全 文 ：研究报告
A Letter
3种接种方法对十字花科黑腐病菌 Xcc8004菌株在拟南芥 Col-0上致病
力的影响
梅雄 1 李振江 1 张慧 1 唐纪良 1,2 唐东阶 2*
1广西大学生命科学与技术学院,南宁, 530005; 2亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室,南宁, 530005
*通讯作者, tangdj66@sohu.com
摘 要 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pathovar campestris, Xcc)是引起十字花科植物黑腐病
的病原菌，也是研究寄主与病原微生物相互作用分子机理的模式菌之一。Xcc可以感染白菜、萝卜和甘蓝
等十字花科农作物，也可以感染重要的模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)。由于拟南芥的全基因组测
序已经完成，因此，拟南芥是研究寄主植物对 Xcc浸染的防卫反应的分子机理的最理想的寄主材料。但
是，到现在为止，一套完善的在拟南芥上进行 Xcc致病检测的实验系统还没有建立。为此，本研究比较了
“叶片压渗法”、“剪叶法”和“叶片中脉穿刺法”这 3种常用的病原细菌接种方法对 Xcc的实验室菌株
8004 (以下简称 Xcc8004)在哥伦比亚生态型拟南芥(A. thanliana ecoype Colombia 0, Col-0)上的致病力的
影响。结果发现，在拟南芥 Col-0叶片上用“叶片压渗法”接种 Xcc8004可以引起明显致病症状，而用“剪
叶法”和“叶片中脉穿刺法”接种均不能引起病症。这一结果说明，不同的接种方法的对 Xcc在拟南芥上的
致病力有很大的影响。因此，要在拟南芥 Col-0上进行 Xcc8004的致病力检测，本研究建议采用“叶片压
渗法”而不用“剪叶法”和“叶片中脉穿刺法”。此外，本研究还建立了一套简易的拟南芥试验用苗的栽培方法。
关键词 十字花科黑腐病菌 Xcc,拟南芥,致病检测,叶片压渗法,剪叶法,叶片中脉穿刺法
Effect of 3 Inoculation Methods on the Virulence of Xanthomonas campestris
pathovar campestris strain 8004 onArabidopsis thalianaCol-0
Mei Xiong 1 Li Zhenjiang 1 Zhang Hui 1 Tang Jiliang 1,2 Tang Dongjie 2*
1 College of life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, 530005; 2 State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropi-
cal Agro-bioresources, Nanning, 530005
* Corresponding author, tangdj66@sohu.com
DOI: 10.3969/gab.030.000365
Abstract Xanthomonas campestris pathovar campestris (Xcc) is the causal agent of black rot disease of cruciferous
crops, and is a model strain for studying the molecular mechanisms of plant-microbe interactions. Xcc infects almost
all the members of crucifer family (Brassicaceae) such as cabbage, radish and cauliflower, and the model plant Ar-
abidopsis thaliana. Since the whole genome of Arabidopsis thaliana has been sequenced, which has became the
best host plant for studying the molecular basis for the host defense against Xcc. However, the method for testing
the pathogenicity of Xcc on Arabidopsis thaliana has not been well established so far. For this, in this study, the re-
sponse of the wild typeArabidopsis thaliana ecoype Colombia 0 (Col-0) to the infection byXcc strain 8004 (Xcc8004)
was respectively tested by using leaf-infiltration, leaf-clipping and leaf main vein-piercing method. The results
show that Xcc8004 can cause disease on the leaf of Arabidopsis thaliana Col-0 by leaf-infiltration, but not by
leaf-clipping or leaf central vein-piercing. These results reveal that the pathogenicity of Xcc8004 in Arabidopsis is
strongly affected by the inoculation method used, and leaf-infiltration is a suitable method but leaf-clipping or leaf
central vein-piercing is not a suitable method for which. In addition, a simple and efficient Arabidopsis thaliana
基因组学与应用生物学，2011年，第 30卷，第 4期，第 365-370页
Genomics and Applied Biology, 2011, Vol.30, No.4, 365-370
基金项目：本研究由国家自然科学基金项目(31071141)资助
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
planting method was established in this study.
Keywords Xanthomonas campestris pathovar campestris (Xcc), Arabidopsis thaliana, Pathogenicity assay, Leaf-
infiltration, Leaf-clipping, Main vein-piercing
十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.
campestris, Xcc)，也称为野油菜黄单胞菌野油菜致病
变种，是引起十字花科植物黑腐病的病原菌，寄主包
括重要农作物甘蓝、花椰菜、白菜、芥菜、萝卜、油菜
以及重要的模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)等
(Hayward, 1993;王金生, 2000)。Xcc也是重要的工业
原料-黄原胶的产生菌，同时还是研究寄主植物与
病原微生物相互作用分子机理的模式菌之一。Xcc主
要通过叶片的水孔或伤口侵入寄主体内，然后在质
外体空间增殖，并沿维管束蔓延，引起系统侵染(Rud-
olph, 1993; Meyer et al., 2005)。黑腐病典型的症状是
在叶缘上形成V字型黄色病斑，随着病斑的扩大，叶脉
变黑(Hayward, 1993;王金生, 2000)。十字花科黑腐病
在世界各地均有发生，近年来在我国各地也时有发
生；由于目前还没有有效的防治方法，爆发时会导致
相关作物严重减产和品质下降，造成严重的经济损失。
众所周知，拟南芥是生物学研究的重要实验模
式植物。特别是在拟南芥的全基因组序列被测定后，
拟南芥已经成为研究植物与植物病原菌的相互作
用分子机理的理想材料(Somerville and Meyerowitz,
2004)。目前，拟南芥与丁香假单胞菌番茄致病变种
(Pseudomonas syringae pathovar tomato, Pst)的互作研
究系统已经建立，并且已经成为研究寄主植物—病
原细菌相互作用分子机理的最重要的研究体系之一
(Whalen et al., 1991)。可是，尽管人们早在二十年前
就已用拟南芥作为寄主来研究 Xcc 与寄主植物互
作的机理(Si-mpson et al., 1990; Lummerzheim et al.,
1993)，但到目前为止，一套完善的拟南芥-Xcc相互作
用实验系统还没有建立(Somerville and Meyerowitz,
2004)。目前，人们通常用白菜、萝卜和甘蓝作为寄主
植物，采用“剪叶法”来检测 Xcc的致病力(Dow et al.,
2003)。尽管一套完善的在白菜、萝卜和甘蓝等上检测
Xcc致病力的方法已经建立，但是，由于目前白菜、萝
卜和甘蓝等的全基因组序列没有被测定，而拟南芥
的全基因组已经完成测序；因此，使用拟南芥作为寄
主来研究寄主植物-Xcc相互作用分子机理，特别是
研究寄主植物对 Xcc浸染的防卫反应的分子机理，
有其独特的优势。
为了建立一套完善的在拟南芥上检测 Xcc致病
力的方法，本研究比较了“压渗法”、“剪叶法”和“穿
刺法”3种接种方法对 Xcc在拟南芥上的致病力的
影响。我们的实验结果说明，要在野生型拟南芥
Col-0上检测 Xcc8004菌株的致病力，可以采用“压
渗法”而不能用“剪叶法”和“穿刺法”。
1结果与分析
1.1拟南芥试验用苗的温室栽培
生长良好的拟南芥小苗是获得准确有效的致病
力数据的前提条件，而拟南芥对生长条件(光照,温度,
湿度和培养基质)的要求比较高，因此建立一套拟南
芥试验用苗的温室栽培方法非常重要。“材料和方
法”一节中的“3.2拟南芥种子的发芽和幼苗的培养”
部分描述的方法，是我们经过长期摸索而总结的拟
南芥试验用苗的温室栽培方法。
1.2拟南芥 Col-0接种 Xcc8004的最佳方法的筛选
目前在甘蓝、花椰菜、白菜、芥菜和萝卜等寄主
植物上接种 Xcc的方法主要有叶片压渗法、剪叶法
和叶片中脉穿刺法 3种。实验证明，这 3种接种方法
均能使 Xcc在这些寄主植物上致病良好。但是这 3种
方法是否也适合于接种拟南芥还不清楚。为了明确
叶片压渗法、剪叶法和叶片中脉穿刺法是否适用在
拟南芥上检测 Xcc的致病力，我们在拟南芥 Col-0
生态型上分别用这 3种方法接种 Xcc8004并比较它
们的致病情况。同时，我们也分别用这 3种方法接种
Xcc8004△hrcV (已丧失致病力的突变体)，作为负对
照；接种 PstDC3000 (已经证实该菌用叶片压渗法、
剪叶法和叶片中脉穿刺法接种均能使拟南芥 Col-0
型发病)，作为正对照。此外，为了解接种菌液的菌体
密度对致病的影响，我们分别用 OD600=0.1和 OD600=
0.01两种接种菌液浓度进行接种。
图 1显示的是用这 3种方法在拟南芥 Col-0型
上接种 Xcc8004、Xcc8004△hrcV和 PstDC3000引起
的症状。从图 1中可以看出：(1)用这 3种方法接种
PstDC3000均能使拟南芥 Col-0型发病；其中压渗法
和穿刺法的发病程度很严重而剪叶法的发病程度很
轻；(2)用这 3种方法接种 Xcc8004时，只有压渗法接
种能使拟南芥 Col-0发病(程度较重)而剪叶法和叶
片中脉穿刺法接种则不能引起可观病症；(3)虽然用叶
片压渗法接种 Xcc8004和 PstDC3000均能引起拟南
芥 Col-0发病，但 PstDC3000引起的病症比 Xcc8004
366
引起的病症严重；此外，接种 PstDC3000的叶片在压
渗接种 15h后，在压渗区就出现坏死斑，随着时间推移，
坏死斑会变得严重并进一步扩展，到接种后第 3天，接
种叶片的大部分会坏死。而接种 Xcc8004的叶片要
到接种后第 3天接种部位才出现明显的黄化斑，随
着时间推移，黄化斑会变成褐色坏死斑，但病斑扩展
不明显(图 1A)。这一结果说明，PstDC3000在拟南芥
Col-0上的致病力要比 Xcc8004强。
压渗接种 Xcc8004△hrcV不能引起拟南芥Col-0
发病，说明三型分泌系统(T3SS)也是 Xcc 在拟南芥
上致病必须的，同时也说明我们的接种过程没有发
生交叉污染。3种方法接种 PstDC3000均能使拟南芥
Col-0型发病，说明我们的接种是有效的，剪叶法和
叶片中脉穿刺法接种 Xcc8004不能引起可见病症并
非由于接种失败。剪叶法和叶片中脉穿刺法接种
PstDC3000形成明显的 V型病斑(图 1B;图 1C)，说明
PstDC3000进入寄主后是从维管束扩散的。
2讨论
2.1拟南芥温室栽培的关键问题
和甘蓝、花椰菜、白菜、芥菜、萝卜和油菜等寄主
植物相比，拟南芥对生长条件(光照,温度,湿度和培
养基质)的要求比较高，温室栽培的难度也较大。通
过一段时间的探索，我们认为做好以下几点是温室
栽培拟南芥成功的关键：(1)种子点播前一定要经过置
于 4℃冰箱中春化处理 48 h；(2)温室温度不能过高，
要控制在 20~24℃之间；(3)拟南芥是一种长日照植
物，日照时间长(12 h)其莲座叶不再生长，而是抽苔
开花；相反，在日照 10 h条件下，拟南芥只进行营养
生长，且其莲座叶生长很快。所以，我们可以利用光
照时间长短来控制拟南芥的生长。为此，温室中最好
配备两种光照时间长度(长日照和短日照)的育苗架。
当我们需要小苗用于致病实验时，就在短日照育苗
架上培养，当需要繁殖种子时，就在长日照育苗架上
培养。为了避免天然日光的干扰，温室要注意遮光。
此外，光照光源用飞利浦(PHILIP)的全光谱日光灯管
(型号: TLD36w/840)会达到很好的效果。(3)营养土的
成分也是种植成功的关键因素之一。我们发现，拟南
芥在泥炭育苗基质：腐殖土：锯木屑为 1:1:1:1的营养
土中生长良好。这里需要注意的是，在这个配方中，
锯木屑的种类对生长影响很大。我们发现用杉木锯
末的效果最好，而苦楝树的锯末会抑制拟南芥生长，
所以不能使用。
图 1不同菌株的 3种接种方法造成的拟南芥致病症状
注: A:用叶片压渗法接种造成的致病症状; B:用剪叶法接种
造成的致病症状; C:用叶片中脉穿刺法接种造成的致病症状;
每一组图片的左侧的文字是菌株名称,上方是接种菌液的密
度和接种后的天数
Figure 1 The symptoms on the inoculated leaf of Arabidopsis
thaliana caused by different strains using 3 different inoculation
methods
Note: A: Symptoms resulted from leaf-infiltration; B: Symptoms
resulted from leaf-clipping; C: Symptoms resulted from main
vein-piercing; Letters on the left and top of the figures indicate
the bacterial strains, the density of bacterial suspension and days
post-inoculation, respectively
3种接种方法对十字花科黑腐病菌 Xcc8004菌株在拟南芥 Col-0上致病力的影响
Effect of 3 Inoculation Methods on the Virulence of Xcc strain 8004 on Arabidopsis thaliana Col-0 367
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
2.2 剪叶法和叶片中脉穿刺法接种 Xcc8004 不能使
拟南芥 Col-0发病的可能原因
我们实验室的徐荣旗博士等人的研究发现，
Xcc8004存在一个维管束 avr基因，其编码的蛋白能
导致 Xcc8004在拟南芥 Col-0的维管束内产生抗性
反应(Xu et al., 2007)。因此，叶片中脉穿刺法接种
Xcc-8004不能使拟南芥 Col-0发病是由于 Xcc8004
进入中脉维管束后，引起拟南芥 Col-0的维管束内
产生抗性反应的缘故。
至于为什么剪叶法接种 Xcc8004不能使拟南芥
Col-0发病。由于实验已经证明，进入寄主体内的菌
数和发病严重程度是成正比的。而在叶片压渗法、剪
叶法和叶片中脉穿刺法这 3种接种方法中，从能进
入寄主体内的细菌数量方面看，叶片压渗法叶片中
脉穿刺法剪叶法。所以，我们认为，用叶片剪叶法接
种不能使拟南芥 Col-0发病的可能原因主要是进入
寄主体内的细菌数量太少。
2.3 关于如何对叶片压渗法的致病严重程度进行定
量计算的问题
从图 1A可以看出，通过压渗将 Xcc8004接种到
拟南芥 Col-0的叶肉后第 3天起，可以在压渗部位
形成黄化病斑，随着时间推移，黄化斑会变成褐色坏
死斑，但病斑扩展不明显。从此图还可以看出，接种
高浓度(OD600=0.1)的 Xcc8004比接种浓度的发病程
度要轻，但这种差异主要表现在病斑颜色的深浅上。
而这种颜色的深浅的差异是很难定量的。所以，关于
如何对叶片压渗法的致病严重程度进行定量计算还
是一个有待解决的问题。我们认为，可以尝试通过测
定接种叶片的叶内细菌的生长来衡量发病的严重程度。
3材料和方法
3.1供试细菌菌株及培养条件
本工作所使用的细菌菌株见表 1。
Xcc丰富培养基-NYGB培养基：每升含蛋白胨
5.0 g，酵母提取粉 3.0 g，甘油 20 g，pH 7.0。在 NYGB
添加 1.5%的琼脂粉既成为固体培养基 NYGA。培养
温度：28℃。抗菌素使用浓度(终浓度)：利福平，50 g/mL；
卡那霉素，25 g/mL。
Pst丰富培养基-King氏 B培养基：每升含蛋白
胨 20 g，甘油 10 mL，磷酸钾 1.5 g，七水硫酸镁 1.5 g，
pH 7.0。在 King氏 B培养基中添加 1.5%琼脂粉既成
为固体培养基King氏 A培养基。培养温度：28℃。
3.2拟南芥种子的发芽和幼苗的培养
成熟的哥伦比亚野生型(Arabidopsis thanliana
ecotype Colombia 0, Col-0)拟南芥种子(从美国 TAIR
(The Arabidopsis information resource)购买 )在 1:100
的漂白水(蓝猫漂白水)中浸泡 15 min (期间经常摇
晃)后，用无菌水洗 3~5次。表面消毒后的种子置于
4℃冰箱中春化处理 48 h后，点播到 MS半固体培养
基(每升含MS粉末 4.3 g,蔗糖 10 g,琼脂粉 4~5 g)平
板上，然后置于 22~23℃光照培养箱中光照(光照强度:
1 808 Lux;光照周期: 12 h光照 /12 h黑暗)培养 7 d。
3.3拟南芥幼苗的土壤栽培
拟南芥幼苗在MS半固体培养基中培养 7 d后，
将长势较好的幼苗移栽到装满营养土的培养杯中。
营养土制备：将泥炭育苗基质、腐殖土、锯木屑和珍
珠岩按 1:1:1:1的比例混匀。移栽完后立即用保鲜膜
覆盖，保湿 2~3 d。培养条件：温度：22~23℃，光照强
度：1 808 Lux；光照周期：12 h光照 /12 h黑暗，相对
湿度>50%。每两天浇一次 1/5 Hoagland营养液(成分:
硝酸钙: 945mg/L;硝酸钾: 607mg/L;磷酸铵: 115mg/L;
硫酸镁: 493 mg/L;铁盐溶液: 2.5 mL/L; 微量元素溶
液: 5mL/L;pH=6.0)。3~4周龄的植株可用于致病力检测。
3.4叶片压渗接种法
3.4.1菌悬液准备
Xcc8004和 Xcc8004△hrcV接种菌液的准备：从
-80℃冰箱拿出甘油保存的菌种，在 NYGA固体培养
菌株
Strain
Xcc8004
Xcc8004△hrcV
PstDC3000
特征
Relevant characteristics
Xcc野生型菌株;抗利福平(Rif r)
The wild type strain of Xcc; Rifampicin resistance (Rifr)
Xcc8004的 hrpX基因缺失突变体;抗利福平和卡那霉素(Rif r, Kan r)
The hrpX deletion mutant of Xcc8004; Rifampicin and kanamycin resistance (Rifr, Kanr)
Pst野生型菌株
The wild type strain of Pst
来源或参考文献
Source or reference
Daniels et al., 1984
本实验室保存
Laboratory collection
本实验室保存
Laboratory collection
表 1供试菌株
Table 1 Bacterial strains used in this work
368
基上划线培养2 d后，用接种环挑一环菌体接种到
NYGB液体培养基中，置于转速为 200 r/min，温度为
28℃的摇床培养 15 h (此时 OD600=0.8~1.0,菌体处于
对数生长期的中期)，然后用 NYGB液体培养基将菌
液浓度调至所要的接种浓度(OD600=0.1和OD600=0.01)。
Pst DC3000接种菌液的准备：从-80℃冰箱拿出
甘油保存的菌种，在 King氏固体培养基上划线培养
2 d后，用接种环挑一环菌体接种到 King氏液体培
养基中，至于转速为 200 r/min，温度为 28℃的摇床
培养 12 h (此时 OD600=0.8~1.0,菌体处于对数生长期
的中期)，然后用 King氏培养基将菌液浓度调至所要
的接种浓度(OD600=0.1和 OD600=0.01)。
3.4.2叶片压渗接种方法
选取 3~4周龄的生长良好的拟南芥植株作为实
验材料。将长势一致的全展莲座叶作为待接种叶片
并做好标记，以方便接种。接种时，先将叶片翻过来，
背面朝上，用灭过菌的 1 mL注射器吸取之前准备好
的菌液 10 μL，去掉针头，用合适力度将菌液轻轻压
入叶肉细胞间隙内。由于叶的主脉被压破后，会导致
叶片生长受到影响，甚至死亡，因此压渗时应避开主
脉。接种过的叶片会在压渗过的位置周围出现一个
明显的水浸润圈(图 2)。实验设 3个重复，每个重复
至少接种 20张叶片。
3.4.3接种后植株的培养和发病情况观察
接种过的植株先用保鲜膜覆盖保湿 2 d，然后继
续在温度为 22~23℃；光照强度为 1 808 Lux；光照周
期为 12 h光照 /12 h黑暗；相对湿度>50%的温室中
图 2叶片压渗接种的实验操作过程图解
注: A:用 1 mL无菌注射器吸取稀释好的待接种菌液; B:用手
将待接种叶片的背面翻转朝上; C:在靠近叶边缘位置将菌液
轻轻入叶片叶肉细胞间隙; D:看到接种区域出现的水浸润斑,
就表示接种成功
Figure 2 Schematic of the experimental procedure for leaf-infil
tration
Note: A: Take some diluted bacterial suspension with a sterile
1 mL-syringe; B: Select a leaf and turn the leaf over (underside
up); C: Infiltrate the bacterial suspension into the intercellular
space of the leaf gently; D: Appearance of water-soaked around
the infiltrated area, indicating the success of inoculation
培养，并分别在接种后第 3天、第 6天和第 10天观
察和记录接种叶片的发病情况。每 2 d 浇一次 1/5
Hoagland营养液。
3.5剪叶法接种
3.5.1菌悬液准备
与压渗接种法同。
3.5.2剪叶接种方法
选取 3~4周龄生长良好的拟南芥植株作为实验
材料。将长势一致的全展莲座叶作为待接种叶片并
做好标记，以方便接种。接种前，先在准备好的菌液
中加入表面活性剂 Silwet L-77 (终浓度 0.02%)，混匀，
然后将灭菌的手术剪的刀口部分浸入菌液中沾取菌
液，接着，用沾有菌液的手术剪在距离叶尖 0.5 cm处
垂直于主脉剪下叶尖，并用无菌棉签蘸取菌液轻轻
压在切口上，停留 4~6 s (图 3)。实验设 3个重复，每
个重复至少接种 20张叶片。
3.5.3接种后植株的培养和发病情况观察
与压渗接种法同。
3.6叶片中脉穿刺法接种
3.6.1菌悬液准备
同压渗接种法。
3.6.2叶片中脉穿刺法接种过程
选取 3~4周龄的生长良好的拟南芥植株作为实
验材料。将长势一致的全展莲座叶作为待接种叶片
并做好标记，以方便接种。接种前，先在准备好的菌
图 3剪叶法接种的实验操作过程图解
注: A:将无菌手术剪在待接种的菌液中侵泡片刻; B:选择待
接种叶片; C:用蘸有菌液的剪刀在距叶尖 0.5 cm处垂直于主
脉方向慢慢剪下叶尖; D:用蘸有菌液的棉签轻轻在剪过的伤
口上涂抹
Figure 3 Schematic of the experimental procedure for leaf-clip-
ping
Note: A: Put a sterile scissor into the diluted bacterial suspen-
sion for awhile; B: Select a leaf; C: Cut the leaf in the place that
0.5 cm away from the tip in the direction of perpendicular to the
main vein; D: Daub the wound with a swab dipped in the bacteri-
al suspension
3种接种方法对十字花科黑腐病菌 Xcc8004菌株在拟南芥 Col-0上致病力的影响
Effect of 3 Inoculation Methods on the Virulence of Xcc strain 8004 on Arabidopsis thaliana Col-0 369
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
液中加入表面活性剂 Silwet L-77 (终浓度 0.02%)，
混匀，将灭菌的竹牙签的顶端部分浸入菌液中沾取菌
液，然后在靠近叶尖的主脉上穿刺 3~4个位置，接着
用无菌棉签蘸取菌液轻轻压在穿刺伤口上，停留几秒
(图 4)。实验设 3个重复，每个重复至少接种 20张叶片。
3.6.3接种后植株的培养和发病情况观察
与压渗接种法同。
作者贡献
唐东阶和梅雄是本研究的实验设计和实验研究
的执行人，完成数据分析及论文初稿的写作；李振江
和张慧参与部分实验；唐纪良参与实验设计和试验
结果分析；唐东阶是项目的构思者及负责人，指导实
验设计，数据分析，论文写作与修改。全体作者都阅
读并同意最终的文本。
参考文献
Daniels M.J., Barber C.E., Turner P.C., Sawczyc M.K., Byrde R.
J.W., and Fielding A,H., 1984, Cloning of genes involved in
pathogenicity of Xanthomonas campestris pv. campestris us-
ing the broad host range cosmid pLAFR1, The EMBO Jour-
nal, 3(13): 3323-3328
Dow J.M., Cro ssman L., Findlay K., He Y.Q., Feng J.X., and
图 4叶片中脉穿刺接种的实验操作过程图解
注: A:将无菌的竹牙签在待接种的菌液中侵泡片刻; B:用手
将待接种叶片的背面翻转朝上; C:将蘸有菌液的竹牙签在主
脉上的 3个地方穿刺; D:用蘸有菌液的棉签在穿刺伤口上涂
抹片刻
Figure 4 Schematic diagram of the experimental procedure for
main vein-piercing
Note: A: Put a sterile bamboo toothpick into the and diluted bac-
terial suspension for awhile; B: Select a leaf and turn the leaf
over (underside up); C: Stick the main vein in 3 places; D: Daub
the wound with a swab dipped in the bacterial suspension
Tang J.L., 2003, Biofilm dispersal in Xanthomonas campestris
is controlled by cell-cell signaling and is required for full
virulence to plants, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100 (19):
10995-11000
Hayward A.C., 1993, The host of Xanthomonas, In: Swings J.G.,
and Civerolo E.L., (eds.), Xanthomonas, Chapman & Hall,
London, pp.51-54
Lummerzheim M., Oliveira D.D., Castrestresana C., Miguens F.
C., Louzada E., Roby D., van Montagu M., and Timmerman
B., 1993, Identification of compatible and incompatible in-
teractions between Arabidopsis thaliana and Xanthomonas
campestris pv. campestris and characterization of the hyper-
sensitive response, Molecular Plant-Microbe Interactions,
6(5): 532-544
Meyer D., Lauber E., Roby D., Arlat M., and Kroj T., 2005, Opti-
mization of pathogenicity assays to study the Arabidopsis
thaliana-Xanthomonas campestris pv. campestris pathosys-
tem, Molecular Plant Pathology, 6(3): 327-333
Rudolph K., 1993, Infection of the plant by Xanthomonas, In:
Swings J.G., and Civerolo E.L., (eds.), Xanthomonas, Chap-
man & Hall, London, pp.193-264
Simpson R.B., and Johnson L.J., 1990, Arabidopsis thaliana as a
host for Xanthomonas campestris pv. campestris, Molecular
Plant-Microbe Interactions, 3(4): 233-237
Somerville C.R., and Meyerowitz E.M., 2004, Optimization of
pathogenicity assays to study the Arabidopsis, In: Somerville
C.R., and Meyerowitz E.M., (eds.), The Arabidopsis Book,
American Society of Plant. Biologists, Rockville, MD, USA,
pp.1-11
Wang J.S., ed., 2000, Pathogenic Bacteriology, China Agriculture
Press, Beijing, China, pp.235-246 (王金生,主编, 2000,植物
病原细菌学,中国农业出版社,中国,北京, pp.235-346)
Whalen M.C., Innes R.W., Bent A.F., and Staskawicz B.J., 1991,
Identification of Pseudomonas syringae pathogens of Arabi-
dopsis and a bacterial locus determining avirulence on both
Arabidopsis and soybean, The Plant Cell, 3(1): 49-59
Xu R.Q., Blanvillain S., Feng J.X., Jiang B.L., Li X.Z., Wei H.Y.,
Kroj T., Lauber E., Roby D., Chen B., He Y.Q., Lu G.T.,
Tang D.J., Vasse J., Arlat M., and Tang J.L., 2008, AvrAC
(Xcc8004), a type Ⅲ effector with a leucine-rich repeat do-
main from Xanthomonas campestris pathovar campestris
confers avirulence in vascular tissues of Arabidopsis thaliana
ecotype Col-0, Journal of Bacteriology, 190(1): 343-355
370