全 文 ：第３５卷第５期
２ ０ １ ２年９月
河 北 农 业 大 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＨＥＢＥＩ
Ｖｏｌ．３５Ｎｏ．５
Ｓｅｐ．２ ０ １ ２
文章编号：１０００－１５７３（２０１２）０５－００６７－０５
拟南芥ＡｔＣＣａＰ２基因缺失突变体的鉴定及表型观察
高 亢， 马惠斌， 吴立柱， 潘延云＊
（河北农业大学 生命科学学院，河北 保定，０７１００１）
摘要：本研究拟利用反向遗传学研究ＡｔＣＣａＰ２基因的功能。通过ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ的方法筛选和鉴定了拟南
芥ＡｔＣＣａＰ２基因的Ｔ－ＤＮＡ插入突变纯合体ａｔｃｃａｐ２，该纯合体ＡｔＣＣａＰ２基因表达缺失。ＲＴ－ＰＣＲ分析显示该
基因在拟南芥雌雄蕊等生殖器官中有较多的表达。通过对生长表型的观察发现ａｔｃｃａｐ２突变体出现早花现象，
抽薹时间较野生型早３ｄ，显示该基因可能参与了拟南芥的早花表型。
关 键 词：拟南芥；ＡｔＣＣａＰ；反向遗传学
中图分类号：Ｑ７８９ 文献标志码：Ａ
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ Ｔ－ＤＮＡ ｉｎｓｅｒｔ ＡｔＣＣａＰ２
ｇｅｎｅ ｍｕｔａｎｔ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ
ＧＡＯ Ｋａｎｇ，ＭＡ Ｈｕｉ－ｂｉｎ，ＷＵ Ｌｉ－ｚｈｕ，ＰＡＮ Ｙａｎ－ｙｕｎ＊
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡｔＣＣａＰ２ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅ ｇｅｎｅｔｉｃｓ
ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ Ｔ－ＤＮＡ ｉｎｓｅｒｔ ＡｔＣＣａＰ２ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ，ａｎｄ
ｔｈｅ ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ ｍｕｔａｎｔ ａｔｃｃａｐ２ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ．ＲＴ－ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＡｔＣＣａＰ２ ｇｅｎｅ
ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｔａｍｅｎ ａｎｄ ｐｉｓｔｉｌ ｔｈａｎ ｉｎ ｌｅａｆ．Ｔｈｅ ａｔｃｃａｐ２ ｍｕｔａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｅａｒｌｙ ｂｏｌ－
ｔｉｎｇ ３ｄａｙｓ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ．Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＡｔＣＣａＰ２ ｇｅｎｅ ｍｉｇｈｔ ｃａｕｓｅ ｅａｒｌｙ
ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ，ＡｔＣＣａＰ，ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｃａ２＋作为动植物细胞中重要的信号分子，参与
了动植物生长发育及多种生理过程和对外界刺激的
应答反应［１］。钙信号通路中Ｃａ２＋往往通过钙结合
蛋白（Ｃａｌｃｉｕｍ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣａＢＰｓ）进一步调节
下游靶酶或靶蛋白的活性，参与生理反应。这些钙
结合蛋白也称为Ｃａ２＋的传感器。植物中的ＣａＢＰｓ
有３个家族，分别是具有ＥＦ手型结构的ＣａＢＰ蛋白
家族，内质网腔ＣａＢＰ家族和 Ａｎｎｅｘｉｎ家族［１］。其
中具有ＥＦ手型结构的ＣａＢＰ蛋白家族是最大的家
族，ＥＦ手型结构可以结合１～４个Ｃａ２＋，根据结合
的Ｃａ２＋数量具有不同的调节活性。内质网腔ＣａＢＰ
家族中有多个成员，如钙网蛋白是一个典型的内质
网腔ＣａＢＰ家族成员，参与了蛋白伴侣激活，细胞粘
附等生理过程［２－３］。Ａｎｎｅｘｉｎｓ家族在拟南芥中已经
发现了７个成员，成员间有一个共同的特点，能够在
依赖Ｃａ２＋的情况下结合酸性磷脂，在离子转运与细
收稿日期：２０１２－０５－１０
基金项目：国家自然科学基金项目（Ｎｏ．３０５７０９９３）；河北省自然基金项目（Ｃ２００８０００２９２）．
作者简介：高 亢（１９８６－），男，河北省石家庄市人，在读硕士生．
通讯作者：潘延云（１９６３－），女，河北省保定市人，博士，教授，从事植物细胞信号转导研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｙｙｃｅｌ＠１６３．ｃｏｍ．
６８ 河 北 农 业 大 学 学 报 第３５卷
胞骨架重排等基本细胞生理过程中发挥作用［４］。
ＡｔＣＣａＰ２ 是拟南芥胞质钙结合蛋白 （Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ
Ｃａ２＋－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＣａＰ），该蛋白是２００７年
Ｙｕｋｉ等［５］利用从萝卜主根中发现的一类酸性ＣａＢＰ
（也称为囊泡钙结合蛋白 Ｖａｃｕｏｌｅ Ｃａ２＋－ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＶＣａＢ）与拟南芥基因组进行序列对比后
发现的一类钙结合蛋白，拟南芥基因组中有３个基
因，分别为ＡｔＣＣａＰ１、ＡｔＣＣａＰ２和ＡｔＣＣａＰ３。Ｙｕ－
ｋｉ等对这３个新型的ＣａＢＰ进行了组织和细胞水平
的表达分析，发现这３个基因各自具有组织特异性
但均定位于细胞质中［５］。目前除了了解ＡｔＣＣａＰ１
可能参与了光或赤霉素刺激的应答反应外，其余生
物学功能尚属未知。本研究从 ＡＢＲＣ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｓｏｕｒｃｅ ｃｅｎｔｅｒ）中获得了一株 Ｔ－ＤＮＡ
插入ＡｔＣＣａＰ２基因的突变体，进行了纯合突变体
的筛选和表达检测，获得了该基因表达缺失的纯合
突变体；通过对该突变体生长表型的观察，发现突变
体抽薹时间较野生型早。初步说明该基因可能参与
了拟南芥开花转换与茎伸长等生理过程，为进一步
利用反向遗传学的方法研究该基因的生物学功能奠
定了基础。
１ 材料与方法
１．１材料 野生型拟南芥
（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ ｅｃｏｔｙｐｅ）为
河北农大生命学院植物抗逆实验室保存，ＡｔＣＣａＰ２
基因Ｔ－ＤＮＡ插入突变体拟南芥种子购自ＡＢＲＣ突
变体库，编号Ｃｓ８７４０１４，命名为ａｔｃｃａｐ２。
１．２ 试剂和工具酶
ＴａＫａＲａ ＲＮｉｓｏ Ｐｌｕｓ ＲＮＡ提取试剂盒；小量琼
脂糖凝胶回收试剂盒为北京庄盟产品；ＲＴ－ＰＣＲ一
步 法 反 转 录 试 剂 盒、Ｍ－ＭＬＶ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎ－
ｓｃｒｉｐｔａｓｅ、各种限制性内切酶、均为ＴａＫａＲａ公司产
品；ｄＮＴＰ、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（Ｔｉａｇｅｎ公司）；其他生
化试剂均为进口分装或国产分析纯试剂。
１．３ 拟南芥的培养
拟南芥种子用２．５％次氯酸钠消毒１０ｍｉｎ后，
无菌水洗３～４次，４℃暗中处理３ｄ，播种在固体
ＭＳ培养基上于２２℃，１６ｈ／８ｈ光暗周期，光照强度
６ ０００～８ ０００ｌｘ环境中培养。幼苗长出２～４片真
叶后，移栽到浸透 Ｈｏａｇｌａｎｄ营养液的蛭石中，相同
温度和光照条件继续培养，每周浇一次 Ｈｏａｇｌａｎｄ
营养液。记录抽薹时间，培养３０ｄ后，测量植株抽
薹高度，使用ＳＰＳＳ１７．０软件进行数据分析。
１．４ 拟南芥ａｔｃｃａｐ２突变体纯合体的筛选和鉴定
从ＡＢＲＣ库中获得的拟南芥突变体种子，播种
后采摘莲座叶按照文献［６］提供的方法提取基因组
ＤＮＡ。以基因组ＤＮＡ为模板，根据ｈｔｔｐ：／／ｓｉｇｎａｌ．
ｓａｌｋ．ｅｄｕ／网站上提供的Ｔ－ＤＮＡ插入位点信息（图
１），设计引物并利用ＰＣＲ的方法检测样本中是否有
Ｔ－ＤＮＡ插入及插入位点。如图１所示，网站提供
ａｔｃｃａｐ２突变体的Ｔ－ＤＮＡ插入位点为距ＡＴＧ下游
第４５２核苷酸处，据此设计合成３条引物：ＬＰ１：５′－
ＧＴＴＧＡＡＣＡＡＧＴＣＡＣＴＣＣＡＧＴ－３′，该引物位于
ＡＴＧ 下 游 第 １９８ 核 苷 酸 处；ＲＰ１：５′－ＴＡＣＴＣ－
ＣＴＣＧＧＣＣＴＴＣＴＣＡＡＣＧＧ－３′，该引物位于 ＡＴＧ
下游 第 ５７７ 核 苷 酸 处；ＬＢ２：５′－ＧＣＴＴＣＣＴＡＴ－
ＴＡＴＡＴＣＴＴＣＣＣＡＡＡＴＴＡＣＣＡＡＴＡＣＡ－３′，该引
物位于插入Ｔ－ＤＮＡ序列中的右侧（图１）。引物由
上海生工公司合成。以样本ＤＮＡ为模板，分别以
ＬＰ１／ＲＰ１和ＬＰ１／ＬＢ２为组合引物进行ＰＣＲ。ＰＣＲ
反应条件为：９４℃５ｍｉｎ；９４℃３０ｓ，５３℃４５ｓ，７２
℃３０ｓ，３０个循环；７２℃１０ｍｉｎ。ＰＣＲ扩增产物经
１％的琼脂糖凝胶电泳，根据电泳结果进行样本
ＤＮＡ中是否有Ｔ－ＤＮＡ插入片段的分析。
图１ ａｔｃｃａｐ２突变体中Ｔ－ＤＮＡ插入位点
Ｆｉｇ．１ Ｔ－ＤＮＡ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｓｉｔｅ ｏｆ ａｔｃｃａｐ２ ｍｕｔａｎｔ
１．５ ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡｔＣＣａＰ２基因的表达量
提取待检测拟南芥植株的总 ＲＮＡ，反转录为
ｃＤＮＡ，以此为模板，选用根据内含子区域的设计的
引 物 ＬＰ２（５′－ＡＴＣＣＧＧＡＡＡＴＧＡＴＴＡＧＴＴＡＴ－
ＣＡ－３′）与ＲＰ１为引物组合，同时以ＬＰ１／ＲＰ１为引
物组合分别检测样本植株中ＡｔＣＣａＰ２基因转录表
达水平，以Ａｃｔｉｎ２基因作为对照，Ａｃｔｉｎ２所用引物
为 Ａｃｔｉｎ２Ｆ：５′－ＧＴＴＡＧＣＡＡＣＴＧＧＧＡＴＧＡＴＡＴ－
ＧＧ－３′；Ａｃｔｉｎ２Ｒ：５′－ＴＣＣＡＣＡＴＣＡＣＡＣＴＴＣＡＴ－
ＧＡＴ－３′。总ＲＮＡ的提取和转录均按照ＴＡＫＡＲＡ
公司产品的试剂盒说明操作。ＰＣＲ条件为：９４℃５
ｍｉｎ；９４℃３０ｓ，５３℃４５ｓ，７２℃３０ｓ，２８个循环；７２
℃１０ｍｉｎ。琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
２ 结果与分析
２．１ ＡｔＣＣａＰ２的序列分析
文献报道，ＡｔＣＣａＰ 家族基因为新型的囊泡钙
第５期 高 亢等：拟南芥ＡｔＣＣａＰ２基因缺失突变体的鉴定及表型观察 ６９
结合蛋白，包括３个成员。序列比对后发现，ＡｔＣ－
ＣａＰ２（ＤＤＢＪ／ＧｅｎＢａｎｋＴＭ／ＥＢＩ ｌｏｃｕｓ ＩＤ，Ａｔ１ｇ１２０８０）
基因编码１３８个氨基酸，与 ＡｔＣＣａＰ１ 的氨基酸
序列同源性为５０．７６％，而与ＡｔＣＣａＰ３ 同源性为
７２．３４％。根据 Ｃｈｏｕ和Ｆａｓｍａｎ的方法检测［７］，
ＡｔＣＣａＰ２ 具有螺旋结构的ＥＦ手型钙结合域，不
具有肌钙集蛋白的结构域。因此推测该蛋白为
Ｃａ２＋结合蛋白，属于ＥＦ手型结构的ＣａＢＰ蛋白家
族。
２．２ ＡｔＣＣａＰ２基因Ｔ－ＤＮＡ插入突变体纯合体的
鉴定及基因表达检测
拟南芥Ｔ－ＤＮＡ插入突变体是通过农杆菌介导
获得的，通过遗传转化使Ｔｉ质粒上的４．４ｋｂ的Ｔ－
ＤＮＡ整合到拟南芥基因组。该 Ｔ－ＤＮＡ会破坏被
插入基因的正常转录，且用普通的ＰＣＲ方法扩增不
出Ｔ－ＤＮＡ插入两侧引物区域的ＤＮＡ片段。根据
方法１．４鉴定的结果，我们分别获得了 Ｔ－ＤＮＡ插
入ＡｔＣＣａＰ２基因的纯合体和杂合体（图２）。
Ａ：ＰＣＲ电泳图；Ｂ：ａ扩增条带的测序结果及序列比对；Ｃ：ｂ扩增条带的测序结果和序列比对图２ ＡｔＣＣａＰ２突变体的鉴定
Ｆｉｇ．２ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍａｐ ｏｆ ＡｔＣＣａＰ２ ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
图２Ａ电泳图显示，野生型（ＷＴ）对照中，没有
Ｔ－ＤＮＡ插入片段，因此ＰＣＲ后只能扩出ＬＰ１／ＲＰ１
引物组合的ＤＮＡ片段，片段大小为４０１ｂｐ，与预计
相符（ａ泳道）；而来自 ＡＢＲＣ的１号植株的 ＤＮＡ
样本中，既能以ＬＰ１／ＲＰ１引物组合扩增出４０１ｂｐ
的ＤＮＡ片段，也能以 ＬＰ１／ＬＢ２引物组合扩增出
３６０ｂｐ的片段（片段长度与预计相符）说明该样本
中一条染色体有 Ｔ－ＤＮＡ插入（ｂ泳道），另一条染
色体没有Ｔ－ＤＮＡ的插入（ａ泳道），为杂合体植株，
以ＡｔＣＣａＰ２／ａｔｃｃａｐ２ 表示。而２号植株只能扩增
出ＬＰ１／ＬＢｂ１引物组合的片段，说明两条染色体上
均有Ｔ－ＤＮＡ的插入，为突变纯合体植株，以ａｔｃ－
ｃａｐ２表示。图２Ｂ显示ａ泳道条带和ｂ泳道条带测
序及比对结果，ａ条带序列与ＡｔＣＣａＰ２基因序列相
７０ 河 北 农 业 大 学 学 报 第３５卷
符；ｂ条带部分与ＡｔＣＣａＰ２基因序列相符（图２Ｃ中
黑体部分），其他为插入的Ｔ－ＤＮＡ部分序列。试验
进一步对上述鉴定植株做了ＡｔＣＣａＰ２基因转录水
平的检测，检测该基因是否会由于 Ｔ－ＤＮＡ的插入
影响转录。由于检测用引物同为ＬＰ１和ＲＰ１，而该
基因在此区域内没有内含子（图１），以ｃＤＮＡ为模
板进行的 ＲＴ－ＰＣＲ 将与以 ＤＮＡ 为模板进行的
ＰＣＲ结果一致，无法显示提取的总ＲＮＡ中是否有
基因组ＤＮＡ的污染，因此在ＡｔＣＣａＰ２基因的内含
子区域设计引物ＬＰ２做为阴性对照。根据方法１．５
检测结果，ＷＴ、ＡｔＣＣａＰ２／ａｔｃｃａｐ２ 和ａｔｃｃａｐ２ 的３
份样本中，ＬＰ２和ＲＰ１引物组合的ＲＴ－ＰＣＲ均不能
扩出条带，说明提取的总ＲＮＡ样本中没有基因组
ＤＮＡ的污染，可以用来检测目的基因的转录（图３）。
图３ ＡｔＣＣａＰ２突变体转录水平的检测
Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＡｔＣＣａＰ２ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ．
以此为对照，以ＬＰ１和 ＲＰ１引物组合进行的
ＲＴ－ＰＣＲ，扩增循环数为２８。野生型拟南芥（ＷＴ）
中扩出了４０１ｂｐ的片段，显示ＡｔＣＣａＰ２ 基因正常
表达；ＡｔＣＣａＰ２／ａｔｃｃａｐ２ 中也能扩增出相同的片
段，但较 ＷＴ含量低，说明杂合体中该基因的表达
量下降；ａｔｃｃａｐ２中则没有扩增条带，说明该纯合体
中由于Ｔ－ＤＮＡ的插入导致ＡｔＣＣａＰ２ 基因的表达
缺失，为功能缺失突变体。
２．３ ＡｔＣＣａＰ２的组织表达特征
为了探索ＡｔＣＣａＰ２ 可能的生物学功能，试验
分别检测了该基因在植株各个组织中的表达特征。
分别提取各组织部位的总ＲＮＡ按照方法１．５进行
ＲＴ－ＰＣＲ，结果显示，该基因在根、叶等营养组中表
达较低，而在雄蕊、雌蕊、长角果等生殖组织中表达
较高（图４）。暗示该基因可能更多地参与生殖生长
的生理过程。
图４ ＡｔＣＣａＰ２基因在各组织中的表达
Ｆｉｇ．４ ＡｔＣＣａＰ２ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅｓ．
２．４ ａｔｃｃａｐ２突变体表型分析
按照方法１．３进行拟南芥的培养和突变体生长
表型的检测。在一个花盆中分别按照图５Ｂ的排列
方式种下ＡｔＣＣａＰ２／ａｔｃｃａｐ２、ａｔｃｃａｐ２ 和两株野生
型对照，发现在整个生长周期中，幼苗期突变体与对
照没有明显的变化，但进入抽薹期后，ａｔｃｃａｐ２明显
较杂合体和野生型生长速率快，显示出早花特征，抽
薹时间较野生型平均早３ｄ（图５Ａ）。
图５ ａｔｃｃａｐ２表型特征
Ｆｉｇ．５ ＡｔＣＣａＰ２ ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
统计结果显示，野生型拟南芥在培养３０ｄ后，
抽薹率达到８０％，但薹的长度仅为０．５ｃｍ；此时
ＡｔＣＣａＰ２／ａｔｃｃａｐ２薹的高度１ｃｍ，而ａｔｃｃａｐ２薹的
长度已经达到４．３ｃｍ，统计学分析显示为显著差异
（Ｐ＜０．０１）（图５Ｃ）。拟南芥的抽薹意味着从营养
生长向生殖生长的转换，因此，该表型特征初步显示
ＡｔＣＣａＰ２基因可能参与了拟南芥生殖生长的生理
过程。
第５期 高 亢等：拟南芥ＡｔＣＣａＰ２基因缺失突变体的鉴定及表型观察 ７１
４ 讨论
反向遗传学是指从已知的基因序列出发，通过
对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因
插入／缺失、基因置换等，获得该基因突变产生的突
变体，根据突变体表型的变化研究该基因的功能。
随着基因组计划的完成，反向遗传学已经是研究基
因功能的有效方法之一［８］。目前拟南芥用农杆菌侵
染的方法已经创造出大量Ｔ－ＤＮＡ插入突变体［ｈｔ－
ｔｐ：／／ｓｉｇｎａｌ．ｓａｌｋ．ｅｄｕ／］，据２００３年 Ａｌｏｎｓｏｅｔ等报
道表明［９］，在ＳＡＬＫ库中，已经存在２２５ ０００种插入
位点，但对Ｔ－ＤＮＡ精确定位的只有９ ０００个。因此
从突变体库中获得突变体体后，首先要对突变体进
行Ｔ－ＤＮＡ插入位置的鉴定。结果２．２显示，本研
究获得的ａｔｃｃａｐ２突变体，Ｔ－ＤＮＡ插入位点与网站
公布的一致，并且验明在突变体中，ＡｔＣＣａＰ２ 基因
的确因Ｔ－ＤＮＡ的插入造成转录缺陷，表明该突变
体可以用于对ＡｔＣＣａＰ２ 基因功能的研究。通过对
ａｔｃｃａｐ２的表型观察，发现该突变体较野生型抽薹
时间早２～３ｄ，暗示着该基因的缺失表达可能使得
植物过早地从营养生长转向了生殖生长（图５）；另
外，Ｙｕｋｉ等利用ＧＵＳ报告基因的定位研究显示，
ＡｔＣＣａＰ２在根、茎、花和长角果中等均有表达，本研
究利用ＲＴ－ＰＣＲ检测不同组织中该基因的转录水
平，发现除莲座叶外，其他部位均转录表达，尤其在
雄蕊中表达较高（图４），该结果与文献报道相符，同
时也提示该基因可能参与生殖生长的过程。上述结
果为进一步利用反向遗传学以ａｔｃｃａｐ２为材料研究
ＡｔＣＣａＰ２基因的功能奠定了基础。
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