全 文 ：收稿日期:2013-05-29; 修订日期:2013-10-29
基金项目:广西自然科学基金( No． 2011GXNSFA018192) ;
广西科学研究与技术开发计划项目( No．桂科攻 0718002-3-4)
作者简介:钟霞军( 1964-) ，女( 汉族) ，浙江上虞人，广西中医药大学副研
究员，学士学位，主要从事中医药标本、中药成分分析与质量研究工作．
* 通讯作者简介:黄荣韶( 1963-) ，男( 汉族) ，广西玉林人，广西大学农学
院教授，博士学位，主要从事药用植物资源研究与利用工作．
光石韦抑菌活性的研究
钟霞军1，蓝 芳2，朱丹青3，李雁群4，黄荣韶3*
(1．广西中医药大学医药会展中心，广西 南宁 530001; 2．广西大学研究生处，广西 南宁 530004;
3．广西大学 农学院，广西 南宁 530004; 4．华南农业大学 生命科学学院，广东 广州 510642)
摘要:目的 研究光石韦总黄酮、总皂苷、总多糖的抑菌作用。方法 采用纸片扩散法测量光石韦总黄酮、总皂苷和多糖对
8种微生物的抑菌圈大小，并采用二倍稀释法测定其对敏感菌的最低抑菌浓度( MIC) 。结果 光石韦总黄酮、总皂苷和多
糖对供试细菌有不同程度的抑菌作用，且抑制作用均随着提取物浓度的升高而增强。结论 光石韦总黄酮、总皂苷和多
糖对供试菌具有一定的抑制作用，是一种潜在的亟待开发利用的植物。
关键词:光石韦; 总黄酮; 总皂苷; 多糖; 抑菌活性
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 03． 022
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 03-0574-02
Study on the Antimicrobial Activity of Pyrrosia Calvata
ZHONG Xia-jun1，LAN Fang2，ZHU Dan-qing3，LI Yan-qun4，HUANG Ｒong-shao3*
( 1． Traditional Chinese Medicine Exhibition Center，Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning
Guangxi 530001，China; 2． Postgraduate Department，Guangxi University，Nanning Guangxi 530004，Chi-
na; 3． Agricultural College，Guangxi University，Nanning Guangxi 530004，China; 4． College of Life Science，
South China Agricultural University，Guangzhou Guangdong 510642，China)
Abstract: Objective To research the inhibition effect of total flavonoids，total saponin and polysaccharide from Pyrrosia． Calva-
ta ( Bak． ) Ching． Methods Imipenem inhibition zone of eight kinds of microorganism was measured by the paper dispresion
method of total flavonoids，total saponin and polysaccharide from Pyrrosia． Calvata ( Bak． ) Ching and their minimum inhibitory
concentrations( MIC) against sensitive microorganisms were determined by two fold dilution method in this study． Ｒesults The to-
tal flavonoids，total saponin and polysaccharide from Pyrrosia． calvata ( Bak． ) Ching showed different grades of inhibitory effect
on microorganisms and the antimicrobial activity enhanced along with the increase of the concentration． Conclusion The total fla-
vonoids，total saponin and polysaccharide from Pyrrosia． calvata ( Bak． ) Ching may have the growth inhibition on microorgan-
isms，which inplied the Pyrrosia． calvata ( Bak． ) Ching with potential value．
Key words: Pyrrosia． calvata ( Bak． ) Ching; Total flavonoids; Total saponin; Polysaccharide; Antimicrobial activity
光石韦 Pyrrosia． calvata (Bak．)Ching为水龙骨科石韦属多
年生草本植物，别名大肺痨草［1］，以全草入药，具有利尿通淋、清
热止血的功效，用于热淋、血淋、石淋、小便不通、吐血、崩漏、肺热
喘咳等［2，3］。《广西中药材标准》1990 年版收载光石韦作为广西
地方习用药材［4］。目前国内外关于石韦属植物的研究多集中在
《中国药典》2010 年版所收录的有柄石韦、庐山石韦和石韦上，针
对光石韦的研究开展较少，关于光石韦抗菌活性的研究至今尚未
见报道［5］。本研究采用纸片扩散法对光石韦地上部分中的黄酮
类、皂苷类和多糖展开抑菌活性研究，首次观察到光石韦的抗菌
作用，为促进石韦属植物的研究和合理开发利用提供科学依据。
1 材料
1． 1 材料 光石韦采自广西靖西，经广西大学植物分类学黎桦副
教授鉴定分别为光石韦 Pyrrosia． calvata (Bak．)Ching。将植株
的地上部分洗净，自然风干后磨成粉末，过 40 目筛备用。
1． 2 供试菌种 大肠杆菌 Escherichia coli，普通变形杆菌 Proteus
vulgaris，金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus，枯草芽孢杆菌 Ba-
cillus subtilis，藤黄微球菌 Sarcina lutea。供试真菌:黄曲霉 Asper-
gillus flavas，青霉 Penicillium sp．，黑曲霉 Aspergillus niger 由广西
大学农学院植物保护系微生物学实验室提供。
1． 3 培养基 细菌用营养琼脂培养基培养，真菌用马铃薯培养基
培养［5］。
1． 4 材料与试剂 材料包括超净工作台、手提式灭菌锅、恒温控
制箱、冰箱、游标卡尺、镊子、接种针、三角瓶等。试剂乙醇、甲醇、
正丁醇等试剂均为分析纯。
2 方法
2． 1 菌悬液或孢子悬液制备 采用平板菌落计数法［6］，将受试
菌在斜面培养基活化 2 ～ 3 代后，用接种环从斜面上刮菌苔两环，
分别收集到内盛有 100 ml无菌水的 250 ml 的三角瓶中，将受试
菌配成终浓度 0． 1 × 107 CFU·ml －1的菌悬液，备用。
2． 2 样液制备
2． 2． 1 总黄酮成分提取 称取石韦粉末 6 g，置于 100 ml三角烧
瓶中，加 80 ml 95 %乙醇，超声波提取 2． 5 h，抽滤。滤渣再加 80
ml95 %乙醇，超声波提取 2． 5 h，抽滤，合并两次滤液(60 ℃水浴
蒸干)，冷却至室温后，10 000 r /min 离心 10 min，除去少量叶绿
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 3
素及其他水不溶性杂质，上清液蒸发浓缩，干燥后得到总黄酮粗
样品粉末。准确称取 100 mg 黄酮，用乙醇溶解，配成 100 mg·
ml －1的溶液备用。
2． 2． 2 总皂苷成分提取 精密称取各样品粉末 5 g，脱脂后置于
100 ml锥形瓶中，加 40 ml 95 %的甲醇，超声提取 4 次，每次 50
min，合并提取液过滤，水浴蒸干，加少量水溶解残渣，过滤，滤液
用 40 ml水饱和正丁醇萃取 3 次，取正丁醇层，合并，水浴蒸干正
丁醇，得总皂苷物质。准确称取 100 mg 皂苷，用甲醇溶解，配成
100 mg·ml －1的溶液备用。
2． 2． 3 多糖成分提取 称取各样品粉末 5 g，加 50 ml 水，于 100
℃水浴下加热 1 h，再经 70 ～ 80 ℃水浴加热 1 ～ 2 h，过滤、去渣取
清液，在 70 ℃水浴下将清夜浓缩至 20 ～ 30 ml，加 3 倍体积的无
水乙醇，离心取沉淀，用 3 %三氯乙酸溶解沉淀，离心去沉淀，在
40 ～ 50 ℃水浴条件下将清液蒸干至恒重，得多糖提取液。准确
称取 100 mg 多糖，用无菌水溶解，配成 100 mg·ml －1的溶液备
用。
2． 3 抑菌作用的检测方法 采用纸片扩散法进行抑菌试验［6］。
在超净工作台上将灭菌后的牛肉蛋白胨培养基倒入培养皿中，每
皿 15 ml，放置冷却。用无菌移液管取 0． 1 ml细菌液加于平皿中
均匀涂布于平板(内径 90 mm)表面后。取经灭菌的标准滤纸
(直径 6 mm)，分别蘸取石韦和光石韦的总黄酮，多糖，总皂苷并
贴于平板表面，每个培养皿放 3 片滤纸，以乙醇、甲醇和无菌水为
对照液。细菌于 37 ℃培养 24 h 、真菌于 28 ℃培养 48 h后，检测
抑菌环的有无并测量抑菌环直径，每种提取液对供试菌重复测定
3 次，结果取平均值。出现抑菌环的菌株才作 MIC检测。
2． 4 最小抑菌质量浓度的检测 采用纸片扩散法方法同上，将
各溶液稀释成 60，30，15，5，2． 5，1． 25 mg /ml的质量浓度梯度，以
出现抑菌圈的最低质量浓度为最小抑菌浓度(MIC)。
3 结果
3． 1 光石韦总黄酮、总皂苷和多糖对细菌的抑制效果 对光石韦
地上部分总黄酮、总皂苷和多糖提取物的抑菌活性进行比较。结
果见表 1。光石韦不同提取物对 5 种细菌的抑制作用各不相同，
并存在一定差异。光石韦总黄酮对藤黄微球菌无抑制作用，对大
肠杆菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有较
强抑制作用，抑菌圈直径分别为 12． 7，17． 3，11． 0 和 10． 0 mm;光
石韦总皂苷对大肠杆菌、普通变形杆菌和藤黄微球菌无抑制作
用，对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用，抑菌圈直径
分别为 9． 2 和 12． 0 mm;光石韦多糖对藤黄微球菌无抑制作用，
对大肠杆菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌和枯燥芽孢杆菌有
抑制作用，抑菌圈直径分别为 8． 3，8． 7，8． 3 和 9． 3 mm。对照均
无抑制作用。
表 1 光石韦总黄酮、总皂苷和多糖对细菌的抑菌作用(抑菌圈直径)
mm
成分 大肠杆菌
普通变形
杆菌
藤黄
微球菌
金黄色
葡萄球菌
枯草芽
孢杆菌
总黄酮 12． 7 17． 3 － 11． 0 10． 0
总皂苷 － － － 9． 2 12． 0
多糖 8． 3 8． 7 － 8． 3 9． 3
3． 2 光石韦总黄酮、总皂苷和多糖最小抑菌浓度比较 根据抑菌
圈的测定结果，选取大肠杆菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌和
枯草芽孢杆菌进行最低抑菌浓度试验，结果见表 2。光石韦总黄
酮提取物对普通变形杆菌抑制效果最好，最小抑菌浓度为 15 mg
·ml －1，对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为 30 mg·
ml －1，对金黄葡萄球菌的抑制作用稍差，最低抑菌浓度为 60 mg
·ml －1;总皂苷提取物枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为 30 mg·
ml －1，对金黄色葡萄球菌抑制作稍差，为 60 mg·ml －1;多糖提取
物对 4 种细菌的最低抑菌浓度均为 60 mg·ml －1。
表 2 光石韦不同提取物的最低抑菌浓度 mg·ml － 1
成分 大肠杆菌 普通变形杆菌 金黄葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
总黄酮 30 15 60 30
总皂苷 － － 60 30
多糖 60 60 60 60
3． 3 光石韦总黄酮、总皂苷和多糖对真菌抑制效果 对光石韦三
种提取物进行真菌抑菌活性试验。结果见表 3。石韦总黄酮对
黄曲霉存在一定抑制作用，抑菌圈直径为 8． 3 mm，对黑曲霉和青
霉无抑制作用，石韦皂苷和多糖对黄曲霉、黑莓和青霉均无抑制
作用。
表 3 光石韦总黄酮、总皂苷和多糖对真菌的抑制作用(抑菌圈直径)
mm
菌种 总黄酮 总皂苷 多糖
黄曲霉 8． 5 ± 0． 17 － －
黑曲霉 － － －－
青霉 － － －－
4 结论与讨论
本研究比较了光石韦总黄酮、总皂苷和多糖的抑菌作用，发
现光石韦三种提取物对不同供试菌的抑制作用各不相同，且对供
试菌的种类存在选择性。光石韦总黄酮和多糖均对大肠杆菌、普
通变形杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌存在抑制作用，光
石韦总皂苷仅对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌存在抑制作用;
从最低抑菌浓度的试验结果来看，各供试菌对三种提取物的敏感
性不同，大肠杆菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆
菌这 4 种细菌均对石韦总黄酮最敏感，其最低抑菌浓度分别是
30，15，15，15 mg·ml －1，说明石韦的三种提取物中，总黄酮的抑
菌广谱性最强，可能与总黄酮提取物中含有较多抑菌活性成分有
关。在抗真菌试验中，除石韦总黄酮对黄曲霉存在抑制作用，其
它几种提取物对黄曲霉、黑曲霉、青霉均无抑制作用，这与庄惠如
等［7］发现蕨类提取物的抗细菌活性大于抗真菌活性的研究结果
一致。
参考文献:
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