全 文 ：当归四逆冻疮膏的药效学研究
石米扬　张　莉　吴淑文　刘志刚　易吉萍
武汉大学生命科学学院 ,武汉 430072
摘要　目的:对当归四逆冻疮膏的药理作用进行实验研究。方法:采用炎症 、疼痛 、冻伤等动物模型观察当归
四逆冻疮膏的药效作用。结果:该药可显著减轻小鼠耳廓肿胀;提高小鼠热刺激痛阈值;增加离体兔耳血管灌流
量;并能促进兔耳冻伤组织复原。结论:当归四逆冻疮膏具有抗炎 、镇痛 、增加组织血流量和促进中度冻伤组织复
原的作用。
主题词　当归四逆冻疮膏＊ 药理学;冻疮 治疗;中草药
中图分类号　R285.05
　　冻疮是一种季节性的常见病和多发病 。冻疮产
生是由于冬季低温使某些易感者暴露部位的皮肤真
皮内毛细血管和小动脉收缩 ,时间稍长引起组织缺
氧 ,组织呈麻痹性扩张 ,小静脉瘀血 ,遇热后血管扩
张更甚 ,液体外渗到组织 ,产生红斑水肿等冻疮症
状。中医理论认为:冻疮乃皮肤肌肉受严寒侵袭 ,气
血运行不畅致气血凝滞而成 ,平素气血衰弱或疲劳
过度 ,暴冻着热 ,暴热着冻也能使本病生成 。故中医
临床治疗以温经散寒 ,活血化瘀 ,消肿止痛为主。根
据这一治则 ,选用中医温经散寒代表方当归四逆汤
为基础 ,经适宜溶媒提取 ,再加山茛菪碱与基质混合
后制成当归四逆冻疮膏。我们以多种动物炎症模
型 、冻伤模型 、疼痛模型及组织血流量测定 ,对该药
进行药效学研究 ,现将结果报道如下。
1　实验材料
1.1　实验动物　昆明种小白鼠 ,体重(19.3±2.7)g ,
雌雄兼用;日本大耳白家兔 ,体重(2.6±0.4)kg 。以
上由武汉大学生命科学院实验动物中心提供 。
1.2　药品及试剂　当归四逆冻疮膏(简称冻疮膏)
自制 ,以所含当归量计:0.25 g 10 g 膏;特效防冻霜
(简称防冻霜), 广西桂林龙胜日用化工厂 , 批号
0012;阿司匹林 ,天津化学试剂一厂 ,批号 752364;二
甲苯 ,武汉市有机化学合成厂 ,批号 920916;硫化钠 ,
天津市东丽区大化工厂 ,批号 9994A20。
1.3　实验器材料　JN-A型精密扭力天平 ,上海第二
天平仪器厂;NP200B 电子天平 ,上海天平仪器厂;
501型超级恒温器 , 上海仪器厂;冰箱;冷冻槽(自
制)。
2　实验方法与结果
2.1　抗炎作用(二甲苯小鼠耳廓肿胀法[ 1] )　取 50
只小白鼠 ,随机分为 5组(见表 1)。将二甲苯 0.05
ml涂于小鼠右耳前后两面 ,左耳不涂为对照 ,致炎
后 30 min ,在致炎耳处分两次涂受试药 ,每次间隔 30
min ,4 h 后脱颈椎处死小鼠 ,沿耳廓基线剪下两耳 ,
表 1　冻疮膏对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
组　别 剂量(g kg) 动物数(只) 耳廓肿胀度( x±s ,mg) 肿胀抑制率(%)
生理盐水组(ml kg) 5 10 8.42±0.29 -
防冻霜组 5 10 5.17±1.17＊＊ 38.60
基质组 5 10 8.06±1.38 4.28
冻疮膏组 2.5 10 6.18±1.38＊＊■■ 26.60
冻疮膏组 5 10 5.16±0.69＊＊■■ 38.72
　　　　注:与生理盐水组比较 , ＊＊P<0.01;与基质组比较:■■P<0.01(下同)
用直径 9 mm 打孔器将两耳同部位等面积打下耳圆
片 ,用 JN-4型精密扭力天平称重 ,以两耳片重量之
差作为肿胀程度指标 ,与对照组比较 ,进行 t 检验。
并按以下公式计算肿胀抑制率。结果见表 1。
第 22卷　第3 期 武汉大学学报(医学版) Vol.22 , No.3
　 2001年 7 月 Medical Journal of Wuhan University July , 2001
DOI :10.14188/j.1671-8852.2001.03.013
肿胀抑制率=对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度对照组平均肿胀度 ×100%
实验结果可见 ,冻疮膏可降低小鼠耳廓肿胀度 ,
大小剂量组肿胀抑制率分别为 26.60%和 38.72%,
有一定剂量依赖关系 ,而冻疮膏的基质无以上作用 。
2.2　镇痛作用(热板法[ 1 , 2] )　取雌性小鼠放在加热
至55 ℃的金属板上 ,以舔后足为痛反应指标 ,共测
两次以每次不超过 30 s 者为合格鼠 ,取平均值为给
药前痛阈值 。将预选合格鼠随机分为 4组(见表 2),
A 、B 组按每次 10 ml kg 分两次灌胃 ,每次间隔 1 h;
C 、D组按 15 g kg 涂每只鼠后足 ,分 3 次给药 ,每次
间隔 1 h ,末次给药后 0.5 h测定痛阈值 ,与给药前痛
阈值比较 ,进行 t 检验 ,结果见表 2。
表 2　冻疮膏对热板致痛小鼠的镇痛作用( x±s)
组　　别 剂量(g kg) 动物数 给药前后痛阈值差
A 生理盐水组(ml kg) 20 10 0.29±1.80
B 阿司匹林组 0.25 10 35.50±3.30＊＊
C 基质组 15 10 0.40±1.84
D 冻疮膏组 15 10 8.00±3.22 ＊＊■■
　　实验结果可见 ,冻疮膏局部涂擦后 ,对热板致痛
小鼠有明显镇痛作用 ,而其基质成分无镇痛作用 ,表
明冻疮膏的镇痛作用产生与其药物成分有关 。
2.3　对兔耳冻伤的影响　按文献方法[ 3] 制备低温
冷冻液:3份碎冰+1份食盐 ,混匀后放入冷冻槽中
使温度维持于(-18±1)℃备用 。
将家兔双耳尖起 7 cm 处的区域内剪毛 ,分别将
家兔双耳同时浸泡于冷冻槽中 ,冻结的兔耳瞬间变
白 ,再继续冷冻 70 s ,取出以 20 ℃温水清洗兔耳 ,干
棉球拭干 ,让其复温 ,兔耳开始发红发热。4 h 后开
始肿胀 ,24 h后兔耳皮肤呈深红色或近紫色 ,肿胀灼
热显著 ,少数兔耳出现水泡 ,第 3 ,4 d 少数兔耳冻区
有淡黄色渗出物 ,第 7 d 兔耳紫红色部位出现坏死 ,
以上重复 4 只次 ,说明耳冻伤模型成功 ,开始试验。
取耳冻伤模型家兔 15只 ,随机分为 3组 ,见表 3 ,于
冻伤后24 d 开始给药 ,每只兔右耳给受试药 ,冻疮膏
大剂量组 ,每天分两次给药 。左耳给药物基质或给
生理盐水作为对照 ,连续给药 7 d ,结果见表 3。
实验结果可见 ,冻疮膏大 、小剂量局部给药 ,可
以明显减轻冻伤组织红肿的炎症反应 ,防止水泡产
生和组织坏死 ,对兔耳中 、轻度冻伤有治疗作用 。
2.4　冻疮膏对免耳灌流量的作用　取家兔 5只按
文献[ 4] 将家兔用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉 ,仰位固
定于兔台 ,剪去耳根部毛 ,分离耳中心动脉 ,并于其
表 3　冻疮膏对家兔耳冻伤的影响
分组 剂量 动物数
(mg 只) (n)
停药后结果
对照耳 治疗耳
冻疮膏组 600 5 4 5 中轻度红肿 , 1 5 有渗出结痂 5 5恢复正常
冻疮膏组 200 5 4 5 中轻度红肿 , 1 5 恢复正常 4 5恢复正常 , 1 5轻度红肿
防冻霜组 200 5 4 5 中轻度红肿 , 1 5 渗出 ,结痂 4 5恢复正常 , 1 5轻度红肿
下穿二线 , 近心端结扎 ,在结扎部位远心侧做一切
口 ,插入插管 ,结扎固定后用剪刀顺耳根剪下全兔
耳 ,立即经插管灌入克氏液 ,冲洗血管中血液 ,直至
滴出液无色 ,将兔耳固定在呈 45°的玻板上 ,使灌流
液顺板角滴下 ,调整滴速 30滴 min ,灌流液 37 ℃恒
温。连续记录 10 min 流量 ,取平均值作为给药前对
照 ,按每耳0.5 g 药物均匀涂抹冻疮膏 ,每隔 10 min
记录一次 ,测定平均流量 ,结果见表 4。
表 4　冻疮膏对兔耳灌流量的影响( x±s)
剂量 给药前后灌流量差值(ml min)
10 min 20 min 30 min 40 min 60 min
0.5 g 0.025±0.006 0.26±0.05 0.90±0.21 1.00±0.20 0.54±0.08
　　实验可见冻疮膏涂擦于离体兔耳可使兔耳灌量
逐渐增加 ,以 40 min时流量最大 ,此后作用逐渐减
弱 ,表明冻疮膏有扩张血管 ,促进血液循环作用。
2.5　皮肤刺激性实验　取白色家兔于实验前 24 h
将脊柱两侧长毛剪短 ,然后涂脱毛剂[ 4] , 面积 150
cm
2 ,经 2 ～ 3 min 后用温水清洗 ,脱毛 24 h 后选择皮
肤无损伤者供试验用 。取 4只为完整皮肤组 ,每只
左侧脱毛区涂冻疮膏 1 g ,右侧涂冻疮膏基质作为对
照;另取 4只为破损皮肤组 ,用针头将脱毛区皮肤#
字形划破 ,以渗血为度 ,左侧涂冻疮膏 ,右侧涂基质。
给药部位上复盖油纸及纱布用胶布固定 ,给药 24 h
后 ,用温水清洗 ,去除药后 1 h 、24 h 、48 h 后连续 7 d
观察涂药部位有无红斑 、水肿现象和恢复情况及时
间 ,按文献标准[ 1] 进行冻疮膏皮肤刺激反应评分和
229第 3期 石米扬 , 等.当归四逆冻疮膏的药效学研究
皮肤刺激性强度评价 。结果见表 5。
表 5　冻疮膏对家兔皮肤刺激性试验
时间
(d)
完整皮肤刺激分级
0 1 2 3 4
破损皮肤刺激分级
0 1 2 3 4
刺激强度
指数
1 4 4 0 0 0 0 4 4 0 0 0 0 0
2 4 4 0 0 0 0 4 4 0 0 0 0 0
3 4 4 0 0 0 0 4 4 0 0 0 0 0
4 4 4 0 0 0 0 4 4 0 0 0 0 0
5 4 4 0 0 0 0 4 4 0 0 0 0 0
6 4 4 0 0 0 0 4 4 0 0 0 0 0
7 4 4 0 0 0 0 4 4 0 0 0 0 0
　　实验可见冻疮膏及其基质皮肤局部给药 ,完整
皮肤及破损皮肤无红斑 、水肿出现 ,表明该药对皮肤
无局部刺激性。
3　讨论
实验结果表明冻疮膏在 2.5 g kg 和 5 g kg 应用
时 ,可显著减轻二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀度 ,肿胀抑
制率分别为 26.60%和 38.72%;可显著提高热致痛
小鼠在给药后 0.5 h 痛阈值;对本实验条件下兔耳冻
伤 ,可减轻冻伤组织红肿反应 ,减少渗出 ,防止水肿
产生;局部涂擦后 ,使离体兔耳灌流量增加 。因此冻
疮膏局部应有较好的抗炎 、镇痛 、扩张血管促进血液
循环和抗中 、轻度实验性冻伤作用。冻疮膏对家兔
完整皮肤及破损皮肤刺激指数均小于 0.4 ,表明其局
部外用对皮肤无刺激性。
当归四逆冻疮膏是以《伤寒论》中当归四逆汤为
基础 ,加用山茛菪碱 、红花 、樟脑等制成的外用膏剂。
方中当归能养血通脉 ,其有效成分阿魏酸有抑制血
小板凝集和抗血栓作用;桂枝发汗温经止痛 ,其主要
成分桂皮油对毛细管有扩张作用;细辛温经散寒 ,其
主要成分红花黄素有抗血栓形成作用;山莨菪碱有
明显外周抗胆碱作用 ,能解除小血管平滑肌痉挛 ,改
善末梢血液循环。上药合用可除内外之寒 ,使阴血
充 、客寒除 、阳气振 ,而改善冻伤部位血液循环障碍 ,
减轻因冻伤引起的红肿痛热等症状。结果表明本药
组方的合理性 ,并为其临床应用提供了实验依据 。
参考文献
1　陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社 ,
1993 , 164 , 356 , 377
2　窦昌贵 , 成俊.当归四逆汤镇痛抗炎作用的实验研究.中
国实验方剂学杂志 , 1999 , 5(5):38
3　施新猷.现代医学实验动物学.北京:人民军医出版社 ,
2000 , 509
4　李仪奎 , 中药药理实验方法学 , 上海:上海科学技术出版
社 , 1991:138
(2000-10-15 收稿)
A Pharmacodynamic Study of Danggui Sini Dongchuang Unguentum
Shi Mi-yang , Zhang Li , Wu Shu-wen , et al
College of Life Sciences , Wuhan University , Wuhan 430072 , China
Abstract
Objective:To investigate the pharmacodynamic actions of Danggui Sini DongchuangUnguentum.Methods:Animal
models of inflammation , pain and frostbite were used to observe the effect of Danggui Sini DongchuangUnguentum.Re-
sults:Danggui Sini Dongchuang Unguentum obviously eased inflammation and swelling of the mouse ears , improved
threshold of pain caused by heat , increased the circular flow amount at the ears of rabbits and promoted the frostbite ears
of rabbits to recover.Conclusion:Danggui Sini Dongchuang Unguentum has the effects of anti-inflammation and analge-
sic.It can increase the amount of blood flow in organs and speed the recovery of middle-degree frostbitten tissues.
MeSH　danggui sini dongchuang unguentum PD;chilblains TH;drugs , Chinese herbal
230 武汉大学学报(医学版) 第 22卷