全 文 ：挪威云杉单倍体的离体培养
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高等植物中用单倍体育成纯合的近交系
是一种有希望的植物育种方法 , 最近这种方
法已经实际应用于一些茄科植物 。 这种方法
对树木来说更有价值 , 因为树 木生 长 周期 ·
长 , 因此通过连续 自交育成纯 系需要几十年
乃至几百年 。 目前在阔叶树方面已可 用离体
培养体细胞组织的方法诱导产生新的个体。
在针叶树方面还没有完全成功 。
娜威云杉雌配子体的离体培养
用改良的 M S 培养 基 ( 5 0 0毫 克 /升 谷
酸氨 0 . 1~ 1 . 0 毫 克 /升 、 6 一节 基 嚓 吟 和
1
. 。~ 10 毫克 /升 2 . 4一 D ) , 培养挪威云杉未
成熟种子的雌配子体 , 可以很容易地诱导产
生愈伤组织 。 我们试验时选择的 最 适 于 产
生愈伤组织的时期是雌配子体呈液态而开始
硬化的时期 。 从显微镜观察这正是细胞内开
始形成一滴滴类脂物 和淀粉粒的时期 , 时间
约在授粉后一个月 。 但这时很难把胚和颈卵
器从雌配子体分离开来 , 因此需要找 出另一
个方法 , 即选择晚一些的时期 , 以便把胚分
离开来。
根据我们目前的试验 , 最有成效的方法
是培养前在高湿度和冷冻条件下对球果内的
种子先进行春化处理 。 采用这种方法产生愈
伤组织的百分率能保持 0 . 1~ 5% , 对一些授
粉后四个月采集的种子也如此 。 此外在春化
处理期间种胚能继续生长和分化 , 因此对雌
配子体呈液态 时期所采集的种子也可以把胚
分离出来 。 预先春化的另一优点是 , 在低温
时雌配子体组织比较软 , 分离胚进行培养比
较容易 。 用挪威云杉的成熟种子进行春化再
培养也能得到愈伤组织 , 但其百分率比上述
方法要低 10 % 。
在最初的培养基内愈伤组织生长较慢 ,
但反复转移培养时愈伤组织生长迅速 。 转移
培 养用的培养基的生长物质的 浓 度可 减低
9 %
。 从染色体数镜鉴结果看 , 愈伤组织最
初约有 90 %是 l单倍体 , 但也有二倍体 、 三倍
体和多倍体。 户于它们的细胞结构和单倍体
相同 , 因此我们认为它们也是由雌配子体产
生的 。 雌配子体离体培养的特点是细胞核不
稳定 。 例如培养过程中某些愈伤组织的无性
系可 以保持单倍 , 有些无性系则成二倍 、 三
倍或多倍 。 但值得注意的是这种现象对选择
有利 , 因为经过加倍可 以选 出二倍体的纯系
来 。 对挪威云杉雌配子体的离体培养来说 ,
培养基中植物生长素与激动素比例 较低可能
对染色体组加倍有利 。
娜威云杉雌配子体愈伤组织的分化
愈伤组织细胞最初呈圆形并充满一滴滴
类脂物和淀粉粒 , 但培养几星期后这些物质
逐渐消失 , 细胞分化成不同的类型和器官结
构。 当愈伤组织转移到植物生 长 素 和 激 动
素比例较高的培养基上时 , 许多长形细胞繁
殖起来 , 这些细胞附着于分生组织细胞团。
从愈伤组织内可散见一些管胞 , 但还没有分
化发育成具有明确功能的器官 。 如果把这种
愈伤组织再转移到激动素浓度 较 高 (1 . 0或
5
.
0毫克 /升 ) 的培养基上 , 就产生许多结实
的瘤状物 , 某些瘤状物可分化成具有小胚芽
的类胚体 , 但通过各种试验至今还未能使这
些类胚体生根 。
摘译自 R o e e e d i n g s o f X V l l [J F R O
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,
D 1
.
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