全 文 ：第３７卷第４期
２０１４年７月
河 北 农 业 大 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＨＥＢＥＩ
Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．４
Ｊｕｌ．２０１４
文章编号：１０００－１５７３（２０１４）０４－００４７－０６　 ＤＯＩ：１０．１３３２０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊａｕｈ．２０１４．００８７
ＡＰ２２．６５基因调控拟南芥开花的机制分析
张　靖，　樊锦涛，　蒋琛茜，　王冠宇，
董丽萍，　邢继红
（河北农业大学 真菌毒素与植物分子病理学实验室，河北 保定　０７１００１）
摘要：为揭示ＡＰ２２．６５基因在拟南芥开花过程中的调控机制，对ＡＰ２２．６５基因与拟南芥开花调控途径的关系
进行了分析，发现拟南芥ａｐ２２．６５突变体中赤霉素途径基因ＳＰＹ，光周期途径基因ＧＩ、ＣＯ和ＦＴ，春化途径基
因ＶＮＲ２、ＶＩＮ４和ＦＬＣ，整合途径基因ＬＦＹ、ＴＦＬ１和ＥＭＦ１的表达水平均明显下调，ＦＶＥ、ＣＣＡ１、ＶＮＲ１和
ＳＯＣ１表达变化不明显。ＣＯ超表达突变体 ＷＴ／ＣＯ和ｓｐｙ、ｇｉ、ｌｈｙ突变体中ＡＰ２２．６５基因的表达水平均不同
程度上调，而ＦＬＣ超表达突变体 ＷＴ／ＦＬＣ中ＡＰ２２．６５基因的表达水平明显下调。春化处理后，ａｐ２２．６５、回
复及超表达突变体的花期和ＡＰ２２．６５基因的表达变化不明显；赤霉素处理后，ａｐ２２．６５突变体的花期明显延
迟，且ＡＰ２２．６５ 基因的表达明显增强，明确ＡＰ２２．６５ 基因主要参与光周期途径和赤霉素途径调控拟南芥
开花。
关　键　词：ＡＰ２２．６５；拟南芥；开花；调控途径
中图分类号：Ｓ１８４ 文献标志码：Ａ
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎｇ，ＦＡＮ　Ｊｉｎ－ｔａｏ，ＪＩＡＮＧ　Ｃｈｅｎ－ｘｉ，ＷＡＮＧ　Ｇｕａｎ－ｙｕ，
ＤＯＮＧ　Ｌｉ－ｐｉｎｇ，ＸＩＮＧ　Ｊｉ－ｈｏｎｇ
　　收稿日期：２０１４－０３－３１
　　基金项目：国家自然科学基金（３１２００２０３）；河北省自然科学基金（Ｃ２０１２２０４０３２）；高等学校博士学科点专项科研基金
（２０１２１３０２１２０００７）．
　　作者简介：张　靖（１９８５－），女，河北省保定人，助理实验师，研究方向：植物学．
　　通讯作者：邢继红（１９７７－），女，河北省东光人，博士，教授，研究方向：分子生物学．Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｎｇｊｉｈｏｎｇ２０００＠１２６．ｃｏｍ
（Ｍｙｃｏｔｏｘｉｎ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ　０７１００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｒｅｖｅａｌ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ，
ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＡＰ２２．６５　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｗｅｒｅ
ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａｐ２２．６５　ｍｕｔａｎｔ　ｗａｓ　ｎｏｔｅｄ　ｆｏｒ　ＳＰＹｉｎ　ｔｈｅ　ＧＡ　ｐａｔｈ－
ｗａｙ；ｋｅｙ　ｇｅｎｅｓ　ＧＩ，ＣＯ，ａｎｄ　ＦＴｉｎ　ｔｈｅ　ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ　ｐａｔｈｗａｙ；ｔｈｅ　ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｐａｔｈｗａｙ　ｇｅｎｅｓ
ＶＮＲ２，ＶＩＮ４　ａｎｄ　ＦＬＣ；ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ－ｐａｔｈｗａｙ　ｇｅｎｅｓ　ＬＦＹ，ＴＦＬ１　ａｎｄ　ＥＭＦ１．Ｔｈｅ　ｅｘ－
ｐｒｅｓｓｅｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５ｉｎ　ｔｈｅ　ＷＴ／ＣＯ，ｓｐｙ，ｇｉ　ａｎｄ　ｌｈｙ　ｍｕｔａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｅｘｔｅｎｔｓ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５　ｗａｓ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ＷＴ／ＦＬＣ　ｍｕｔａｎｔ．Ｔｈｅ　ｄａｔｅ　ｏｆ
ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｐ２２．６５　ｍｕ－
ｔａｎｔ　ａｎｄ　ＡＰ２２．６５　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｄａｔｅ　ｏｆ　ａｐ２２．６５　ｍｕｔａｎｔ　ｗａｓ　ｐｕｔ　ｏｆｆ
ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ａｐ２２．６５　ｍｕｔａｎｔ　ｒａｉｓｅｄ　ｃｌｅａｒｌｙ　ａｆｔｅｒ　ＧＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅｓｅ
ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＡＰ２２．６５　ｇｅｎｅ　ｍａｙ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ　ａｎｄ　ＧＡ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｔｏ
河 北 农 业 大 学 学 报 第３７卷　
ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＡＰ２２．６５；Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ；ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ；ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｐａｔｈｗａｙ
　　高等植物开花决定了植物生殖发育的时期和质
量，对于植物的发育具有重要的影响。对植物调控
开花时间的分子机制进行研究，对于调节植物发育
和生殖、提高农作物的产量和品质具有重要的意
义［１］。拟南芥开花受光周期［２－３］、春化［４－５］、自主［６］和
赤霉素［７］途径共同调节，再调控一些下游关键基因
（ＦＴ、ＳＯＣ１、ＬＦＹ）的表达，构成一个复杂的信号网
络。在光周期途径中，ＧＩ、ＣＯ和ＦＴ 是该途径下游
的关键基因，ＧＩ通过上调ＣＯ 和ＦＴ 基因的表达而
促进拟南芥开花［８－１０］。自主开花途径是对光周期或
春化信号都不甚敏感的开花调控途径，该途径的相
关突变体，如ｆｃａ、ｌｄ、ｆｌｄ、ｆｌｋ、ｆｖｅ等突变体，在长
日照和短日照条件下均表现晚花表型，在短日照的
条件下，其晚花的表型更为明显。ＦＬＣ基因为春化
途径的下游关键基因，对花分生组织特性基因ＬＦＹ
的表达起抑制作用［１１－１２］。ＬＤ 基因对ＦＬＣ 的表达
起负调控作用，ＦＶＥ在冷应答反应和调控开花时间
方面具有双重作用。春化作用由２部分组成，首先
是对低温的响应，抑制ＦＬＣ基因的表达；然后是对
ＦＬＣ 基 因 表 达 低 水 平 状 态 的 维 持。ＶＩＮ３ 和
ＶＲＮ１、ＶＲＮ２ 分别在这２个阶段起主要作用［１３］。
赤霉素途径的基因也影响开花时间，其中ＧＡＩ、
ＲＧＡ和ＲＧＬ１是该途径的３个关键基因［１４］。拟南
芥开花调控的４条途径最终都是通过调控下游
ＡＰ１和ＬＦＹ 基因的表达，启动花的形态建成［１５－１８］。
笔者前期研究中，获得了一株早花的 Ｔ－ＤＮＡ插入
突变体，明确了其突变基因为 ＡＰ２２．６５。研究发
现，ａｐ２２．６５突变体在短日照条件花期明显提前，且
突变体中开花关键基因ＳＰＹ、ＦＬＣ、ＧＩ、ＣＯ、ＦＴ、
ＬＦＹ表达水平均显著下调；该基因的功能互补回复
植株的花期在长日照和短日照条件下均与野生型一
致，超表达植株的花期明显延迟。从而明确了
ＡＰ２２．６５基因为拟南芥的开花调控基因［１９］。但是，
ＡＰ２２．６５基因与拟南芥开花调控途径的关系尚不
清楚。
本研究通过分析ＡＰ２２．６５ 基因突变对拟南芥
开花途径相关基因表达的影响、开花途径相关突变
体中ＡＰ２２．６５基因的表达情况、春化和赤霉素处理
对ａｐ２２．６５突变体花期和ＡＰ２２．６５ 基因表达的影
响，以期明确ＡＰ２２．６５基因与拟南芥开花调控途径
的关系，为进一步揭示ＡＰ２２．６５基因调控拟南芥开
花的分子机制奠定基础。
１　材料与方法
１．１　供试材料
拟南芥野生型Ｃｏｌ－０、开花途径相关突变体ｓｐｙ
（ＳＡＬＫ＿０９０５８０）、ｇｉ（ＳＡＬＫ＿０９２７５７）、ｌｈｙ（ＳＡＬＫ＿
１４９２８７）、ＣＯ超表达突变体（ＷＴ／ＣＯ）、ＦＬＣ超表达
突变体（ＷＴ／ＦＬＣ）、ａｐ２２．６５ 突变体、回复突变体
（ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５）和 超 表 达 突 变 体 （ＷＴ／
ＡＰ２２．６５）均由河北农业大学真菌毒素与植物分子
病理学实验室提供。
１．２　ＡＰ２２．６５基因的生物信息学分析
应用软件ＰｒｏｔＰａｒａｍ对ＡＰ２２．６５ 进行理化性
质分析，利用ｈｔｔｐ：／／ｎｐｓａ－ｐｂｉｌ．ｉｂｃｐ．ｆｒ／分析蛋白
质的 二 级 结 构，利 用 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／
Ｔｏｏｌｓ／ｐｆａ／ｉｐｒｓｃａｎ／分析基因的保守结构域，利用
Ｍｏｄｅｌｅｒ软件构建ＡＰ２２．６５蛋白的三级结构，同时
利 用 ＳＡＶＥＳ （ｈｔｔｐ：／／ｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｍｂｉ．ｕｃｌａ．ｅｄｕ／
ＳＡＶＥＳ／）对预测的ＡＰ２２．６５蛋白结构进行质量评
估；最后从拟南芥 ＭＰＳＳ（Ｍａｓｓｉｖｅｌｙ　Ｐａｒａｌｅｌ　Ｓｉｇｎａ－
ｔｕｒｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）网 站 ｈｔｔｐ：／／ｍｐｓｓ．ｕｄｅｌ．ｅｄｕ／ａｔ／
ｍｐｓｓ＿ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ中查询ＡＰ２２．６５基因在拟南芥不
同组织中的表达数据，确定该基因的组织表达
规律。
１．３　ａｐ２２．６５突变体中开花调控基因的表达分析
利用 ＲＴ－ＰＣＲ 技术，检测拟南芥野生型和
ａｐ２２．６５突变体中的开花调控途径中重要基因
（ＳＰＹ、ＦＶＥ、ＦＬＣ、ＣＣＡ１、ＧＩ、ＣＯ、ＦＴ、ＶＮＲ１、
ＶＮＲ２、ＶＩＰ４、ＬＦＹ、ＴＦＬ１、ＥＭＦ１和ＳＯＣ１）的表达
情况。根据已知开花途径相关基因的序列，利用
ＰＲＩＭＥＲ５．０设计基因的特异性引物。ＰＣＲ的反应
体系为ｃＤＮＡ 模板１．０μＬ、ｄＮＴＰ（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）
２．０μＬ、Ｔａｑ酶（５Ｕ／μＬ）０．３μＬ、１０×Ｔａｑ　ｂｕｆｆｅｒ
２．５μＬ、引 物 （１０μｍｏｌ／Ｌ）各 ０．５μＬ，最 后 加
ｄｄＨ２Ｏ至２５μＬ。ＰＣＲ程序为９４℃５ｍｉｎ；９４℃
３０ｓ，退火３０ｓ，７２℃１ｍｉｎ，３４个循环；７２℃１０
ｍｉｎ。ＰＣＲ产物用１％的琼脂糖凝胶电泳进行检测。
８４
　第４期 张　靖等：ＡＰ２２．６５基因调控拟南芥开花的机制分析
１．４　开花途径相关突变体中ＡＰ２２．６５基因的表达
分析
利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测拟南芥开花途径相关
突变体ｓｐｙ、ｇｉ、ｌｈｙ、ＣＯ超表达突变体（ＷＴ／ＣＯ）、
ＦＬＣ超表达突变体（ＷＴ／ＦＬＣ）中ＡＰ２２．６５基因的
表达情况。ＰＣＲ体系和程序同１．２。
１．５　春化、赤霉素处理对ａｐ２２．６５突变体花期的影响
１．５．１　赤霉素处理　将拟南芥的野生型、ａｐ２２．６５
突变体、回复突变体（ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５）和超表达
突变体（ＷＴ／ＡＰ２２．６５）的种子消毒后，铺于含有
ＧＡ３（１００μｍｏｌ／Ｌ）的 ＭＳ平板上，短日条件下培养
１４ｄ，然后将野生型和各突变体的幼苗移栽后进行
正常培养，每周用ＧＡ３（１００μｍｏｌ／Ｌ）处理一次。
１．５．２　春化处理　将拟南芥的野生型、ａｐ２２．６５突
变体、回复突变体（ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５）和超表达突
变体（ＷＴ／ＡＰ２２．６５）的种子消毒后，铺于 ＭＳ平板
上，在长日条件下培养１ｄ后，将其置于在４℃条件
下处理４周。然后，将其置于短日条件下继续培养
１０ｄ后，将野生型和各突变体的幼苗移栽至营养土
中进行正常培养。
１．５．３　开花时间统计　从温室光照培养开始，到植
株抽薹、主茎长至０．５ｃｍ植株开花为止，计算开花
时间天数，并且在植株第１朵花开时的莲座叶片数
进行了统计，最少统计１５株。
１．６　春化、赤霉素处理对ＡＰ２２．６５基因表达的影响
提取春化和赤霉素处理的拟南芥野生型、
ａｐ２２．６５突变体、ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５回复突变体和
ＷＴ／ＡＰ２２．６５超表达突变体的总 ＲＮＡ，并反转录
合成其ｃＤＮＡ。以 ＡＰ２２．６５ 基因特异引物进行
ＲＴ－ＰＣＲ扩增，检测其在转基因株系中的表达情况。
２　结果与分析
２．１　ＡＰ２２．６５基因的生物信息学分析
２．１．１　ＡＰ２２．６５蛋白质的理化性质分析　应用生
物信息学软件ＰｒｏｔＰａｒａｍ对 ＡＰ２２．６５进行理化性
质分析，结果发现该蛋白相对分子质量４６．５ｋＤ，等
电点为９．１８，负电荷氨基酸残基总数为４９，正电荷
氨基酸残基总数为５２，蛋白在２８０ｎｍ下的吸光度
为０．８５３。蛋白不稳定指数为４５．１２（＞４０．００考虑
为不稳定），为不稳定蛋白，脂肪系数为７６．５５，总平
均疏水－０．４５６，是亲水蛋白。
２．１．２　ＡＰ２２．６５蛋白质的二级结构分析　利用在
线网站对该蛋白进行二级结构分析得知，该蛋白主
要含有 ａｌｐｈａ　ｈｅｌｉｘ（Ｈｈ）－螺旋，Ｅｘｔｅｎｄｅｄ　ｓｔｒａｎｄ
（Ｅｅ）延伸链，Ｂｅｔａ　ｔｕｒｎ（Ｔｔ）－转角，Ｒａｎｄｏｍ　ｃｏｉｌ（Ｃｃ）
无规卷曲。其中 Ｈｈ有２７３个氨基酸，占６６．２６％；
Ｅｅ有１１个氨基酸，占２．６７％；Ｔｔ有３２个氨基酸，
占７．７７％；Ｃｃ有９６个氨基酸，占２３．３０％。
２．１．３　ＡＰ２２．６５蛋白质保守结构域及高级结构预
测　利用ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｆａ／ｉｐｒ－
ｓｃａｎ／分析ＡＰ２２．６５蛋白的保守结构域，根据Ｅ－ｖａｌ－
ｕｅ值可以确定该蛋白具有５个ＰＰＲ保守基序，分别
位于１０７～１３６、１４１～１７０、１７８～２０８、２１３～２４３、２８２～
３１２ａａ位（图１Ａ）；利用 Ｍｏｄｅｌｅｒ软件构建ＡＰ２２．６５
蛋白 的 三 级 结 构，同 时 使 用 ＳＡＶＥＳ（ｈｔｔｐ：∥
ｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｍｂｉ．ｕｃｌａ．ｅｄｕ／ＳＡＶＥＳ／）对预测的 ＡＰ２２．６５
蛋白结构的质量进行评估，结果发现该蛋白具有ＰＰＲ
保守结构，为右手螺旋蛋白（图１Ｂ、１Ｃ）。
Ａ．保守区域预测　Ｂ．卡通模式三级结构
Ｃ．球体模式三级结构。
图１　ＡＰ２２．６５蛋白的保守结构域及三级结构预测
Ｆｉｇ．１　Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｄｏｍａｉｎｓ　ａｎｄ
ｔｅｒｔｉａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｉｎ　ＡＰ２２．６５ｐｒｏｔｅｉｎ
２．１．４　ＡＰ２２．６５组织表达分析　从拟南芥 ＭＰＳＳ
数据库查询ＡＰ２２．６５ 基因在拟南芥愈伤组织、花、
叶、根、果夹、种子中的转录数据，分别得到愈伤组织
１９６万条、花１７７万条、叶２８８万条、根３６４万条、果
夹２３５万条、萌发种子２５５万条 ＭＰＳＳ标签，将６个
时期转录信息进行归一统计操作，进行不同时期转
录水平的比较。结果发现，ＡＰ２２．６５基因在愈伤组
织、花、根和果夹中大量表达，转录数分别为７７６，
７５５，５９８，５４５；在叶中表达水平较低，转录数为１５３，
在种子萌发过程中不表达（图２）。
９４
河 北 农 业 大 学 学 报 第３７卷　
１：愈伤组织；２：花；３：叶；４：根；５：果荚；６：种子。
图２　ＡＰ２２．６５基因在不同部位的转录情况
Ｆｉｇ．２　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｒｔｓ
２．２　ＡＰ２２．６５基因突变对开花途径相关基因表达
的影响
以１８ＳｒＲＮＡ 为内参基因，对拟南芥野生型
Ｃｏｌ－０和ａｐ２２．６５突变体中开花途径相关基因的表
达进行ＲＴ－ＰＣＲ分析。结果发现，突变体中赤霉
素途径基因ＳＰＹ，光周期途径基因ＧＩ、ＣＯ和ＦＴ，
春化途径基因ＶＮＲ２、ＶＩＰ４和ＦＬＣ，整合途径基因
ＬＦＹ、ＴＦＬ１ 和ＥＭＦ１ 的表达水平均明显下调，
ＦＶＥ、ＣＣＡ１、ＶＮＲ１和ＳＯＣ１表达水平变化不明显
（图３）。
图３　开花途径相关基因的表达分析
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｇｅｎｅｓ　ｒｅｌａｔｅｄ
ｗｉｔｈ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ
２．３　开花途径相关突变体中ＡＰ２２．６５基因的表达
分析
利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测拟南芥开花途径相关
突变体中ＡＰ２２．６５ 基因的表达情况。结果发现，
ＣＯ超表达突变体（ＷＴ／ＣＯ）和ｓｐｙ、ｇｉ、ｌｈｙ突变体
中ＡＰ２２．６５ 基因的表达水平均不同程度上调，而
ＦＬＣ超表达突变体（ＷＴ／ＦＬＣ）中ＡＰ２２．６５基因的
表达水平明显下调（图４）。表明 ＡＰ２２．６５ 基因与
ＣＯ、ＳＰＹ、ＧＩ、ＬＨＹ和ＦＬＣ基因存在调控与被调控
的关系，初步确定ＡＰ２２．６５ 基因参与光周期途径、
赤霉素途径和春化途径。
１：ＷＴ；２：ＷＴ／ＣＯ；３：ＷＴ／ＦＬＣ；４：ｓｐｙ；５：ｇｉ；６：ｌｈｙ．
图４　开花途径相关突变体中ＡＰ２２．６５基因的表达
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｍｕｔａｎｔｓ
ｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ
２．４　ａｐ２２．６５突变体的花期受春化、赤霉素的影响
在短日条件下，观察ａｐ２２．６５ 突变体在春化、
赤霉素处理前后的花期变化情况。结果发现，在春
化处 理 后，拟 南 芥 野 生 型、ａｐ２２．６５ 突 变 体、
ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５回复突变体及 ＷＴ／ＡＰ２２．６５超
表达突变体的开花时间均有所推迟，与未处理相比
变化不 明 显；赤 霉 素 处 理 后，拟 南 芥 野 生 型、
ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５回复突变体及 ＷＴ／ＡＰ２２．６５突
变体均提早开花，而ａｐ２２．６５突变体的开花时间却
明显地推迟（图５）。
图５　春化、赤霉素处理对ａｐ２２．６５突变体花期的影响
Ｆｉｇ．５　Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ａｐ２２．６５　ｕｎｄｅｒ　ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ
ａｎｄ　ＧＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
２．５　ＡＰ２２．６５基因的表达受春化、赤霉素的影响
利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测春化、赤霉素处理后
拟南芥野生型、ａｐ２２．６５突变体、ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５
突变体及 ＷＴ／ＡＰ２２．６５突变体中ＡＰ２２．６５基因的
表达水平。结果发现，春化处理后拟南芥野生型和
０５
　第４期 张　靖等：ＡＰ２２．６５基因调控拟南芥开花的机制分析
突变体中ＡＰ２２．６５基因的表达水平没有明显的变
化；赤霉素处理后，ａｐ２２．６５ 突变体中ＡＰ２２．６５ 基
因的 表 达 水 平 明 显 增 强，野 生 型 和 ａｐ２２．６５／
ＡＰ２２．６５突变体中ＡＰ２２．６５基因的表达水平明显
降低，而超表达突变体 ＷＴ／ＡＰ２２．６５中ＡＰ２２．６５
基因的表达水平没有明显的变化（图６）。该结果与
春化和赤霉素处理后花期的变化基本一致。
１：ａｐ２２．６５９；２：ｃｏｌ－０；３：ａｐ２２．６５／ＡＰ２２．６５；４：ＷＴ／ＡＰ２２．６５．
图６　春化、赤霉素处理对ＡＰ２２．６５基因表达的影响
Ｆｉｇ．６　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＡＰ２２．６５　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｍｕｔａｎｔｓ
ｕｎｄｅｒ　ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＧＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
３　讨论
ＡＰ２２．６５基因编码一个类似ＴＰＲ的超家族蛋
白（Ｔｅｔｒａｔｒｉｃｏｐｅｐｔｉｄｅ　ｒｅｐｅａｔ（ＴＰＲ）－ｌｉｋｅ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉ－
ｌｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ），并包含５个ＰＰＲ（Ｐｅｎｔａｔｒｉｃｏｐｅｐｔｉｄｅ　ｒｅ－
ｐｅａｔｓ）的保守结构域。文献报道，ＰＰＲ基因的编码
产物是以３５个氨基酸为重复单位的蛋白质［２０］，称
为ＰＰＲ蛋白。拟南芥中，ＰＰＲ基因均匀地分布在５
条染色体上，成簇现象不十分明显［２１］。ＰＰＲ 基因
多数定位在叶绿体或线粒体上，ＰＰＲ蛋白可间接或
直接的与ＲＮＡ相作用，对细胞器的相关基因或其
他基因的表达起到重要的调控作用［２２］。本研究中，
ＡＰ２２．６５基因为拟南芥开花调控基因，推测该基因
调控拟南芥开花的机制可能与ＰＰＲ蛋白与 ＲＮＡ
的结合相关。
拟南芥有４条调控开花时间的信号转导途径，
即自主途径、光周期途径、春化途径和赤霉素途
径［２－７］。４ 条开花调控途径通过一些整合基因
（ＬＦＹ、ＴＦＬ１和ＥＭＦ１等）共同调控着拟南芥的开
花［２６］。本研究前期已明确ＡＰ２２．６５基因为拟南芥
开花调控基因，但该基因与已知开花调控途径的关
系尚不清楚。本研究中，ａｐ２２．６５ 突变体的花期在
长日条件下与野生型基本一致，而在短日条件下，则
表现为早花。说明该突变体对光周期敏感，但该突
变体的开花特性与自主途径突变体的明显不同，且
春化处理对突变体的花期没有明显的影响，由此推
测ＡＰ２２．６５基因主要参与光周期途径，不参与自主
途径。本研究检测了ＡＰ２２．６５ 基因突变对开花调
控途径基因表达的影响，发现突变体中光周期途径
基因（ＧＩ、ＣＯ、和ＦＴ）、春化途径基因（ＶＮＲ２、ＶＩＰ４
和ＦＬＣ）和赤霉素途径基因（ＳＰＹ）的表达水平发生
了明显的变化，确定ＡＰ２２．６５ 基因参与赤霉素、光
周期和春化途径。赤霉素处理对ａｐ２２．６５ 突变体
的花期和ＡＰ２２．６５基因表达的影响较大，而春化处
理对其花期及基因的表达均没有明显的影响，从而
确定ＡＰ２２．６５基因主要参与赤霉素途径。综上所
述，ＡＰ２２．６５基因主要通过光周期途径和赤霉素途
径调控拟南芥的成花。
参考文献：
［１］　Ｋｏｍｅｄａ　Ｙ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｉｍｅ　ｔｏ　ｆｌｏｗｅｒ　ｉｎ　Ａｒ－
ａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．Ａｎｎｕ　Ｒｅｖ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌ，２００４，５５
（１）：５２１－５３５．
［２］ Ｓｔｒａｔｍａｎｎ　Ｔ，Ｍａｓ　Ｐ．Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ：ａｑｕｅｓｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｉｍｅ［Ｊ］．
Ｓｅｍ　Ｃｅｌ　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，２００８，１９：５５４－５５９．
［３］ Ｏｓｎａｔｏ　Ｍ，Ｃａｓｔｉｌｅｊｏ　Ｃ，Ｍａｔｉａｓ－Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．
ＴＥＭＰＲＡＮＩＬＬＯｇｅｎｅｓ　ｌｉｎｋ　ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ　ａｎｄ　ｇｉｂｂｅｒ－
ｅｌｉｎ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｃｏｍｍｕｎ，２０１２，３：８０８．
［４］ Ｃｈａｎｄｌｅｒ　Ｊ，Ｗｉｌｓｏｎ　Ａ，Ｄｅａｎ　Ｃ．Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｍｕｔａｎｔｓ
ｓｈｏｗｉｎｇ　ａｎ　ａｌｔｅｒｅｄ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｊ，１９９６，１０：６３７－６４４．
［５］ Ｓｈｅｌｄｏｎ　Ｃ　Ｃ，Ｆｉｎｎｅｇａｎ　Ｅ　Ｊ，Ｐｅａｃｏｃｋ　Ｗ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｅｃｈａ－
ｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ａｒａｂｉ－
ｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｊ，２００９，５９：４８８－４９８．
［６］ Ｍａｒｑｕａｒｄｔ　Ｓ，Ｂｏｓｓ　Ｐ　Ｋ，Ｈａｄｆｉｅｌｄ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｔａｒ－
ｇｅｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　ｐａｔｈｗａｙ　ｍｅｍｂｅｒｓ，
ＦＣＡａｎｄ　ＦＹ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｂｏｔ，２００６，５７：３３７９－３３８６．
［７］ Ｃｈｅｎ　Ｍ，Ｄｕ　Ｘ，Ｚｈｕ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｅｅｄ　Ｆａｔｔｙ　Ａｃｉｄ　Ｒｅｄｕｃｅｒ
ａｃｔｓ　ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ　ｏｆ　ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｔｏ
ｌｏｗｅｒ　ｓｅｅｄ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｃｅｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ，２０１２　３５：２１５５－２１６９．
［８］ Ｄａｖｉｄ　Ｋ　Ｍ，Ａｒｍｂｒｕｓｔｅｒ　Ｕ，Ｔａｍａ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ．Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ＧＩＧＡＮＴＥＡ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｓ　ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ
ｂｙ　ｌｉｇｈｔ　ａｎｄ　ｄａｒｋ［Ｊ］．ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ，２００６，５８０：１１９３－１１９７．
１５
河 北 农 业 大 学 学 报 第３７卷　
［９］ Ｈｕｑ　Ｅ，Ｔｅｐｐｅｒｍａｎ　Ｊ　Ｍ，Ｑｕａｉｌ　Ｐ　Ｈ．ＧＩＧＡＮＴＥＡｉｓ　ａ
ｎｕｃｌｅａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｐｈｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２０００，９７：
９７８９－９７９４．
［１０］ Ｋｉｍ　Ｙ，Ｙｅｏｍ　Ｍ，Ｋｉｍ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．ＧＩＧＡＮＴＥＡａｎｄ
ＥＡＲＬＹ　ＦＬＯＷＥＲＩＮＧ４ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｅｘｈｉｂｉｔ　ｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｐｈａｓｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｖｅｒ　ａ　ｄｉｕｒ－
ｎａｌ　ｃｙｃｌｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｌａｎｔ，２０１２，５：６７８－６８７．
［１１］ Ｄｅｎｇ　Ｗ，Ｙｉｎｇ　Ｈ，Ｈｅｌｉｗｅｌ　ＣＡ，ｅｔ　ａｌ．ＦＬＯＷＥＲＩＮＧ
ＬＯＣＵＳ　Ｃ （ＦＬＣ）ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙｓ
ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ　ｔｈｅ　ｌｉｆｅ　ｃｙｃｌｅ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２０１１，１０８：６６８０－６６８５．
［１２］ Ｓｍｉｔｈ　Ｈ　Ｂ．Ｐｌａｎｎｅｄ　ｐａｒｅｎｔｈｏｏｄ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ：
ＦＬＯＷＥＲＩＮＧ　ＬＯＣＵＳ　Ｃ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，１９９９，１１：
７６３－７６４．
［１３］ Ｙａｒｏｎ　Ｙ　Ｌ，Ｓｔｅｐｈａｎｅ　Ｍ，Ｊｏｓｈｕａ　Ｓ　Ｍ，Ａｎｔｈｏｎｙ　Ｒ　Ｇ，
Ｃａｒｏｌｉｎｅ　Ｄ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　Ｒｏｌｅｓ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ＶＲＮ１　ｉｎ
Ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｔｉｍｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．Ｓｃｉ－
ｅｎｃｅ，２００２，２９７：２４３－２４６．
［１４］ Ｂｏｌｅ　Ｃ，Ｋｏｎｃｚ　Ｃ，Ｃｈｕａ　Ｎ　Ｈ．ＰＡＴ１，ａ　ｎｅｗ　ｍｅｍｂｅｒ　ｏｆ
ｔｈｅ　ＧＲＡＳ　ｆａｍｉｌｙ，ｉｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｐｈｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ａ　ｓｉｇｎａｌ
ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ　＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，１４（１０）：
１２６９－１２７８．
［１５］ Ｓｉｍｏｎ　Ｒ，Ｉｇｅｎｏ　Ｍ　Ｉ，Ｃｏｕｐｌａｎｄ　Ｇ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｒａｌ
ｍｅｒｉｓｔｅｍ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，
１９９６，３８４（６６０４）：５９－６２．
［１６］ Ｋａｒｄａｉｌｓｋｙ　Ｉ，Ｓｈｕｋｌａ　Ｖ　Ｋ，Ａｈｎ　Ｊ　Ｈ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｔａｇ－
ｇｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌｏｒａｌ　ｉｎｄｕｃｅｒ　ＦＴ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２８６
（５４４６）：１９６２－１９６５．
［１７］ Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｙ，Ｋａｙａ　Ｈ，Ｇｏｔｏ　Ｋ．Ａ　ｐａｉｒ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ
ｗｉｔｈ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｒｏｌｅｓ　ｉｎ　ｍｅｄｉａｔｉｎｇ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｓｉｇｎａｌｓ
［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２８６（５４４６）：１９６０－１９６２．
［１８］ Ｂｌａｚｑｕｅｚ　Ｍ　Ａ，Ｗｅｉｇｅｌ　Ｄ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｒａｌ　ｉｎｄｕｃ－
ｔｉｖｅ　ｓｉｇｎａｌｓ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０００，４０４
（６７８０）：８８９－８９２．
［１９］ Ｘｉｎｇ　Ｊ　Ｈ，Ｗａｎｇ　Ｆ　Ｒ，Ｊｉａ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ
ＡＰ２２．６５　ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉ－
ａｎａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１３，５６：４９－５８．
［２０］ 徐相波，邱登林，孙永堂．ＰＰＲ基因家族的研究进展
［Ｊ］．遗传，２００６（６）：７２６－７３０．
［２１］ Ａｕｂｏｕｒｇ　Ｓ，Ｂｏｕｄｅｔ　Ｎ，Ｋｒｅｉｓ　Ｍ．Ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉ－
ａｎａ，１％ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｃｏｄｅｓ　ｆｏｒ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆａｍｉ－
ｌｙ　ｕｎｉｑｕｅ　ｔｏ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，
４２（４）：６０３－６１３．
［２２］ Ｔｕｒｃｋ　Ｆ，Ｃｏｕｐｌａｎｄ　Ｇ．Ｗｈｅｎ　ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｍａｋｅｓ　ｓｅｎｓｅ
［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，３３１（６０１３）：３６－３７．
（编辑：宗淑萍
櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗
）
（上接第４６页）
［１４］　杨昌鹏，杨静，藤田修二．番石榴多酚氧化酶的部分
纯化及其特性研究［Ｊ］．食品与发酵工业，２００６，３２
（９）：２３－２７．
［１５］　段玉权，董维，张明晶，等．中华寿桃多酚氧化酶的特
性研究［Ｊ］．中国农业科学，２００８，４１（３）：７９５－７９９．
［１６］　纪淑娟，尹竞男，李家政．蜜柚多酚氧化酶的酶学特
性与 活 性 测 定 研 究 ［Ｊ］．北 方 园 艺，２０１０（１７）：
１７１－１７４．
［１７］　苏桂林．现代实用果品生产新技术［Ｍ］．北京：中国
农业出版社，２００３：５９２－５９３．
［１８］　及华，刘媛，关军锋，等．１－ＭＣＰ、薄膜包装和乙烯吸
收剂对‘安哥诺’李长期冷藏期间品质和褐变的影响
［Ｊ］．果树学报，２０１２，２９（３）：４０４－４０８．
［１９］　王国英，董海洲，王兆升，等．西葫芦多酚氧化酶酶
学特性研究［Ｊ］．食品工业科技，２０１２（２）：１５４－１５９．
［２０］　莫开菊，刘娜．姜多酚氧化酶特性的研究［Ｊ］．食品
科学，２００４，２５（８）：４７－４９．
［２１］　Ｗａｎｇ　Ｍｅｎｇ，Ｓｕｎ　Ｊｉｎｇ，Ｆｅｎｇ　Ｗｅｉｈｕａ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉ－
ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｒｉｐｅｎｉｎｇ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ
ｆｒｕｉｔ　ａｓ　ｂｌａｎｃｈｉｎｇ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｅｎｚｙｍｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏ－
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，４３：９３２－９３６．
（编辑：宗淑萍）
２５