此反应显著;“- ”示无反应。
成分类别 反应名称 正反应 (+) 指标 结果
蛋白质、多
肽、氨基酸
双缩脲反应 呈紫红色 -
蛋白质沉淀反应 有沉淀产生 -
茚三酮实验 呈深蓝紫色 +
糖、多糖、
糖苷类
Fehling反应 产生砖红色沉淀 ++
Molish反应 形成紫红色环 ++
鞣质
三氯化铁实验 有蓝紫色生成 -
氯化钠明胶实验 白色沉淀或浑浊 -
有机酸
测定 pH值 pH值 7以下 +
溴酚蓝实验 黄色背景有蓝色斑点 +
皂苷
泡沫实验 泡沫不消失 -
Rosen-Heimer
反应 有紫红色生成 -
挥发油 油斑检查 滤纸上有油斑 -
注:“+”示有此反应;“++”示此反应显著;“- ”示无反应。
表 2 合阳蔓菁 95%乙醇提取液预试验结果
成分
类别 反应名称 正反应(+)指标 结果
黄酮类
盐酸-镁粉反应 呈红色或桃红色 -
三氯化铝实验 荧光变黄或加深 -
氨熏实验 显黄色荧光 -
酚类
三氯化铁实验 有蓝紫色生成 -
氯化钠明胶实验 白色沉淀或浑浊 -
香豆素、
内酯类
内酯开环闭环实验 混浊-澄清-混浊 -
异羟肟酸铁实验 呈红色 -
重氮化实验 呈红色 -
蒽醌类
碱液实验 出现红色,酸化后消退,碱化显色 -
醋酸镁反应 呈红色 -
强心苷
Kedde实剂反应 呈红色或紫色 -
苦味酸实验 呈红色或橙色 -
甾体、三
萜类
Liebermann-
Burchard反应
呈黄色-红色-蓝色-紫
色-青色-污绿色 +
氯仿-浓硫酸反应 氯仿层呈红色,硫酸层呈绿色荧光 +
生物碱
磷钼酸实验 生成棕黄色沉淀 ++
硅钨酸实验 生成灰白色沉淀 ++
碘-碘化钾实验 生成浅黄色沉淀 +
碘化汞钾实验 生成浅黄色沉淀 +
表 3 合阳蔓菁对正常小鼠胃排空的影响(±s)
注:与对照组相比,* P <0.05,**P<0.01。
组别 剂量 C/(g/kg)
动物
数(n)
胃甲基橙残
留率/%
空白对照组 蒸馏水 10 51.88±5.34
合阳蔓菁低剂量组 4 10 49.80±4.81
合阳蔓菁中剂量组 8 10 47.46±5.68*
合阳蔓菁高剂量组 16 10 43.66±4.47*
多潘立酮组 0.048 10 35.30±5.28**
表 4 合阳蔓菁对小鼠小肠推进运动的影响(±s)
注:与对照组相比,* P<0.05,**P<0.01。
组别 剂量 C/(g/kg) 动物数(n) 炭末推进率/%
空白对照组 蒸馏水 10 41.02±4.69
合阳蔓菁低剂量组 4 10 47.01±4.12
合阳蔓菁中剂量组 8 10 52.78±5.16*
合阳蔓菁高剂量组 16 10 60.58±3.56**
多潘立酮组 0.048 10 78.90±3.58**
(下转第 112页)
食品开发
·108·
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2011年 第 36卷 第 3期
对 ABTS的 IC50比对 DPPH的 IC50低很多,表明龙
眼壳提取物对 ABTS自由基的清除能力比对 DPPH
自由基的清除能力要强。但总体上看,龙眼壳提
取物对 DPPH和 ABTS两种自由基均有较好的清除
效果,其中 P21、P22、P23 的自由基清除能力比
其他产物都要强,由此可知 P21、P22、P23 含有
的活性成分比较多。
3 结论
龙眼壳提取物各部分均含有较丰富的黄酮类
物质,对 DPPH 自由基和 ABTS 自由基有显著的
清除作用,且清除作用随浓度和时间的增大而增
强,他们是天然有效的自由基清除剂。通过各阶
段产物的总黄酮的测定以及自由基清除能力测
定,可知具有自由基清除能力的活性成分主要集
中在 P21、P22、P23 部分。接下的研究将是对
P21、P22、P23 进行分离纯化,从中筛选出具有
自由基清除活性的单体化合物,这无疑将更具有
研究价值与开发前景。龙眼壳提取物各部分可以
广泛应用于食品和药品行业中,具有广阔的开发
前景,为实现龙眼的二次产业化生产提供了一种
新的途径。
参考文献:
[1] Wu J, Wu Y, Yang BB. Anticancer activity of Hemsleya
amabilis extract[J]. Life Sciences,2002,71:2161-2170
[2] Parman T, Wiley MJ, Wells PG. Free radical -mediated
oxidative DNA damage in the mechanism of thalidomide
teratogenicity[J]. Nature,1999,5:582-585
[3] Hussain SP, Hofseth LJ, Harris CC. Radical causes of can-
cer[J]. Nature,2003,3:276-285
[4] Di A, Krupa B, Bindokas VP. Quantal release of free radi-
cals during exocytosis of phagosomes [J]. Nature cell biol-
ogy,2002,4:279-285
[5] Halliwell B, Grootveld M. The measurement of free radical
reactions in humans[J]. FEBS Letters,1987,213:9-14
[6] Valentao P, Fernandes E, Carvalho F, et al. Antioxidative
properties of cardoon (Cynara cardunculus L.) infusion a-
gainst superoxide radical, hydroxyl radical and hypochlor-
ous acid[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,
2002,50:4989-4993
[7] 肖更生,黄儒强,曾庆孝,等.龙眼核的营养成分[J].食品科
技,2004,12(1):93-94
[8] Jiang YM. Purification and some properties of polyphennol
oxidase of longan fruit[J]. Food Chemistry,1999,66(1):75-
79
[9] 江苏新医学院.中药大词典(上) [M].上海:上海人民出版
社,1977:637
[10] 潘英明,黄斯琴,王恒山,等.龙眼果皮不同方法提取物对
自由基的清除作用[J].精细化工,2006,23(6):568-570
[11] Pan YM, Wang K, Huang SQ, et al. Antioxidant activity
of microwave-assisted extract of longan (Dimocarpus Lon-
gan Lour.) peel[J]. Food Chemistry,2008,106:1264-1270
[12] 王立娟.微波辅助提取山楂叶总黄酮的条件研究[J].林
产化学与工业,2006,26(3):131-134
[13] Pan YM, He CH, Wang HS, et al. Antioxidant activity of
microwave assisted extract of Buddleia officinalis and its
major active component[J]. Food Chem,2010,121:497-502
验,并结合药理实验验证了其生物活性,为其资
源的进一步开发利用提供了研究基础。
参考文献:
[1] 锦达.蔓菁与蔓菁子[J].家庭中医药,1997,(2):55
[2] 刘湘,汪秋安.天然产物化学[M].北京:化学工业出版社,
2005:10-11
[3] 李仪奎.中药药理实验方法学(第二版)[M].上海:上海科学
技术出版社,2005:466-472
(上接第 108页)
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
食品开发
#






##






#
欢迎订阅2011年 《食品科技》
邮发代号: 2-681 全年订价: 300元
·112·