全 文 ：第 2 2 卷
1 9 9 4 年
第 3 期
9 月
河南职技师院学报
J o u r n a l o f H e n a n V o e a t i o n
-
T e e h n i e a l T e a e h e r s C o l l e g e
V o l
.
2 2
S e P
.
N o
.
3
1 9 9 4
玉米花粉山碴 口服液对老龄
小鼠红细胞 S O D 酶活性及心肌
组织过氧化脂质含量的影响
邓月峨 牛立元 陈士林
(基础部 , 新乡 4 5 3 0 0 3) (农学系 )
摘要 为了正确评价玉米花粉山检口服液钧抗衰作用 ,我们研究了该口服液对老龄小鼠红细胞
so D 酶活性及心肌组织过氧化脂质含量的影响 。 本组试验共用小白鼠 40 只 ,采用双重对比法 。 试
验组和对照组每日分别饲以 3% 的口服液及自来水 ,连续 45 天 。其中试验组小鼠红细胞 S O D 酶活
性及心肌组织过氧化脂质含量分别为 4 2 4 . 4 2士 1 0 9. 83 ( u / em 3 )和 61 9 . 2 5 士 9 1 . 6 3 ( n M o l /w e t · w t
·
g )
,而对照组则分别为 2 1 5 . 4 0士 1 4 5 . 4 0 ( u / e m , )和 7 5 9 . 7 3士 1 3 5 . 9 3 ( n M o l /w e t · w t · g ) 。 差异显
著 ( P < 0 . 0 01 或 P < 0 . 0 5 ) . 结果表明 ,该口服液具有良好的抗衰作用 。 另外 ,本文对红细胞 s 0 D 酶
活性的测定方法也进行了探讨 。
关键词 玉米花粉山检 口服液 ; 红细胞 S O D 酶活性 ; 心肌组织 L P O 含量
超氧化物歧化酶 (s uP ~
ide d is m
u t as 。 简称 . SO D )是广泛存在于生物体内的一种金属酶 ,
在人体及其它动物体内 , 它主要分布于红细胞中〔 , , , 且酶活力有随动物年龄的增大而不断减小
的趋势 。 由于 SO D 可以催化趋氧化物阴离子自由基 ( O动发生歧化反应 ,清除超氧基团 ( O 牙) ,
所以它在氧毒的防御 、 辐射损伤的防护以及预防衰老等方面均有重要作用 〔2〕 。 而过氧化脂质作
为自由基损害作用的产物 , 其含量随动物年龄的增大而增高 , 因此 , 定量考查玉米花粉 山植口
服液对老龄小鼠红细胞 S O D 活性及心肌过氧化脂质含量的影响 ,就可以大致估计它在预防动
物衰老中的作用 。
1 材料与方法
L l 试剂与仪器
1
.
1
.
1 试剂
( 1 ) P H S
.
2
、
s o n M o l
.
d m
一 ”的 T r i s 一 H C I缓冲液 。
( 2 ) s m M o l
0
d m
一 “的邻苯三酚 (尊义化工厂的产品 )液 ( l om M o l · dm 一 “的 H C I配制 ) 。
( 3 ) 乙醇一氯仿混合液 ( 5 : 3 , V / V ; 4℃预冷 ) 。
收稿 日期 : 1 9 9 4一 0 3 一 2 5 .
( ) 4双蒸馏水 。
( 5 ) 0
.
9 %生理盐水 。
( 6) 0
.
I Mo l
·
d m
一 3盐酸 。
( 7 ) 20%三氯醋酸 。
( 8 ) 1%的硫代巴比妥酸 ( B A T) 。
( 9 ) 正丁醇 。
其中 ( ) 1一 ( ) 4为红细胞 S O D活力测定所需试剂 , ( 5) ~ ( 9) 为过氧化脂质测定所用试剂 。
1
.
1
.
2 仅器 本实验所使用的主要仪器为 JA S C O 型 U V I D E C 一 5分光光度计及 L X 6J 4一 01 型
普通离心机 。
本实验共设抗衰老及对照两个组 ,动物为新乡医学院动物房提供的约一年龄的昆明种小
白鼠 ,每组 20 只 , 体重 43 士 5 克 , 除抗衰老组每 日自由饮用 3%的 口服液外 ,其它均同于对照
组 ,共喂 1 个半月 ,于实验结束时取血及心脏分别测定 SO D 活力及过氧化脂质的含量 。
L Z S O D 活力的测定
SO D 活力的测定方法系由赵玉洲〔 3〕的微量红细胞 S O D 活力测定方法改良而来 。
1
.
2
.
1 红细胞 S O D 提取液的制备 用微量取样器准确取小鼠尾尖血 0 . o cZ m , ,注入到盛有
sc m
3 生理盐水 的锥形刻度离心管中 , Z o o o r p m 离心 10 分钟后弃上清液 ; 加入 0 . cZ m “ 的双蒸
馏水 ,待其完全溶血后 ,再垂直 、 快速地加入预冷的乙醇一氯仿液 0 . cZ m “ , 混匀 ,置 4 ℃ ~ 8℃冰
箱中放置 1 0 分钟 , Z0 0 0 r p m 离心 1 0 分钟 ,上层即为 S O D 提取液 。
L .2 2 SO D 活 力 的测定 取干净的试管表 1 SO D 活性测定加样程序
试 剂
P H S
.
2 缓冲剂
双蒸馏水
S O D 提取液
空白管 标准管 测定管
5 0 1
.
5 0
4 0 1
.
3 5
一 仓 . 1 0
1
.
5 0
1
.
3 5
0
.
1 0
混匀 25 ℃水浴中预热 2 0m in
l oM
o l
.
dm 一 3 H C l l 滴 一
s m M
o l
.
d m 一 ”邻苯三酚 0 . 0 5 0 . 0 5 0 . 0 5
12 支 , 分别用作空 白管 、 标准管 及样品的
测定管 ,然后按表 1操作程序加入试剂 ,进
行测定 。
在上述操作中 , 自邻苯三酚加入起记
时 , 以空白调零 , 准确 测定 4m in 时 , 每管
一在 一拙Q二 3 3 0n m 处的光吸收值 , 并按下式
计算各测定管的 S O D 活力值 。
O D
I 一 O D Z
S O D 活力 ( U · c m 一 “ ) 一 O D
I
3
、
V
入 二二, 丁 入 丁 -丁二
U
。
I U
。
U乙
5 0铸
其中 O D , 、 O D : 分别为标准管和测定管 4 分钟时的光吸收值 ; V 为 SO D 抽提液总体积 。
1
.
3 小鼠心肌过氧化脂质含量的测定 〔4〕
准确称取 已用滤纸吸干血渍的心肌组织 0 . 25 克 ,置玻璃匀浆器中 , 用 0 . 9%的生理盐水
制备 1%的心肌匀浆 ;取 1%心肌匀浆 cI m “ , 加入 0 . c4 m , 的 20 % T C A ,混匀 ,于室温下放置 20
分钟 ,沉淀蛋 白 ;加入 0 . I M o l · dm 一 3的 H C I Z e m 3 和 1% T B A l e m 3 ,并充分混匀 ; 1 0 0℃沸水煮
1 5m in
, 然后冷却到室温 J 力口 c4 m “ 的正丁醇提取颜色 , 充分混匀 , 2 0 0 0印m 离心 15 分钟 ,最后
取上层清液 c3 m 3 , 于 5 3 2n m 处测定光吸收值 ,并按下式计算各样品所含过氧化脂质的含量 :
过氧化脂质含量 ( n M ol / g · w et · w t) - C x v
W
e t
。
W t
X 稀释倍数其中 C - O D
1
.
5 6 X 1 0 5 X I
M o l
·
dm
一 3 ; V 为提抽液总体积 。
2 结果与讨论
按上面所述方法所测红细胞 S O D 活力及心肌过氧化脂质含量 ,分别如表 2 、 表 3 所示 。
从表 2、 表 3 所列结果可
以看出 , 玉米花粉山植 口服液
对于红细胞 S O D 活力及心肌
过氧化脂质含量均有较大影
响 。 其 中 , 该 口 服液 可 以使
S O D 活力显著增加 ,而使心肌
过氧化脂质含量降低 , 两者呈
明显的负相关 。不仅如此 ,该结
果还与实验期内老龄 鼠的存活
只数也较为一致 ,在 实验结束
时 ,对照组死亡小鼠 6 只 , 而抗
表 2 口服液对小鼠红细胞 SO D 活力的影响 (又士 S D )
组 别
抗衰老组
对照组
动物只数 so D 活力 ( U · c m 一 3 ) T P
1 0
10
4 24
.
4 2士 1 0 9 . 8 3
2 1 5 漆0士 1 4 5 . 4 0
3 8
。
4 3 P < 0
.
0 0 1
表 3 口服液对川 心肌组织中过级化脂质
含 t 的影响 (又士 SD )
组 别 动物只数 过氧化脂质含量( n M o l /W e t · W t · g ) T P
抗衰老组
对照组
6 1 8
.
1 3士 9 1 . 63
7 5 9
.
7 3土 1 35 . 9 3
2
.
4 5 P ( 0
.
0 5
衰老组则仅仅死亡 3 只 , 两者有明显的差异 。 由此说明玉米花粉山植 口服液对老龄小鼠确有抗
衰老作用 ,并且可能主要是通过改善血液循环加强营养供给 , 增加红细胞 S O D 活力 , 降低心肌
组织过氧化脂质含量等功能而实现的 。 由于动物实验的结果在许多情况下于人的试验结果较
为一致 ,因此 ,玉米花粉山植口服液若用于老年人的保健及抗衰必会取得满意的结果 。
另外 , 在红细胞 S O D 活力的测定中 ,笔者对测定方法也作了若干方面的改进 , 主要包括 :
( l )采用 sm M o l · dm 一 “邻苯三酚 , 并用 s m M o l · d m 一 3的 H C I来配 ; ( 2 )减少反应中邻苯三酚
液的加入量 , 由于 P H 值对 S O D 的活力具有明显的影响 , 因此在保证体系中邻苯三酚浓度不
变的情况下 ,加入的体积愈小 ,对反应体系 P H 值的影响就愈小 ; ( 3) 标准氧化速度管的测定过
程中 ,不加入浓硫酸来终止反应 ,因为笔者发现 , 加入浓硫酸虽然可以终止邻苯三酚的自氧化 ,
但却可以导致反应液在 3 3 0n m 波长处光吸收度的显著减少 ,平均幅度都在 0 . 24 5一 0 . 2 25 个
O D 单位之间 ; ( 4 ) O D 值的测定选取的是自邻苯三酚加入后 4 分钟时的值 。
参考文献
M i
e h e ls o n AM
.
J P n J eD
r
ma
t o l
.
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,
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李仪奎等 . 中药药理实验方法学 . 上海科学技术出版社 , 19 1 . 203 一 2 04
(下转 7 5 页 )
贡献 ,产生显著的经济效益和社会效益 ,应遵
循鉴定 、评奖优先的原则 , 向上级主管部门推
荐报送 。
5
.
2 对在技术转让中取得的转让收入 ,可以
参 照《技术合同法 》提取部分转让费作为奖
金 ,领取奖金应按照贡献大小发放 。
5
.
3 对于研究先进技术做出突出贡献者 , 除
上述奖励之外 , 在继续研究或立新课题等方
面提供优先权 。
5
.
4 对于技术的主要完成者 ,根据技术水
平 、 转让效益 、 生产应用等情况 , 为应用技术
评级 ,并颁发 “ 技术奖励证书 ” ,使获奖的技术
能够作为晋级晋职 、评先和津帖的重要依据 ,
以调动广大科技人员的积极性和创造性 ,并
逐步使应用技术建行兴旺发达 , 从而使高校
形式优厚的技术储备 , 得到与市场经济对接
的 目的 。
参考文献
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社 , 1 9 9 1
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(上接 6 3 页 )
E f f e e t s o f t h e O r a l L iq u id o f M
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P o l l
e n a n d H a w t h o r n o n E r y t h r o e y t e S O D A e t i v i t y
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l i q u id o f m a i z 。 p o l l e n a n a h a w t h o r n , e f f e e t , 。 f t h e l i q u id p r e p a r e d b y 。 u r s e l f 。 n 。 r y t h r o乞y t e
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.
T h e l i q u id g r o u p h a d h i g h e r SO D a e t iv i t y 4 2 4
.
4 2士 10 9 . 8 3 ( u · e m 一 “ ) a n d Io w e r L P O
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4 0士 1 4 5 . 4 0 ( u · e m 一 “ ) a n d h i g h e r L P O e o n t e n t 7 5 9 . 3士 1 3 5 . 9 3 ( n M o l · w e t 一 ’
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