全 文 ：第４３卷第３期第３２１页
２０１４年 ６月
华中科技大学学报（医学版）
Ａｃｔａ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｈｕａｚｈｏｎｇ
Ｖｏｌ．４３ Ｎｏ．３ Ｐ．３２１
Ｊｕｎ． ２０１４
!李文静，女，１９７８年生，博士研究生，Ｅ－ｍａｉｌ：ａｎｎｌｗｊ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
△通讯作者，Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｈｌｉｕ－３４８８＠１６３．ｃｏｍ
圆柏花粉浸液４０ｋＤ蛋白组分的鉴定
李文静， 黄 南， 刘光辉△
华中科技大学同济医学院附属同济医院过敏反应科，武汉 ４３００３０
摘要：目的 对圆柏花粉浸液４０ｋＤ条带的蛋白组分进行初步鉴定，明确其一级结构。方法 将圆柏花粉浸液使用
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ初步分离后，取４０ｋＤ条带进行质谱分析。结果 ４０ｋＤ条带中获得肽段分别与Ｊｕｎ ｖ １，Ｃｕｐ ａ １，Ｊｕｎ ａ ２及
其他植物蛋白序列一致。结论 ４０ｋＤ条带可能包含多种成分，包括柏科花粉１组２组变应原等。
关键词：圆柏花粉浸液； ４０ｋＤ条带； 质谱分析
中图分类号：Ｒ５９３．１ ＤＯＩ：１０．３８７０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－０７４１．２０１４．０３．０１７
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ４０ｋＤ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｐｏｌｅｎ Ｅｘｔｒａｃｔ
Ｌｉ Ｗｅｎｊｉｎｇ，Ｈｕａｎｇ Ｎａｎ，Ｌｉｕ Ｇｕａｎｇｈｕｉ△
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｏｌｏｇｙ，Ｔｏｎｇｊｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏｎｇｊｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，
Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００３０，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ４０ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｎｄ ｏｆ Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｐｏｌｅｎ ｅｘｔｒａｃｔ，ａｎｄ ｃｌａｒｉ－
ｆｙ ｔｈｅｉｒ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｐｏｌｅｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｉｔｉａｌｙ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ａｎｄ ｔｈｅ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ４０ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｎｄ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ４０
ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｎｄ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｔｏ ｈａｖｅ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈ Ｊｕｎ ｖ １，Ｃｕｐ ａ １，Ｊｕｎ ａ ２ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔ－ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ ｐｒｏ－
ｔｅｉｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ４０ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｎｄ ｏｆ Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｐｏｌｅｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｍａｙ ｃｏｎｔａｉｎ ａ ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ｇｒｏｕｐ １ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ２ Ｃｕｐｒｅｓｓａｃｅａｅ ａｌｅｒｇｅｎｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｐｏｌｅｎ ｅｘｔｒａｃｔ； ４０ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｎｄ； ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
柏科植物花粉在全世界过敏性疾病中的作用越
来越多地被认识，各国学者对其花粉变应原的研究
也不断深入。目前发现的柏科花粉变应原主要分为
４组，其中分子量在４０ｋＤ左右，含量丰富，变应原
性较强的包括１组和２组变应原。１组均具有果胶
裂解酶活性，目前发现了７种；２组大多具有聚半乳
糖醛酸酶活性，目前发现了３种。这１０种变应原蛋
白的序列均已被鉴定，并录入 Ｕｎｉｐｒｏｔ蛋白数据库
（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ）。它们的变应原性被多国学者
反复验证［１－５］。这些蛋白具体的抗原反应表位、糖基
化情况、多糖部分的具体糖型及其在蛋白变应原性
中所起作用、蛋白的酶活性以及与本科花粉蛋白及
其他植物蛋白间的交叉反应性，均是目前研究的重
点和热点。
我们之前的研究结果显示圆柏（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）花粉浸液的蛋白成分与其他柏科花粉具
有相似性，部分成分也可与患者血清ＩｇＥ反应。尤
其是４０ｋＤ条带，它含量丰富，与患者血清ＩｇＥ反应
性也强，极有可能属于１组或２组变应原。因此，我
们采用质谱分析对其进行了鉴定，以证实这一推论。
１ 材料与方法
１．１ 花粉的收集
采用自然脱落法，将圆柏花序采回，摊开置于平
底筛子中，筛子悬空放置，需距其下铺设的洁净纸张
２～３ｃｍ，经常轻轻敲打并翻动花序，使花粉逐渐脱
落，通过筛孔落到纸上。使用９号筛去除杂质后，将
花粉浸于丙酮中振摇２ｈ，弃去丙酮，换入新鲜脂溶
剂，重新振摇，反复去脂，至溶剂不再浑浊，然后置于
通风橱中摊开晾干。脱脂后的干花粉置于－７０℃保
存。
１．２ 花粉鉴定
随机取样，染色后显微镜下观察有无异种花粉
等各种杂质，杂质含量应控制在５％以下。
１．３ 花粉浸液的制备
按重量体积比１∶２０，将１．５ｇ花粉置于３０ｍＬ
０．０１ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ液中，冰浴超声波破碎１５ｍｉｎ。再
将花粉混悬液４℃下连续搅拌２４ｈ。然后于４℃下
２０ ０００ｒ／ｍｉｎ离心１ｈ，取上清液。将上清液在４℃
下，采用大体积（６Ｌ）蒸馏水透析７２ｈ（使用Ｔｈｅｒ－
ｍｏ公司Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ Ｄｉａｌｙｓｉｓ? Ｃａｓｓｅｔｅ ３．５ｋＤ）。
透析后液体使用 Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司生产的３ｋＤ超滤管
进行浓缩，４℃下５ ０００ｇ离心，至样品体积浓缩至
０．５ｍＬ，得到目标浓度花粉浸液。
１．４ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳
采用北京市六一仪器厂ＤＹＣＺ－２４ＤＮ型迷你双
垂直电泳仪进行。分别配制５％和１０％的聚丙烯酰
胺胶作为浓缩胶和分离胶（具体制胶过程不再赘
述）。按１∶４体积比混合蛋白上样缓冲液和花粉浸
液，在１００℃沸水浴中保温５ｍｉｎ，取出冷却后取样
电泳。每孔加入２５μＬ上述样品液后连接电源进行
电泳。浓缩胶时７０Ｖ恒压电泳，进入分离胶后１００
Ｖ恒压电泳。当溴酚蓝指示剂前沿快到达凝胶底部
时，关闭电源停止电泳。将染色液倒入容器中，加入
配制好的染料染色过夜。次日取出用蒸馏水漂洗数
次，脱色液脱色至蛋白条带清晰。
１．５ 质谱分析
胶内酶切后采用美国 ＡＢ Ｓｃｉｅｘ公司的四极杆
飞行时间串联质谱（Ｑ－ＴＯＦ）进行分析，该分析委托
武汉析维科技公司进行，具体过程不赘述。
２ 结果
２．１ 与柏科花粉１组变应原一致的肽段
质谱所得肽段与Ｊｕｎ ｖ １（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｖｉｒｇｉｎｉ－
ａｎａ，北美刺柏）序列一致的有 Ｐ４１－８１“ＫＬＡＤ－
ＣＡＶＧＦＧＳＳＴＭＧＧＫＧＧＤＦＹＴＶＴＳＡＤＤＮＰＶＮＰ－
ＴＰＧＴＬＲＹ”和 Ｐ３２１－３６１“ＲＤＡＦＳＮＧＡＹＦＶＳＳＧＫ－
ＩＥＥＴＮＩＹＮＳＮＥＡＦＫＶＥＮＧＮＡＡＰＱＬＴＫ”。与Ｃｕｐ ａ
１（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ ａｒｉｚｏｎｉｃａ，绿干柏）序列一致的有Ｐ１－１０
“ＤＮＰＩＤＳＣＷＲＧ”以及Ｐ２１４－２３０“ＫＶＴＶＡＦＮ ＱＦＧＰ－
ＮＡＧＱＲＭ”。这２个肽段在Ｊｕｎ ｖ １中也有完全对应
的序列分别位于Ｐ２２－３１和Ｐ２３５－２５１。
２．２ 与柏科花粉２组变应原一致的肽段
与Ｊｕｎ ａ ２（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ａｓｈｅｉ，山雪松）序列一致
的肽 段 有 Ｐ１２０－１３４“ＫＶＤＧＴＩＡＡＹＰＤＰＡＫＷ”，
Ｐ１８１－１８７“ＫＧＲＰＴＡＩ”，Ｐ２４３－２５０“ＫＲＦＥＩＥＫＣ”，
Ｐ２９２－３１４“ＲＳＥＶＳＦＶＨＬＤＧＡＫＦＩＤＴＱＮＧＬＲＩ”和
Ｐ３９５－４０３“ＫＬＳＮＶＦＬＫＬ”。
２．３ 与其他植物蛋白序列一致的肽段
质谱分析还得到了一些其他肽段：“Ｒ．ＶＫ－
ＴＳＹＡＧＫ．Ａ”，“Ｋ．ＬＦＧＶＴＴＬＤＶＶＲ．Ｖ”，“Ｒ．
ＤＤＬＦＮＩＮＡＧＩＶＫ．Ｎ”，“Ｒ．ＫＶＡＩＬＧＡＡＧＧＩＧＱ－
ＰＬＡＬＬＭＫ．Ｌ”，“Ｋ．ＬＦＧＶＴＴＬＤＶＶＲ．Ａ”，“Ｋ．
ＡＳＮＰＦＶＮＬＫ．Ｋ”，“Ｒ．ＦＶＤＡＶＬＴＩＰＫ．Ｇ”，“Ｋ．
ＮＬＧＬＹＡＥＲ．Ｉ”，“Ｒ．ＩＳＬＡＧＬＳＬＡＫ．Ｃ”，“Ｒ．Ｅ－
ＧＡＤ ＦＶＲ．Ｇ”，“Ｍ．ＡＧＴＶＴＶＰＧＳＳＴＰＳＴＰＬＬＫ．
Ｄ”，“－．ＶＶＳＬＳＩＰＲ．－”，“Ｒ．ＮＱＩＥＡＩＳＫＥＫＫ．Ｋ”，
“Ｋ．ＬＮＳＦＥＡＤＳＬＬＮＰＫ．Ｑ”，“Ｒ．ＴＰＤＥＫＬＬＦ－
ＰＬＬＰＳＫ．Ｄ”，“Ｋ．ＬＥＬＳＤＩＡＧＲ．Ｖ”，“Ｒ．
ＧＤＬＤＴＬＲ．Ｅ”，“Ｋ．ＫＩＧＬＬＬＮ．－”，“Ｋ．ＦＳＤＳＮＶ－
ＬＳＲＧＧＲ．Ｇ”，“Ｒ．ＥＫＥＳＥＥＫ．Ｒ”，“Ｋ．ＭＶＳＤＴＮ－
ＬＥＫ．Ｖ”，“Ｒ．ＬＫＩＳＰＰＰＬＰＰＴＶＶＲ．Ｔ”，“Ｒ．ＱＰＧ－
ＰＬＰＧＬＮＴＫ．Ｉ”。
这些肽段的来源包括拟南芥、日本粳米、欧洲油
菜、豌豆、玉米、北美白松、芍药八角等植物。这些蛋
白则具有苹果酸脱氢酶、α－１，４－葡聚糖－蛋白合成酶
（合成ＵＤＰ）以及推定ＰＲ蛋白等作用。
３ 讨论
柏科花粉１组变应原目前已发现并鉴定的有７
种，即Ｃｈａ ｏ １（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ ｏｂｔｕｓｅ，日本扁柏），
Ｃｒｙ ｊ １（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ，日本柳杉），Ｃｕｐ ａ
１，Ｃｕｐ ｓ １，Ｊｕｎ ａ １，Ｊｕｎ ｓ １和Ｊｕｎ ｖ １。其中来源植
物与圆柏同属刺柏属的是Ｊｕｎ ａ １，Ｊｕｎ ｓ １和Ｊｕｎ ｖ
１。同属植物花粉变应原间因为亲缘关系较同科其
他植物更近，因此序列一致率也较其他同科植物蛋
白高。例如Ｊｕｎ ａ １和Ｊｕｎ ｖ １的序列一致率高达
９５％［６］，与Ｃｕｐ ａ １的一致率则是９０％［７］，而与Ｃｒｙ
ｊ １的序列一致率只有７８．９％［３］。圆柏作为刺柏属
的一员，可以推测它的１组变应原蛋白序列应该与
Ｊｕｎ ａ １或Ｊｕｎ ｖ １具有最高的一致率，质谱分析的
结果也支持这一推论。由结果２．１可见质谱检测所
得肽段与Ｊｕｎ ｖ １序列一致性最高，而这部分一致肽
段与Ｊｕｎ ａ １的对应肽段存在个别氨基酸的差别（共
２处Ｐ６７和Ｐ３２５）。此外，也有与Ｃｕｐ ａ １序列一致
的肽段，但与Ｊｕｎ ｖ １比较后，可见这些肽段也都包
含在Ｊｕｎ ｖ １的序列内。因此，４０ｋＤ中应该有属于
１组变应原的蛋白存在，且与Ｊｕｎ ｖ １具有最高的相
似性。这也可以从一个方面解释圆柏花粉较低的变
应原性，因为美国学者的研究显示Ｊｕｎ ｖ １的变应原
性明显低于Ｊｕｎ ａ １，临床上北美刺柏与过敏性疾病
的相关性也显著低于山雪松［８］。
目前研究清楚的Ｃｒｙ ｊ １Ｔ细胞抗原表位有３
个。质谱所得肽段中包含与Ｃｒｙ ｊ １的第２个表位
（Ｐ２３５－２４７，ＫＶＴＶＡＦＮＱＦＧＰＮＣ）基本一致（仅最
后１个氨基酸残基Ｃ变为Ａ）的序列。而Ｊｕｎ ａ １的
４个ＩｇＥ结合位点中，检测肽段也包含其中一个
（Ｐ７１－８４，ＰＶＮＰＴＰＧＴＬＲＹＧＡＴ）的大部分，这表明
４０ｋＤ具有与ＩｇＥ结合以及与Ｔ细胞作用的能力，
印证了它的变应原性。但是具有果胶裂解酶活性的
·２２３· 华中科技大学学报（医学版） ２０１４年６月第４３卷第３期
肽段并未出现在本次质谱分析结果中，是否有此酶
活性尚需进一步验证。
除了与１组变应原序列一致的肽段外，我们还
可以看到与２组变应原序列一致的肽段。柏科植物
花粉中鉴定出的２组变应原比１组少，只有３种
Ｃｈａ ｏ ２、Ｃｒｙ ｊ ２和Ｊｕｎ ａ ２。质谱得出的肽段虽然
比与１组相似的肽段少，但其序列具特征性，不存在
于１组变应原中。这些肽段的存在表明４０ｋＤ不是
由单一的１组变应原蛋白组成，应该还有２组变应
原的存在。这一特征与其他柏科植物花粉浸液一
致，如Ｃｒｙ ｊ １和Ｃｒｙ ｊ ２在发现伊始被认为是一种
成分即Ｓｕｇｉ碱性蛋白；Ｊｕｎ ａ １也与Ｊｕｎ ａ ２具有相
同的分子量４３ｋＤ。
除了上述两组变应原相似肽段之外，本研究质
谱分析还得到了一些其他肽段，这些肽段与其他科
属植物蛋白序列一致。这些肽段的来源有两种可能
性，一方面可能与上述１或２组变应原蛋白相似肽
段来源于同一个蛋白分子，是圆柏花粉１、２组变应
原蛋白特有的序列；另外一方面也可能是其他的既
不属于１组也不属于２组的蛋白组分。不论是哪种
情况，这些肽段与其他科属植物蛋白序列的一致性，
均可导致交叉反应性的发生，这些交叉反应性广泛
存在于各种花粉变应原和各种植物来源食物间，可
造成花粉过敏性疾病发病时间的变化、发病率的升
高、口腔变态反应综合征的发生等等［９－１１］。
总之，本研究采用最新质谱技术，对圆柏花粉浸
液４０ｋＤ组分进行了初步分析和鉴定，获得了与柏
科花粉１、２组变应原序列一致的肽段，基本可以证
明圆柏花粉浸液中１、２组变应原蛋白的存在，同时
获取了圆柏花粉１组变应原蛋白较长的肽段，证明
其与Ｊｕｎ ｖ １的序列一致率最高，便于在进一步的分
析鉴定中确定引物的序列，进行分子克隆，为圆柏花
粉变应原蛋白组分的全面鉴定奠定了基础。
参 考 文 献
［１］ Ｆｏｒｄ Ｓ Ａ，Ｂａｌｄｏ Ｂ Ａ，Ｐａｎｚａｎｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｃｙｐｒｅｓｓ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ
ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ）ｐｏｌｅｎ ａｌｅｒｇｅｎｓ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｌｏｔ－
ｔｉｎｇ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ
Ａｒｃｈ Ａｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９１，９５（２／３）：１７８－１８３．
［２］ Ｆｅｌｉｃｅ Ｇ Ｄ，Ｃａｉａｆｆａ Ｍ Ｆ，Ｂａｒｉｌｅｔｔｏ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ａｌｅｒｇｅｎｓ ｏｆ Ａｒｉｚｏ－
ｎａ ｃｙｐｒｅｓｓ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ ａｒｉｚｏｎｉｃａ）ｐｏｌｅｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ｅｘｔｒａｃｔ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｅｒｇｅｎｉｃ ｃｏｍｐｏ－
ｎｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９４，９４（３）：５４７－５５５．
［３］ Ｍｉｄｏｒｏ－Ｈｏｒｉｕｔｉ Ｔ，Ｇｏｌｄｂｌｕｍ Ｒ Ｍ，Ｋｕｒｏｓｋｙ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｎｔａｉｎ ｃｅｄａｒ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ａｓｈｅｉ）
ｐｏｌｅｎ ｍａｊｏｒ ａｌｅｒｇｅｎ，Ｊｕｎ ａ １［Ｊ］．Ｊ Ａｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，
１９９９，１０４（３Ｐｔ１）：６０８－６１２．
［４］ Ｓｏｎｅ Ｔ，Ｋｏｍｉｙａｍａ Ｎ，Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎ－
ｃｉｎｇ ｏｆ ｃＤＮＡ ｃｏｄｉｎｇ ｆｏｒ Ｃｒｙ ｊ １，ａ ｍａｊｏｒ ａｌｅｒｇｅｎ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ
ｃｅｄａｒ ｐｏｌｅｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，１９９４，１９９
（２）：６１９－６２５．
［５］ Ｆｕｊｉｍｕｒａ Ｔ，Ｓｈｉｇｅｔａ Ｓ，Ｋａｗａｍｏｔｏ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ
ＩｇＥ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｃｅｄａｒ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ ｊａｐｏｎ－
ｉｃａ）ｐｏｌｅｎ ａｌｅｒｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００４，１３３
（２）：１２５－１３５．
［６］ Ｍｉｄｏｒｏ－Ｈｏｒｉｕｔｉ Ｔ，Ｇｏｌｄｂｌｕｍ Ｒ Ｍ，Ｂｒｏｏｋｓ Ｅ Ｇ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ａｌｅｒｇｅｎｓ ｏｆ ｅａｓｔｅｒｎ
ｒｅｄ ｃｅｄａｒ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐｅｒｉ Ａｌｅｒ，２００１，
３１（５）：７７１－７７８．
［７］ Ｍｉｄｏｒｏ－Ｈｏｒｉｕｔｉ Ｔ，Ｇｏｌｄｂｌｕｍ Ｒ Ｍ，Ｋｕｒｏｓｋｙ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕ－
ｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｎｔａｉｎ ｃｅｄａｒ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ａｓｈｅｉ）ｐｏｌｅｎ
ｍａｊｏｒ ａｌｅｒｇｅｎ，Ｊｕｎ ａ １［Ｊ］．Ｊ Ａｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９９，１０４
（３Ｐｔ１）：６１３－６１７．
［８］ Ｋａｈｎ Ｉ Ｓ，Ｇｒｏｔｈａｕｓ Ｅ Ｍ．Ｈａｙ－ｆｅｖｅｒ ａｎｄ ａｓｔｈｍａ ｄｕｅ ｔｏ ｒｅｄ ｃｅ－
ｄａｒ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）ａｎｄ ｔｏ ｍｏｕｎｔａｉｎ ｃｅｄａｒ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ
ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ）［Ｊ］．Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｊ，１９３１，２４：７２９－７３０．
［９］ Ａｆｆｅｒｎｉ Ｃ，Ｉａｃｏｖａｃｃｉ Ｐ，Ｂａｒｌｅｔｔａ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
ｍｏｉｅｔｉｅｓ ｉｎ ＩｇＥ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ａｌｅｒｇｅｎｉｃ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ
ａｒｉｚｏｎｉｃａ ｐｏｌｅｎ ｅｘｔｒａｃｔ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｅｒｇｙ，１９９９，２９（８）：
１０８７－１０９４．
［１０］ Ａｒｉｌａ Ｍ Ｃ，Ｉｂａｒｒｏｌａ Ｉ，Ｍａｒｔíｎｅｚ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ａｌｅｒｇｅｎ ｏｆ Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ ｐｏｌｅｎ，Ｃｕｐ
ｓ １，ｂｙ ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ［Ｊ］．Ａｌｅｒｇｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ，２００４，３２
（６）：３１９－３２５．
［１１］ Ｍｉｄｏｒｏ－Ｈｏｒｉｕｔｉ Ｔ，Ｂｒｏｏｋｓ Ｅ Ｇ，Ｇｏｌｄｂｌｕｍ Ｒ Ｍ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ－
ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ ａｓ ａｌｅｒｇｅｎｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ａｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈ－
ｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００１，８７（４）：２６１－２７１．
（２０１３－１２－０９ 收稿）
·３２３·!李文静等 ．圆柏花粉浸液４０ｋＤ蛋白组分的鉴定