全 文 ：收稿日期:2009-12-31;　修订日期:2010-07-05
基金项目:新疆医科大学大学生创新项目(No.SRTPCX2008083);
新疆维吾尔自治区自然基金 (No.200821129);
新疆维吾尔自治区教育厅科研项目(No.XJEDU2008I17)
作者简介:王红英(1965-),女(汉族),湖北枣阳人 ,现任新疆医科大学微
生物学和免疫学副教授 ,学士学位 ,主要从事感染免疫研究工作.
＊通讯作者简介:丁剑冰(1960-), 女(汉族),福建福州人 , 现任新疆医科
大学免疫学教研室教授 ,博士学位 ,主要从事分子免疫学工作.
维吾尔药新疆假龙胆对大鼠关节炎的作用机制研究
王红英 1, 2 ,李文红3 ,周晓涛 2 ,丁剑冰1, 2＊ ,王亚男 2 , 侯　敏4 ,苏　琦 4 ,李大伟4 ,马飞飞 4
(1.新疆医科大学附属中医院新疆国家中医临床研究基地 ,新疆 乌鲁木齐　830011;　
2.新疆医科大学基础医学院 ,新疆 乌鲁木齐　830011;
3.新疆乌鲁木齐市火车西站医院 ,新疆 乌鲁木齐　830023;　
4.新疆医科大学中西医结合专业 2006-2班 ,新疆 乌鲁木齐　830011)
摘要:目的 考察新疆假龙胆抗类风湿性关节炎(RA)的药理作用及作用机制。方法 建立佐剂性关节炎(AA)动物模型 ,
观察新疆假龙胆对 AA大鼠足肿胀 、踝关节组织病理变化及血清中促炎细胞因子 TNF-α水平的影响 。结果 新疆假龙
胆能有效抑制关节肿胀及减轻炎症的发展 ,降低 AA大鼠血清中促炎细胞因子 TNF-α的水平。结论 新疆假龙胆具有
良好的抗 RA作用 ,其作用机制与抑制促炎细胞因子 TNF-α的水平有关。
关键词:新疆假龙胆;关节炎;肿瘤坏死因子 -α
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.02.040
中图分类号:R291.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2011)02-0353-03
EffectsofHerbaGentianelaconRheumatoidArthritisanditsMechanism
WANGHong-ying1, 2 ,LIWen-hong3 , ZHOUXiao-tao3 , DINGJian-bing1, 2＊ , WANGYa-nan2 , HOUMin4 , SUQi4 , LI
Da-wei4 ,MAFei-fei4
(1.TraditionalChineseMedicalHospitalinXinjiangMedicalUniversity, Urumqi830011 , China;2.BasicMedi-
calSchool, XinjiangMedicalUniversity, Urumqi830011, China;3.WestRailwayStationHospital, Urumqi
830023, China;4.Studentof2006-2 ClassinIntegratedWestChineseMedicine, XinjiangMedicalUniversity,
Urumqi830011, China)
Abstract:ObjectiveToobservetheantiarthriticefectsandthepossiblemechanismofHerbaGentianelacagainstrheumatoid
arthritis(RA).MethodsAfterestablishingAAratmodel, theantiarthriticefectsandmechanismofHerbaGentianelacagainst
RAwerestudiedthroughobservingthechangesofankleswelling, pathologyofankleboneandlevelofTNF-αaftermedication.
ResultsHerbaGentianellaccouldeffectivelyinhibitarticularsweling, decreaseinflammatoryreactionanddown-regulatethe
contentofTNF-αinserumofAArats.ConclusionHerbaGentianellachasgoodantiarthriticefectsandthepossiblemechanism
mayberelatedtoitsdownregulationofTNF-α.
Keywords:HerbaGentianellac;　Rheumatoidarthritis;　Tumornecrosisfactor-α
　　新疆假龙胆(HerbaGentianelac,又称新疆阿帕斯)属于假龙
胆科 、假龙胆属 ,多分布在新疆 、蒙古等地区。药用全药 , 本草全
长 10 ～ 30 cm, 根稍细小 , 淡黄白色;茎略呈四棱形或近圆形 , 单
一 , 多分枝 ,光滑 , 黄绿色 , 有时带铁锈红色至紫褐色 , 中空;叶对
生 , 无柄 ,卵状披针形 , 先端极尖 ,半抱茎 ,叶脉 3 ～ 5条 , 下面主脉
明显;聚伞花序 ,密集 , 花多变为浅黄色 , 有时略带蓝色 , 花 5数。
新疆假龙胆是维吾尔医常用药材 ,具有清热解毒 、利湿消肿作用 ,
常用于关节炎的治疗。新疆假龙胆在维医中应用广泛 ,但至今为
止未见其免疫学 、临床 、药理学等方面的报道 [ 1] 。
类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis, RA)是一种致残率极高
而在治疗上至今仍没有取得突破性进展的疾病 , 以关节疼痛 、畸
形 、功能障碍为主要特征 ,严重影响人们的正常生活和工作 [ 2 , 3] 。
RA以关节滑膜慢性炎症为主要表现 ,细胞因子网络失衡在其发
生 、炎症迁延 、关节破坏中占有重要地位 [ 4] , 肿瘤坏死因子 -α
(tumornecrosisfactor-α, TNF-α)是RA发病机制中属中心地位
的促炎症细胞因子 [ 5] 。近年来随着分子生物学的快速发展 , 以
细胞因子为作用靶点的治疗措施成为当前的研究热点 [ 6] , 目前
很多药物就是通过降低 TNF-α的水平而达到治疗疾病的目
的 [ 7] 。本实验通过采用佐剂诱导的关节炎(Adjuventinducedar-
thritis, AA)大鼠模型 ,观察新疆假龙胆对 AA型关节炎大鼠左踝
关节肿胀程度 、外周血中 TNF-α以及组织病理变化 ,探讨新疆
假龙胆治疗类风湿性关节炎的部分机制。
1　材料
1.1 　动物 清洁级健康雄性 Wistar大鼠 48只 ,购于新疆医科大
学实验动物中心 ,体质量 180 ～ 220 g,正常饲养。
1.2 　试剂 注射器(1 ml);游标卡尺(最小刻度为 0.2mm);酶
标仪 (型号:LabsystemsDragonwellscanMK3 );维吾尔药新疆假
龙胆全草(新疆奇康哈博维药有限公司提供 ,新疆医科大学形态
中心实验室制备水煎剂);雷公藤多苷片(浙江得恩德制药有限
公司);完全弗氏佐剂(FreundsCompleteAdjuvent, FCA)(美国
Sigma公司);大鼠 TNF-α定量试剂盒(北京晶美公司)。
2　方法
2.1　动物分组和模型复制
2.1.1　分组及给药剂量 48只 Wistar雄性大鼠 , 随机分为 6组:
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.2 时珍国医国药 2011年第 22卷第 2期
空白对照(NS)组 、模型组 、雷公藤治疗组(雷公藤苷 0.01 mg/
kg)、新疆假龙胆治疗高 、中 、低 (20, 10, 5 g/kg)剂量组。
2.1.2　造模 NS组大鼠右后足趾皮内注射生理盐水;其余各组
依照文献 [ 4]方法 , 将 BCG+不完全佐剂(BCG10 mg/ml)混合 、乳
化成混悬乳剂 , 于大鼠左后足跖肉垫皮内注射 0.1 ml, 背部 0.05
ml致炎 。并用游标卡尺记录大鼠左后足踝关节的上下径。
2.1.3　给药 造模 14 d后参照关节炎指数评分标准 [ 8]对模型复
制效果进行评估 , 评分达 6分以上的大鼠用于实验 , 成功建立 AA
型关节炎大鼠模型。正常对照组 、AA模型组每日予以生理盐水
灌胃;雷公藤组予以雷公藤苷(0.01 mg/kg)灌胃;维药假龙胆高
剂量组给予假龙胆水煎剂 20 g/kg灌胃 , 维药假龙胆中剂量组给
予假龙胆水煎剂 10g/kg灌胃 ,维药假龙胆低剂量组给予假龙胆
水煎剂 5 g/kg灌胃 , 每日灌胃 1次 , 连续给药 25 d。每天用游标
卡尺记录左后足踝关节肿胀情况。
2.2　取材 大鼠乙醚麻醉后心内采血 , 常规分离血清 , 用于检测
细胞因子 TNF-α;分离左足踝关节滑膜组织用 10%甲醛溶液固
定 , 4℃保存。
2.3　观察指标的检测 用游标卡尺每日测量大鼠左后足踝关节
的上下径 ,观察左后足踝关节的肿胀程度(精确至 0.2 mm);按
照 ELISA试剂盒公司提供的说明进行血清中细胞因子 TNF-α
的检测;左后足踝关节滑膜组织做病理切片(HE染色)镜下观
察。
2.4　统计学方法 用统计软件 SPSS11.5进行数据处理 , 计量资
料经方差齐性检验 , 采用方差分析的方法 , 两两比较采用 SNK
法。用实验数据 x±s表示。
3　结果
3.1　对 AA大鼠踝关节肿胀的影响 新疆假龙胆能有效抑制 AA
大鼠踝关节的急性炎症反应。与空白对照组比较 , 模后第 14天
(药前)各组踝关节均明显肿胀(P<0.01), 表明造模成功。用药
25 d后 ,新疆假龙胆各剂量对踝关节肿胀均显示出明显的抑制作
用(P<0.05), 其中高剂量组作用强度大于雷公藤治疗组(表 1
及图 1 ～ 4)。
表 1　新疆假龙胆对大鼠关节肿胀的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1
药前肿胀度 l/mm
(造模后 14 d)
药物干预后肿胀度 l/mm
第 5天 第 10天 第 15天 第 20天 第 25天
NS - 6.48±0.4 6.48±0.4 6.4±0.1 6.4±0.1 6.4±0.2 6.4±0.1
模型 - 9.78±0.6# 9.78±0.9 9.75±0.6 9.74±0.5 9.76±0.6 9.76±0.4
雷公藤 0.01 9.6±1.2# 9.4±0.8＊ 9.36±0.8＊ 9.2±0.8＊ 9.1±0.8＊ 9.1±0.8＊
新疆假龙胆治疗(高) 20 9.71±0.9# 9.2±0.98＊ 8.7±0.8＊ 8.5±0.8＊ 8.0±1.2＊ 8.0±1＊
新疆假龙胆治疗(中) 10 9.78±0.8# 9.7±0.5 9.7±0.9 9.6±0.2★ 9.5±0.5＊ 9.6±0.6★
新疆假龙胆治疗(低) 5 9.71±0.5# 9.7±0.3 9.7±0.3 9.78±0.9 9.5±0.6＊ 9.57±0.6＊
与空白对照组比较 , #P<0.01;与模型组比较 , ★P<0.05, ＊P<0.01;n=8
图 1　空白对照组 　　　　　　图 2　模型对照组 　　
　图 3　雷公藤治疗组　　　图 4　新疆假龙胆治疗高剂量组
3.2 　组织病理切片观察 镜下观察可见正常组大鼠关节组织无
淋巴细胞浸润 、无毛细血管增生;AA型关节炎大鼠模型组淋巴细
胞浸润 , 滑膜细胞增殖 , 毛细血管增生 , 软骨组织破坏严重;雷公
藤治疗组和新疆假龙胆治疗高剂量组视野淋巴细胞浸润明显改
善 , 软骨组织的破坏减轻。见图 5 ～ 8。
图 5　空白对照组 (100×)　　　　图 6　模型组(100×)　　　　　
图 7　雷公藤治疗组　　　　　　　图 8　新疆假龙胆治疗　　　　　
　　　　(100×)　　　　　　　　　　　高剂量组(100×)　　　　　　　
3.3　外周血中 TNF-α含量变化 AA模型组中 , 外周血的 TNF
-α含量最高 , 经新疆假龙胆治疗后 , 大鼠外周血 TNF-α水平
明显下降 , 表明新疆假龙胆能降 TNF-α水平(P<0.01),且与正
常大鼠水平相比 ,差异无显著性 (P>0.05)。见表 2及图 9。
表 2　新疆假龙胆对大鼠血清中TNF-α浓度的影响( x±s)
pg· ml-1
分组 TNF-α
模型 73.96±8.20
空白对照 55.41±6.80＊
雷公藤治疗 60.84±9.71#
新疆假龙胆治疗(高) 55.60±4.10＊
新疆假龙胆治疗(中) 57.21±9.10#
新疆假龙胆治疗(低) 58.94±4.39#
　　与模型组比较 , ＊P<0.01, #P<0.05;n=8
　
图 9　药物干预后大鼠血清中TNF-α浓度的比较
4　讨论
维吾尔医把炎症叫做 “欧腐乃提 ”和 “依休克 ”, 把致病菌叫
做 “加拉斯米”。 维吾尔医认为机体相对平衡的四种体液(胆液
质 、血液质 、粘液质 、黑胆质)失去平衡 , 致气质失调 , 人体的太比
也提(免疫能力)受到损害 , 导致抵抗力的减弱 , 从而给人体内正
常生存的或者从外界侵入的加拉斯米(病毒)创造繁殖的有利条
件 , 促使各种疾病的发生。维吾尔医认为新疆假龙胆增强人体的
太比也提(免疫)功能 , 调节气质和体液平衡 ,常用于关节炎的治
疗 [ 1] 。
AA又称福氏佐剂关节炎。与其他类风湿性关节炎大鼠模型
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时珍国医国药 2011年第 22卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.2
相比 , AA大鼠关节炎模型具有关节组织病理学及血中变化与人
RA相似的特点 , 而且制作简单 [ 8] ,可以作为人类 RA的较理想的
疾病模型 [ 9] , 关节炎指数和固定部位周径是其重要的检测指标 ,
可以准确地反映大鼠佐剂性关节炎的病变程度 [ 10] 。本实验依据
参考文献 [ 10] ,免疫 14d后成功建立了 AA型关节炎大鼠模型。
参照关节炎指数评分标准 [ 10]对模型复制效果进行评估 , 评分达 6
分以上。通过我们的实验可以看出 ,与对照组比较 ,模后第 14天
(药前)各组踝关节均明显肿胀 , AA型关节炎大鼠模型的制造较
为成功。新疆假龙胆各剂量组的使用均可明显降低 AA大鼠足
踝关节的肿胀程度 , 其中高剂量组作用强度大于雷公藤治疗组。
新疆假龙胆能有效抑制 AA型关节炎大鼠模型足踝关节肿胀。
类风湿关节炎是一类以关节炎为主要临床表现的系统性自
身免疫疾病 , 其基本病理特点是血管炎和滑膜炎。其主要特征是
滑膜关节的炎症 , 导致进行性的软骨和软骨下骨的破坏 , 在关节
内可以看到滑膜组织的异常增生 、大量炎性细胞的浸润 [ 11] 。大
鼠 AA是一种典型的免疫炎性模型 , 其组织病理学特点包括滑膜
增生 、单核细胞浸润 、关节软骨破坏 [ 12] 。通过足踝关节组织病理
切片镜下观察 , 可以看到新疆假龙胆高治疗组视野淋巴细胞浸润
减少 , 软骨组织的破坏减轻 ,有明显改善炎症程度作用。
炎性细胞因子是类风湿关节炎的主要病理介质 , 主要有 TNF
-α、白介素 -1、白介素 -6等。其中 TNF-α在 RA炎症 、软骨
吸收和骨破坏中起重要作用 , 其通过诱导内皮细胞黏附分子介导
关节炎性细胞的浸润 ,同时还是破骨细胞活化因子 , 引起骨和软
骨的吸收破坏 , 还能促进成纤维细胞增生 , 造成关节功能障
碍 [ 7, 9] 。研究发现 RA患者血 TNF-α浓度与健康人比较明显升
高 , 说明 RA患者存在TNF-α的过表达 [ 5] 。动物实验显示 ,过分
表达 TNF-α的转基因小鼠产生侵蚀性关节炎 , 其组织学特点与
RA类似 , 抗 TNF-α物质可以减轻病变程度 [ 13] 。也有研究表
明 , RA患者血和病变关节滑液中 TNF-α含量明显增高 , 经治疗
后 , TNF-α水平随同期关节炎活动指数的改善而显著下
降 [ 14 , 15] 。通过本实验 , 可以观察到 AA型关节炎大鼠模型血清中
TNF-α明显增高 ,提示其在 RA的发病和关节损伤中起着重要
作用。经新疆假龙胆治疗后 , 血清中 TNF-α含量明显下降 ,提
示新疆假龙胆可能通过降低外周血清中炎性细胞因子 TNF-α
的产生 , 达到减轻炎性细胞浸润 , 抑制滑膜组织增生和血管翳形
成 , 减轻软骨和骨破坏 , 对 AA型关节炎大鼠模型起到了治疗作
用 , 也可能是新疆假龙胆治疗类风湿性关节炎的部分机制。
本研究表明 , 新疆假龙胆能有效抑制 AA型关节炎大鼠模型
足趾肿胀 、减轻病理损伤 , 初步证明了其良好的抗 RA效果。降
低血清中 TNF-α水平可能是新疆假龙胆治疗类风湿性关节炎
的部分机制。鉴于目前 RA病人治疗手段的局限性 , 充分发掘民
族药的独特性 ,运用现代的研究手段和方法 , 进一步研究并阐明
新疆维药假龙胆的抗 RA作用及作用机制 , 有望对 RA的研究和
治疗取得新进展。
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