全 文 ：中国农学通报 2010,26(15):25-31
Chinese Agricultural Science Bulletin
基金项目：国家自然科学基金“新型芥子酶基因TGG4和TGG5的表达调控及生物学功能研究”(30571064)。
第一作者简介：辛曙丽，女，河南焦作人，1984年出生，在读硕士，从事专业为作物遗传育种。通信地址：571101海南省海口市城西学院路4号热带生
物技术研究所B401，Tel：0898-66984866，E-mail：xsl-1984@163.com。
通讯作者：张家明，男，湖北公安人，1966年出生，研究员，博士生导师，主要从事分子生物学及作物遗传育种研究。Tel：0898-66986190，E-mail：
jmzhang@vip.163.com。
收稿日期：2010-04-23，修回日期：2010-05-25。
拟南芥TGG5基因的克隆、表达和酶学特性
辛曙丽 1，张家明 2
（1海南大学农学院，海口 571101；2中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海口 571101）
摘 要：芥子酶是广泛存在于十字花科植物中的一类降解硫代葡萄糖苷的酶。当植物受到病虫侵袭时，
芥子酶与其底物硫代葡萄糖苷结合，释放有毒的水解产物形成植物重要的化学防御系统。TGG5是新
发现的一类芥子酶基因，对其研究将有利于揭示芥子酶防御系统的功能。试验克隆了拟南芥TGG5基
因 cDNA，构建酵母表达载体，转化毕氏酵母GS115。经甲醇诱导表达和Ni亲和层析，获得纯化的
TGG5重组蛋白。SDS-PAGE分析表明，重组蛋白分子量集中在58 kD左右，并有较明显拖尾，呈现典型
的糖基化蛋白的特征。进一步探讨了TGG5重组蛋白的酶学特性，结果表明：该芥子酶的Km为 1.96
mmol/L，Vmax为 0.084 mmol/(min·mg)；酶反应的最适 pH为 5.5；该芥子酶在 37~80℃范围内有较广泛的
温度适应性，并具有较好的80℃热稳定性；NaCl对该酶有明显的抑制作用；低浓度抗坏血酸具有激活芥
子酶的作用，抗坏血酸终浓度为1.5 mmol/L时，酶活力最大。RT-RCR分析，证实了TGG5只在拟南芥根
中特异表达，这表明TGG5可能代表了一个芥子酶基因新亚家族。
关键词：拟南芥；芥子酶；TGG5；RT-PCR；酶活性
中图分类号：Q943.2 文献标志码：A 论文编号：2010-1291
Cloning, Expression of Myrosinase Gene TGG5 in Arabidopsis thaliana and
Character of Myrosinase Activity
Xin Shuli1, Zhang Jiaming2
（1College of Agriculture, Hainan University, Haikou 571101；
2Institute of Tropical Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101）
Abstract: Myrosinase widely exists in the Cruciferae plant, which can catalyse the hydrolysis of
thioglucosides. Myrosinase and glucosinolate are mixed upon infestation by pests, and thioglucosides are
hydrolyzed into toxic compounds to serve as defense weapons. A new myrosinase gene was found, denoted as
TGG5. The research of myrosinase gene TGG5 could explore the function of myrosinase defense system. In this
research, the cDNA sequence of TGG5 was cloned, and the pichia expression vector pPIC3.5K was
constructed, then transformation of pichia GS115 was made. The expression of recombinant TGG5 protein was
induced by Methanol, and purified by Ni-chelating colum. SDS-PAGE analysis showed that the recombinant
protein concentrated in the 58 kD molecular weight around and showed typical features of protein glycosylation
with a more visible tail. The myrosinase activity of recombinant TGG5 protein was future researched after
separation and purification. The results indicated that the Km and Vmax of the enzyme were 1.96 mmol/L and
0.084 mmol/(min·mg) respectively. The optimal pH of tested myrosinase was 5.5. The myrosinase showed the
wider adaptability in the temperature range of 37~80℃, and took on better stability on 80℃ high temperature.
NaCl had an obvious inhibitory effect on activity of tested myrosinase, but low concentration of ascorbic acid
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0 引言
芥子酶（myrosinase，EC3.2.3.1，又称β-硫苷酶、β-
硫代葡萄糖苷水解酶）广泛存在于十字花科植物中，催
化硫代葡萄糖苷水解成为葡萄糖和不稳定的中间物配
基，此配基易重排形成异硫氰化合物、硫氰化合物、腈、
噁唑烷硫酮等有毒物质[1-2]。当植物受到昆虫，哺乳动
物或病源菌伤害时，芥子酶与硫代葡萄糖苷结合，释放
有毒的水解产物来抵御病虫侵袭，因而形成植物重要
的化学防御系统，被称之为“芥子油弹”(mustard oil
bomb)[3]。另有研究表明，芥子酶水解硫代葡萄糖苷产
物中，一些物质对人类的健康十分有益，如萝卜硫素，
苯乙基异硫代氰酸盐和3-苯丙基异硫代氰酸盐等都具
有很好的抑癌或抗癌作用[4-5]。
芥子酶在十字花科植物中以多种形式存在，且所
有植物中的芥子酶均是糖蛋白，芥子酶的多样性可以
部分解释为糖基化的不同。迄今为止，已经被分离出
的同功酶表明芥子酶基因至少存在 3个亚家族，分别
是MA、MB、MC[6-7]。MA是可溶性的二聚物，MB和
MC是不可溶性的二聚物，不同的基因亚族在植物的
不同组织中表达。芥子酶不仅在十字花科等植物中广
泛存在，芥子酶活性还在植物以外的某些生物体中被
检测到，这些生物包括昆虫、真菌和细菌[8]，说明芥子
酶活性物质在自然界中是广泛存在的。
目前，拟南芥中已发现了6个芥子酶基因，分别是
TGG1、TGG2、TGG3、TGG4、TGG5和TGG6。芥子酶
基因TGG1、TGG2和TGG3是通过Southern杂交筛选
基因文库而获得的。TGG1、TGG2在拟南芥子叶、茎、
叶片、花和果荚中表达，而不在根部表达。TGG3是一
个在花中表达的假基因[9]。近年，通过搜索拟南芥基
因组序列数据库，又发现了TGG4、TGG5和TGG6基
因，其编码产物与芥子酶的某些片段相似[10]。通过检
测发现TGG4只在拟南芥根部特异表达[11]。TGG6同
TGG3类似，是花特异表达的假基因 [12]。而拟南芥芥
子酶基因TGG5的表达调控有待研究。
笔者通过RT-PCR方法验证了拟南芥TGG5的表
达特异性，并克隆了TGG5基因 cDNA编码序列全长，
构建酵母表达载体，转化毕氏酵母，进一步探讨了
TGG5重组蛋白的酶学特性。
1 材料与方法
1.1 时间与地点
试验于 2009年 4—12月，在中国热带农业科学院
热带生物技术研究所进行。
1.2 植物材料和栽培条件
材料中拟南芥的生态型Col-0 (NASC，N1092)种
子来自英国Nottingham Arabidopsis Stock Centre。采
用标准营养土栽培，置培养室培养。培养室温度为
20℃，空气相对湿度为80%，光周期为16 h/8 h，光照强
度 200 μmol/(m2·s)拟南芥子叶取自播种后 1周的幼
苗，根取自播种后2周的幼苗，叶片取自播种后5周的
植株，花和角果取自播种后4~5周的植株。
1.3 mRNA提取和TGG5 cDNA的克隆
拟南芥样品用液氮研磨，采用 3STrizol RNA提取
试剂盒（上海博彩）提取总RNA。然后采用Oligotex
Direct mRNA 纯化试剂盒（Qiagen GmbH，Hilden，
Germany)提取mRNA。用Moloney Murine Leukemia
Virus (M-MuLV) reverse transcriptase (大连宝生物)合
成第一链 cDNA。以第一链 cDNA为摸板，采用基因
特异引物G5F4（5´TCA TCA CCA AAA GAA GCC3´）
和G5R2（5´AAC ACA CAA CAA GGT ATA GGT A3´）
扩增AtTGG5基因的编码区全长 cDNA，扩增产物克
隆到 pMD19-T载体(大连宝生物)上。挑若干克隆测
序，直到获得的 cDNA序列与GenBank数据库中序列
完全一致的克隆。
1.4 毕赤酵母表达载体的构建和转化
以序列完全正确的TGG5 cDNA克隆为模板，以
G5N1（5’GGG TGA TCA CCA TGG CAA TTC CAA
AAG C 3’）和 G5C2（5’TAA ACC TAG GTT AAT
GGT GAT GGT GAT GGT GTT TTG CGA GGA ACT
TAG AGA ACC 3’）为引物，用宝生物高保真 LA Taq
酶为聚合酶，进行 PCR扩增。PCR反应的参数为
94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 2 min，25个循环。扩增产物
用 BclI和 AvrII酶切后，与 pPIC3.5K（已用 BamHI和
AvrII酶切），进行连接反应，pPIC3.5K (Invitrogen，San
Diego，CA，USA)是一个Pichia胞内表达载体。连接产
物转化大肠杆菌感受态细胞，用添加氨苄青霉素的LB
平板筛选转化菌落。挑阳性克隆提取质粒，酶切鉴
定。选择插入片断正确的克隆测序。
could activate the myrosinase, which reached to a climax with an ascorbic acid final concentration of 1.5 mmol/L.
RT-RCR detection confirmed the TGG5 gene only specificlly expressed in roots, which showed that TGG5
represent a novel myrosinase gene subfamily.
Key words: Arabidopsis thaliana; myrosinase; TGG5; RT-RCR; myrosinase activity
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辛曙丽等：拟南芥TGG5基因的克隆、表达和酶学特性
选择序列正确的克隆提取质粒，用SalI酶切线形
化后，用电击法转化酵母。电转化参数为电阻200 Ω，
电容25 μF，电压1.5 kV。转化后的细胞在MD培养基
上筛选阳性克隆。
1.5 TGG5重组蛋白的表达及纯化
随机挑取克隆，按照 Invitrogen的Pichia表达外源
基因的操作手册进行基因表达。挑取的阳性克隆，经
甲醇诱导 4天后，3500 r/min离心收集酵母菌体，用
Breaking buffer (20 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5，1 mmol/
L PMSF，1 mmol/L Benzamidine)将菌体重悬后，用玻
璃珠法破碎细胞，离心收集上清，即为TGG5酵母表达
后的粗提液。
蛋白粗提液经0.22 μm过滤膜过滤，收集滤液，用
Ni亲和层析柱过柱纯化。纯化蛋白时，先用Binding
buffer（20 mmol/L sodium phosphate, 500 mmol/L
NaCl，20~40 mmol/L Imidazole，pH 7.4）平衡柱子后，
再上，然后分别用 Elution A（20 mmol/L sodium
phosphate, 500 mmol/L NaCl, 60 mmol/L Imidazole，
pH 7.4）和Elution B（20 mmol/L sodium phosphate，500
mmol/L NaCl，500 mmol/L Imidazole，pH 7.4）洗脱目的
蛋白。用 1.5 mL的离心管收集洗脱液，每管收集 500
μL，检测各组分的芥子酶活性，选取芥子酶活性比较
集中的收集管，进行下一步酶活性研究。
1.6 芥子酶活性测定和TGG5重组蛋白酶学特性
通过检测芥子酶水解底物 sinigrin(黑芥子硫苷酸
钾)所释放的葡萄糖的量来确定芥子酶的活性。芥子
酶活性测定的反应体系是：10 μL Phosphate Buffer (50
mmol/L，pH 6.0)，2 μ L sinigrin (100 mmol/L)，2 μ L
myrosinase solution，2 μL ascorbate acid (3.0 mmol/L)，
蒸馏水定容至终体积 20 μL。混匀后置 37℃反应 30
min，95℃灭活 5 min。加入葡萄糖测定试剂（上海荣
盛）于 37℃反应 10 min，用 sunrise酶标仪（奥地利
Tecan公司）测定 505 nm消光值。根据Bradford蛋白
质测定试剂盒（上海申能博彩）的操作方法进行酶蛋白
的定量测定,并根据葡萄糖测定试剂的使用方法计算
芥子酶活性。
1.6.1 芥子酶的Vmax和Km的测定 其他条件不变的情
况下（Vc浓度为 3.0 mmol/L时），改变底物浓度，分别
测定底物浓度为1.0、2.0、2.5、4.0、5.0、8.0、10.0 mmol/L
时的酶反应初速度，按Hanes法原理作图，并计算该酶
的Km值和Vmax值。
1.6.2 pH对芥子酶活力的影响 其他条件不变的情况
下，分别测定缓冲液 pH为 3.0、4.5、5.5、6.5、7.5、8.0、
10.0、12.0时酶反应速度。采用的pH缓冲体系为柠檬
酸-柠檬酸钠缓冲液。
1.6.3 抗坏血酸（Vc）对芥子酶活力的影响 其他条件
不变的情况下，反应体系中抗坏血酸终浓度分别为0、
0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、5.0、8.0 mmol/L，研究抗
坏血酸对芥子酶活力的影响。
1.6.4 NaCl浓度对芥子酶活力的影响 其他反应不变
的情况下，反应体系中加入NaCl的终浓度分别为 0、
50、100、150、200、250、300、400、500、600、800、1000
mmol/L，进行酶活检测。
1.6.5 温度对酶活力的影响 其他反应条件一致情况
下，设置不同的酶液处理温度：28、37、45、55、65、80、
90℃，将酶液分别在各个温度条件下保温20 min，再按
照酶活测定方法进行残余酶活检测。
1.6.6 芥子酶在 80℃高温下的稳定性 将酶液在 80℃
条件下，设置不同的保温时间：0、5、15、20、30、45、60、
75、90 min的处理，再按照上述方法检测残余酶活性。
2 结果与分析
2.1 拟南芥芥子酶基因TGG5的RT-PCR表达分析
提取拟南芥各组织器官的总RNA（图1），用1%琼
脂糖凝胶电泳检测，具有完整的 3条带。将各器官
RNA反转录成 cDNA，以看家基因Actin为外参照，用
RT-PCR方法研究芥子酶基因TGG5的表达情况，结果
表明：在拟南芥的子叶、茎、叶、花和种子中未扩增出条
带，仅在根中能扩增 1500 bp左右的TGG5基因片段，
且表达量很高（图 2）。说明TGG5只在拟南芥的根部
特异表达。
2.2 TGG5基因的克隆和表达载体构建
用RT-PCR方法扩增到TGG5基因完整 cDNA编
码区（图 3）。并将其克隆到 pMD19-T载体，用SalI和
XbaI双酶切，结果表明 TGG5基因已成功克隆（图
4）。挑 5个克隆测序。尽管LA Taq是高保真的DNA
聚合酶，仍然具有PCR错误。共测序5个克隆，其中一
个克隆序列与GenBank数据库中的序列完全相同。
编码区全长1536个碱基，编码511个氨基酸。
以序列完全正确的TGG5基因克隆为模板，用引
物G5N1和G5C2扩增TGG5编码序列。AtTGG5基因
有一个完美的Kozak序列ACCATGGC，有报道该序列
对基因在酵母中的表达效率非常重要。为提高表达效
率，在设计PCR引物时将 5′端非编码区设计的尽可
能短，只保留Kozak序列。将扩增产物酶切后连接到
酵母表达载体pPIC3.5K，并对重组质粒进行酶切鉴定
（图5）。
2.3 TGG5重组蛋白的表达和纯化
从序列正确的阳性克隆提取质粒，用SalI线型化
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后电击转化酵母菌株GS115。选择表达量高的克隆规
模化培养提取芥子酶。芥子酶用Ni亲和层析柱纯化，
获得纯化度较高的芥子酶（图6）。在培养基中也检测
到芥子酶活性。大约有 15%的芥子酶分泌到培养基
中。从SDS-PAGE可以看出，分泌到培养基中的芥子
酶与细胞裂解液中的芥子酶具有相同的分子量。酶蛋
白分子量集中在58 kD左右，并有较明显的拖尾，呈现
典型的糖基化蛋白的特征。培养基中的芥子酶可能是
分泌产物，这说明TGG5的信号肽可能在酵母中表现
出一定的胞外分泌功能。
2.4 TGG5的酶学特性
毕氏酵母表达的TGG5重组蛋白经过葡萄糖试剂
盒测定，具有较强的芥子酶活性并具有较好的稳定性,
为进一步酶活特性研究奠定基础。
2.4.1 酶的动力学常数 根据Hanes作图法原理，以底
物浓度[S]为横坐标，以[S]×V-1为纵坐标作图（如图
7）。由图可以计算出 Km=1.96 mmol/L，Vmax=0.084
mmol/(min·mg)。
6 5 4 3 2 1
28SrRNA
18SrRNA
5SrRNA
1 2 3 4 5 6
TGG5
Actin
1.根；2.子叶；3.茎; 4.叶；5.花；6.种子
图1 拟南芥各组织器官总RNA
1.根；2.子叶；3.茎; 4.叶；5.花；6.种子；
图2 拟南芥芥子酶基因TGG5组织特异表达的RT-PCR分析
15000
10000
7500
5000
2500
2000
1000
750
500
250
100
M TGG5 M M
15000
10000
7500
5000
2500
2000
1000
750
500
250
100
15000
10000
7500
5000
2500
2000
1000
750
500
250
100
图3 RT-PCR扩增获
得TGG5全长编码区
图4 pMD19-AtTGG5
双酶切鉴定 图5 表达载体的酶切鉴定
M.Marker；1.细胞裂解液中纯化的TGG5重组蛋白；2.培养基中纯化的
TGG5重组蛋白；3和4. TGG5重组蛋白的粗提液。
图6 TGG5重组蛋白的SDS-PAGE
M 1 2 3 4
94.0KDa
66.2KDa
45.0KDa
33.0KDa
26.0KDa
20.0KDa
14.4KDa
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2.4.2 pH对酶活力的影响 TGG5重组蛋白最适 pH为
5.5左右。该芥子酶在pH 4.0~10.0范围内具有较高的
酶活力（＞50%），说明该芥子酶具备较宽范围的PH适
应性。pH为 3.0时，酶活力仅为最大酶活力（设定 pH
5.5时的酶活力为 100%）的 46%，pH为 5.5时，酶活力
达到最大值，随着 pH的递增，酶活力逐渐递减，当 pH
达到12.0时，相对酶活力仅为14%（图8）。
2.4.3 抗坏血酸对酶活力的影响 实验结果表明（如图
9），抗坏血酸对该芥子酶的活性有显著影响，低浓度的
抗坏血酸能极大提高重组TGG5蛋白的芥子酶活性，
当抗坏血酸的终浓度达到 1.5 mmol/L时，酶活性达到
最高，即其激活作用最强。当抗坏血酸高于此浓度时，
酶活性就开始迅速下降，至5.0 mmol/L时，相对酶活力
仅为 26%（以抗坏血酸的终浓度为 1.5 mmol/L时的酶
活力为 100%）；当抗坏血酸终浓度为 8.0 mmol/L时，
TGG5重组蛋白的芥子酶活性被完全抑制，即高浓度
的抗坏血酸对酶活力有明显抑制作用。
2.4.4 NaCl浓度对酶活力的影响 实验结果表明（如图
10），NaCl对芥子酶的活性有明显的抑制作用。当
NaCl终浓度较低时，即50~200 mmol/L时，对该酶的抑
制作用较明显，NaCl终浓度至 200 mmol/L时，残余相
对酶活力仅为 53.6%；随着 NaCl终浓度的增高，即
250~600 mmol/L时，酶活力呈现缓慢的下降趋势，
NaCl终浓度至 600 mmol/L时，残余相对酶活力为
23.4%。当NaCl浓度足够大时，TGG5重组蛋白的芥
子酶活性将被完全抑制。
2.4.5 温度对酶活力的影响 设定不同的温度梯度，分
别对酶液处理 20 min后，进行酶活反应及测定，结果
可知（如图 11）：该芥子酶在 37~80℃范围内有较广泛
的温度适应性（酶活力>80%），28℃处理后的酶活力仅
为70%（以55℃时酶活力为准），55℃处理的酶活力呈
现为最大值，当温度超出 55℃之后，酶活力开始逐渐
下降；至80℃时，酶活力为88%；90℃时酶活力迅速降
低至45%。
2.4.6 80℃高温条件下酶的稳定性 实验结果表明（如
图12），TGG5重组蛋白的芥子酶在80℃高温条件下具
有较好的热稳定性，保温 60 min后，相对残存酶活力
仍高达63%（以未经80℃高温处理的酶活为准）；保温
0
20
40
60
80
100
120
0 2 4 6 8 10Vc/(mmol/L)
相
对
酶
活
/%
0
20
40
60
80
100
120
0 200 400 600 800 1000 1200NaCl终浓度/(mmol/L）
相
对
酶
活
/%
图9 抗坏血酸浓度对酶活力的影响 图10 NaCl浓度对酶活性的影响
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75 min时，相对残存酶活力为 36%；随着 80℃保温时
间的增加，芥子酶活性逐渐下降，可能是高温条件下，
会促使酶的结构发生变化，从而导致酶变性失活。
3 讨论
3.1 关于拟南芥芥子酶TGG5的进化分析
从系统进化发育学上来看，在拟南芥芥子酶基因
家族中 TGG5 与 TGG4 的同源性较高，且拟南芥
TGG4-5分支可能是处于从O-β-葡糖苷酶向芥子酶进
化过程的中间位置，由于在结构和酶学性质上具有芥
子酶的特征，因而归入芥子酶。拟南芥芥子酶的组织
特异性研究，表明TGG1和TGG2在叶片、子叶、茎和
花器中表达，TGG3和TGG6只在雄蕊和花瓣特异表达
的假基因。TGG5同TGG4一样仅在拟南芥根部特异
表达。基因结构的进一步研究发现，TGG5和TGG4一
样都是由 13个外显子和 12个内含子构成，与含有 12
个外显子和 11个内含子的拟南芥TGG1-TGG3不同，
虽然基因序列的某些区域对芥子酶来说是很保守的，
但TGG5和TGG4基因序列与其他芥子酶基因序列的
同源性低于60%。这预示着，TGG4和TGG5属于芥子
酶基因家族的一个新分支。
3.2 关于芥子酶基因TGG5在酵母中的高效表达
实验成功地在毕赤酵母中表达了拟南芥芥子酶基
因TGG5，经过蛋白及酶活测定，TGG5重组蛋白具有
较强的酶活力，且表达量较高。TGG5能在酵母中成
功高效表达，可能有以下因素：（1）选用具有强启动子
AOX1片段的表达载体pPIC3.5K，其甲醇诱导性很强，
因此，由它控制的外源基因通常能得到高效表达。（2）
TGG5基因有一个完美的Kozak序列ACCATGGC，有
报道该序列对基因在酵母中的表达效率非常重要。为
提高表达效率，在设计PCR引物时将 5′端非编码区
设计的尽可能短，只保留Kozak序列。（3）选用电激转
化来转化酵母，可以获得多拷贝转化子频率相对较高，
在一定程度上外源基因整合的拷贝数愈高，蛋白表达
量愈大。（4）选用两步法来诱导外源蛋白的表达，即先
用甘油培养使细胞达到一定的浓度，再加甲醇诱导，有
利于提高外源蛋白表达量。
4 结论
试验以拟南芥的生态型Col-0为植物材料，克隆
了拟南芥 TGG5基因 cDNA，进行组织特异表达的
RT-PCR分析检测，并构建酵母表达载体，转化毕氏酵
母GS115，经甲醇诱导获得高表达量的TGG5重组蛋
白，用Ni亲和层析柱纯化后，进一步对其进行酶活特
性研究。结果表明：TGG5同TGG4一样，只在拟南芥
根部特异表达，这正好解释了拟南芥根部芥子酶活性
的来源；拟南芥芥子酶基因 TGG5转化毕氏酵母
GS115后，可成功高效表达TGG5重组蛋白，经过鉴定
拟南芥重组TGG5蛋白具有较强的芥子酶活性功能，
并具有较好的稳定性，在4℃可保存数月，酶活损失甚
微；TGG5重组蛋白与已发表的芥子酶的活性类似，具
有典型的芥子酶活性特征，如低浓度抗坏血酸具有显
著的激活该芥子酶的作用，而高浓度的抗坏血酸对该
酶有强烈的抑制作用；NaCl对该芥子酶有明显的抑制
作用，随NaCl浓度的增大，该芥子酶的活性呈逐渐下
降趋势；并且该芥子酶具有较好的80℃高温热稳定性
等，对酶活性的研究也进一步说明在自然条件下或在
“芥子炸弹”防御系统中，该芥子酶发挥其活性功能，将
受到环境中的 pH，温度，Na+浓度，和植物中抗坏血酸
的含量及其分布位置的影响，并且芥子酶的活性也会
随着植株的生长和外界压迫的变化而改变。试验发现
在转化后的酵母培养基中也检测到芥子酶活性，大约
有 15%的芥子酶分泌到培养基中，并初步鉴定出分泌
到培养基中的芥子酶与细胞裂解液中的芥子酶具有相
图11 温度对酶活力的影响 图12 80℃条件下酶的热稳定性
0
20
40
60
80
100
120
28 37 45 55 65 80 90
处理温度/℃
相
对
酶
活
/%
0
20
40
60
80
100
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保温时间/min
相
对
酶
活
/%
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辛曙丽等：拟南芥TGG5基因的克隆、表达和酶学特性
同的分子量和糖基化蛋白特征，关于分泌到培养基中
的芥子酶特性，以及两者蛋白之间的其他异同关系有
待进一步的研究。
参考文献
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