全 文 ：第 38 卷 第 2 期 江西师范大学学报(自然科学版) Vol． 38 No． 2
2014 年 3 月 Journal of Jiangxi Normal University(Natural Science) Mar． 2014
收稿日期:2013-10-18
基金项目:国家自然科学基金(31260082)，江西省自然科学基金(2010GZN0113)和江西省教育厅科技课题(GJJ10395)资助项目．
通信作者:邹峥嵘(1970-) ，男，江西高安人，教授，博士，主要从事天然产物化学研究．
文章编号:1000-5862(2014)02-0196-05
突托蜡梅叶化学成分及其
乙酰胆碱酯酶抑制活性研究
凌 青，邹峥嵘*
(江西师范大学生命科学学院，江西省亚热带植物资源保护与利用重点实验室，江西 南昌 330022)
摘要:采用乙醇浸提法、液液萃取法得到突托蜡梅叶石油醚萃取物，用气-质联用法对其进行组成分析并
用面积归一化法测定各化学成分的相对百分含量．使用改进了的 Ellman 比色法检测突托蜡梅叶石油醚
萃取物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性．突托蜡梅叶石油醚组分共鉴定了 33 个化学成分，其中螺［2，3］己烷-
4-1，5，5-二乙基-6-甲基含量最高，占总质量的 61． 311%，其次是喇叭烯氧化物Ⅱ，占总质量的 2． 042% ．突
托蜡梅叶石油醚组分的乙酰胆碱酯酶抑制率在 1 ～ 10 mg·mL －1范围变化明显，显示出一定的抑制活性，
这为突托蜡梅叶的进一步开发利用提供了科学依据．
关键词:突托蜡梅叶;石油醚组分;GC-MS;乙酰胆碱酯酶抑制活性
中图分类号:Ｒ 931． 77 文献标志码:A
0 引言
突托蜡梅(Chimonanthus grammatus M． C． Liu)
是蜡梅科蜡梅属植物，1984 年刘茂春将其鉴定为新
种，并列为蜡梅属蜡梅组和新蜡梅组之间的过渡类
群［1］．突托蜡梅分布于江西省安远县蔡坊乡和会昌
县清溪县交界处的狭长地带，为江西独有物种．蜡梅
属植物向来具有药用价值，民间常服用山蜡梅茶来
治疗感冒，将突托蜡梅叶抛入鱼塘中用以防止鱼病
产生［2］．为进一步了解突托蜡梅叶中所含的化学成
分及其药理活性和作用机理，本文采用溶剂提取法、
液液萃取法和各种色谱学、波谱学方法对突托蜡梅
叶的化学成分进行了系统的分离纯化和结构鉴定研
究．对于石油醚萃取物采用 GC-MS联用法进行了成
分分析，采用色谱面积归一化法测定了各个化学成
分质量分数．
阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s Disease，AD)是
发生于老年和老年前期以进行性神经退化为特征的
大脑退行性病变，该病严重威胁老年人身心健康．研
究结果表明，阿尔茨海默氏病的发生与突触间隙中
乙酰胆碱酯酶活性过高有关． 发现新型乙酰胆碱酯
酶抑制剂(AChEI)是阿尔茨海默氏病防治研究最为
活跃的领域［3］．本文对突托蜡梅叶石油醚萃取组分
进行乙酰胆碱酯酶抑制活性检测，期待从突托蜡梅
叶中获取具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的化合物．
1 材料与方法
1． 1 材料与试剂
突托蜡梅叶采自于江西省赣州市会昌县，经江
西省林业科学院彭九生鉴定为突托蜡梅(C． gram-
matus M． C． Liu．) ，植物标本存放于江西师范大学亚
热带植物资源保护与利用重点实验室． 将山蜡梅的
叶自然阴干保存备用;乙酰胆碱酯酶(AchE，Sigma
公司) ，50 mmol·L －1、pH值为 8． 0 的磷酸盐缓冲液
(PBS) ，7． 5 mmol·L －1的硫代乙酰胆碱(ATch，Sig-
ma公司，用 50 mmol·L －1、pH 值为 8． 0 的 PBS 配
制) ，7． 5 mmol·L －1的 5，5-二巯基-2，2-二硝基苯甲
酸(DTNB，Sigma 公司，用 50 mmol·L －1、pH 值为
8． 0的 PBS配制) ，4%十二烷基硫酸钠(SDS，西陇化
工股份有限公司) ，阳性对照石杉碱甲;95%酒精、
石油醚，分析纯，购自于西陇化工．
1． 2 仪器与设备
ＲE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，
OSB-2100 旋转蒸发仪(东京理化器械株式会社) ，
DOI:10.16357/j.cnki.issn1000-5862.2014.02.017
CA-1111 冷却水循环器(东京理化器械株式会社) ，
A-1000S真空泵(东京理化器械株式会社) ，KQ5200
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ，GG-17
分液漏斗(四川蜀牛玻璃仪器) ，数显恒温水浴锅
HH-6(国华电器有限公司) ，电子天平 CP114(奥豪
斯仪器)，UV759CＲT紫外可见分光光度计(上海佑
科仪器仪表有限公司)．
1． 3 方法
1． 3． 1 突托蜡梅叶石油醚组分的提取 将 5 kg 突
托蜡梅干燥叶粉碎后，用 70%乙醇浸泡 24 h，用超
声波震荡提取 20 min．过滤后将滤渣继续乙醇浸提，
超声波震荡提取 3 次，合并 3 次的提取液减压蒸馏
得浓缩液．浓缩液用石油醚以体积比 1 ∶ 1 萃取，萃
取 3 次，收集石油醚相，保留水相． 石油醚相经减压
蒸馏得石油醚组分．
1． 3． 2 GC-MS分析条件 气相色谱条件:Elite-MS
毛细管柱;气化室温度 280 ℃ ． 程序升温:初始温度
为 50 ℃，保持 5 min;以 3 ℃ /min 升至 140 ℃后立
即再以 10 ℃ /min 升至 260 ℃，保持 5 min． 进样量
1 μL，分流比为 10∶ 1．
质谱条件:EI 离子源温度 180 ℃，连接线温度
260 ℃ ．
1． 3． 3 突托蜡梅叶石油醚组分对乙酰胆碱酯酶抑
制活性的检测 采用改良版的 Ellman 方法，依次将
2 650 L 50 mmol ·L －1PBS、50 L AChE、100 L DT-
NB、100 L样品加入试管中，37 ℃预热 2 min，再加
入 100 L ATch，在 37 ℃水浴反应 20 min 后，加 4%
的 SDS 1 mL终止反应，将所得溶液立即在412 nm
下测量吸光值 (A)． 计算抑制率:抑制率 =
［1 －(A样品 － A样品对照)/A空白］× 100%，其中 A样品为添
加样品溶液的吸光值，A样品对照指未添加酶液时的样
品溶液本底吸光值，A空白指未添加样品溶液时的吸
光值．每个样品做 3 个平行，取平均值，计算平均抑
制率，阳性对照为石杉碱甲． 实验重复 3 次，最终抑
制率取 3 次平均抑制率的平均值［4］．
2 结果
2． 1 突托蜡梅叶石油醚萃取组分 GC-MS分析
采用 GC-MS 联用技术分析突托蜡梅叶石油醚
组分，并用面积归一化法从总离子流图中计算了各
组分的百分含量，共鉴定了 33 个化合物，质量分数
为 85． 518% ．其中质量分数大于 1%的有 12 种，大
于 2%的有 2 种:螺［2． 3］己烷-4-1，5，5-二乙基-6-甲
基、喇叭烯氧化物-(II)． 图 1 为色谱-质谱总离子流
图，表 1 为各成分的分析鉴定结果．
图 1 突托蜡梅叶石油醚组分总离子流图
表 1 突托蜡梅叶石油醚组分 GC-MS分析
编号 相对分子质量 质量百分含量 /% 分子式 化合物名称
1 170． 20 0． 189 C12H26 十二烷
2 184． 22 0． 189 C13H28 十三烷
3 280． 24 0． 162 C18H32O2 17-十八炔酸
4 196． 22 0． 124 C14H28 7-十四碳烯
5 198． 23 1． 419 C14H30 正十四烷
6 212． 22 0． 125 C15H32 2． 6，10-三甲基-十二烷
7 212． 23 0． 703 C15H32 十五烷
8 220． 0 0． 379 C15H24O 顺-Z-环氧化红没药烯
9 226． 22 1． 224 C16H34 十六烷，鲸蜡烷
10 400． 37 0． 404 C28H48O 2-甲烯基胆甾烷-3-醇
11 284． 44 0． 230 C20H28O 视黄醛
12 220． 00 0． 330 C15H24O 反-Z-环氧化红没药烯
13 268． 31 0． 600 C19H40 十九烷
791第 2 期 凌 青，等:突托蜡梅叶化学成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究
续表 1
编号 相对分子质量 质量百分含量 /% 分子式 化合物名称
14 220． 00 2． 042 C15H24O 喇叭烯氧化物-(II)
15 204． 35 0． 176 C15H24 β-石竹烯
16 220． 00 0． 260 C15H24O 顺-Z-环氧化红没药烯
17 220． 00 0． 722 C15H24O 异香树烯环氧化物
18 400． 37 0． 400 C28H48O 2-亚甲基胆甾烷-3-醇
19 254． 30 0． 819 C18H38 正十八烷
20 240． 28 0． 450 C17H36 2，6，10-三甲基十七烷
21 204． 35 1． 256 C1 5H24 Corymbolone
22 222． 12 0． 872 C14H22O2 双环［4． 4． 0］dec-2-烯-4-醇，2-甲基-9-(prop-1-烯-3-醇-2-酯)
23 268． 31 0． 618 C19H40 十九烷
24 220． 00 0． 290 C15H24O 香橙烯氧化物
25 192． 19 1． 078 C14H24 1，5-二乙丙烯基-2，3-二甲基环己烷
26 206． 17 1． 693 C14H22O 1-二氧螺环［2，5］辛烷 5，5-二甲基-4-(3-甲基-1，3-丁间二烯基)
27 278． 15 1． 374 C16H22O4 邻苯二甲酸二丁酯
28 166． 14 61． 311 C11H18O 螺［2． 3］己烷-4-1，5，5-二乙基-6-甲基
29 236． 35 1． 702 C15H24O2 柠檬烯-6-醇特戊酸酯
30 306． 26 1． 146 C20H34O2 9，12，15-十八碳三烯酸乙酯
31 250． 19 1． 335 C16H26O2 甲酸，3，7，11-三甲基-16，10-十二烷三烯-3-乙酯
32 318． 26 0． 568 C21H34O2 甲基 8，11，14，17-二十碳四烯
33 318． 26 1． 328 C21H34O2 甲基(Z)-5，11，14，17-二十碳四烯
2． 2 突托蜡梅叶石油醚萃取组分对乙酰胆碱酯酶
的抑制活性
选用的石油醚萃取组分浓度与相关抑制率如表
2 所示．
表 2 突托蜡梅叶石油醚萃取物抑制 AchE活性
样品浓度 /(mg·mL －1) 抑制率
10． 0 0． 613 08 ± 0． 015 16
8． 0 0． 494 54 ± 0． 020 88
5． 0 0． 294 84 ± 0． 002 93
2． 0 0． 161 44 ± 0． 009 58
1． 0 0． 106 19 ± 0． 009 28
0． 5 0． 059 59 ± 0． 007 93
通过 SPSS软件对数据进行分析，得石油醚萃取
物对乙酰胆碱酯酶抑制率与浓度的线性关系为 Y =
0． 038 + 0． 057X，其中 Y 为抑制率，X 为浓度(mg·
mL －1)．
3 讨论
3． 1 突托蜡梅叶石油醚萃取组分的 GC-MS结果分析
研究结果表明，突托蜡梅叶石油醚组分中有螺
环类 63． 004%、烷烃类 6． 336%、萜类及其衍生物
6. 131%、酯类 5． 557%、环烷类 3． 206%、烯烃类
2. 020%、固醇类 0． 804%及有机酸类 0． 162% ．
含量最高的是螺［2． 3］己烷-4-1，5，5-二乙基-6-
甲基，占 61． 311%，如图 2(8) ;此外还鉴定了如图 2
(9)所示的另一种简单螺环类． 螺环化合物为抗菌
剂的发展开辟了新的领域． 螺环化合物的 2 环平面
相互垂直［5］，研究表明，具有生理活性的螺环化合
物大多数是不对称分子或非对称分子，一些具有螺
［吲哚-3，3’-四氢吡咯］或螺［吲哚-3，3’-四氢吡啶］
类化合物、胞二醚螺环化合物、带双环的螺环原酸酯
化合物和含脲结构单元的螺环化合物有很好的生理
活性［6］．对于图 2(8)和图 2(9)所示的螺环化合物
目前研究甚少，鉴于它的天然来源，非对称性及高含
量有必要进行进一步研究．
有几种萜类及其衍生物如图 2(1)～图 2(7)、
喇叭烯氧化物如图 2(3)、香橙烯氧化物如图 2(6)
等萜烯类化合物具抗氧化、抗菌消炎和镇痛、提神等
作用［7］．视黄醛(见图 2(2) )是维生素 A 的一种代
谢产物，在脊椎动物的眼球发育中具有多种不同的
重要作用．研究表明:视黄醛对于视网膜背、腹侧范
式的形成、巩膜的发育和特定细胞类型(如光感受
器细胞、无长突细胞)的分化和成熟具有重要
影响［8］．
G． M． Ｒukunga 等［9］ 研究发现 Mustakone 和
Corymbolone(含量 1． 256%，如图 2(10))都具有很
显著的杀疟原虫活性．
突托蜡梅产地居民常用晒干的蜡梅叶泡茶饮用
以养生，对蜡梅叶的石油醚组分分析为突托蜡梅叶
的生理药理活性研究提供了一定的理论依据．
891 江西师范大学学报(自然科学版) 2014 年
图 2 几种活性成分化学结构
3． 2 突托蜡梅叶石油醚萃取组分的乙酰胆碱酯酶
抑制活性结果分析
突托蜡梅叶石油醚萃取组分的 AChE 抑制活性
在 1 ～ 10 mg·mL －1范围内变化明显，根据 SPSS 数
据所得分析，抑制活性与浓度成一定的线性相关，可
通过回归所得方程计算出 IC50 = 8． 1 mg·mL
－1 ．结
果显示:突托蜡梅叶的石油醚组分具有一定的乙酰
胆碱酯酶抑制活性．
目前对蜡梅属植物的研究主要集中于山蜡
梅［10］、柳叶蜡梅［11］等，其化学成分主要有黄酮类、
生物碱类和香豆素类等［12］．在对药用植物活性产物
进行系统分离纯化和结构鉴定研究的基础上阐明其
活性作用的物质基础和作用机理，以进一步开发利
用其有效成分，实现资源的高效利用［13］． 质谱解析
是鉴定物质结构的有效手段［14］，对于天然来源的挥
发性成分，通过 GC-MS分析可以提供非常准确有用
的信息以阐明挥发性成分的物质种类和含量，为开
发利用提供科学依据．
4 参考文献
［1］刘茂春．蜡梅属的研究［J］．南京林学院学报，1984，38
(2):78．
［2］刘易鑫，颜日明，鲁顺宝，等．突托蜡梅叶中挥发成分及
抑菌活性研究 ［J］． 中国中药杂志，2011，36(22):
3149-3153．
［3］张翼，冯妍，李晓明，等．海藻组分抑制乙酰胆碱酯酶活
性研究［J］．海洋与湖沼，2005，36(5) :459-463
［4］殷帅文，刘丽萍，王安萍，等． 17 种植物不同溶剂萃取
物乙酰胆碱酯酶抑制活性研究［J］． 江苏农业科学，
2012，40(10) :293-296．
［5］丁妍，田喆，朱能．具有抗菌活性的螺环化合物研究进
展［J］．有机化学，2010，30(8) :1156-1163．
［6］魏荣宝，刘博，刘洋，等．具有生理活性的含氧、氮、硫杂
原子螺环化合物研究进展 ［J］． 有机化学，2008，28
(9) :1501-1514．
［7］何恩其，赵烽．穿心莲的药理作用及研究进展［J］． 中
医药导报，2007，13(5) :107-108．
［8］戴淑真，曾骏文．视黄醛在实验性近视中的作用［J］．
眼视光学杂志，2003，5(1) :55-56．
［9］Ｒukunga G M，Muregi F W，Omar S A，et al． Anti-plasmo-
dial activity of the extracts and two sesquiterpenes from
Cyperus articulatus ［J］． Fitoterapia，2008，79(3) :188-
90．
［10］周斌，李梦杰，王平，等． 中药山蜡梅叶质量标准研究
［J］．中药材，2013，36(9) :1434-1436．
［11］章瑶，华金渭，王秀艳，等．柳叶蜡梅叶氯仿部位化学成
分的研究 ［J］． 中国中药杂志，2013，38(16) :2661-
2664．
［12］潘心禾，史小娟，张新凤，等．柳叶蜡梅化学成分及其抗
氧化活性研究 ［J］． 中国实验方剂学杂志，2012，18
(1):99-102．
991第 2 期 凌 青，等:突托蜡梅叶化学成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究
［13］丁立稳，汤建萍，杨书武，等． HPD-300 大孔树脂吸附纯
化荔枝黄酮特性研究［J］．江西师范大学学报:自然科
学版，2013，37(1):74-78．
［14］肖转泉，刘艳，陈金珠，等．氢化诺卜基甲酸及其酯类化
合物的质谱解析［J］． 江西师范大学学报:自然科学
版，2013，37(4):345-348．
The Study on Chemical Constituents and Acetylcholinesterase Inhibitory
Activity of Petroleum Ether Extracts from Leaves of Chimonanthus grammatus
LING Qing，ZOU Zheng-rong*
(College of Life Sciences，Jiangxi Normal University，Protection and Utilization of Jiangxi Province
Key Laboratory of Subtropical Plant Ｒesources，Nanchang Jiangxi 330022，China)
Abstract:The petroleum ether extracts from leaves of C． grammatus were extracted from by ethanol extraction and
liquid-liquid extraction，identified by GC-MS，and its AChE inhibitory activity were evaluated with the improved Ell-
man colorimetry． The petroleum ether extracts from leaves of C． grammatus contain 33 kinds of compounds，the ma-
jor compounds include Spiro［2，3］ hexan-4-one，5，5-diethyl-6-methyl is highest(61． 311%)and Ledene oxide-
(II)(2． 042%)． However，the inhibition rate of AChE changed very obviously from 1 mg·mL －1 to 10 mg·mL －1，
which shows some inhibition activity． According to the result，it shows that petroleum ether fraction owns certain ex-
tent inhibition activity，which provides the experimental and theoretical basis to the further study on C． grammatus．
Key words:the leaves of Chimonanthus grammatus;components of peteoleum ther;GC-MS analysis;anticholinester-
ase activity
(责任编辑:刘显亮)
( 上接第 190 页)
The Synthesis and Characterization of a Supramolecular
Compound {Cd(H2dtca)(bipy) }
SU Yong-chao，GAO Lou-jun* ，WANG Ji-jiang
(Department of Chemistry and Chemical Engineering，Shanxi Key Laboratory of Chemical
Ｒeaction Engineering，Yan’an University，Yan’an Shanxi 716000，China)
Abstract:A new supermolecular compound {Cd2(H2 dtca)2(bipy)2}［H2 dtca = 1，3-di(2，4-dicarboxypheny)-
benzene，bipy = 2，2-bipyridine］was synthesized hydrothermally and characterized by means of elemental analysis，
IＲ and single crystal X-ray diffraction． Complex crystallizes in monoclinic space group P21 /n，a = 1． 604 06(7)nm，
b = 1． 037 30(4)nm，c = 1． 720 97(7)nm;β = 101． 803 0(10)°;Z = 4，wＲ1 = 0． 034 2，wＲ2 = 0． 079 5． The crystal
structure of compound revealed that one 1，3-di(2，4-dicarboxypheny)benzene ligand links two Cd II ions to form a
symmetrical dimmer，and the binuclear units form a 3D supramolecular structure under the action of the hydrogen
bonds． The luminescence property in solid state of complex have been further studied and discussed in this paper．
Key words:Cd(II)complex;supramolecular compound;crystal structure;luminescence property
(责任编辑:刘显亮)
002 江西师范大学学报(自然科学版) 2014 年