全 文 ：紫花茄皂苷的体外抗肿瘤及溶血性实验研究＊
倪艳波　曹同涛　马　朋
滨州医学院基础学院　滨州市　256603
【摘要】　目的　探讨紫花茄皂苷 I-1对人肝癌 BEL-7402细胞的抗肿瘤作用并对其进行溶血性检查。方法　用酸性磷酸酶
(APA)法测定不同浓度紫花茄皂苷处理人肝癌 BEL-7402细胞后的 OD405值。体外溶血性实验检测皂苷安全性。结果　紫花
茄皂苷对 BEL-7402细胞有明显的抗肿瘤作用 , 在皂苷作用 72h后 ,实验组与对照组的 OD405值比较差异有显著性(P<0.05)。
体外溶血实验 , 100 μg· ml-1的皂苷Ⅰ -1不引起兔红细胞的溶血和凝集。结论　紫花茄皂苷 I-1对人肝癌细胞的抗肿瘤作用
呈明显的浓度依赖性 ,在体外安全性较好。
【关键词】　皂苷;抗肿瘤;溶血
【中图分类号】　R735.7　【文献标识码】　A　 【文章编号】　 1001-9510(2008)02-0085-03
Studyonantineoplasticactivityandbloodcelhaemolysistesttosaponin
NIYanbo　CAOTongtao　MAPeng
CollegeofBasicSciences, BinzhouMedicalUniversity, Binzhou256603
【Abstract】　Objective　Toinvestigatetheantineoplasticactivityandbloodcelhaemolysistestonsaponin.Methods　TheOD405
valueofcellwasdetectedaftersaponintreatmentbytheacidphosphataseassay(APA).Thesafetyofsaponinwasexaminedbyhae-
molysisandbloodcelagglutinationtests.Results　ThesaponinsignificantlyinhibitedproliferationofBEL-7402 cells.Apparentdiffer-
enceinOD405 valuewasdetectedafterBEL-7402 celshadbeenexposedtothesaponinfor72hourscomparedwithcontrolgroup(P<
0.05).Itwasprovedthat100μg· ml-1 saponincausednohaemolysisandbloodcelagglutinationinvitro.Conclusion　Thesaponin
I-1 hasconcentration-dependentantineoplasticactivityonhumanhepatocarcinomacells.Thesafetyofsaponinwasbetterinvitro.
【Keywords】　saponin, antineoplastic, haemolysis
　　皂苷是广泛存在于高等植物和某些低等动物中
的一类具有广泛药理活性的三萜及甾体的糖缀合
物 ,很多中草药的主要活性成分都是皂苷类化合物 。
近年来随着分离提取技术的不断发展 ,多种薯蓣皂
苷被分离出来 ,并不断发现其新的生物活性 ,特别是
在抗肿瘤 、免疫调节 、干预细胞信号转导 、抗炎 、降血
脂 、抗艾滋病等方面的作用引起了人们的重视 [ 1, 2] 。
紫花茄皂苷是根据从紫花茄中分离出的甾体皂苷化
学合成的薯蓣皂苷 [ 3] ,具有较强的抗肿瘤活性 。我
们的研究表明紫花茄皂苷可以诱导肝癌细胞凋
亡 [ 4] ,在肝病用药中很有前途 。本研究对紫花茄皂
苷进行体外抗肿瘤及溶血性实验 ,结果报道如下。
1　材料与方法
1.1　主要试剂及仪器 　RPMI-1640培养基购自
GibcoBRL公司 。 D-Hanks液 , PBS缓冲液 , 0.1%
EDTA溶液等均按常规配制[ 5, 6] ,新生牛血清(黑龙
江省同江市江海生物公司 ), 二氧化碳培养箱
(Hereus公司 ), 96孔细胞培养板 (Nunc公司),
EL311酶标免疫检测仪(Bio-Tek公司),相差倒置显
微镜(Olympus)。
1.2　实验动物　新西兰大白兔 ,雄性 ,体重 2.5 kg,
由滨州医学院实验动物中心提供 。
1.3　药物及配制　紫花茄皂苷 I-1由中国科学院
生态研究环境中心生物技术室提供。以二甲基亚砜
(DMSO)溶解后用生理盐水稀释至 100μg/ml,其中
DMSO浓度为 0.1%。
1.4　2%红细胞悬液的制备　取 10 ml新鲜新西兰
兔血 ,滴入含 2500 IU肝素钠的离心管中 ,加入 10
ml生理盐水 ,摇匀后 2 500 r/min离心 5min,倾去上
清液 ,再加生理盐水混合离心 ,反复洗 4次 ,最后一
遍用巴比妥钠缓冲液洗至上清液呈无色透明 ,然后
将所得红细胞用巴比妥钠缓冲液稀释成红细胞压积
百分比为 2%的红血细胞混悬液 。
1.5 　酸性磷酸酶 法 (acidphosphataseassay,
APA)[ 7]检测细胞存活率　取对数生长期细胞 ,消化
后制成细胞悬液 ,按 1×103 /孔的密度接种于 96孔
·85·滨州医学院学报 2008年 4月第 31卷第 2期　BMUJournal, Apr.2008, Vol.31, No.2
＊ 基金资助项目:国家自然科学基金(编号:30330690),滨州医学院科技计划(编号:BY2005KJ09)
板 。培养 24 h后 , 实验组加入先用二甲基亚砜
(DMSO)溶解 、再经 RPMI-1640培养液稀释至终浓
度为 1 ～ 10 μg· ml-1的皂苷;空白对照组加入 RP-
MI-1640培养液;溶剂对照组加入经同样稀释的溶
剂 ,含 0.01% ～ 0.1%DMSO。实验中每个浓度设 8
个平行孔 ,作用 72 h后用 APA法经 EL311酶联免
疫检测仪在 405nm波长处测定吸光度 OD值 ,空白
孔调零 ,实验重复三次 ,取平均值。
1.6　溶血性实验 [ 8, 9] 　在 2 %的兔红血细胞混悬
液中 ,分别加入不同体积的 100μg·ml-1的皂苷 Ⅰ -
1,轻轻摇匀置 37℃水浴中保温 1 h后 , 2000 r/min
离心 5 min,每管取上清 100 μl,经 EL311酶联免疫
检测仪于波长 405 nm测量吸光度。第 6组不加皂
苷 , 作为空白阴性对照;第 7组不加皂苷并用蒸馏
水代替巴比妥钠缓冲液 ,作为充分溶血阳性对照
(表 1)。空白组调零 ,每组设 3个平行孔 ,计算吸光
度平均值。实验重复三次 ,取平均值 。
根据吸光度平均值按下式计算相对溶血率:
相对溶血率 =OD实验组 / OD阳性对照 ×
100%。
表 1　各实验组配比量表
组别 1 2 3 4 5 6阴性对照
7阳性
对照
2%红细胞悬液(μl) 62.5 62.5 62.5 62.5 62.5 62.5 62.5
巴比妥钠缓冲液(μl) 60 57.5 55 52.5 50 62.5 —
皂苷(μl) 2.5 5.0 7.5 10 12.5 — —
ddH
2
O — — — — — — 62.5
1.7　统计学方法　所得数据以均数 ±标准差表示 ,
采用 SPSS10.0统计分析软件包分析统计学差异 。
2　结果
2.1　紫花茄皂苷的体外抗肿瘤作用　不同浓度的
紫花茄皂苷 I-1作用于 BEL-7402细胞 72 h后 , APA
法测定结果如表 2, 实验表明 ,加药组从 2.0 μg·
ml-1起 ,与对照组的 OD405比较 ,即有显著性差异(P
<0.05),而且随着皂苷浓度的增加抗肿瘤作用也
增加 , 呈剂量依赖性。
表 2　紫花茄皂苷 I-1对 BEL-7402细胞抗肿瘤作用 (n=3)
紫花茄皂苷 I-1的量(μg· ml-1) A405nm值(x±s)
空白对照 0.359±0.022
1.0 0.341±0.031
2.0 0.302±0.042＊
4.0 0.290±0.051 ＊
6.0 0.225±0.058 ■
8.0 0.029±0.006 ■
10.0 0.022±0.010 ■
　注:与空白对照比较 , ＊P<0.05, ■P<0.001
2.2　溶血性试验评价　实验结果见表 3,不同体积
的 100 μg· ml-1的皂苷 Ⅰ -1作用于新鲜兔血后 ,根
据公式计算出 1、2、3组的溶血率均小于 5%,表明
100 μg· ml-1的皂苷 Ⅰ -1体外溶血实验 ,不引起红
细胞的明显凝集和溶血 ,安全性较好。
3　讨论
恶性肿瘤或癌症是目前威胁人类生命和健康的
严重疾病之一 ,与心血管病 、糖尿病并称为现代社会
的三大杀手 ,给人类的身心健康带来巨大的损害。
寻找有效的抗肿瘤方法具有强烈的社会需求 ,是多
年来世界各国学者面临的重大课题 ,并已取得大量
成果 。但目前一个重要的问题是 ,大部分治疗肿瘤
的方法给患者 ,尤其是晚期患者带来的创伤过大 。
表 3　皂苷Ⅰ -1的溶血实验(n=3)
组别 1 2 3 4 5 6阴性对照 7阳性对照
OD405(x±s)
相对溶血率(%)
0.017±0.002
2.187
0.023±0.001
2.916
0.024±0.004
3.045
0.035±0.003
4.503
0.057±0.009
7.376
0.000±0.000
0
0.777±0.051
100
无论是手术还是放 、化疗 ,其痛苦和代价有时不呰于
肿瘤本身。大量研究结果表明 ,植物来源的抗肿瘤
药具有种类多 、毒副作用小 、不良反应少的特点 。因
此 ,从植物中寻找高效的抗肿瘤药物已成为一种新
的研究思路 。
本文利用 APA法 ,以抑制肿瘤细胞增殖为活性
指标 ,对紫花茄皂苷进行活性筛选 ,确定出一些有较
好生物活性和稳定性 ,具有深入研究价值的结构 ,对
其进行深入研究 。本实验观察了不同剂量的紫花茄
皂苷 I-1对人肝癌 BEL-7402细胞的抗肿瘤作用 。
将 BEL-7402细胞与不同浓度的紫花茄皂苷共同孵
育 72h后测定各组吸光度值 ,结果表明紫花茄皂苷
I-1能明显抑制体外培养的 BEL-7402细胞的生长
(P<0.05), 并呈浓度依赖性 。提示皂苷 I-1对
BEL-7402细胞具有明显的体外抗肿瘤作用 。
采用 《中国药典 》2005版中药安全性检查法应
用指导原则 “溶血与凝聚检查法” ,参照国家食品药
品监督管理局制定 《化学药物刺激性 、过敏性和溶
(下转第 90页)
·86· 滨州医学院学报 2008年 4月第 31卷第 2期　BMUJournal, Apr.2008, Vol.31, No.2
展 。可以推论 , Aβ的神经毒性机制之一是通过激活
NF-κB诱导 iNOS过表达而产生超生理剂量的 NO
来发挥的。
因此 ,小胶质细胞的 Aβ-NF-κB-iNOS-NO途径 ,
可能在 AD过程中起着重要的作用 ,对此途径进行
深入研究 ,可进一步揭示 AD发病机制以及为 AD
的临床治疗提供理论依据 。
参　考　文　献
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(收稿日期:2007-09-14)
(上接第 86页)
血性研究技术指导原则 》相关内容进行皂苷的体外
安全性评价 。体外溶血实验显示皂苷不引起兔红血
细胞的溶血与凝集 ,安全性较好 ,有望成为临床上的
抗癌新药。
参　考　文　献
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·90· 滨州医学院学报 2008年 4月第 31卷第 2期　BMUJournal, Apr.2008, Vol.31, No.2