全 文 ：第 1 3 卷 第 1 期 上 海 医 科 大 学 学 报 V o l 13 ,
1 9 8 6
N O
. 工
1 9 8 6年 人C T A A C人D EM I A E M E D I C工N A E S H A N G H A工
韭叶柴胡多糖对淋 巴细胞
增生的调节作用
张罗修 潘胜利, 黄开星仰 孙克显样
(上海医科大学药学系药理学教研室 、 芳生药学教研室 )
提要 本文报道从最近鉴定的韭叶柴胡 刀呷 z。 ~ 无~ 啊哪“ Y
.
iL e o s
.
L
.
F an 即 .
on
v
. 中分离的多糖 (简称 B K P ) 在试管内对促细胞分裂剂引致小鼠淋巴细胞增生 反应 的作
用 。 用 “ H一胸普 ( , H袱 )T 掺入法证明 B K P 不仅增强小鼠脾细胞对 不 同浓度的刀 豆素 A
(C on A ; 0
.
63 ~ 2
.
5峪 /m l) 和大肠杆菌脂多糖 ( L P氏 10 ~ 叨皿m/ 1) 的增生反应 , 而且对植物
血凝素 (P H戈 40 峪 / m l) 及美洲商陆 ( P WM ; 40 户 g / 。 1) 的应答也有所提高 。 可是正品北柴胡
B u P le u1’ u m hc in e 扛阳 D C 所含多糖在同一条件下并无明显作用 。
关键词 韭叶柴胡多糖 ; 促细胞分裂剂 ; 氮 ; 胸普掺入 ; 淋巴细胞 ; 小鼠
柴胡为临床常用中药 , “本草纲 目” 列为上品 , 中医认为它有和表解里 , 疏肝升阳的功
效。 现代医学认为它有解热、 镇痛、 镇静及抗炎等作用 , 主要有效成分有柴胡皂贰及挥发
油等 1r 飞而对于多糖作用的研究 , 迄今未见报道 。 目前 临床使用的柴胡主要采用正品北柴
胡 。 韭叶柴胡是 19 8 4 年鉴定的柴胡新种 , 经研究所含皂贰量为北柴胡的两倍 , 故有可能
成为优质品而被推广使用 `幻 。 鉴于在多糖中寻找免疫调节剂是近二十多年来国内外比较
活跃的研究领域印 , 我们 已经筛选了多糖类化合物 , 发现韭叶柴胡多糖具有较明显的 作
用。 本文报道它对淋 巴细胞增生的影响 。
材 料 与 方 法
动物 C二B L / 6 (H 一 Z b ) 小鼠由本院动物室供应 , 雌雄兼用 , 8 周龄以上 。
药 品 B K P 和北柴胡多糖 (生药教研室提供 ) ; C o n A (本院基础部生 化教 研 室提
供 ) ; L P S 、 p WM (美国 S i g m a 产品 ) ; P H A (广东医药卫生研究所生产 ) 。 所用药品均以
无菌生理盐水配制成所需浓度置冰箱备用 。
R P M卜16 40 培养液 (美 国 G ib co 产 品 ) , 临 用 前 配 制 , 含 L 一 lG n 2 . o ln M 、 2一M E
50 拜万 、 10 外 小牛血清 、 H E P ES 15 m万 、 青霉素 10 O u / m l 、 链霉素 10 0 ” g/ nI l 。
3且一dT 系上海原子能研究所产品 ( 4 1
.
5段 /m万) 。
淋巴细胞增生试验4jt 小鼠放血致死后无菌取脾 , 于 aH n r 。 液中以摄子释放脾 细
胞 , 洗一次 。 弃上清液 , 加 0 . 1 7万 N H `O1 约 3 m l , 充分混匀 , 破坏红细胞 , 约 3 o in 后以
样 19 84 届药理专业毕业生
本文承易鸿匹副教授审阅 , 曹致芳同志参加部分技术工作 , 特此志谢。
1期 韭叶柴胡多糖对淋巴细胞增生的调节作用
H a n丫。 液洗 3次 , 最后加入培养液 , 调节细胞数至 3 x l沪 个 /毫升。 以圆底玻璃试管依
次加入细胞悬液 0 . 4 m l 、 B K P 或相应药物 20 川 , 然后加入促细胞分裂剂 20 尹 l , 对照 组
则 以生理盐水 20 川 取代之 , 以培养液补至每管 0 . 石耐 , 密闭 , 3 7℃ 培养 48 五, 在培养终
止前 4 h 加入 ” H 一 d T Z户伍。 培养结束后 , 利用多头细胞收集仪将细胞抽滤于玻璃纤维
滤纸后 , 烘干 , 每组复管 4 只 , 结果以每分钟 c p m 1/ x l护 个细胞表示 。
今士于曰 果
习K P 及北柴胡多糖对小鼠脾淋巴细胞增生作用的比较
B K P 在 10 0 井 g / m l 时对 o o n A 2 . 5种g/ m l 诱导的淋巴细胞增生反应 有刺激 作用 ,
经 云测验 (下同 ) p < 0 .弱 ; 而北柴胡多糖在相同条件下无显著作用。 表 1 中刺激指 数 为
加促细胞分裂剂的测定管叩m 除以无促细胞分裂剂的对照管叩m 所得。
表 ! B K尸及北柴胡多糖对体外淋巴细胞增生反应的影响
` . . . . . . .
. 一 , . . . . . . . 曰 . . . . . . . 浓 度
(峪加 l) 少 Pm( x 士 S E ) 刺激指数
八n俘`408541803韶
1010
1功1
对 照 组
B K P
北柴胡多糖
1 7
,
8 32 士习6 6习
34
,
6 2 6士 3 9 12 游备
1 8
,
6 0生士 5 1 6 7
2 0
,
6 13士 2 0 48
1 6
,
6 2 3士 2 1 2 1
1 3
,
8 9 5土 1 7肪
1 7
,
8 1 5士 3 1怪0
注: 肿细胞 1 x l沪 个 /毫升 , oC n A 2 . 5 赵 9 2尹m l , 37 O C 48 h , 反应终止前 4 h 加 3H - dT , 未加 oC ” A 对照组的 e Pm
为 连2 9士 5 7
” 与对照组比较 p < 0 . 05
对促细胞分裂剂作用的影响
1
. 甘不 同浓度 o o n A 与 L P S 作用 的 影 响 B K P 10 灿g /ml 对 C o n A (0
.
6 3 、 2 . 5
户g /m l )与 L p S ( 1 0 ~ 4 0 户 g /m l )的作用均有增强效应 ( p < 0 . 0 1 ) 。 此作用基本上与 o o n A
及 L P吕的增加相平行 (表 2 ) 。
表 2 BK p ( 1 0 0 种g /m l )对不同浓度 C o n A 及 L p S 致体外淋巴细胞增生反应的影响
eP m (玉士昌E )
生理盐水 B K P
月g /m 生理盐水 B E :G
0
C o u A I
2
L l
、
8
32 7土6 7
3 8 8士 68
1 4
,
5 0 8士 15 8 9
8 0 7 7士 50 2
1 2
,
4 5 6士 1 3 95
2 1
, 36 8士 1 3 8 4
7 2 9 9士 3 94 芳 务 甘
6生92士 7 9 9 升 去 赞
2 3
,
0 8 3士 1 45 1关 苦 升
32
,
7生0 士 1 6 9 6 花 漪谈
6 0
,
4 42 士 2 1 8 0 斧 并 舟
8 0
,
5 6 1生 92 9 4务 升铃
0
.
9
1
。
0
3 8
.
4
1 9 3
1 7
.
2
6 1
.
1
qo50
ùh25
2生 . 5
3 7
.
8
6 4
.
8
9 9
.
4
1 8 3
,
4
2 4 4
.
5
2014
注 未加 oC n A 的对照组 e Pm 为 3 78 土 63 , 未加 L 卫吕的对照组 cP m 为 32 9
·
5 上 39
姚诱 沂 P < 0
.
0 1
上 海 医 科 大 学 学 报 13 卷
2
. 对P H A 、 P W M刺激作用的 影 响 B K P 1 0如g /m l 能 明 显增 强 卫H A 及 P W M
〔各为 4 0 灿g /m l) 刺激淋巴细胞增生的作用 (表 3) 。
表 3 BK P 对 P日A 、 PW M致体外淋巴细胞增生反应的影响
叩m (王士 S E) 刺 激 指 数
组 别 召g /功l
P H A P W MP 王王A P W M
生理盐水 8 5 3 7 士 5 7 7 8 . 0 2生. 6
B K 尸 1 0 0
1 0
1 6
,
8 7 6 士 1 9 6 3二 开
8 8住9士 5 9 8
2 6
,
1 1 8生 2 1 5 9
4 1
,
6留士 1 8 9 8器 关 开
3 0
, 3 7 9士 9 09
1 5
.
9 3 9
.
2
8
.
3 2 8
.
6
注 : P H A 、 P W M 各为 幻 娜g/ m l,
“ ” 与生理盐水组比较 P < 0 . 01
讨 论
试管内的淋巴细胞增生试验已成为反映机体免疫功能的有效指标之一旧 。 经预试验
已知 B K G单独在试管内对淋 巴细胞并无刺激作用 , 在整体连续 4 d 给药 , B K P 单 独 对
小鼠脾细胞的 D N A 合成也无明显增加 , 但是它可以明显增强促细胞分裂剂对淋 巴 细胞
的刺激作用。 这与多数免疫调节剂的作用相似 〔旧 。 已知 p H A 、 C o n A 主要刺激 T 淋 巴细
胞转化 ; L P S 主要作用于 B 淋 巴细胞 , 而 PW M 则对 r1, 、 B 细胞都有刺激作用 , B K P 显著
增强小 鼠脾细胞对上述 4 种促细胞分裂剂的应答 , 提示它对 T 、 B 淋巴细胞的功能都有 调
节作用 。
上述资料指出 , B K P 为韭叶柴胡的主要活性成分之一 , 它比北柴胡多糖 的 作 用 更
强 , 可能更有希望发展为免疫调节剂 , 值得进一步研究。
参 考 文 献
江苏新医学院: 中药大辞典 (下册 ) , 1 9 7 年 , 第 1 版 , 第 3 76 3 页 , 上海人民卫生出版社
潘胜利等: 云南省柴胡属药用植物的分类及其化学成分的研究 。 上 海第一医 学院学报 198 4 1 ( 1) : 1
潘启超 : 免疫兴奋剂进展 。 药理学进展抗炎免疫药理分册 , 1 9 82 年第 7 2 页 , 人民卫生出版社 , 北京
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韭叶柴胡多糖对淋巴细胞增生的调节作用
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r e g P o l l 日e o f m o u s e s p l e n o e y七e s 七0 m i t o g e n 日 a 日 m e a 日u r e d b y 3H艰 T 主n e o r 砂 r a右i o n a r a
r叩 o r 七e d . B K P a t 1 0 0拜 g / m l w a , e肠。七i v e i n p r o m o七i gn p r o l i加 r at i o n o f o o 7B L / 6
m o u s` , 。 lP e n o e y七e o i n o u b a七e d w计h C o n A ( 2 . 5 灿 g /m l ) of r 4 8 h o u r o
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A七 t h i ,
e o n 。。 n t r a t i o n B K P al o o i n盯 e a s e d 七h e r e o P o n 日e o f m o u 日e o P l e n o c y七e日七0 v a r i o u 日 。七h e r
m i七o g e n 吕 i n cl u d i n g P H A , L P S a n d P WM
.
T h e s e r e s u h 日 日u g g e 3七七h a右B K P m i g h 七 b a
d e v e l o eP d
a s a n im m u n
o ,且 o d u l a为o r .
兀 E Y
t h y m i
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j i n e
W O R D S B
肠尸忍e Z, , u饥 无u乃哪艺。 g 。怜肥 Po ly s a e e h a r id e ( B K P ) ; m i t o g e n ; t r i t i以m ;
in e o r护 r a ti o n ; l y m P h o e y et ; m i e e
人血清载脂蛋白 A 一 I 的分离纯化及其抗血清的制备 (简讯 )
用超速离心法分得高密度脂蛋白, 经琼脂糖平板电泳检定为一条区带。 用甲醇 /氯仿 ( 1 :2 V / V )脱
脂 。 然后经 S eP had e二G 一 150 层析及 D E A E一纤维素 ( D E 一 52) 离子交换柱所得蛋白在 2 80 n m 有一吸收
峰 。 做 P A G E 仅出现一条区带 , 电泳双扩散未见交叉沉淀线 , 说明所得载脂蛋白 A 一 I a( oP A 一 )I 是纯
的。 P A G E 测得分子量为 绍 , 。0 , 其氯基酸组成与文献报道基本一致。 用纯化的 a P。荃工免疫新西兰
免 ,获得效价为 1 : 32 的特异性抗人血清 a P。企工抗血清 。
我们用本室建立的单向火箭免疫电泳测定法 , 测定了 158 名健康中年人与 g 名 80 岁以上老年人的
血清 aP o A 一 I 。 结果庄脂蛋白 < 5 0 0 9 % 、 总胆固醇 < 2 0 m g % 的人血清 a p A 一工含量 , 男女分别为
2 06
.
3 士 16 . 3 8 ( m g % )与 20 7 . 3 士 1 5 . 5 6 (m g % ) ; 而 口一脂蛋白> 5 0 m g % 、 总胆固醇 》 20 m g % 的人血
清 a护 A一工含量 , 男女分别为 1 75 · 29 士 14 · 60 (m g % )与 18 2 ` 38 士 10 · 20 (m g% ) 。 可见不论男女 , 血脂
正常者的 a砂A 一 I 含量均显著高于血脂高者。 这与以往的报道相符 。 80 岁以上老人的血清 aP 。企 I 含
呈为 3 0 9 . 5 9 士 1 0 . 53 (nI g % ) , 也在正常范围。
药学系生物 化学教研室 供稿