全 文 ：２０１５年０９月 四川大学学报 （自然科学版） Ｓｅｐｔ．２０１５
第５２卷　第５期 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖｏｌ．５２　Ｎｏ．５
收稿日期：２０１４－０２－２１
基金项目：国家自然科学基金 （３１１７１５８６），转基因重大专项 （２０１１ＺＸ０８００９－００３－００２）
作者简介：王翔 （１９８８－），男，甘肃西和人，硕士研究生，研究方向为分子遗传学与基因工程．Ｅ－ｍａｉｌ：８１５５０１００２＠ｑｑ．ｃｏｍ
通讯作者：李旭锋．Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｆｌｉ＠ｓｃｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｄｏｉ：１０３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０４９０－６７５６．２０１５．０９．０３１
拟南芥中一个参与热胁迫应答基因功能的初步研究
王　翔，刘志斌，李旭锋
（四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都６１００６４）
摘　要：在拟南芥中发现了一个受热诱导的基因Ａｔ４ｇ１９４３０，经Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ分析表明该
基因受热诱导后表达量显著升高．组织特性的分析发现其在拟南芥不同组织中均有表达，但
在叶中表达量最高．亚细胞定位结果表明Ａｔ４ｇ１９４３０蛋白定位在细胞质中．筛选并鉴定了该
基因的突变体，并分析了其在热胁迫时的表型，结果表明该基因的突变体对热胁迫非常敏
感，在热胁迫的条件下突变体存活率明显下降．
关键词：拟南芥；亚细胞定位；热胁迫
中图分类号：Ｑ９４５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：
Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ａ　ｇｅｎｅ　ｗｈｉｃｈ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ＷＡＮＧ　Ｘｉａｎｇ，ＬＩＵ　Ｚｈｉ－Ｂｉｎ，ＬＩ　Ｘｕ－Ｆｅｎｇ
（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏ－ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ａｎｄ　Ｅｃｏ－ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，
Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００６４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｗｏｒｋ，ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　Ａｔ４ｇ１９４３０ｕｎｄｅｒ　ｖａｒｉｏｕｓ　ａｂｉｏｔｉｃ
ｓｔｒｅｓｓ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ａｔ４ｇ１９４３０ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｆｔｅｒ
ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｐｌａｎｔ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　Ａｔ４ｇ１９４３０ｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ　ａｃｃｕｍｕｌａ－
ｔｅｄ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ．Ａｔ４ｇ１９４３０－ＧＦＰ　ｆｕｓｉｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｍａｉｎｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ．Ｔｈｅ　Ｔ－ＤＮＡ　ｉｎｓｅｒ－
ｔｉｏｎ　ｍｕｔａｎｔ　ｌｉｎｅ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｍｕｔａｎｔ　ｌｉｎｅ
ｕｎｄｅｒ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｕｔａｎｔ　ｌｉｎｅ　ｗａｓ
ｍｏｒｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｔｏ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ；Ｓｕｂｃｅｌｕｌａｒ　ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ；Ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ
１　引　言
植物在生长发育过程中经常遇到各种不利环
境，例如干旱、盐害、极端温度等，这些不利因
素会影响植物的地域分布和生长状况，经济作物
的产量也受到很大的影响［１］．由于植物固着生长，
不能像动物那样主动躲避不利因素的胁迫，所以
植物进化出一套精密复杂的机制以感知外界的各
种胁迫信号从而应对外界复杂多变的环境［２－４］，如
提高 植 物 耐 盐 性 相 关 的 ＡｔＨＫＴ１、ＳＯＳ 基
因［５－９］；抗渗透压相关的ＯＳＭ１／ＳＹＰ６１基因［１０］；
耐冷性相关的ＩＣＥ１基因［１１］；以及抗氧化胁迫的
ＥＮＨ１基因等．
近些年由于全球气温不断升高，因此植物生
长所面临的高温胁迫也更加严峻．好在植物进化
出了抵抗高温环境一套分子机制．参与植物热激
　 四川大学学报 （自然科学版） 　 第５２卷
反应［１２］ （Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨＳＲ）的主要有：
热转录因子 （Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｆａｃｔｏｒ，ＨＳＦｓ）和热激
蛋白 （Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰｓ）．ＨＳＦｓ的表达
情况受温度的影响，植物受到高温胁迫会导致
ＨＳＦｓ表达量的升高［１３－１５］，ＨＳＦｓ可以特异地结合
在热相关的顺式作用元件 （Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｅｌｅｍｅｎｔ，
ＨＳＥ）上诱导其下游 ＨＳＰｓ的表达［１６－１９］．作为分
子伴侣的 ＨＳＰｓ有助蛋白质的折叠以及稳定蛋白
结构，因此 ＨＳＰｓ表达量的上调会导致植物对热
胁迫产生一定的耐受，使其能够更好的应对高温
环境［２０－２２］．
本实验室通过生物信息学分析 （ｈｔｔｐ：／／ｂａｒ．
ｕｔｏｒｏｎｔｏ．ｃａ／ｅｆｐ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ｅｆｐＷｅｂ．ｃｇｉ）发现拟南芥
基因Ａｔ４ｇ１９４３０的表达会受到高温胁迫的诱导，
暗示该基因有可能参与拟南芥的热信号转导．本
研究对Ａｔ４ｇ１９４３０基因的组织特异性、亚细胞定
位以及受非生物胁迫后的表达情况进行了分析．
并从拟南芥生物资源中心 （Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　Ｂｉｏｌｏｇｉ－
ｃａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｃｅｎｔｒｅ，ＡＢＲＣ）订购了Ａｔ４ｇ１９４３０
基因的突变体种子，筛选获得了纯合株系，对其
在拟南芥中的生物学功能尤其是受到热胁迫时的
功能进行了初步研究．
２　材料和方法
２．１　实验材料
拟南芥 （Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ）Ｃｏｌｕｍｂｉａ
生态型种子为本实验室保存．Ａｔ４ｇ１９４３０突变体种
子购于拟南芥生物资源中心 （Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　Ｂｉｏｌｏｇ－
ｉｃａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｃｅｎｔｒｅ，ＡＢＲＣ），该突变体背景为
Ｃｏｌｕｍｂｉａ生态型．
Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶、高保真ＤＮＡ聚合酶、限
制性内切酶和Ｔ４连接酶购于Ｔａｋａｒａ公司；植物
总ＲＮＡ提取试剂盒、质粒提取试剂盒、反转录
试剂盒和ｑＰＣＲ试剂盒ＴＩＡＮＧＥＮ公司；引物合
成、测序由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ生物技术有限公司完成；
其余试剂均为进口分装或国产分析纯产品．
２．２　实验方法
２．２．１　Ａｔ４ｇ１９４３０蛋白生物信息学分析　利用
ＥｘＰＡＹｙ数据库的ＰｒｏｔＰａｒａｍ在线工具 （ｈｔｔｐ：／／
ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｐｒｏｔｐａｒａｍ／）对 Ａｔ４ｇ１９４３０蛋白的理
化性质进行分析．在 ＮＣＢＩ网站 （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ） 上 利 用 Ｂｌａｓｔ 查 找 与
Ａｔ４ｇ１９４３０蛋白同源的的其它物种序列，运用
ＤＮＡＭＡＮ进行相似性分析并构建系统进化树．
２．２．２　拟南芥培养　将营养土和蛭石按照２∶１
混合高压湿热灭菌３０ｍｉｎ，同时将所用花钵洗干
净，高压湿热灭菌３０ｍｉｎ待其冷却室温．将灭好
的营养土分装到花钵中备用．将在ＭＳ平板上生长
了一周左右的野生型及突变体拟南芥幼苗分别移
栽至花钵中，于２２℃光照１６ｈ黑暗８ｈ的组培室
中培养．
２．２．３　Ａｔ４ｇ１９４３０基因组织特异性表达　分别
提取拟南芥根、茎、叶、花、果实的 ｍＲＮＡ 并
将 其 反 转 为 ｃＤＮＡ， Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ 分 析
Ａｔ４ｇ１９４３０基因 （上游引物：５′－ＣＧＣＡＡＴＡＧ－
ＴＡＡＣＡＡＡＣＣＣＡＡＡＣ－３′，下游引物：５′－ＡＣＴ－
ＴＡＣＣＡＴＣＴＴ－ＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＣＴＴ－３′）在不同
组织中的表达水平．
２．２．４　Ａｔ４ｇ１９４３０亚细胞定位　用引物 （５′－
ＴＧＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＧＣＴＡＣＴＡＡＡＴＴＣＡＴＣＡＣＣ
ＣＴ－３′；５′－ＴＣＣＣＣＣＧＧＧＡＡＴＴＡＡＴＴＡＣＣＧＧＡ－
ＡＴＡＧＡＡＡＡＡＴ－３′）进行 ＰＣＲ，从拟南芥ｃＤ－
ＮＡ中扩增Ａｔ４ｇ１９４３０基因，经ＸｂａｌⅠ和Ｓｍａｌ
Ⅰ双酶切，将其连接到含ＧＦＰ 的ｐＢＩ２２１载体上，
ＰＥＧ介导转染至野生型拟南芥原生质体中培养
１６ｈ后激光共聚焦显微镜观察并拍照．
２．２．５　Ａｔ４ｇ１９４３０基因在非生物胁迫条件下的
表达　将生长７ｄ的野生型幼苗分别进行 ＮａＣｌ
（３００ｍＭ，０～６ｈ），ＡＢＡ （１００μＭ，０～６ｈ），低温
（４℃，０～６ｈ）以及高温 （３８℃，０～７ｈ）处理，提
取处理和不处理的野生型幼苗 ｍＲＮＡ并反转为
ｃＤＮＡ，Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ分析Ａｔ４ｇ１９４３０在４种处
理前后及不同时间梯度时表达量的差异．
２．２．６　突变体纯合子鉴定及其热表型分析　
ＤＮＡ水平检测：突变体幼苗在组培室中生长２０ｄ
后，提取叶片ＤＮＡ为模板，采用三引物ＰＣＲ法
进行ＰＣＲ 扩增鉴定．Ａｔ４ｇ１９４３０特异的引物为
ＬＰ （５′－ＣＧＧＣＡＴＡＣＡＴＡＴＣＧＧＴＣＡＡＴＣ－３′），
ＲＰ （５′－ＣＡＣＴＡＴＧＧＣＴＧＴＧＧＴＡＧＡＧＣＣ－３）′，
Ｔ－ＤＮＡ 引物 ＬＢｂ１．３ （５′－ＡＴＴＴＴＧＣＣＧＡＴＴＴ－
ＣＧＧＡＡＣ－３′）．
ＲＮＡ水平检测：提取突变体和野生型幼苗
ｍＲＮＡ并将其反转录为ｃＤＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ检测其
转录水平的表达量，同时以ａｃｔｉｎ 基因表达为对
照，扩增产物用１．０％的琼脂糖凝胶电泳分析．
Ａｔ４ｇ１９４３０ 上 下 游 特 异 引 物 分 别 为，（５′－
ＣＴＡＣＴＴＴＣＣＡＣＣＡＣＡＡＡＡＴＣＴＣＧ－３′） 和 （５′－
ＴＣＴＡＣＣＡＣＡＧＣＣＡＴＡＧＴＧＴＴＡＣＴＣＴ－３′）．
４２１１
第５期 　　 王　翔，等：拟南芥中一个参与热胁迫应答基因功能的初步研究 　
Ａｃｔｉｎ 上 下 游 引 物 分 别 （５′－ＧＴＴＧＧＴＧＡＴＧ－
ＡＡＧＣＡＣＡＡＴＣＣＡ－３′）和 （５′－ＧＴＴＧＧＴＧＡＴ－
ＧＡＡＧＣＡＣＡＡＴＣＣＡ－３′）．
热表型分析：将正常条件生长７ｄ的野生型和
突变体幼苗移至４５℃黑暗环境处理９０ｍｉｎ，处理后
移至组培室恢复生长４ｄ，拍照．分别统计热处理前
后野生型和Ａｔ４ｇ１９４３０突变体幼苗的存活率．
３　结果与分析
３．１　Ａｔ４ｇ１９４３０基因的生物信息学分析
拟南芥 Ａｔ４ｇ１９４３０基因全长４８３ｂｐ，位于４
号染色体上，只包含一个外显子．经ＰｒｏｔＰａｒａｍ预
测表明，Ａｔ４ｇ１９４３０基因共编码１６０个氨基酸，蛋
白质分子式为 Ｃ８１８Ｈ１３０５Ｎ２２９Ｏ２４２Ｓ７，相对分
子质量为１８．４４４１ｋＤ，理论等电点为９．５６，半衰
期为３０ｈ，不稳定参数为５７．０３，属于不稳定蛋白．
在ＮＣＢＩ数据库搜索到６个来自其它物种的同源
基因 （图１Ａ），对其蛋白质氨基酸序列进行了比
对并构建了它们之间的进化关系树 （图１Ｂ）．
图１　Ａｔ４ｇ１９４３０同源基因氨基酸序列比对
Ａ：Ａｔ４ｇ１９４３０同源基因氨基酸序列比对；Ｂ：Ａｔ４ｇ１９４３０同源基因进化树．
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｏｆ　Ａｔ４ｇ１９４３０ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｇｅｎｅｓ
３．２　Ａｔ４ｇ１９４３０基因的组织特异性分析
利用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ的方法对拟南芥不同组
织中Ａｔ４ｇ１９４３０基因在的表达情况进行了研究．
结果表明，该基因在拟南芥根、茎、叶、花、果
实中均有表达，但在叶中的表达水平最高 （图２）．
把根中Ａｔ４ｇ１９４３０基因表达量定为１，茎、叶、
花、果实中相对表达量分别为根中的１．２倍、
４．９１倍、３．３１倍、１．５倍．
图２　Ａｔ４ｇ１９４３０基因表达模式分析
Ｆｉｇ．２　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　Ａｔ４ｇ１９４３０
５２１１
　 四川大学学报 （自然科学版） 　 第５２卷
３．３　Ａｔ４ｇ１９４３０蛋白的亚细胞定位
强表达Ａｔ４ｇ１９４３０－绿色荧光蛋白 （ｇｒｅｅｎ　ｆｌｕ－
ｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ， ＧＦＰ） 的 载 体 ｐＢＩ２２１－
Ａｔ４ｇ１９４３０－ＧＦＰ转化野生型拟南芥原生质体．激
光共聚焦显微镜观察细胞中ＧＦＰ的信号，结果显
示其主要定位在细胞质中 （图３）．
３．４　Ａｔ４ｇ１９４３０基因在非生物胁迫条件下的表达
生长７ｄ的野生型拟南芥进行非生物胁迫的时
间梯度处理：ＮａＣｌ（３００ｍＭ，０～６ｈ），ＡＢＡ
（１００μＭ，０～６ｈ），低温 （４℃，０～６ｈ）以及高温
（３８℃，０～７ｈ）热激 （ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ，ＨＳ）处理并
提取总ＲＮＡ，做梯度诱导表达谱分析．结果表明，
Ａｔ４ｇ１９４３０不受ＡＢＡ的诱导，ＮａＣｌ和低处理时
表达量会有略微的变化，但当受到热胁迫时其表
达量有非常显著提升．
３．５　Ａｔ４ｇ１９４３０基因突变体鉴定及其热表型分析
经生物信息学分析发现Ａｔ４ｇ１９４３０只有一个
外显子，其突变体中 Ｔ－ＤＮＡ插入在该基因的３′
端 （图５，Ａ）．在ＤＮＡ水平 （图５，Ｂ）和ＲＮＡ
水平 （图５，Ｃ）鉴定了该突变体，表明 Ｔ－ＤＮＡ
的插入使得突变体中Ａｔ４ｇ１９４３０完全被敲除，可
供后续实验使用．
将在 ＭＳ 平 板 生 长 ７ ｄ 的 野 生 型 和
Ａｔ４ｇ１９４３０突变体移入４５℃黑暗环境处理９０
ｍｉｎ，处理完后移至组培室恢复生长４ｄ，拍照，并
统计其存活率 （图５Ｄ、Ｅ）．实验结果表明，在受
到热激 （ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ，ＨＳ）处理 （４５℃）并回复
生长４ｄ后，野生型和Ａｔ４ｇ１９４３０突变体的存活
率都有所下降，然而相对野生型突变体存活率的
下降更为明显，对三次重复实验中野生型和突变
体存活率进行了统计，其存活率分别为２１．４％、
４．７％ （图５Ｅ），Ａｔ４ｇ１９４３０突变体表现出对热胁
迫的不耐受．
４　讨　论
热胁迫会延缓植物的生长和发育，并且当温
图３　Ａｔ４ｇ１９４３０蛋白的亚细胞定位
Ｆｉｇ．３　Ｓｕｂｃｅｌｕｌａｒ　ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｔ４ｇ１９４３０ｐｒｏｔｅｉｎ
度超过一定的范围后能引起细胞程序性死亡从而
使植物致死［２３］．通过对模式植物拟南芥的研究发
现，其中存在大量热胁迫响应基因，它们大多编
码热转录因子 （ＨＳＦ）与热激蛋白 （ＨＳＰｓ）．植
物受到热胁迫会导致 ＨＳＦ表达量的提升，进而又
会引起其下游 ＨＳＰｓ表达水平的上调．ＨＳＰｓ作为
分子伴侣能够帮蛋白质的折叠以及稳定蛋白结构，
因此 ＨＳＰｓ表达量升高导致植物对热胁迫产生一
定的耐受，使其能够更好的应对高温环境，提高
在高温环境下的存活率［２０］．
本实验室在拟南芥中发现了一个可能受热诱
导的基因Ａｔ４ｇ１９４３０，对其的组织特异性情况进
行了研究，发现该基因在拟南芥的根、茎、叶、
花、果实中均有表达，但在叶中的表达量最高
（图２）．亚细胞定位的结果表明，Ａｔ４ｇ１９４３０基因
所编码的蛋白主要定位在细胞质中 （图３）．Ｒｅａｌ－
ｔｉｍｅ　ＰＣＲ分析了Ａｔ４ｇ１９４３０基因在热胁迫时的表
达情况，发现在受热胁迫１ｈ和３ｈ之后，该基因
的表达量会分别上升１２０和１６０余倍 （图４），暗
示其 可 能 参 与 拟 南 芥 的 热 信 号 转 导．订 购
Ａｔ４ｇ１９４３０基因的突变体并筛选得到了纯合株系
（图５Ｂ、Ｃ），分析了突变体和野生型的表型．结
果表明，在正常生长条件下Ａｔ４ｇ１９４３０基因突变
体和野生型株系都能够正常生长，并且并二者之
间没有差异．然而在热胁迫条件下，与野生型相比
突变体株系表现出了对热胁迫的敏感，其存活率
明显 下 降 （图 ５ Ｄ、Ｅ）．以 上 结 果 表 明，
Ａｔ４ｇ１９４３０的表达受热诱并且该基因的缺失会导
致拟南芥对热胁迫的耐受降低，说明该基因参与
了拟南芥的热信号转导并发挥了负调控的作用．
６２１１
第５期 　　 王　翔，等：拟南芥中一个参与热胁迫应答基因功能的初步研究 　
图４　非生物胁迫下Ａｔ４ｇ１９４３０的表达分析
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ａｔ４ｇ１９４３０ｕｎｄｅｒ　ａｂｉｏｔｉｃ　ｓｔｒｅｓｓ
图５　Ａｔ４ｇ１９４３０基因突变体鉴定及其热表型分析
Ａ：Ａｔ４ｇ１９４３０基因只有一个外显子，Ｔ－ＤＮＡ插入在该基因的３′端；Ｂ，Ｃ：ＤＮＡ、ＲＮＡ水平鉴定Ａｔ４ｇ１９４３０突变体；Ｄ、Ｅ：
Ａｔ４ｇ１９４３０基因突变体和野生型的热表型及其存活率
Ｆｉｇ．５　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｔ４ｇ１９４３０Ｔ－ＤＮＡ　ｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｌ　ｍｕｔａｎｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ａｔ４ｇ１９４３０ｍｕｔａｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｃｅ
７２１１
　 四川大学学报 （自然科学版） 　 第５２卷
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ｔｒｏｌｓ　Ａｂｓｃｉｓｉｃ　Ａｃｉｄ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ　ａｎｄ　Ｎｏｎ－Ａｂｓｃｉｓｉｃ
Ａｃｉｄ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　Ａｂｉｏｔｉｃ　Ｓｔｒｅｓｓ ［Ｊ］．
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ｄｕｃｅｄ　ａｎｄ　ｂａｓａｌ　ｔｈｅｒｍｏｔｏｌａｒａｎｃｅ　ａｎｄ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｒｏｏｔ
ｇｒｏｗｔｈ ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，２００２，１４：１６２１．
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［２１］　Ｙａｎｇ　Ｊ　Ｙ，Ｓｕｎ　Ｙ，Ｓｕｎ　Ａ　Ｑ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｉｎｖｏｌｖｅ－
ｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ　ＨＳＰ１００／ＣｌｐＢ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｃｑｕｉｒｅｄ
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ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙ－
ｔｏｓｏｌｉｃ　ａｓｃｏｒｂａｔｅ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ａｎｄ　ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ　ｏｆ
ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ａｒｅ　ｅａｒｌｙ　ｅｖｅｎｔｓ　ｉｎ　ｈｅａｔ
ｓｈｏｃｋ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｃｅｌ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　ｔｏｂａｃｃｏ
ｂｒｉｇｈｔ－ｙｅｌｏｗ　２ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００４，
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８２１１