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天山花楸平喘胶囊的提取工艺研究
何家伟１，常军民１＊，狄 斌２，王 岩１，刘玉花１（１．新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 ８３００１１；２．中国药科大学，南京
２１０００９）
摘要：目的 优选天山花楸平喘胶囊的最佳提取工艺。方法 以浸膏得率、总黄酮和氰苷含量为指标，以乙醇体积分数、提取温
度、乙醇用量、提取时间为考察因素，采用正交设计法筛选最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为１５倍量体积分数４０％乙醇，提
取温度４０℃，提取３次，每次１ｈ。结论 验证实验结果表明，优选出的工艺合理可行。
关键词：天山花楸；总黄酮；氰苷；提取工艺；正交实验
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１３．０５．０１０
中图分类号：Ｒ２８４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４－２４０７（２０１３）０５－０４６３－０４
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．Ａｎｔｉａｓｔｈｍａ Ｃａｐｓｕｌｅｓ
ＨＥ Ｊｉａｗｅｉ １，ＣＨＡＮＧ Ｊｕｎｍｉｎ１＊，Ｄｉ Ｂｉｎ２，ＷＡＮＧ Ｙａｎ１，ＬＩＵ Ｙｕｈｕａ１（１．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕ－
ｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．Ａｎｔｉａｓｔｈｍａ Ｃａｐｓｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｏｐｔｉ－
ｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．Ａｎｔｉａｓｔｈｍａ Ｃａｐｓｕｌｅｓ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ａｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ
ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｕｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｃｙａｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ａｓ ｉｎｄｅｘｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ，ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．Ａｎｔｉａｓｔｈｍａ Ｃａｐｓｕｌｅｓ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｏｗｓ：ａｄｄｉｎｇ １５ｔｉｍｅｓ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ４０％ａｌｃｏｈｏｌ，ｅｘｔｒａｃｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ａｔ ４０℃，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ３ｔｉｍｅｓ，ａｎｄ １ｈｏｕｒ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｓ
ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ａｎｄ ｆｅａｓｉｂｌｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃｙａｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
基金项目：新疆维吾尔自治区科技支撑计划（编号：２０１１３３１２７）
作者简介：何家伟，男，硕士研究生
＊通信作者：常军民，男，教授
蔷薇科 Ｒｏｓａｃｅａ花楸属Ｓｏｒｂｕｓ植物天山花楸
Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．的干燥嫩枝叶，为维吾尔
和哈萨克族民间常用药材，有止咳、祛痰、平喘、抗炎、
保护心肌缺血等作用［１－３］，现拟开发成国家五类（中
药）新药天山花楸平喘胶囊。该属植物中含有多种活
性成分，主要包括黄酮类、生氰苷类、三萜类、甾醇类、
木质素类、有机酸类等［４］。研究表明，黄酮类及氰苷
类化合物为天山花楸的主要有效成分［５－６］。本研究以
总黄酮、氰苷含量及浸膏得率为评价指标，采用正交
设计法筛选本品的最佳提取工艺条件。
１ 仪器与试药
１．１ 仪器 ＵＶ－９１００Ｄ型紫外分光光度计（北京莱
伯泰科仪器有限公司）；ＨＨ－Ｓ４ 型恒温水浴锅（金坛
市医疗仪器厂）；ＤＨＯ－９０７５Ａ型电热鼓风干燥箱（上
海恒科仪器有限公司）；ＢＬ－１５００型电子天平（北京赛
多利斯仪器系统有限公司）；ＸＳ２０５型电子分析天平
（托利多－梅特勒（上海）有限公司）。
１．２ 试药 天山花楸药材（２０１１年１０月中旬采自
新疆呼图壁林场，秋季叶尚绿时采收，即时干燥，经新
疆医科大学药学院生药学教研室帕丽达教授鉴定为
Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．的干燥嫩枝叶）；芦丁对照
品（中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所，批 号 １０００８０－
２００７０７）；水为蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 总黄酮的含量测定
２．１．１ 对照品溶液 取芦丁对照品约２０ｍｇ，精密称
定，置于１００ｍＬ量瓶中，加体积分数６０％的乙醇溶解，
定容至刻度，摇匀，得质量浓度０．２０ｍｇ·ｍＬ－１的对照
品溶液。
２．１．２ 供试品溶液 将天山花楸药材粉碎，过２０目
筛，取粗粉约１０ｇ，置圆底烧瓶中，１５倍量体积分数
４０％乙醇，提取温度５０℃，提取３次，每次１ｈ，过滤，
滤液定容至５００ｍＬ，精密吸取４ｍＬ用体积分数
６０％乙醇稀释至２５ｍＬ，作为供试品溶液。
２．１．３ 测定波长的选择 精密吸取５．０ｍＬ芦丁对
照品溶液和天山花楸枝叶供试品溶液４ｍＬ，置于
２５ｍＬ量瓶中，加体积分数６０％乙醇至６ｍＬ，再加
５０ｇ·Ｌ－１ ＮａＮＯ２１ｍＬ，放置６ｍｉｎ，加１００ｇ·Ｌ－１
Ａｌ（ＮＯ３）３１ｍＬ，放置６ｍｉｎ，加４０ｇ·Ｌ－１ ＮａＯＨ
１０ｍＬ，加体积分数６０％乙醇至刻度，摇匀，放置
１５ｍｉｎ，以零质量浓度管溶液为空白，进行全波长扫
描，获得紫外吸收光谱图［７］。结果显示：芦丁对照品
溶液在５０８ｎｍ处吸光度最大，天山花楸枝叶供试品
溶液在５０６ｎｍ处吸光度最大，故选择５０８ｎｍ测定
样品吸光度。
２．１．４ 线性关系的考察 精密吸取１，２，３，４，５和
６ｍＬ芦丁对照品溶液，分别置于２５ｍＬ量瓶中，加体
３６４西北药学杂志 ２０１３年９月 第２８卷 第５期
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积分数６０％乙醇至６ｍＬ，再加５０ｇ·Ｌ－１ ＮａＮＯ２
１ｍＬ，放置６ｍｉｎ，加１００ｇ·Ｌ－１ Ａｌ（ＮＯ３）３１ｍＬ，放
置６ｍｉｎ，加４０ｇ·Ｌ－１ ＮａＯＨ １０ｍＬ，加体积分数
６０％乙醇至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ，以零质量浓度
管溶液为空白，分别测定吸光度。以总黄酮质量浓度
Ｃ对吸光度Ａ 作线性回归，绘制标准曲线，得回归方
程：Ａ＝１２．５１３ １８７ Ｃ＋０．００３ ７６９，ｒ＝０．９９９ ３，线性
范围为０．００８～０．０４８ｍｇ·ｍＬ－１。
２．１．５ 样品的测定 精密吸取供试品溶液４ｍＬ，置于
２５ｍＬ量瓶中，按２．１．４项下方法操作，测定吸光度。
２．１．６ 精密度实验 精密吸取芦丁对照品溶液
４ｍＬ，置于２５ｍＬ量瓶中，按２．１．４项下方法操作，测定
吸光度。结果ＲＳＤ为０．０４％，表明仪器精密度良好。
２．１．７ 重复性实验 取天山花楸药材样品６份，每
份１０ｇ，按２．１．２项下方法操作，制备供试品溶液。
分别取供试液４ｍＬ，置于２５ｍＬ量瓶中，按２．１．４
项下方法操作，测定吸光度。结果 ＲＳＤ为０．４３％，
表明重复性良好。
２．１．８ 稳定性实验 取一份供试品溶液４ｍＬ，置于
２５ｍＬ量瓶中，按２．１．４项下方法操作，分别于０，５，
１０，１５，２０，２５和３０ｍｉｎ测定吸光度。结果 ＲＳＤ为
１．７５％，表明其显色后３０ｍｉｎ内基本稳定。
２．１．９ 回收率实验 取已知总黄酮含量的天山花楸
供试品溶液２ｍＬ，平行６份，分别置于２５ｍＬ量瓶
中，加入芦丁对照品溶液２ｍＬ。按２．１．４项下方法操
作，测定吸光度。结果总黄酮的平均回收率为９９．２６％，
ＲＳＤ为２．５％，见表１。
表１ 天山花楸总黄酮的回收率（ｎ＝６）
Ｔａｂ．１ Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ
Ｒｕｐｒ．（ｎ＝６）
编号
溶液中
总黄酮的
量／ｍｇ
加入芦丁
的量／ｍｇ
测得总
黄酮的量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ
／％
１ ０．４３８ ５ ０．４００ ２ ０．８３２ ０ ９８．３３
２ ０．４３８ ５ ０．４００ ２ ０．８３７ ３ ９９．６５
３ ０．４３８ ５ ０．４００ ２ ０．８２７ ８ ９７．２８
４ ０．４３８ ５ ０．４００ ２ ０．８３１ ８ ９８．２８
５ ０．４３８ ５ ０．４００ ２ ０．８５５ ０ １０４．０７
６ ０．４３８ ５ ０．４００ ２ ０．８３０ ５ ９７．９５
９９．２６ ２．５
２．２ 氰苷的含量测定［８－１２］
２．２．１ 异烟酸－吡唑啉酮溶液 异烟酸溶液：称取
１．５ｇ异烟酸溶于２４ｍＬ ２０ｇ·Ｌ－１氢氧化钠溶液
中，加水稀释至１００ｍＬ。吡唑啉酮溶液：称取０．２５ｇ
吡唑啉酮溶于２０ｍＬ无水乙醇中。临用前，将吡唑
啉酮溶液和异烟酸溶液按１∶５混合。
２．２．２ 氰化钠标准溶液
２．２．２．１ 氰化钠储备液的配制和标定 取氰化钠约
０．１９ｇ，精密称定，溶解于１０ｇ·Ｌ－１氢氧化钠中，并
稀释至１００ｍＬ，摇匀，避光贮存于棕色瓶中。此溶液
１ｍＬ约相当于１ｍｇ氰离子（ＣＮ－），其准确度可在
使用前用硝酸银标准溶液标定（１Ｌ的１ｍｏｌ·Ｌ－１硝
酸银标准溶液相当于５２．０４ｇ氰离子（２ＣＮ－））。
２．２．２．２ 氰化钠标准中间溶液 先按式（１）计算出
配制５００ｍＬ（１ｍＬ含１０．００μｇ ＣＮ
－）氰化钠标准中
间溶液时，应吸取氰化钠储备溶液的体积Ｖ（ｍＬ）：
Ｖ ＝１０．００×５００Ｔ×１ ０００
． 式（１）
式中：Ｔ×１ ０００：１ｍＬ氰化钠储备液含ＣＮ－质
量（μｇ）；１０．００：１ｍＬ氰化钠标准中间溶液含１０．００
μｇ ＣＮ
－；５００：氰化钠标准中间溶液体积（ｍＬ）。
准确吸取Ｖ（ｍＬ）氰化钠储备液溶液于５００ｍＬ
棕色量瓶中，用１ｇ·Ｌ－１氢氧化钠溶液稀释至刻度，
摇匀。
２．２．２．３ 氰化钠标准溶液 临用前，精密吸取
１０ｍＬ氰化钠标准中间溶液于１００ｍＬ棕色量瓶中，
用１ｇ·Ｌ－１氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀。即得
１．００μｇ·ｍＬ
－１ ＣＮ－的氰化钠标准溶液。
２．２．３ 供试品溶液 将天山花楸药材粉碎，过２０目
筛，取粗粉１０ｇ，置于５００ｍＬ圆底烧瓶中，加１５倍
量体积分数４０％乙醇，提取温度５０℃，提取３次，每
次１ｈ，滤过，滤液定容至５００ｍＬ，作为供试品溶液。
２．２．４ 氰化氢的释放和吸收 取供试品溶液５０ｍＬ，
置于５００ｍＬ蒸馏瓶中，加蒸馏水至２００ｍＬ。将１０
ｍＬ １００ｇ·Ｌ－１ ＥＤＴＡ 二钠溶液加入蒸馏瓶中，迅速
加入１０ｍＬ磷酸。迅速连接好全部装置，冷凝管下端
插入盛有１０ｍＬ １０ｇ·Ｌ－１氢氧化钠溶液的１００ｍＬ量
筒。打开冷凝水，打开可调电炉，由低档逐渐升高，馏
出液以２～４ｍＬ·ｍｉｎ－１的速度进行加热蒸馏。量筒
内馏出液近１００ｍＬ时，停止蒸馏，取下量筒，加水至刻
度，此碱性馏出液待测定氰化物用。
２．２．５ 线性关系的考察 取８支２５ｍＬ具塞比色
管，分别加入氰化钠标准溶液０，０．２，０．５，１，２，３，４和
５ｍＬ，各加１ｇ·Ｌ－１氢氧化钠溶液至１０ｍＬ。向各
管中加入５ｍＬ磷酸盐缓冲溶液，混匀，迅速加入０．２
ｍＬ １０ｇ·Ｌ－１氯胺Ｔ溶液，立即盖塞子，混匀，放置
３～５ｍｉｎ。向各管中加入５ｍＬ异烟酸－吡唑啉酮溶
液，混匀加水稀释至刻度，摇匀，在３０℃的水浴中放置
４０ｍｉｎ。用分光光度计，在６３８ｎｍ波长处，以试剂空
白（零质量浓度）作参比，测定吸光度。以氰化物含量
Ｃ为横坐标、吸光度Ａ为纵坐标，绘制标准曲线，计算
得回归方程：Ａ＝２．９５６ ０１１Ｃ－０．００６ １１３，ｒ＝０．９９９ １，
氰离子线性范围为０．００８～０．２００μｇ·ｍＬ
－１。
２．２．６ 样品的测定及结果计算 吸取适量体积的馏
出液，于２５ｍＬ具塞比色管中，按２．２．５项下方法操
作，测定吸光度。计算相应的氰化物含量，以氰离子
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（ＣＮ－）计，按式（２）计算：
Ｃ２ ＝ｍＶ ×
Ｖ１
Ｖ２
式（２）
式中：ｍ：从标准曲线查出试份（比色时，所取馏
出液）的氰化物的含量（μｇ）；Ｖ：蒸馏所取样品液的体
积（ｍＬ）；Ｖ１：试样（馏出液）的体积（ｍＬ）；Ｖ２：试份
（比色时，所取馏出液）（ｍＬ）。
药材中氰苷含量，以苦杏仁苷含量计算。
２．２．７ 精密度实验 取氰化钠标准溶液３ｍＬ，置于
２５ｍＬ具塞比色管中，按２．２．５项下方法操作，测定吸光
度。结果ＲＳＤ为０．１６％，表明仪器精密度良好。
２．２．８ 重复性实验 取天山花楸药材样品１０ｇ，按
２．２．３项下方法操作，平行制备６份供试品溶液，按
２．２．４项下方法操作制备蒸馏液，并测定吸光度。结
果ＲＳＤ为０．４３％，表明重复性良好。
２．２．９ 稳定性实验 取样品馏出液５ｍＬ，置于
２５ｍＬ具塞比色管中，分别于０，５，１０，１５，２０，２５和
３０ｍｉｎ测定吸光度。结果ＲＳＤ为１．４３％，表明其显
色后３０ｍｉｎ内基本稳定。
２．２．１０ 回收率实验 取已知含量天山花楸药材的
样品馏出液３ｍＬ，加入氰化钠标准溶液２ｍＬ，按
２．２．５项下方法操作，测定吸光度。结果氰苷的平均
回收率为９６．４％，ＲＳＤ为２．４％。见表２。
表２ 天山花楸氰化物的回收率（ｎ＝６）
Ｔａｂ．２ Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｃｙａｎｉｄｅ ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．（ｎ＝６）
编号
溶液中
ＣＮ－的量
／μｇ
加入ＣＮ－
的量／μｇ
测得ＣＮ－
的量／μｇ
回收率
／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ
／％
１ １．９１５ １ ２ ３．８５９ ８ ９７．２４
２ １．９１５ １ ２ ３．８２６ ５ ９５．５７
３ １．９１５ １ ２ ３．８９８ ０ ９９．１５
４ １．９１５ １ ２ ３．７９６ ５ ９４．０７
５ １．９１５ １ ２ ３．８８６ ８ ９８．５９
６ １．９１５ １ ２ ３．７８５ ３ ９３．５１
９６．４ ２．４
２．３ 出膏率的测定 合并提取液，滤过，定容至５００
ｍＬ，再从中取２５０ｍＬ，置于已干燥至恒质量的蒸发
皿内，水浴蒸干，于１０５℃烘箱干燥３ｈ，置于干燥器
中冷却３０ｍｉｎ，迅速称质量，计算。
２．４ 正交实验
２．４．１ 考察因素的确定 在预实验中，以总黄酮和
氰苷含量为指标，对提取次数进行考察。结果发现：
体积分数６０％乙醇提取３次与提取４次提取液中各
指标成分的含量相差不大，所以将提取次数固定为３
次。以乙醇体积分数、提取温度、乙醇倍数、提取时间
为考察因素，以总黄酮、氰苷含量及浸膏得率为考察
指标，选用Ｌ９（３４）正交设计进行实验，结果见表３。
２．４．２ 正交实验的方法与结果 将天山花楸药材粉
碎，过２０目筛，取粗粉１０ｇ，每次实验平行做３份样
品，取平均值计算。按正交实验设计方案提取，滤过，
滤液定容至５００ｍＬ。测定总黄酮、氰苷含量及浸膏
得率。结果见表４至表７。
表３ 正交实验因素水平表
Ｔａｂ．３Ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
水平
因 素
Ａ，乙醇体积
分数／％
Ｂ，提取温度
／℃
Ｃ，乙醇用量
／倍
Ｄ，提取时间
／ｈ
１ ３０ ４０ １２ ０．５
２ ４０ ５０ １５ １．０
３ ５０ ６０ １８ １．５
表４ 正交实验结果
Ｔａｂ．４Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
实验号
因 素
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
总黄酮
／ｍｇ·ｇ－１
氰苷
／ｍｇ·ｇ－１
浸膏得率
／％
１ １ １ １ １ ５５．１０ ３．３０ ２８．５２
２ １ ２ ２ ２ ６３．１１ ２．９１ ３２．７２
３ １ ３ ３ ３ ６７．２５ １．０６ ３０．９５
４ ２ １ ２ ３ ６２．３１ ２．５４ ３１．０１
５ ２ ２ ３ １ ６７．４７ １．２９ ３２．５４
６ ２ ３ １ ２ ６８．３６ ０．６０ ３６．０７
７ ３ １ ３ ２ ６６．１３ １．４６ ３１．０５
８ ３ ２ １ ３ ６３．６５ ０．４６ ２９．２９
９ ３ ３ ２ １ ６９．２２ ０．３７ ３１．８７
总黄酮
／ｍｇ·ｇ－１
珔ｋ１ ６１．８２ ６１．１８ ６２．３７ ６３．９３
珔ｋ２ ６６．０５ ６４．７４ ６４．８８ ６５．８７
珔ｋ３ ６６．３３ ６８．２８ ６６．９５ ６４．４０
Ｒ１ ４．５１ ７．１０ ４．５８ １．９４
氰苷
／ｍｇ·ｇ－１
珔ｋ１ ２．４２ ２．４３ １．４５ １．６５
珔ｋ２ １．４８ １．５５ １．９４ １．６６
珔ｋ３ ０．７６ ０．６８ １．２７ １．３５
Ｒ２ １．６６ １．７５ ０．６７ ０．３１
出膏率
／％
珔ｋ１ ３０．７３ ３０．１９ ２９．６２ ３０．９８
珔ｋ２ ３３．２１ ３１．５２ ３１．８７ ３３．２８
珔ｋ３ ３０．７４ ３２．９６ ３１．５１ ３０．４２
Ｒ３ ２．４８ ２．７７ ２．２５ ２．８６
表５ 总黄酮正交实验方差分析
Ｔａｂ．５Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
因素 偏差平方和 自由度 方差 Ｆ值 Ｐ值
Ａ ３８．３１７ ２ １９．１５９ ６．２６５ ０．１３８
Ｂ ７５．５４４ ２ ３７．７７２ １２．３５２ ０．０７５
Ｃ ３１．５６１ ２ １５．７８１ ５．１６０ ０．１６２
误差 ６．１１６ ２ ３．０５８
表６ 氰苷正交实验方差分析
Ｔａｂ．６Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙａｎｏ－
ｐｈｏｒｉｃ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ
因素 偏差平方和 自由度 方差 Ｆ值 Ｐ值
Ａ ４．１６１ ２ ２．０８０ ２２．８５８ ０．０４２
Ｂ ４．６２９ ２ ２．３１４ ２５．４３０ ０．０３８
Ｃ ０．７１９ ２ ０．３６０ ３．９５２ ０．２０２
误差 ０．１８２ ２ ０．０９１
表７ 浸膏得率正交实验方差分析
Ｔａｂ．７Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃ－
ｔｉｏｎ ｒａｔｅ
因素 偏差平方和 自由度 方差 Ｆ值 Ｐ值
Ａ １２．２３５ ２ ６．１１７ ２４．３７４ ０．０３９
Ｂ １１．５１７ ２ ５．７５８ ２２．９４４ ０．０４２
Ｄ １３．８１８ ２ ６．９０９ ２７．５２８ ０．０３５
误差 ０．５０２ ２ ０．２５１
５６４西北药学杂志 ２０１３年９月 第２８卷 第５期
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通过表中总黄酮（Ｒ１）的正交分析，各因素作用
主次为Ｂ＞Ｃ＞Ａ＞Ｄ，因素Ｄ的影响最小，方差分析
时，将Ｄ作为误差列，结果各因素对黄酮均无显著影
响，体积分数４０％乙醇和体积分数５０％乙醇对总黄
酮含量影响不大，故最佳提取工艺为Ｂ３Ｃ３Ａ２Ｄ２，即
１８倍量体积分数４０％的乙醇，提取温度６０℃，提取
３次，每次１ｈ。
通过表中氰苷（Ｒ２）的正交分析，各因素作用主
次为Ｂ＞Ａ＞Ｃ＞Ｄ，因素Ｄ的影响最小，方差分析
时，将Ｄ作为误差列，结果Ａ、Ｂ均具有显著性差异，
最佳提取工艺为Ｂ１Ａ１Ｃ２Ｄ２，即１５倍量体积分数３０％
的乙醇，提取温度４０℃，提取３次，每次１ｈ。
通过表中出膏率（Ｒ３）的正交分析，各因素作用
主次为Ｄ＞Ｂ＞Ａ＞Ｃ，因素Ｃ的影响最小，方差分析
时，将Ｃ作为误差列，结果Ａ、Ｂ、Ｄ均有显著性差异，
最佳提取工艺为Ｄ２Ｂ３Ａ２Ｃ２，即１５倍量体积分数４０％
的乙醇，提取温度６０℃，提取３次，每次１ｈ。
综合上述考察结果，由于指标成分氰苷化学性质
不稳定，温度高于４０℃时，含量会显著下降，同时考
虑各因素对黄酮含量、出膏率的影响，确定最佳提取
工艺条件为Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ２，即１５倍量体积分数４０％乙
醇，提取温度４０℃，提取３次，每次１ｈ。
２．４．３ 最佳工艺验证实验 称取天山花楸干燥叶
４０ｇ，加１５倍量体积分数４０％乙醇，提取温度４０℃，
提取３次，每次１ｈ。滤液定容至２ ０００ｍＬ，分别测
定总黄酮含量、氰苷含量和出膏率，结果见表８。
表８ 验证实验结果
Ｔａｂ．８Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
实验号 总黄酮／ｍｇ·ｇ－１ 氰苷／ｍｇ·ｇ－１ 浸膏得率／％
验１ ６８．２０ ２．９０ ３１．０８
验２ ６７．９３ ２．８２ ３１．１７
验３ ７１．０７ ２．７１ ３１．４３
平均值 ６９．０７ ２．８１ ３１．２３
由表８可知，验证结果与正交实验最高值接近，
表明此优选的工艺可行。
３ 讨论
本实验参考饲料中氰化物和水质中氰化物测定
的国家标准，采用异烟酸－吡唑啉酮法测定天山花楸
中氰化物的含量，进而推算天山花楸中氰苷类物质的
含量（以苦杏仁苷含量计）。该方法具有良好的线性
相关性，方法灵敏，重复性好，结果可靠，可以用于天
山花楸及其制剂的质量控制。
参考文献：
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吡唑啉酮分光光度法测定［Ｊ］．分析仪器，２００９（１）：３２－
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中氰苷的研究 ［Ｊ］．安徽农业科学，２０１０，３８（２４）：
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保护，２００９，３１（４）：４３－４５．
（收稿日期：２０１３－０４－１９）
红芪片质量标准研究
何 悦１，肖会敏１，李予蓉２，谢艳华１，王四旺１＊（１．第四军医大学药物研究所，西安 ７１００３２；２．第四军医大学放射医学教
研室，西安 ７１００３２）
摘要：目的 建立红芪片的质量标准。方法 采用ＴＬＣ法对制剂中黄芪甲苷、黄芪与沙棘药材进行薄层鉴别；采用 ＨＰＬＣ法测
定制剂中红景天苷的含量。结果 黄芪甲苷、黄芪与沙棘药材的薄层鉴别具有较好的专属性；红景天苷的回归方程：ｙ＝
２ ２９１ ６２７ｘ＋１３ ３６０，ｒ＝０．９９９ ９，线性范围为０．０６４～０．９６０ｍｇ·ｍＬ－１；平均回收率为９８．５％，ＲＳＤ值为０．７％。结论 所建立
的标准可用于该制剂的质量控制。
关键词：红芪片；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１３．０５．０１１
中图分类号：Ｒ９２７ 文献标志码： 文章编号：１００４－２４０７（２０１３）０５－０４６６－０４
基金项目：陕西省“１３１１５”科技创新重大科技专项（编号：２００９ＺＤＫＧ－７５）
作者简介：何悦，女，本科生
＊通信作者：王四旺，男，教授，博士生导师
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