全 文 ：拟南芥LFR原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备 *
高 宁 王志娟 曾 博 崔素娟 **
(河北师范大学生命科学学院分子细胞生物学实验室，石家庄 050016)
摘要 拟南芥中有一类含ARM结构域的蛋白质，研究表明它们中的一些在植物的生长发育和激素应答等方面发挥着重要的
作用.在拟南芥突变体筛选中，获得了一个推测编码蛋白含 ARM重复序列的新基因突变体 lfr(leafandflowerrelated
mutant)，它在叶子和花的发育过程中表现出较明显的表型.为进一步研究该基因编码蛋白的生物学功能及其分子作用机制，
构建了pGEX-2TGST∶LFR融合蛋白重组表达载体，将重组质粒转化到工程菌中诱导表达菌体蛋白，经SDS-聚丙烯酰胺凝
胶电泳检测，结果表明，融合重组蛋白成功获得了高效表达，分子质量在77ku左右.重组蛋白经谷胱甘肽S-转移酶(GST)
标签蛋白亲和层析法纯化，SDS-PAGE制备胶割胶富集，电洗脱法纯化后得到纯度较高的抗原.经对新西兰兔进行5次免
疫，获得了多克隆抗血清.采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化，结果得到只识别LFR重组蛋白的抗血清.进一步提取
拟南芥野生型及突变体的核蛋白，经蛋白质印迹检测，结果显示，在分子质量50ku左右处出现特异的蛋白质条带，证明所
制备的抗血清可以与拟南芥LFR蛋白特异性结合.
关键词 拟南芥，LFR重组蛋白，原核表达，多克隆抗体
学科分类号 Q78
*国家重大科学研究计划项目(2006CB910600),教育部新世纪优秀人
才支持计划(NCET-06-0256).
**通讯联系人.
Tel:0311-86269144,E-mail:cuisujuan@263.net
收稿日期：2008-01-16，接受日期：2008-03-13
生物化学与生物物理进展
ProgressinBiochemistryandBiophysics
2008,35(9):1059~1064
www.pibb.ac.cn
研究报告ResearchPapers
ARM重复序列是一类重要的介导蛋白质-蛋
白质相互作用的结构域，由42个氨基酸构成高度
保守的α右手超螺旋，普遍存在于真核细胞中，参
与了信号转导，胞质内调节，核转运，转录调节和
泛素化等重要的生理过程[1].第一个被发现的具有
ARM重复结构域的蛋白质是果蝇β-catenin蛋白，
随后在植物中也发现了大量含有此结构域的功能蛋
白，如芸苔属植物中的ARC1，土豆中的PHOR1，
烟草中的NtPUB4，水稻中的SPL11等，它们在植
物花粉自交不亲和，对光和赤霉素的应答和调控细
胞凋亡与防御反应中发挥着重要功能[2～5].
推测拟南芥中含有108个具有ARM结构域的
蛋白质，已有研究表明它们中的一些在拟南芥的生
长发育和激素应答方面发挥着重要的调节作
用[1,6～8]，但仍有很多这类蛋白质的功能还未知.我
们通过正向遗传学方法获得了一个推测含ARM结
构域的新基因的点突变体，它在叶子和花的发育过
程中表现出严重的表型，将其命名为 lfr(Wang
Zhijuan等，待发表).
本研究在利用基因工程手段获得了 LFR基因
基础上，将该基因连接到表达载体上，转入工程菌
中诱导表达，利用纯化的重组蛋白制备了可以识别
拟南芥LFR蛋白的多克隆抗体，这为从分子水平
上研究该基因功能奠定了基础.
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂. BamHⅠ和 EcoRⅠ限制性内切
酶购自Takara公司；T4DNA连接酶购自Takara公
司；胶回收试剂盒购自上海生工生物技术公司；
DNA分子质量标准购自天根公司；Glutathione
SepharoseFF4B购自 GE公司；弗式佐剂购自
Sigma公司；碱性磷酸酶(AP)标记的山羊抗兔抗体
为北京中杉公司产品；GST抗体购自Amersham公
司；低分子质量蛋白标准购自Fermentas公司.
1.1.2 载体与菌株.pGEX-2T表达载体，Roseta
工程菌均由本室保存.
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1.1.3 实验动物.成年雄性新西兰兔2.5kg，购自
河北医科大学动物实验中心.
1.2 方法
1.2.1 重组质粒构建与鉴定.用BamHⅠ和EcoRⅠ
酶切已克隆载体 pGEM-T-LFR，回收插入的 LFR
片段，连接至经同样酶切的 pGEX-2T表达载体，
构建重组表达质粒 pGEX-2TGST∶LFR，转化至
Roseta工程菌.提取质粒酶切，对插入片段大小
进行琼脂糖电泳鉴定.
1.2.2 重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达.鉴定
好的单克隆接种于5mlLB液体培养基(50mg/L的
Amp)，180r/min，37℃培养过夜，再按1∶50的
比例转接于含 100mlLB液体培养基(50mg/L的
Amp)的三角瓶中，37℃摇床培养至吸光度在
0.6～0.8之间，加异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)至终
浓度1mmol/L，37℃诱导表达，分别于1h，3h，
5h收集菌体.
1.2.3 重组蛋白表达检测和溶解性检测.诱导菌
液及未诱导菌液2ml，12000r/min离心，弃上清，
向沉淀中加入100l上样缓冲液(2×)，混匀，金属
浴加热 10min，12%SDS-PAGE分离胶电泳检
测.离心收集 100ml诱导后 3h菌体，用 PBS
(0.14mmol/LNaCl，0.0027mmol/LKCl，0.01mmol/L
Na2HPO4，0.0018mmol/LKH2PO4，pH7.3)重悬菌
体，于冰水上以超声波(300W，10s超声，10s间
歇)裂解菌体，于4℃，25000g，10min离心，分
别取上清和沉淀加入50l上样缓冲液(2×)，混匀，
金属浴加热10min，12%分离胶电泳检测.
1.2.4 GST亲和层析分离与电洗脱法纯化表达蛋
白.将诱导后 3h菌体裂解液离心后，上清用
0.45m滤膜过滤，上样(流速0.2ml/min)，PBS淋
洗 10个柱体积(流速 1ml/min)，洗脱液(10mmol
还原型谷胱甘肽，50mmolTris)洗脱(流速
1ml/min)，收集洗脱峰，用 SDS-PAGE检测融合
蛋白的纯度.将数次收集的洗脱峰蛋白用 12%
SDS-PAGE进行分离，将电泳后的凝胶用蒸馏水淋
洗干净，再浸泡在预冷的0.25mol/LKCl中染色，
2～5min后即可显色，显色后从凝胶上切下目的
带，-20℃保存.收集一定量后，将蛋白质条带切
碎置于透析装置中加入适量电泳缓冲液，电泳槽中
恒压 80V电泳，3.5h，换不含 SDS的电极缓冲
液，恒压80V电泳，0.5h，收集洗脱蛋白存放于
-20℃.用12%SDS-PAGE检测其分离产物纯度.
1.2.5 兔抗血清制备.将纯化好的表达蛋白与弗氏
完全佐剂混合乳化，使目的蛋白浓度为1g/L，作
为免疫原，按每只兔每次1ml剂量，背部脊柱两
侧6点以及腹股沟注射，共8点，首次免疫皮内注
射，以后皮下注射，每次间隔14天，每次剂量与
第一次相同，与弗氏不完全佐剂混合乳化，共加强
免疫5次.第3次免疫后进行试血，于第5次免疫
后第8天颈动脉插管收集全血，分离血清，补体灭
活，加入叠氮钠分装，-80℃冷冻保存.
1.2.6 兔抗血清纯化.制备抗体吸附用的大肠杆
菌全菌蛋白：诱导含有 pGEX-2TGST表达载体的
工程菌3h，于4℃以5000r/min离心10min，回
收菌体后用PBS重悬浮菌体，溶菌裂菌，超声裂
菌.加入丙酮，室温静置30min沉淀蛋白，4℃，
4000r/min离心 20min，回收蛋白质沉淀后加入
100mmol/LNaCl重悬蛋白质沉淀，丙酮重复沉淀
蛋白质1次，4℃，4000r/min离心20min，回收
蛋白质沉淀37℃约24～48h直至蛋白质干燥.将
蛋白质研磨成粉状，10mlPBS洗2次，回收蛋白
质沉淀，加入PBS混悬蛋白质沉淀使每毫升混悬
液含有0.1g蛋白质，分装并储存于-20℃.抗血
清的纯化：将 1ml的多克隆抗血清与等体积的
上述蛋白质混悬液混合，室温振荡 3h后，
12000r/min离心10min，收集上清，-80℃保存
备用.
1.2.7 拟南芥核蛋白提取.选取拟南芥col野生型
9天小苗 2g，加入 4ml提取缓冲液(0.3mol/L蔗
糖，10mmol/LKCl，10mmol/LNaCl，15mmol/L
Tris-HCl，10mmol/L巯基乙醇，pH7.4)匀浆破碎
细胞，经三层滤膜过滤后弃去沉渣，将上清液
350g，4℃，8min离心，弃去上清，沉淀用含1%
TritonX-100的提取缓冲液重悬，350g，4℃，
8min离心，弃去上清，沉淀再用提取缓冲液重悬，
350g，4℃，8min离心收集，加入100l上样缓
冲液(2×)，混匀，金属浴加热 10min，-20℃
保存.
1.2.8 蛋白质印迹检测.将 pGEX-2T-GST∶LFR
Roseta表达菌，pGEX-2TGSTRoseta表达菌及拟
南芥col野生型9天小苗核蛋白经上样处理后进行
SDS-PAGE，通过半干电转仪转至 PVDF膜上
(22V，45min)，利用上述制备的免疫血清为一抗
(1∶500)，用碱性磷酸酶标记(AP)的羊抗兔二抗
(1∶500)，进行蛋白质印迹检测.
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高宁等:拟南芥LFR原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备2008;35 (9)
Fig. 1 Construction and identification of
pGEX-2T GST∶LFR by enzyme digest
Restrictiveenzymedigestionproductsofplasmidswereseparatedby1%
agarose stained with Goldview nucleic acid stain.M: DNA molecular
mass marker; *,← and! showed 1 380 bp, 880 bp and 500 bpLFR
fragmentpartlydigestedbyBamHⅠandEcoRⅠ.
2 结 果
2.1重组GST∶LFR融合蛋白表达载体的构建与
鉴定
在已克隆的 pGEM-TLFR基础上，构建拟南
芥 LFR基因原核表达载体 pGEX-2TGS∶LFR.
BamHⅠ，EcoRⅠ双酶切pGEM-TLFR重组载体得
到 1 380 bp的 LFR基因，同时用相同的双酶切
pGEX-2T载体得到高分子线性片段(图 1a).将
1380bp的LFR基因与双切后的pGEX-2T线性片
段的连接产物，转化Rosetta筛选出阳性克隆，提
取质粒进行双酶切鉴定(图1b).由于 LFR基因内
部含有 BamHⅠ酶切位点，因此用 BamHⅠ、
EcoRⅠ双酶切可得到完整的LFR基因1380bp和
其部分酶切片段500bp和880bp.进一步测序表
明得到的重组质粒pGEX-2TGS∶LFR中LFR序
列及融合阅读框正确.
2.2重组 GST∶LFR融合蛋白在大肠杆菌中的
表达
将鉴定正确带有 pGEX-2T-GS∶LFR载体的
Rosetta菌株，接种到 LB培养基中，培养至 A600
为 0.6～0.8生长期时，加诱导剂 IPTG，分别于
1h、3h、5h后取样，12%不连续 SDS-PAGE检
测与诱导前菌体全蛋白相比，诱导1h后，即在约
77ku处有目的蛋白条带的出现，随着诱导时间的
延长，该蛋白质条带的量有所增加，3 h时较 5 h
时还要多些.取3h诱导菌体超声破碎后离心，收
集上清，12%SDS-PAGE检测，表明该重组表达蛋
白以可融性形式表达(图2)，离心收集的菌体沉淀
蛋白中经检测也含有重组蛋白，可能是因为沉淀中
有未破碎的菌体和以包涵体形式表达的重组蛋白.
2.3 GST∶LFR重组蛋白的分离纯化
诱导 3 h的菌体蛋白经 GST标签亲和层析分
离后，得到一个单一峰，将该峰收集液经 12%
SDS-PAGE分离，此峰中含有大量的77ku目标蛋
白和少量小分子质量的杂蛋白或降解产物的小分子
片段，为得到较纯的77ku重组融合蛋白，将收集
到的洗脱峰蛋白进行 SDS-PAGE电泳分离，切取
77 ku蛋白质条带，电洗脱纯化，进一步
SDS-PAGE电泳检测证实得到了较纯的77ku目的
条带，且纯度大于95%(图3).所制得的抗原可以
用于免疫动物制备抗血清.
ku
14
21
31
43
66
97
1 2 3 4 5 6 7
ku
31
43
66
97
1 2 3 4 5
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2.4抗血清的纯化及特异性检测
经5次免疫后获得了兔抗血清，为检测抗血清
识别抗原的特异性，进行了蛋白质印迹分析
(图4).所制备的抗血清anti-GST∶LFR既可以识
别工程菌的重组GST∶LFR融合蛋白，同时也可
以识别GST标签蛋白.商品化抗GST抗体识别条
带与我们所制备的抗血清识别条带一致.为了去除
识别GST标签及菌体蛋白的非特异性抗体，采用
丙酮沉淀法制备了含有GST的菌体蛋白，免疫沉
淀方式对所制备的抗血清进行了纯化.经蛋白质免
疫印迹检测，表明纯化后的 anti-LFR抗血清只识
别重组LFR蛋白，不再识别GST标签.这说明我
们得到了特异性识别重组LFR的抗血清anti-LFR.
2.5抗血清可识别拟南芥内源LFR蛋白
进一步检测所制备的 anti-LFR抗血清是否识
别拟南芥中的天然LFR蛋白.由于我们已经观察
到 LFR在细胞核内分布(Wang Zhijuan,待发表)，
因此富集了拟南芥野生型和lfr突变体9天幼苗的
细胞核，制备了核蛋白样品，进行了蛋白质免疫印
迹分析(图5).结果表明，anti-LFR抗血清可以在
野生型中特异识别一条分子质量约为 50 ku的条
带，这与分析推测拟南芥LFR蛋白的分子质量一
致，而在lfr突变体和免疫前血清在相似的位置无
识别条带.这说明我们所制备的 anti-LFR抗血清
可以特异识别植物中的天然蛋白.
3 讨 论
利用基因工程获得融合蛋白是目前分子生物学
常用的一种方法，本文采用了原核工程菌表达重组
蛋白的方式获得目标蛋白.通过对LFR基因开放
读码框的分析，发现它含有大量稀有密码子编码的
氨基酸，因此本文选用了Rosetta表达菌株，它含
有一个可兼容的氯霉素抗性质粒，可提供 AUA
AGGAGACUACCC GGA等 6种 tRNA，实现在
天然大肠杆菌中进行原核蛋白和真核蛋白“通用
形”翻译.由于LFR原核表达重组蛋白存在于菌
体可溶性部分(图 2)，这为进一步纯化提供了便
捷.同时我们观察到重组 GST∶LFR融合蛋白在
亲和层析过程中，出现降解现象(图3)，说明该蛋
白质不是十分稳定，分析原因我们认为可能是亲和
层析时间较长造成的.为得到比较纯的目的蛋白我
们又采用了制备胶富集目的蛋白条带，电洗脱回收
方式，得到了满足抗体制备需要的高纯度抗原
(图 3)，经免疫兔后得到了效价较高的抗血清
(图4).
多克隆抗体的制备方法成熟、过程简单，因此
被广泛使用，但由于其中除了含有高效价的抗目的
蛋白抗体外，也有一部分抗菌体中其他非目的蛋白
和所连标签蛋白的抗体，所以特异性往往受到影
响.目前去除抗血清中交叉反应的抗体多采用特异
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PurificationofArabidopsisLFRRecombinantProteinin
EngineeringBacteriaandPreparationofItsAntibody*
GAONing,WANGZhi-Juan,ZENGBo,CUISu-Juan**
(InstituteofMolecularandCelBiology,HebeiNormalUniversity,Shijiazhuang050016,China)
Abstract GenomeofArabidopsishasakindofgenesencodingproteinswithARMrepeatdomainsandsomeof
theseproteinsareknowntoplayimportantrolesinplantdevelopmentandresponsestohormone.AnArabidopsis
mutantlfrwithadistinctphenotypewasgotinleafandflowerdevelopment.Thegeneispredictedtoencodea
proteinwithARM repeatdomains.Inordertostudyitsfunctionandmolecularmechanism,recombination
expressionplasmidpGEX-2TGST∶LFRwasconstructedandtransformedintothehostbacteriastrainRoseta.
ThenIPTGwasusedtoinducetherecombinantproteinexpressioninengineeringstrain.Theexpressionproducts
weredetectedby12%SDS-PAGE.TheGST∶LFRfusionproteinwasexistedinsolubleformwitharelative
molecularmass77ku,whichisfitwiththemolecularmasssupposedfromgenecodingframe.Afterpurification
byGST-tagafinitychromatographyandelectroelution,thefusionproteinwasusedasantigentoprepare
polyclonalantiseruminrabbits.Afterthefifthinjectionofantigen,theantiserumwasobtainedandfurtherpurified
bydecreasednonspecificbacteriaandGST-tagantibodywithmethodofimmuno-precipitation.Westernblot
analysisshowedthatthepurifiedantiserum,raisedagainsttherecombinationLFRproteininrabbits,couldreactto
therecombinantproteinexpressedinRosetaspecificaly.AndthenthenuclearproteinsofArabidopsiswildtype
性选取亲和层析法，即借助目的蛋白通过抗原抗体
反应，吸附针对目的蛋白的特异抗体，再进行抗血
清的洗脱[9].但由于抗血清中含有大量的脂蛋白及
具有较强疏水性蛋白，所以采用亲和层析法不但会
降低纯化效率还会缩短层析柱使用寿命，另一方面
在分离抗原-抗体复合物时由于使用了低pH缓冲
液还会损伤抗体活性使抗体效价大幅度下降[10].本
文选择了非特异性取代纯化法，即利用含有表达
GST标签蛋白在内的菌体全蛋白，通过抗原抗体
反应去除非特异性交叉反应抗体，在实现了去除非
特异抗体的同时又没有对效价造成明显影响(图4)，
一次可纯化大量抗血清，且过程简单、省时省力.
本文制得的抗体不只是识别原核表达的重组蛋白
(图4)，而且还可以特异识别拟南芥中的天然蛋白
(图5)，说明该抗体是高效特异的.多克隆抗体的
成功制备为研究拟南芥LFR蛋白功能奠定了基础，
也为其免疫定位和研究与其相互作用的蛋白提供了
工具.
参 考 文 献
1 SamuelMA,SaltJN,ShiuSH,etal.Multifunctionalarmrepeat
domainsinplants.IntRevCytol,2006,253:1～26
2 AberleH,BauerA,StappertJ,etal.!-cateninisatargetforthe
ubiquitin-proteasomepathway.EMBOJ,1997,16(13):3797～3804
3 AmadorV,MonteE,Garcia-MartinezJL,etal.Gibberelinssignal
nuclearimportofPHOR1,aphotoperiod-responsiveproteinwith
homologytoDrosophilaarmadilo.Cel,2001,106(3):343～354
4 AzevedoC,Santos-RosaMJ,ShirasuK.TheU-boxproteinfamily
inplants.TrendsPlantSci,2001,6(8):354～358
5 DingwalC,LaskeyRA.Nuclearimport:ataleoftwosites.Cur
Biol,1998,8(25):R922～924
6 YasunariF,MikiF.AREB1isatranscriptionactivatorofnovel
ABRE-dependentABA signalingthatenhancesdroughtstress
toleranceinArabidopsis.PlantCel,2005,17(12):3470～3488
7 DownesBP,StuparRM,GingerichDJ,etal.TheHECT
ubiquitin-proteinligase(UPL)familyinArabidopsis:UPL3hasa
specificroleintrichomedevelopment.PlantJ,2003,35(6):729～
742
8 GuTS,MazzurcoM.Bindingofanarmrepeatproteintothekinase
domainoftheS-locusreceptorkinas.ProcNatlAcadSciUSA,
1998,95(1):382～387
9 张晓楠,黄 勇.兔抗Red蛋白抗血清的纯化及MC3T3细胞中
Red蛋白表达时相的分析.科学技术与工程,2006,6(6):681～
685
ZhangXN,HuangY.ScienceTechnologyandEngineering,2006,6
(6):681～685
10邢小红,吴元明,黄 高.兔抗人Bit1抗血清的制备及其纯化。
细胞与分子免疫学杂志.2004,20(6)：764～768
XingXH,WuYM,HuangG.JCelMolImmun,2004,20(6):
764～768
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生物化学与生物物理进展 Prog. Biochem. Biophys. 2008;35 (9)
科学出版社科学出版中心生物分社新书推介
中国食品安全控制研究
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太湖蓝藻的历史发展与水华灾害 (精装)
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本书是一部从淡水生态学、环境地球化学、遥感、水动力学等视点分析太湖蓝藻的历史发展与水华
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产品中蓝藻的次生代谢产物——微囊藻毒素(CMC)的污染现状，第三章描述太湖沉积物中的氮、磷分布格
局，第四章介绍氮、磷输入和太湖湖水中TN和TP浓度的历史变化和未来趋势，第五章分析“引江”是
否真能“济太”，第六章描述2007年无锡贡湖水厂取水口污染事件，第七章讨论2007年太湖整体水环境
是否发生了巨变，第八章描述贡湖湾生态系统的灾变历程，第九章分析侵袭贡湖水厂取水口的污水团为
何物、来自何方，第十章讨论拿什么来拯救太湖.本书重点在2007年无锡贡湖水厂出现的水污染事件之谜，试图分析拿什
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本书可供湖泊学、环境生物学、环境地球化学、水环境工程、藻类学、生态学、生态水文学、水环境遥感、水产学等相
关领域的研究人员和管理人员、大专院校师生参考.
*This work was supported by grants The National Key Scientific Program (2006CB910600) and Program of New Century Excellent Talents in
University(NCET-06-0256).
**Correspondingauthor.Tel:86-311-86269144,E-mail:cuisujuan@263.net
Received: January16,2008 Accepted: March13,2008
and mutant were extracted and separated by SDS-PAGE. Western blot assays revealed that there was a protein
band,witharelativemolecularmass50ku,indicatingthatantiserumcouldreacttothenativeproteinexpressedin
Arabidopsisspec fically.
Key words Arabidopsis,LFRrecombinantprotein,prokaryoticexpression,polyclonalantibody
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