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拟南芥磷酸肌醇特异性磷脂酶AtPLC6基因的克隆与表达



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论 文 第 49卷 第 4期 2004年 2月
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拟南芥磷酸肌醇特异性磷脂酶AtPLC6基因
的克隆与表达
徐小静① 曹志翔① 刘国琴① Madan K.Bhattacharrya② 任东涛①
(①植物生理学与生物化学国家重点实验室,中国农业大学生物学院,北京100094;②Agronomy Department,Iowa State University
Ames,IA 50011—1010,USA.*联系人,E-mail:ren@cau.edu.en)

摘要 利用文库筛选和RT—PCR方法,从拟南芥中克隆到长度为1954 bp,包括全长1734 bp编码区的
AtPLC6 cDNA,推测其编码一含有578个氨基酸的多肽,其等电点为7.24,分子量为66251.84 Da.在
GenBank中进行序列比对发现,AtPLC6为一新发现的拟南芥PI—PLC基因.对推测的氨基酸序列结构的
分析表明,AtPLC6具有EF手性结构、x结构域、Y结构域和C2结构域,与植物中已知的其他磷酸肌
醇特异性磷脂酶C(PI—PLC)在结构上相似,类似于动物中典型的δ-型磷酸肌醇特异性磷脂酶.将
AtPLC6的编码区序列插入原核表达载体后进行了原核表达,纯化的AtPLC6重组蛋白可水解PIP2产生
IP3和DAG,且水解活性呈明显的钙依赖特性,反应的最适Ca2+浓度为10 μmol/L.Northern分析结果
表明,在检测的根、茎、叶、花、果和幼苗中均有AtPLC6mRNA的转录,但转录水平较低.用ABA,
NaCl,冷和热等胁迫处理的实验表明,AtPLC6 mRNA的转录受到冷胁迫的诱导,而受ABA,NaCl和热
等胁迫影响较小,推测AtPLC6可能参与了植株对冷胁迫的响应.
关键词 拟南芥 AtPLC6 克隆 原核表达 冷胁迫










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(2003-10-24收稿,2004-01-09收修改稿)