全 文 ：分子植物育种，2011年，第 9卷，第 5期，第 635-641页
Molecular Plant Breeding, 2011, Vol.9, No.5, 635-641
研究报告
A Letter
报春 PF sHSP 21.4基因转化拟南芥的获得及耐热鉴定
张路 胡伟娟 张启翔 * 高亦珂
北京林业大学园林学院,北京, 100083
*通讯作者, ZQX@bjfu.edu.cn
摘 要 根据灰岩皱叶报春 PF sHSP 21.4热激蛋白基因序列，采用 PCR法从差减文库中克隆得到该基因，
并构建 pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4植物表达载体，通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥，经潮
霉素筛选、PCR和 RT-PCR法鉴定后，对转基因植株和野生型对照进行高温胁迫，分析其耐热性差异。结果
显示：在 43℃或 44℃处理下，转基因拟南芥幼苗的存活率明显高于野生型拟南芥，且高温处理后转基因植株
叶片的相对电导率升高的幅度显著低于野生型对照，Fv/Fm值比野生型拟南芥下降幅度较小，可溶性蛋白的
含量在热胁迫下有轻微上升，而野生型拟南芥的可溶性蛋白含量则随胁迫的加剧而显著降低。实验证明，PF
sHSP 21.4基因对植物的耐热性有重要作用。
关键词 PF sHSP 21.4基因,拟南芥,热激蛋白
Transformation of Primula PF sHSP 21.4 Gene and Heat Stress Tolerance
Identification of Transgenic Arabidopsis thaliana
Zhang Lu Hu Weijuan Zhang Qixiang * Gao Yike
College of Landscape Architecture, Beijing Forestry University, Beijing, 100083
* Corresponding author, ZQX@bjfu.edu.cn
DOI: 10.3969/mpb.009.000635
Abstract According to the sequence of PF sHSP 21.4 gene from Primula forrestii, PF sHSP 21.4 gene was cloned
from a subtractive library by PCR, and the plant expression vector pCAMBIA1301 which harbored PF sHSP 21.4
gene was established, wild type Arabidopsis plants were transformed by Agrobacterium tumefaciens-mediated
Floral Dip method, after hygromycin screening, PCR and RT-PCR detetion indicated PF sHSP 21.4 gene had been
integrated into the genome. The performance of the transformed plants and the wild type under heat stress was
analyzed. The results showed that, after 2 hours’stress of 43℃, 44℃, the survival rate of transgenic plants was
much higher than that of wild type. What’s more, the increase of relative conductance rate in the leaves of transgenic
plants was much smaller than that in the leaves of wild-type, and the reduction of relative quantum yield of PSⅡ
of transformed in Arabidopsis plants was lesser than that of wild control obviously, for the content of soluble
protein, that in the transformed plants increased slight while the content in the wild type was decreased with the
degree of stress. Consequently, the experimental results displayed that the PF sHSP 21.4 gene has a great value in
improving the heat stress resistance in plants.
Keywords PF sHSP 21.4 gene, Arabidopsis thaliana, HSP
热激蛋白 Heat Shock Proteins (HSP)，又称热休克
蛋白或应激蛋白(Heat Stress Proteins)，是植物在高温
刺激下产生的一组蛋白。研究表明，热激蛋白普遍存
在于从细菌到高等真核生物的整个生物界，而且它
们几乎在所有的活细胞中起着重要的作用(刘良式,
基金项目：本研究由国家林业局重点项目(2003-008-L0)和十一五科技支撑计划课题(2006BAD01A18)共同资助
1997)。根据其分子质量(kD)的大小可分为 HSP110、
HSP90、HSP70、HSP60和小分子 HSPs。其中最重要
的是小分子热激蛋白。大量研究表明，将小分子热激
蛋白相关基因转入植物体后，能显著提高植物的耐
热性。Yeh等(1997)将 sHSP 16.9基因转入大肠杆菌
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
图 1表达载体的 PCR及酶切检测
注: M: DL15000 DNA marker; 1: SSH差减文库的 PCR阳性对
照 ; 2: PCR 检测 ; 3~4: NocⅠ和 BstEⅡ双酶检测 ; 5: pCAM-
BIA1301-PF sHSP 21.4质粒
Figure 1 PCR and double digestion detection of vectors pCAM-
BIA1301-PF sHSP 21.4
Note: M: DL15000 DNA marker; 1: SSH library PCR control; 2:
PCR detection; 3~4: Double digestion by NocⅠ和 BstEⅡ ; 5:
pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4 plasmid as a negative control
后提高了大肠杆菌的耐热性，Sanmiya等(2004)将番
茄中的 sHSPs (MT-sHSP)基因转移到烟草中，同样提
高了烟草对高温的耐受性。刘箭和庄野真理子(2001)
将线粒体小分子热激蛋白基因导入烟草，转基因烟
草植株的线粒体小分子热激蛋白基因可在烟草细胞
中组成型地表达，转基因烟草线粒体的氧化磷酸化
效率高于对照。可见小分子热激蛋白的表达显著能
提高植物的耐热性。
报春属植物(Primula)是著名的高山花卉，其花色
绚丽、花型各具特色，被誉为“世界三大花园植物”之
一(Richards, 1993)。其布在高海拔冷凉地区，温度成
为影响报春花引种利用的主要限制因素。胡伟娟等
(2010)对 6种报春进行生理指标变化、叶片组织结构
和叶肉细胞结构变化 3方面的耐热性评价，得出灰岩
皱叶报春(Primula forrestii)是能在北京越夏的报春中
耐热的种，并构建耐热相关基因的差减(SSH)文库，
通过实时荧光定量 PCR技术进一步分析相关基因
在不同高温胁迫下表达情况，利用 RACE技术得到
基因全长，命名为 PF sHSP 21.4。BLAST分析表明，
该基因为编码 22 kD左右的热激蛋白基因。
为进一步了解该基因在植物耐热性中的作用，
以及应用前景。本实验从 SSH文库中克隆灰岩皱叶
报春 PF sHSP 21.4基因，并构建植物表达载体 pCA-
MBIA1301-PF sHSP 21.4，通过根癌农杆菌介导法转
入野生型拟南芥，经潮霉素筛选、PCR和 RT-PCR鉴
定后，以野生型拟南芥为对照，进行热胁迫处理、测
定生理指标，分析转基因植株的耐热能力，为通过植
物基因工程提高花卉耐热性奠定实验基础。
1结果与分析
1.1表达载体 pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4的构建
对构建的 pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4载体进
行 PCR和双酶切检测(图 1)，结果以 PF sHSP 2.14-F
和 PF sHSP 21.4-R 为引物可特异地扩增出 612 bp
的 PF sHSP 21.4基因片段，用 NocⅠ和 BstEⅡ双酶
pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4载体，可切下相应大
小的 DNA片段，说明成功构建 PF sHSP 21.4基因的
表达载体。
1.2转基因植株的筛选及 PCR检测
将用花器浸泡法转化拟南芥得到的 T0代种子，
消毒后播种于含 25 μg/mL潮霉素的MS固体培养基
上，经 7 d的生长筛选得到阳性株系数株，随机挑选
20株提取其 DNA，以 PF sHSP 21.4的特异引物(PF
sHSP21.4-F和 PF sHSP21.4-R)进行 PCR扩增(图 2)，
均扩增出 612 bp的目的片段，而野生型植株则无 PCR
扩增产物，说明灰岩皱叶报春 PF sHSP21.4基因已经
整合到拟南芥基因组中。
图 2转基因植株的 DNA-PCR检测
注: M: DL2000 DNA marker; 1: DNA-PCR 扩增目的基因 PF
sHSP 21.4 检测转基因拟南芥 ; 2: pCAMBIA1301-PF sHSP
21.4质粒为模板; 3~6:以转基因拟南芥基因组 DNA为模板
Figure 2 Detection of transgenic Arabidopsis plants by DNA-PCR
Note: M: DL2000 DNA marker; 1: PCR amplification of PF
sHSP 21.4 with wild type Arabidopsis genomic DNA; 2: pCAM-
BIA1301-PF sHSP 21.4 plasmid DNA; 3~6: PF sHSP 21.4
transgenic Arabidopsis genomic DNA
1.3转基因拟南芥的 RT-PCR检测
随机选择 10 株经 DNA-PCR 鉴定的阳性植株
进行 RT-PCR检测(图 3)。提取 DNA-PCR鉴定的阳
性植株以及同期培养的野生型拟南芥 RNA，将其转
录成 cDNA后进行 PCR扩增。10株均为阳性克隆，
RT- PCR产物在 612 bp左右有明显条带，而野生型
在此处则无条带。说明 PF sHSP 21.4基因在转基因
植物中可以正常转录。
636
报春 PF sHSP 21.4基因转化拟南芥的获得及耐热鉴定
Transformation of Primula PF sHSP 21.4 Gene and Heat Stress Tolerance Identification of Transgenic Arabidopsis
图 4高温胁迫下转基因和野生型植株叶片相对电导率变化
Figure 4 Changes of relative conductance rate in leeaves under
high temperature stress
图 3转基因植株的 RT-PCR检测
注: M: DL2000 DNA marker; 1: pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4
质粒为模板; 2: 以野生型拟南芥基因组 cDNA 为模板; 3~7:
以转基因拟南芥基因组 cDNA为模板
Figure 3 Detection of transgenic Arabidopsis plants by DNA-PCR
Note: M: DL2000 DNA marker; 1: RT-PCR detection of PF sHSP
21.4 with 21.4 plasmid DNA; 2: Wild type Arabidopsis genomic
DNA; 3~7: PF sHSP 21.4 transgenic Arabidopsis genomic DNA
表 1拟南芥 T3代转基因植株高温胁迫存活率
Table 1 The survival rate of PF sHSP 21.4 transgenic Arabidopsis thaliana under heat stress
温度(℃)
Temperature (℃)
42
43
44
植株
Plant
WT
PF sHSP 21.4
WT
PF sHSP 21.4
WT
PF sHSP 21.4
重复 1
Repeat 1
100
100
64
92
6
18
重复 2
Repeat 2
94
100
70
90
4
20
重复 3
Repeat 3
98
100
60
86
4
14
平均存活率(%)
Average survival rate (%)
97.33a
100.00a
64.67b
89.33a
5.33b
17.33a
存活率(%)
Survival rate (%)
注: WT:野生型; PF sHSP 21.4:转 PF sHSP 21.4基因拟南芥;同一温度处理下不同小写字母表示种间在 0.05水平差异显著;下同
Note: WT: Wild type; PF sHSP 21.4: Transgenic Arabidopsis thaliana; The different normal letters within the heat stress indicate
significant difference among three species at 0.05 level; The same as below
1.4 热胁迫对转基因拟南芥和野生型拟南芥幼苗存
活率的影响
由表1可见，42℃处理 2 h后，野生型拟南芥幼
苗存活率与转基因幼苗存活率无明显差异，野生型
拟南芥幼苗有轻微伤害，而转基因幼苗生长不受影
响。43℃处理 2 h后，野生型拟南芥幼苗存活率明显
低于转基因拟南芥幼苗存活率，分别为 64.67%和
89.33%。44℃处理 2 h后，野生型和转基因植株幼苗
存活率均大幅度下降，但转基因幼苗的存活率明显
高于野生型的，分别为 17.33%和 5.33%。可见，转基
因植株在高温胁迫下有较高的存活率。
1.5 热胁迫对转 PF sHSP 21.4 基因拟南芥生理指标
的影响
1.5.1高温胁迫下细胞膜相对透性的变化
随胁迫程度的加剧，转基因拟南芥和野生型拟
南芥叶片相对电导率均呈上升的趋势，但转基因植株
上升的幅度明显小于野生型植株(图 4)。40℃、42℃、
44℃处理下，转基因植株叶片的相对电导率分别上升
了 49.14%、63.45%和 82.33%，而野生型植株叶片的
相对电导率分别上升了 92.05%、129.46%和 162.76%。
这说明，在高温胁迫下，转基因拟南芥的细胞膜透性
较小，细胞膜的受损程度低于野生型拟南芥，表现出
对高温更强的耐受能力。
1.5.2 PSⅡ最大光化学效率 Fv/Fm
由图 5可得，22℃环境下，转基因拟南芥和野生
型拟南芥的 Fv/Fm值差异不显著，随胁迫温度的升
高，二者的 Fv/Fm值都不同程度的降低，但转基因拟
南芥的 Fv/Fm值下降幅度明显小于野生型拟南芥。野
生型拟南芥的 Fv/Fm值在 40℃、42℃、44℃处理下，分
别下降了 1.89%、2.83%和 3.37%。而转基因拟南芥在
44℃高温胁迫下，Fv/Fm值也仅下降了 1.76%。可见，
高温下胁迫下，与野生型拟南芥相比，转基因拟南芥
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分子植物育种
Molecular Plant Breeding
图 5高温胁迫下转基因和野生型植株叶片 Fv/Fm变化
Figure 5 Changes of Fv/Fm in leaves under high temperature stress
图 6高温胁迫下转基因和野生型植株叶片可溶性蛋白含量变化
Figure 6 Changes of soluble protein content in leeaves under high
temperature stress
受到的光抑制较小，PSⅡ受到的伤害较轻。
1.5.3高温胁迫下可溶性蛋白含量的变化
高温胁迫下转基因拟南芥和野生型拟南芥可溶
性蛋白含量呈不同的变化趋势(图 6)。野生型拟南芥
叶片的可溶性蛋白含量随胁迫的程度的加剧逐渐下
降，可见在高温下，野生型拟南芥的蛋白质合成和分
解的速率被打破，分解的速率大于合成的速率，从而
使得可溶性蛋白含量下降。而在高温胁迫下，转基因
拟南芥叶片中的可溶性蛋白含量有不同程度的上升，
40℃、42℃、44℃处理下，分别上升了 5.4%、10%和
1.15%。可见，高温促进了转基因拟南芥中热激蛋白
的表达，以应对逆境胁迫，从而提高植株的耐热能力。
2讨论
小分子量热激蛋白(sHSPs)在植物耐热性中起主
要作用，广泛分布于细胞质、线粒体、叶绿体等组织
中，在高等植物中至少有 6种多基因家族编码此类
蛋白，其多肽链从 15~30 kD 大小不等。据报道，
sHSPs与植物受到热激后的存活及恢复密切相关。
Forreiter和 Nover (1998)将拟南芥 Hsp17.6基因导入
其悬浮细胞阻止了荧光素酶 Luc热失活，增加了 Luc
热胁迫后的复活。过表达番茄线粒体 Mt-sHsp的转
基因烟草，在高温胁迫后的恢复培养中也明显表现
出更好的生长状态(Sanmiya et al., 2004)。本研究表
明，43℃和 44℃高温胁迫后的转基因拟南芥幼苗存
活率明显高于野生型拟南芥，可见，PF sHSP 21.4导
入提高拟南芥幼苗对高温的抵抗能力，以及胁迫后
的成活率。这与晁旭等(2007)对 AtHsfA6a转基因拟
南芥幼苗的高温处理得出相同结果。
高温对植物生理造成严重影响，高温下光和作
用受到抑制、细胞膜损伤，细胞老化和死亡加快(Xu
and zhang, 2006)，而 HSPs可提高植物细胞的应激能
力，增强生物膜的稳定性从而提高细胞的耐热性。热
激过程中有大量的 HSPs表达，在膜组分中，有可能
担当了阻止膜蛋白的热变性，防止生物膜破碎的功
能，细胞受热后 HSP70和 sHSPs以膜外周蛋白的形
式连接在质膜和液胞膜上，与膜蛋白发生分子互作，
可阻止膜蛋白的变性，稳定细胞膜系统，对膜微囊有
热保护功能(吴厚雄等, 2003)。本试验研究结果显示，
高温胁迫下，转基因拟南芥的相对电导率上升幅度
比野生型拟南芥小，表明细胞膜在高温下受到的损
伤较轻。可见 PF sHSP 21.4 诱导 HSP 21.4 的合成
对细胞膜有明显的保护作用，推测 HSP 21.4可能作
为分子伴侣，阻止高温胁迫下膜蛋白的变性，从而提
高了植物的耐热能力。
研究表明，sHSPs 有助于提高植物的抗氧化能
力，保护 PSⅡ。叶绿体 sHSP能对光氧化胁迫造成
的伤害有防御作用(Asada, 1994)。对番茄幼苗热激
处理，叶绿体的 sHSP组成型表达可以减轻光氧化伤
害(Miyao-tokutomi et al., 1998)，Inbal等(2005)对番茄
HSP21的研究中也表明，该蛋白在高温、强光胁迫下
对 PSⅡ有保护作用。本研究结果表明，转基因拟南芥
在高温下 PSⅡ受到的影响较小，可见 HSP 21.4作为
分子伴侣，不仅对膜蛋白有保护作用，对参与光合作
用的蛋白也有保护作用，从而提高转基因植株在高
温胁迫下光合系统的稳定性。
sHSP的抗热性与细胞内的可溶性蛋白质的稳定
性有关(Jofre et al., 2003)。高温下大豆、绿豆和水稻
细胞中富含小分子量 HSP的组分具有维持蛋白质热
稳定性的作用(Jirm et al., 1995)。孟焕文等(2000)对
不同品种黄瓜耐热性的研究指出，热胁迫后启动了黄
瓜热激蛋白的合成基因，可溶性蛋白含量增加，耐热
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品种热激蛋白的诱导温度高，若耐热品种对高温敏
感，给予较高温度后热激蛋白合成受到抑制，可溶性
蛋白含量下降。本研究结果表明，野生型拟南芥在
40℃以上的胁迫下，叶片可溶性蛋白明显降低。而转
基因拟南芥在 40℃、42℃、44℃处理下，叶片可溶性
蛋白含量均有不同程度的增加，表明转基因拟南芥的
热激蛋白启动温度高，而野生型拟南芥在 40℃的胁
迫下蛋白质合成就已经受到抑制，可见 PF sHSP 21.4
在 40℃、42℃、44℃下有较高的表达量，合成大量的
HSP 21.4从而提高转基因植株的耐热性。且试验结
果表明在 42℃处理后可溶性蛋白含量最高，这与胡
伟娟对 PF sHSP 21.4在灰岩皱叶报春叶片的表达量
分析一致，PF sHSP 21.4在 2 h处理下有最高的表达
量，之后随胁迫时间的延长而降低。说明，在 40℃胁
迫下可溶性蛋白含量低于 42℃下的，是因为胁迫的
温度不够高，而 44℃胁迫下可溶性蛋白的下降是因
为温度太高反而抑制了 PF sHSP 21.4的表达，从而
降低了 HSP 21.4的含量。
本研究表明，报春 PF sHSP 21.4基因的表达对
提高植物耐热性有重要作用，热激蛋白 HSP 21.4可
有效的减小转基因拟南芥在高温下的细胞膜的受损
程度，减轻光合系统Ⅱ的损伤，以及维持蛋白质热稳
定性。本研究为利用基因工程技术提高植物抗逆能
力奠定了理论基础。
3材料和方法
3.1植物材料及菌种
本实验所用哥伦比亚生态型拟南芥(Arabidopsis
thaliana ecotype Columbia)、报春耐热基因差减文库、
大肠杆菌(Escherichia coli) TOP10和农杆菌 GV3103，
以及表达载体 pCAMBIA1301由国家花卉工程技术
中心重点实验室保存。
3.2酶及试剂
植物基因组提取试剂盒(DNA secure Plant kit)、
pGM-T克隆试剂盒、普通 DNA凝胶回收试剂盒、
DNAMarker均购自北京天根生物公司；Easy Spin植
物 RNA提取试剂盒购自北京盖宁金诺生物技术公
司；T4 DNA连接酶、各种限制性内切酶等购自 Takara
公司；基因扩增引物均由北京擎科生物公司合成。
3.3植物表达载体的构建
根据报春 PF sHSP 21.4 cDNA全长序列设计引
物，上游：5-AGGTCACTGGAATGTGCCTTCTCA
C-3，下游：5-GATAGCGATAATACGCATTACAG
AT-3，根据克隆需要在引物的 5端分别引入 NcoⅠ
和 BstEⅡ。通过 PCR 扩增得到带酶切位点的
PF sHSP 21.4基因。反应体系：报春耐热基因差减
文库质粒 DNA 1 μL，上、下游引物各 1 μL，10× PCR
Buffer 2.5μL，dNTP 2μL，MgCl2 2μL，TaqDNALigase
0.25 μL，ddH2O 15.5 μL，总体积 25 μL。反应程序：
94℃预变性 4 min，94℃变性 45 s，65℃退火，72℃延
伸 4 min，循环管扩增 30 次，最后 72℃延伸 6 min。
扩增完毕，用 1%琼脂糖凝胶电泳检测。扩增片段用
DNA凝胶回收试剂盒纯化后连接于载体 pGM-T中，
连接产物转化用的是 CaCl2法制备的大肠杆菌 TOP10
感受态细胞，得到重组质粒 pGM-PF sHSP 21.4。测序
验证后，用 NcoⅠ和 BstEⅡ双酶切质粒 pGM-PF
sHSP 21.4，回收目的片段，并连接于同样经 NcoⅠ和
BstEⅡ双酶的 pCAMBIA1301载体 CaMV 35S启动
子下游，T4 DNA连接酶连接过夜，即构建植物表达
载体 pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4 (图 7)。
报春 PF sHSP 21.4基因转化拟南芥的获得及耐热鉴定
Transformation of Primula PF sHSP 21.4 Gene and Heat Stress Tolerance Identification of Transgenic Arabidopsis
图 7报春 PF sHSP 21.4基因表达载体 pCAMBIA1301-PF sHSP
21.4的构建
Figure 7 Establishment of binary vector pCAMBIA1301-PF sHSP
21.4 gene
639
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
3.4拟南芥的转化
将 pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4表达载体用液
氮冻融法转入根癌农杆菌 GV3101，参照 Clough和
Bent (1998)的方法，以含表达载体的农杆菌转化野
生型拟南芥。
3.5转基因拟南芥的获得
收取转化后的拟南芥种子(T0代)，消毒并在 0.1%
的琼脂糖中重悬种子，均匀分散到潮霉素筛选培养
基(MS+25 μg/mL潮霉素, PH 5.8)上，4℃处理 2 d后，
置于光照 16 h，黑暗 8 h，温度 22℃的培养室中培养。
10 d后挑选 T1代阳性植株转移到培养土中，PCR鉴
定并收种子。为获得纯合的转基因株系，将鉴定的
阳性克隆 T1代所得种子播于含 25 μg/mL潮霉素的
琼脂培养基上，将 T2代抗性株系转移到培养土中并
收获种子。继续将 T3代种子播于含 25 μg/mL潮霉
素的琼脂培养基上，在所得全为绿苗，得单基因插入
纯合株系。
3.6转基因拟南芥植株 PCR和 RT-PCR检测
采用植物基因组提取试剂盒(DNA secure Plant
kit) 提取生长 1月左右筛选出的转基因拟南芥的总
DNA，以 pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4质粒为阳性
对照，野生型拟南芥为阴性对照，PCR检测目的基
因。用 Easy Spin植物 RNA提取试剂盒提取阳性植
株的总 RNA，以 pCAMBIA1301-PF sHSP 21.4 质粒
为阳性对照，相应的以野生型拟南芥为阴性对照，
RT-PCR检测。
3.7转基因拟南芥的热胁迫处理以及生理指标测定
3.7.1幼苗热胁迫处理
分别将转基因拟南芥 T3种子和野生型对照种子
消毒后播种于 MS琼脂培养基上，4℃春化处理 2 d
后，放置于 22℃、光照 3 000 Lx、空气湿度 70%、光
照 16 h/黑暗 8 h的条件下培养 7 d后，移栽到新的
MS琼脂培养皿中，每皿转基因幼苗和野生型幼苗各
50株，缓苗 3 d后，把培养皿放在 42℃、43℃、44℃的
培养箱中进行热胁迫处理 2 h，之后转移到正常生长
条件下，培养 7 d统计存活率，试验重复 3次。
3.7.2成株热胁迫处理
将转基因拟南芥种子和野生型对照种子消毒后
分别播种于含 25 μg/mL潮霉素的琼脂培养基上和
MS琼脂培养基上，于 22℃、光照 3 000 Lx、空气湿度
70%、光照 16 h/黑暗 8 h的条件下培养 10 d，将长势
良好的幼苗移栽到培养土中，8周后，选择生长一致
的转基因和野生型拟南芥进行热胁迫处理。将其分
别置于 40℃、42℃、44℃下处理 2 h，每个处理转基因
和野生型株系各 10株，取同一叶位的叶片进行相关
生理指标的测定，试验重复 3次。
3.7.3生理指标的测定
细胞质膜透性采用相对电导率测定；PSⅡ光化
学最大量子效率使用仪器 Hansatech FMS2测得；可
溶性蛋白采用考马斯亮蓝 G-250法测定，具体参照
植物生理生化试验原理和技术(李合生等, 2000)的方
法操作，每个指标 3次重复。
3.7.4数据处理
数据采用 SPSS17.0统计软件对数据进行分析，
Excel绘制图表。
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报春 PF sHSP 21.4基因转化拟南芥的获得及耐热鉴定
Transformation of Primula PF sHSP 21.4 Gene and Heat Stress Tolerance Identification of Transgenic Arabidopsis
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