全 文 ： 中国现代应用药学 2015 年 7 月第 32 卷第 7 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2015 July, Vol.32 No.7 ·863·
[11] YAN D L, LIU S S, NING Y S. Chemistry, pharmacology and
clinical application of research advances in plant genus
Callicarpa [J]. Chin Tradit Pat Med(中成药), 2008, 30(9):
1361-1363.
[12] WANG Y J, YANG Y F, GAO D. Advances in studies on
chemical constituents in plants of Callicarpa Linn. and their
bioactivities [J]. Chin Tradit Herb Drugs(中草药), 2008, 39(1):
133-138.
[13] WANG J, JIA L Y, HE L H. Research progress of Callicarpa
L. [J]. Her Med(医药导报), 2009, 6(5): 9-10.
[14] JING H, ZUO J F, LI J S. Research progress of
pharmacological phenylethyl alcohol glycosides compounds
[J]. Lishizhen Med Mater Med Res(时珍国医国药), 2006,
17(3): 440-441.
[15] WANG Z N, HAN Z, CUI H B, et al. Chemical constituents
from Callicarpa nudiflora [J]. J Trop Subtr Botany(热带亚热
带植物学报), 2007, 15(4): 359-362.
收稿日期：2014-12-13



HPLC 同时测定浙江蜡梅中 3 种黄酮类成分的含量

吴敏，陈红梅，干红女，方新华(杭州市中医院，杭州 310007)

摘要：目的 建立同时测定浙江蜡梅中 3 种黄酮类成分含量的高效液相色谱法。方法 采用 Agilent Zorbax SB-C18 色谱
柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温为 30 ℃；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，流速为 1.0 mL·min1；检测波长为
360 nm。结果 芦丁、槲皮素和山奈酚的线性范围分别为 4.057~507.2，0.686 1~171.5，0.216 9~81.35 μg·mL1，r 分别为
0.999 3，0.999 6，0.999 9；平均加样回收率分别为 99.97%(RSD=0.97%)，100.13%(RSD=1.06%)，99.35%(RSD=1.39%)。
结论 该方法同时测定浙江蜡梅中的芦丁、槲皮素和山奈酚的含量，简便易行、快速准确、重复性好，可用于浙江蜡梅的
质量控制。
关键词：浙江蜡梅；芦丁；槲皮素；山奈酚；高效液相色谱法
中图分类号：R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2015)07-0863-04
DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2015.07.024

Simultaneously Determination of the Content of Three Kinds of Flavonoids in Chimonanthus
Zhejiangensis M. C. Liu by HPLC

WU Min, CHEN Hongmei, GAN Hongnyu, FANG Xinhua(Hangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,
Hangzhou, 310007, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an HPLC method to simultaneously determine three kinds of flavonoids in
Chimonanthus zhejiangensis M. C. Liu. METHODS The Agilent Zorbax SB-C18 chromatographic column (4.6 mm×250 mm,
5 μm) was adopted. The column temperature of was 30 ℃. The mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution
with the gradient elution at the flow rate of 1.0 mL·min1. The detection wavelength was 360 nm. RESULTS Good linear
correlation of rutin, quercetin and kaempferol were found in the ranges of 4.057507.2, 0.686 1171.5, 0.216 981.35 μg·mL1
(r=0.999 3, 0.999 6, 0.999 9), respectively. The average recoveries were 99.97%(RSD=0.97%), 100.13%(RSD=1.06%),
99.35%(RSD=1.39%). CONCLUSION This method is simple, accurate and repeatable for simultaneously determination of the
contents of rutin, quercetin and kaempferol in Chimonanthus zhejiangensis M. C. Liu, and applicable for the quality control of
Chimonanthus zhejiangensis M. C. Liu.
KEY WORDS: Chimonanthus zhejiangensis M. C. Liu; rutin; quercetin; kaempferol; HPLC


作者简介：吴敏，女，副主任中药师 Tel: (0571)85827812 E-mail: wuminhz773@163.com
浙江蜡梅(Chimonanthus zhejiangensis M. C.
Liu)为蜡梅科植物，产于浙江南部、福建北部，为
一种历史悠久的畲药——“食凉茶”。由于浙江
蜡梅具有抗菌、消炎、抗病毒、增强机体免疫力
等功效，畲族民间常用它来治疗感冒、咽喉肿痛
诸症[1]。关于浙江蜡梅的研究报道极少[2-3]，而关
于 畲 药 “ 食 凉 茶 ” 的 另 一 来 源 柳 叶 蜡 梅
(Chimonanthus salicifolius S. Y. Hu)研究较多。柳叶
蜡梅相关研究表明黄酮是其重要的活性成分之
一[4-5]，且黄酮具有抗炎、抗菌、抗病毒等药理作
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用[6]，预实验发现浙江蜡梅中亦含有芦丁、槲皮素、
山奈酚，且这三者都稳定存在，故选此为指标性
成分。本实验采用 HPLC 同时测定浙江蜡梅中这 3
种成分的含量，旨在为浙江蜡梅质控标准的制定
提供科学依据。
1 仪器与试药
Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国 Agilent 公
司)；DAD 检测器、XS105DU 电子天平(瑞士梅特
勒公司)；DL-360D 智能超声波清洗器(功率 360 W，
频率 40 kHz，上海之信仪器有限公司)。
芦丁(批号：100080-200707，含量 90.5%)、槲
皮素(批号：100081-200406，含量 97.3%)、山奈酚
(批号：110861-201310，含量：93.2%)均购自中国
食品药品检定研究院。甲醇、乙腈、磷酸均为色
谱纯，水为娃哈哈纯净水。药材自行采集或市场
购入，由本院李晓峰副主任中药师鉴定为浙江蜡
梅 Chimonanthus zhejiangensis M.C.Liu 的干燥叶。
药材来源见表 1。
表 1 浙江腊梅药材来源
Tab. 1 Source of Chimonanthus zhejiangensis M. C. Liu
编号 来源 采收时间 水分(甲苯法)/%
1 浙江省遂昌县 2013 年 10 月 9.0
2 福建省寿宁县 2014 年 3 月 8.7
3 浙江省云和县 2014 年 5 月 7.9
4 浙江省庆元县 2014 年 5 月 7.0
5 浙江省云和县 2014 年 6 月 5.6
6 浙江省青田县 2014 年 6 月 7.1
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent Zorbax SB-C18 色 谱 柱 (4.6 mm×
250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，
梯度洗脱(0~10 min，18%→30%乙腈；10~24 min，
30%→45%乙腈 )，流速为 1.0 mL·min1，柱温
30 ℃；检测波长为 360 nm；进样量均为 5 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芦丁、槲皮素、山奈酚对照品适量，
分别加 70%甲醇制成每 1 mL 含芦丁、槲皮素、山
奈酚含量分别为 1.014 3，0.686 1，0.325 4 mg·mL1
的 3 种对照品储备液。精密吸取上述储备液制成
芦丁、槲皮素、山奈酚含量分别为 202.86，34.31，
21.69 μg·mL1 的混合溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品过 2 号筛粉末约 0.5 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 25 mL，密塞，
称定重量，超声处理 60 min，放冷至室温，再称
定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，用
0.45 μm 的微孔滤膜过滤，取续滤液做为供试品溶液。
2.4 系统适用性试验
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，按
“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。在该色
谱条件下，芦丁、槲皮素和山奈酚与其他成分可
达到基线分离，分离度均 >1.5，理论板数均
>30 000，具有良好的分离效果。结果见图 1。

图 1 高效液相色谱图
A对照品；B供试品。
Fig. 1 HPLC chromatograms
Areference substance; Btest sample.
2.5 线性关系考察
精密吸取各对照品储备液适量，制成芦丁浓
度分别为 4.057，12.18，60.86，152.1，338.1，
507.2 μg·mL1，槲皮素浓度分别为 0.686 1，6.861，
20.58，34.31，91.48，171.5 μg·mL1，山奈酚浓度
分别为 0.216 9，1.302，10.85，21.69，57.85，
81.35 μg·mL1 的混合对照品溶液，各精密吸取
5 μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定，分别以
峰面积 Y 和对照品含量 X 进行回归分析，得芦丁
回归方程为 Y=16.097X147.17，r=0.999 3，槲皮
素回归方程为 Y=41.136X140.36，r=0.999 6，山
奈酚回归方程为 Y=48.992X5.1356，r=0.999 9。
结果表明：芦丁、槲皮素和山奈酚分别在 4.057~
507.2，0.686 1~171.5，0.2169~81.35 μg·mL1 内呈
良好的线性关系。
2.6 仪器精密度试验
取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续
中国现代应用药学 2015 年 7 月第 32 卷第 7 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2015 July, Vol.32 No.7 ·865·
进样 5 次，记录峰面积，计算得芦丁、槲皮素、
山奈酚峰面积的 RSD 分别为 0.33%，0.39%，
0.33%，表明仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一批浙江蜡梅，平行取样 6 份，按“2.3”
项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱
条件进样测定，按干燥品计算芦丁、槲皮素、山
奈酚的平均含量分别为 0.603%，0.089%，0.080%，
RSD 分别为 0.33%，1.30%，1.21%。
2.8 稳定性试验
精密吸取“2.7”项下供试品溶液，分别在 0，
4，8，12，18，30 h 进样测定，记录峰面积，计
算得芦丁、槲皮素、山奈酚峰面积的 RSD 分别为
0.23%，1.16%，1.09%，表明供试品溶液在 30 h
内稳定性良好。
2.9 加样回收率试验
取已知含量的浙江蜡梅 6 份，各约 0.25 g，精
密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入芦丁对
照品溶液 5 mL(0.284 0 mg·mL1)、槲皮素对照品
溶液 2 mL(0.102 9 mg·mL1)、山奈酚对照品溶液 2
mL(0.091 11 mg·mL1)，再分别精密加入 70%甲醇
16 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”
项下色谱条件测定。结果见表 2。
表 2 加样回收率试验结果(n＝6)
Tab. 2 Results of recovery test(n＝6)
组
分
称样
量/g
样品
含量/
mg
对照品
加入量/
mg
测得量/
mg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/
%
0.252 7 1.386 6 1.420 0 2.802 3 99.69
0.250 2 1.372 9 1.420 0 2.800 9 100.56
0.249 9 1.371 3 1.420 0 2.789 2 99.85
0.251 8 1.381 7 1.420 0 2.777 3 98.28
0.253 4 1.390 5 1.420 0 2.825 7 101.07
芦
丁
0.252 1 1.383 3 1.420 0 2.808 5 100.36
99.97 0.97
0.252 7 0.204 7 0.205 8 0.412 3 100.89
0.250 2 0.202 6 0.205 8 0.406 0 98.82
0.249 9 0.202 4 0.205 8 0.407 2 99.52
0.251 8 0.203 9 0.205 8 0.410 9 100.57
0.253 4 0.205 2 0.205 8 0.409 7 99.35
槲
皮
素
0.252 1 0.204 2 0.205 8 0.413 3 101.62
100.13 1.06
0.252 7 0.184 0 0.182 2 0.362 6 98.04
0.250 2 0.182 1 0.182 2 0.365 3 100.52
0.249 9 0.181 9 0.182 2 0.363 7 99.77
0.251 8 0.183 3 0.182 2 0.361 9 98.02
0.253 4 0.184 5 0.182 2 0.369 0 101.28
山
奈
酚
0.252 1 0.183 5 0.182 2 0.362 9 98.45
99.35 1.39
2.10 样品含量测定
取不同编号的样品约 0.5 g，各 2 份，精密称
定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”
项下色谱条件进样测定，按干燥品计算含量。结
果见表 3。
表 3 浙江蜡梅中芦丁、槲皮素和山奈酚的含量(n=2)
Tab. 3 Contents of rutin; quercetin and kaempferol in
Chimonanthus Zhejiangensis M. C. Liu (n=2)
编号 芦丁/% 槲皮素/% 山奈酚/%
2 0.390 0.029 0.046
3 0.345 0.027 0.074
4 0.743 0.091 0.131
5 0.474 0.040 0.069
6 0.307 0.027 0.077
3 讨论
本实验分别考察了提取溶剂(50%甲醇、70%
甲醇、纯甲醇)、溶剂体积(15，25，40 mL)、不同
提取方法(加热回流、超声)对黄酮测定结果的影
响，通过比较最终确定以 25 mL 70%甲醇超声处理
60 min 为样品的提取方法；经由 DAD 检测器全波
段扫描，发现在 360 nm 处 3 个黄酮的吸收峰的峰
形、吸收值均较优，故选择 360 nm 为检测波长；
参考相关文献[7-9]，尝试采用甲醇、乙腈与不同浓
度的磷酸溶液为流动相，进行梯度洗脱，结果发
现，以乙腈-0.1%磷酸溶液进行梯度洗脱的分析效
果最优。
近代药理研究表明浙江腊梅具有明显的解热
镇痛、抗菌抗病毒、抗炎、镇咳及增强免疫力等
作用[10]，而黄酮类成分在抗炎、抗菌和抗病毒上
作用明显，与浙江腊梅用于治疗感冒、咽喉肿痛
诸症相符。《浙江省中药炮制规范》2005 年版新收
载浙江腊梅，具体检验项目仅有性状、显微鉴别
和挥发油测定，故建立更为完善的标准极为重要。
由测定结果也可见，不同批次浙江腊梅中的各黄
酮类成分的含量参差不齐，可能与采收季节及地
理因素等相关，制定相关限度还需测定更多不同
批次采收期与不同采集地点的药材。
本实验首次建立了同时测定浙江蜡梅中 3 种
黄酮类指标性成分的 HPLC 方法，专属性强，简
便可靠，可以更全面的反映其物质信息，为浙江
蜡梅的内在质量提供科学依据。
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REFERENCES
[1] 胡剑影, 李水福. 畲药食凉茶[J]. 中国药业, 2009, 18(10):
78.
[2] OUYANG T, MAI X. Analysis of the chemical constituents of
essential oil from Chimonanthus zhejiangensis by GC-MS [J].
Chin Med Mater(中药材), 2010, 33(3): 385-387.
[3] 程东庆, 方浩, 潘佩蕾, 等. 浙江蜡梅叶提取物抑菌试验[J].
实用中医药杂志, 2005, 21(5): 314.
[4] PAN X H, SHI X J, ZHANG X F, et al. Constituents of
Chimonanthus salicifolius and their antioxidant activity [J].
Chin J Exp Tradit Med Form(中国实验方剂学杂志), 2012,
18(1): 99-102.
[5] 孙丽仁, 何明珍, 冯育林, 等. 山蜡梅叶的化学成分研究[J].
中草药, 2009, 40(8): 1214-1216.
[6] 张培成 . 黄酮化学 [M]. 北京 : 化学工业出版社 , 2008,
227-243.
[7] 李诒光, 卢建中, 陈杰, 等. 江西道地药材山蜡梅叶质量标
准的研究[J]. 中草药, 2010, 41(5): 836, 附 1-2.
[8] NIE W, PANG H L, HUANG L L, et al. Determination of the
contents of three flavonoids in leaves of Chimonanthus nitens
Oliv. and their dynamic changes [J]. Acta Agric Univ
Jiangxiensis (江西农业大学学报), 2013, 35(2): 357-360.
[9] LIU D Y, HU P B, SHI X F, et al. Simultaneous determination
of four flavonoids in different parts of Cedrus deodara by
HPLC [J]. Chin J Mod Appl Pharm(中国现代应用药学),
2014, 31(12): 1510-1514.
[10] 朱文佩, 刘丽华. 浅谈畬药食凉茶[J]. 中国民族民间医药,
2011, 20(4): 40.
收稿日期：2014-12-08






本刊入选中国科协精品科技期刊工程项目

精品科技期刊工程项目是由中国科协组织实施的，其目的是支持优秀科技期刊发展，打造一批在本
学科和专业领域内有较强影响力和专业辐射力的中文精品科技期刊。目前，中国的科技期刊约 5000 种，
入选 2015 年中国科协精品科技期刊工程项目的仅 299 种，其中，药学类刊物入选 12 种，而入选期刊数
字出版建设项目的药学期刊仅《中国现代应用药学》1 种。
入选精品科技期刊工程项目的药学类期刊如下：
中国科协精品科技期刊工程第四期项目评审结果(药学类)
序号 期刊名称 主管单位
精品科技期刊 Top50 项目
1 药学学报 中国科学技术协会
2 中国药学杂志 中国科学技术协会
3 中国药物化学杂志 辽宁省教育厅
4 中国中药杂志 中国科学技术协会
5 中草药 天津药物研究院
学术质量提升项目
1 中国药理学通报 中国科学技术协会
2 中国药理学与毒理学杂志 军事医学科学院
3 药物分析杂志 中国科学技术协会
4 国际药学研究杂志 军事医学科学院
6 中华中医药杂志 中国科学技术协会
期刊数字出版建设项目
1 中国现代应用药学 中国科学技术协会
期刊集群（联盟）建设项目
1 中国药学会 中国科学技术协会