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收稿日期:2009-12-25
基金项目:贵州省基金项目(黔科合 J字 [ 2009] 2078号);贵州省优秀科教人才省长基金项目(黔省专合字 [ 2008] 71号和 [ 2009] 55号);贵州省院所
创新能力资助项目(院所创能 [ 2009] 4008号);贵州省社发攻关项目(黔科合 SZ字 [ 2009] 3012号)。
作者简介:张 婷(1984-),女 ,贵州人 ,
通讯作者:刘海燕(1982-),女 ,助理研究员 ,主要从事植物资源学研究;E-mail:liuhaiyan301@ 163.com。
小黄花茶扦插繁殖技术研究
张 婷 1 , 周晓玲 2 , 刘海燕 2 , 杨 松 1 , 邹天才 2
(1.贵州师范大学生命科学学院 , 贵阳 550001; 2.贵州省植物园 , 贵阳 550004)
StudyonCotagePropagationTechnologyofCamelialuteoforaY.K.Li
ZHANGTing1 , ZHOUXiao-ling2 , LIUHai-yan2 , YANGSong1 , ZOUTian-cai2
摘要:采用 3因素 3水平 L9(34)正交设计法进行试验处理 , 利
用极差分析和方差分析确定最优扦插方案。研究不同激素种
类 、不同浓度以及不同浸泡时间处理当年生半木质化程度的小
黄花茶对扦插繁殖生根率和生根状态的影响。结果表明:半木
质化的枝条以浓度为 200mg/L的 GGR6,浸泡 4h处理效果最
佳 , 平均生根率为 66.67%, 每株平均生根数为 11.64条 , 平均
根直径 1.42mm, 平均根长 1.73cm。相关分析显示 ,不同激素
浓度对小黄花茶的扦插生根有极显著影响。
关键词: 小黄花茶;扦插繁殖;正交实验;综合评分法
中图分类号: S571.1 文献标志码: A
文章编号: 1001-4705(2010)04-0086-04
小黄花茶 (CamelialuteoforaY.K.Li)为山茶科
(Theaceae)山茶属 (CameliaLinn.)多年生常绿灌木
或小乔木 ,于 1981年 11月在贵州赤水市葫市镇闷头
溪附近首次发现 。贵州省林业科学研究院曾范安研究
员采集标本 ,贵州科学院李永康教授鉴定 ,中山大学张
宏达教授订立为山茶属 -新组-小黄花茶组 [ 1] 。小黄花
茶作为小黄花茶组仅有的一个种 ,其分布区域极其狭
窄 ,仅 2km2范围 ,种群数量少 ,只有 1 700余株 ,多生
长在海拔 500 ~ 700m范围内的山崖或溪边 ,在少数楠
竹林下及海拔 500m以下河谷地带也偶见分布 ,灌木
或小乔木 ,成年树高 2 ~ 4m,地径 2 ~ 6cm[ 2] 。早在
1983年我国已把小黄花茶列为珍稀濒危保护物种 ,明
令禁止外流 。 1984年 9月 ,贵州省建立赤水桫椤国家
级自然保护区后 ,把小黄花茶分布范围划进保护区内 ,
并将其列入重点保护植物 。 1988年 ,贵州省将其列为
省一级珍稀濒危保护植物。 2003 ~ 2004年 ,世界自然
基金会(WWF)连续两年将贵州赤水小黄花茶的保护
和发展纳入基金会在中国的物种保护资助项目内 ,对
小黄花茶的保护 ,已经引起了国家和国际组织的重视。
只分布在贵州赤水金沙沟内的小黄花茶是黄色山茶花
在地球最北端的分布种类 ,花形小巧玲珑 ,含苞待放 ,
花色淡黄 ,具有重要的观赏价值。又因其种子容易被
鼠害 ,幼苗自然生长率低 ,且天然苗根系不发达 ,移栽
成活率低 ,现处于濒危状态 。因此 ,采用扦插的繁殖方
式 ,筛选适宜的扦插方案 ,对小黄花茶的资源保育 、引
种栽培以及推广应用等都具有极其重要的意义 ,并为
同类研究提供参考。
1 试验材料和方法
1.1 试验地概况
试验场所设在贵州省植物园内 ,位于贵阳市区北
郊的六冲关 ,地处东经 106°42′, 北纬 26°34′, 海拔
1 210 ~ 1 410 m, 年均气温 14.7 ℃, 极端最低温度
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第 29卷 第 4期 2010年 4月 种 子 (Seed) Vol.29 No.4 Apr. 2010
DOI :10.16590/j.cnki.1001-4705.2010.04.074
-7.3℃,极端最高温度 32.1 ℃,属亚热带湿润季风
气候。年均降雨量约 1 200mm,年均相对湿度 80%。
年均日照时数 1 174h,无霜期 263d。试验地的地势较
为平坦 ,排水良好 [ 3] 。
1.2 材料来源
扦插穗条采自贵州省植物园内树龄大于 5年的小
黄花茶母树 。选择生长较为健壮 、基本无病虫害 ,茎粗
较为一致 、当年生半木质化枝较多的枝条 ,采下后立即
用泥水蘸湿切口 ,并扎成捆用湿布包裹 ,以防失水。扦
插基质取自植物园内黄心土以及购买的珍珠岩和
河沙。
1.3 试验前准备
制作一个 1.5m×5m的插床。先选择一块平整
的试验地 ,进行全面锄草和暴晒。将准备好的砖头和
大砂石一并暴晒 。 3d后 ,用砖头垒砌好边框 ,在插床
底部平铺一层砖头 ,接着铺上一层 5 cm厚的大砂石。
再将河沙 、黄心土 、珍珠岩按照一定的比例充分搅拌均
匀 ,平铺在大砂石上大约 15cm厚 ,用 5‰的 KMnO4溶
液浇淋进行消毒杀菌 ,再暴晒几日 ,然后用薄膜覆盖。
扦插基质在试验前 2d用 800倍多菌灵杀菌剂彻底消
毒后 ,在扦插前测基质的 pH值 ,因为小黄花茶喜酸
性 ,可在基质上喷洒 FeSO4将 pH值调到 5.5左右 ,扦
插当日掀开薄膜浇透水后即可扦插。
1.4 扦插方法 、插后管理和调查
1.4.1 扦插方法
从生长健壮的枝条上斜着切下长度约 8cm的插
穗 ,注意切口整齐 ,插穗上部保留 2叶片 ,并将叶片剪
去一半 ,减少水分散失 。再将插穗 30根为一组 ,用橡
皮条捆整齐 。用 5‰的 KMnO4溶液和 5%的酒精溶液
分别速蘸穗条切口 30s进行消毒处理 ,后用清水冲
洗 。采用 3因素 3水平的正交试验 L9(34)3个因素分
别是 A(激素种类), B(激素浓度), C(浸泡时间),详
见表 1。每个处理都是 30个插穗 , 3次重复 。浸泡以
淹到枝条的 1 /3处为宜 。
表 1 正交试验 L9(34)
因素
水平
A
激素种类
B
激素浓度(mg/L)
C
处理时间(h)
1 IBA 200 1
2 IBA+NAA(1∶1) 300 2
3 GGR6 500 4
扦插采用直插法 ,先用合适的小枝条在基质上均
匀间隔插空 ,扦插深度约为插穗长度的 2/3,再将插穗
插入空处 ,用手压实 ,使插穗下端与基质紧密接触 ,然
后浇透水。苗床用细竹条搭建高约 50cm半圆形小拱
棚 ,盖上薄膜 ,四周用土压紧。
1.4.2 插后管理
由于扦插时间为 7 ~ 8月气候酷热 ,因此每天早晚
都要在棚内喷水 1次 ,并揭开棚上薄膜两头通风透气 ,
保持小拱棚内相对湿度在 85%以上。其次 ,加盖遮阳
网遮荫 ,必须注意把握好遮荫度 ,前期以遮去日光的
70%左右为宜 ,随着生根成苗 ,透光度要逐步增加 ,同
时 ,若气候炎热还要给小拱棚上喷水降温。扦插后每
间隔 2周 ,喷施 0.1%多菌灵 ,防止病虫害发生 ,并适
时喷洒 FeSO4保持 pH值 。每隔 10d少量喷施 0.1%
的尿素溶液 。
1.4.3 调 查
扦插 2周后开始调查 ,每间隔 6 ~ 8d1次 ,调查项
目包括:愈伤组织产生时间(d)、不定根产生时间(d)、
插穗生根率(%)、根数(条)、根长(cm)等。
2 结果与分析
2.1 通过正交 L9(34)试验 ,将各处理组小黄花茶半
木质化插穗生根率 、平均根数 、平均根长 、平均根直径
等的试验结果列于表 2。
表 2 小黄花茶当年生半木质化枝条扦插生根正交试验结果
因素 /水平 试验结果
处理 A B C 愈伤形成时间(d)
生根率(%)
假性
成活(%)
平均
根数(条)
平均
根直径(mm)
平均
根长(cm)
最大
根长(cm)
1 1 1 1 26 57.78 3.33 12.33 0.81 1.96 3.6
2 1 2 2 26 56.67 6.67 11.66 0.83 1.88 3.5
3 1 3 3 31 43.33 14.44 8.65 0.88 1.65 3.2
4 2 1 2 21 57.78 6.67 18.67 0.65 1.77 4.5
5 2 2 3 21 63.33 3.33 18.31 0.62 1.75 4.8
6 2 3 1 31 47.78 6.67 13.00 0.71 1.48 4.1
7 3 1 3 21 66.67 5.56 11.64 1.42 1.73 4.0
8 3 2 1 26 56.67 4.44 11.83 1.37 1.66 4.1
9 3 3 2 31 47.78 15.56 6.02 1.02 1.36 3.7
2.1.1 不同种类激素 、浓度 、浸泡时间对小黄花茶愈
伤组织形成的影响
观察小黄花茶插穗愈伤组织形成和生根情况时发
现 , 1、2、4、5号处理的少量插穗不仅在切口处先形成
愈伤组织 ,再从愈伤组织中分化出根 ,而且在切口上部
的皮部也形成了不定根。但 4、5号处理也有少量插穗
没有在切口处形成愈伤组织和不定根 ,只是在切口上
部的皮部出现愈伤组织后再形成不定根。而其他处理
均是在切口处形成愈伤组织后再长出不定根。形成愈
伤组织时间最早的是 4、5、7号处理 ,均为 21d,最晚的
是 3、6、8、9号处理 ,均为 31d。
·87·
问题探讨 张 婷 等:小黄花茶插繁殖技术研究
2.1.2 不同种类激素 、浓度 、浸泡时间对小黄花茶生
根率的影响
用不同种类的植物激素处理小黄花茶插穗均能诱
导生根 ,但由于种类和浓度不同 ,生根率亦不同 ,其中
7号处理(200mg/L的 GGR6)的插穗生根率最高 ,达
到 66.67%。且在一定浓度范围内小黄花茶的扦插生
根率随 GGR6的浓度升高呈下降趋势 ,表现出高浓度
抑制生根的作用。其次是 200 mg/L的 IBA+NAA
(1∶1)激素处理 ,生根率达到 63.33%。而浓度为 500
mg/L的 IBA生根率最差 ,只有 43.33%。从生根率来
看 ,激素浓度高达到 500mg/L的处理生根率都不理
想 ,而一般在 200mg/L和 300mg/L的浓度下 ,生根效
果较为良好 ,以 200mg/L的浓度处理效果最佳 。不同
浸泡时间对小黄花茶生根有一定影响但差别不大。
2.1.3 不同种类激素 、浓度 、浸泡时间对小黄花茶生
根状况的影响
从总体来看 ,小黄花茶插穗在 IBA+NAA(1∶1)激
素处理下生根数最多 ,在 200mg/L和 300mg/L的浓
度下 ,每株平均生根数达 18.67条和 18.31条。生根
数最少的是 500mg/L的 GGR6处理只有 6.02条。但
用游标卡尺测得此浓度处理插穗的直径 、长度最大的
却是 GGR6,特别在 200mg/L和 300mg/L的浓度下 ,
每株平均直径达到 1.42mm和 1.37mm,而直径最细
的是 IBA+NAA(1∶1)激素处理 ,在浓度 300mg/L时
只有 0.62mm。小黄花茶插穗平均根长度最长的是
IBA的处理 ,在 200mg/L和 300mg/L处理 ,平均长度
达到 1.98和 1.88cm,而最大根长是在 300mg/L的
IBA+NAA(1∶1)激素处理下 ,长约 4.8cm。
2.2 不同处理因素对不同生根指标的影响程度分析
根据郑少华等[ 5]的正交试验设计多指标的分析
法 ,对每个试验结果评定出一个综合分数 ,以此分数作
为单项指标进行统计分析 。并采取综合评分法中的排
队评分法和公式评分法 ,对几个主要指标打分后再进
行分析 。
首先 ,进行排队评分 ,这种方法是综合考虑各项指
标优劣 ,并把它作为单项指标进行数据分析。一般先
把每项最优秀值定为满分 10分 ,最低值定为 1分。根
据表 2,生根率指标以 7号 (66.67%)处理最高 ,排在
第一位 ,定为 10分;3号最低(43.33%),排在最后 ,定
为 1分;平均根数以 4号 (18.67条)处理最多 ,定为
10分;9号(6.02条)处理最少 ,为 1分;平均根直径以
7号(1.42mm)最粗 ,定为 10分;5号(0.62mm)处理
最细 ,为 1分;平均根长以 1号(1.96cm)最长 ,定为
10分;9号(1.36mm)处理最短 ,为 1分 。然后 ,再将
其他组试验结果 ,按其与最优秀值的差异照比例打分
排序后给出评分值。
其次 ,进行公式评分 ,本法适用于各项指标重要程
度有差异的情况 。按实践经验可知 ,在扦插试验中 ,生
根率指标最为重要 ,以 2倍计算 ,即权数为 2;平均根
数 、平均根直径 、平均根长这 3个指标其次 ,按 1倍计
算 ,即权数为 1。以排队评分法给出指标的分数为依
据 ,按公式乘以加权系数处理评分值得到:综合评分 =
2×生根率 +1×平均根数 +1×平均根直径 +1×平均
根长 ,处理结果详见表 3。从表 3可看出 ,在 9个处理
中 ,经过排队评分和公式评分后 , 7号处理综合评分最
高 ,为 41.5分 , 5号处理次之。
表 3 公式评分法结果数据
试验号
试验指标评分
生根率
(%)
平均根数
(条)
平均根直径
(mm)
平均根长
(cm) 综合评分
1 6.5 5.5 3.1 10.0 31.6
2 6.1 5.0 3.4 8.8 29.4
3 1.0 2.9 3.9 5.3 14.1
4 6.5 10.0 1.3 7.1 31.4
5 8.7 9.7 1.0 6.8 34.9
6 2.6 6.0 2.0 2.8 16.0
7 10.0 5.0 10.0 6.5 41.5
8 6.1 5.1 9.4 5.5 32.2
9 2.6 1.0 5.5 1.0 12.7
采用 SPSS13.0软件对各指标进行公式评分法的
方差分析 ,结果列于表 4,相关分析显示因素 B的 F=
46.207, P=0.021>0.05,具有显著性差异 ,因此不同
激素浓度对小黄花茶的扦插生根有极显著影响 。
表 4 公式评分法的方差分析
变异来源 离差平方和SS Df自由度 均方MS=S/f F值 Sig.P值 显著性
CorectedModel 821.567(a) 6 136.928 16.861 0.057
Intercept 6 604.271 1 6 604.271 813.223 0.001
激素种类(A) 21.816 2 10.908 1.343 0.427
激素浓度(B) 750.509 2 375.254 46.207 0.021 **
处理时间(C) 49.242 2 24.621 3.032 0.248
Eror 16.242 2 8.121
Total 7 442.080 9
CorectedTotal 837.809 8
依据每个处理的综合评分进行公式评分法极差分
析 ,如表 5所示 , B因素的极差最大 ,是对试验影响最
大的因素。即影响小黄花茶扦插效果的主次顺序为
B、C、A,较佳的方案是 A3B1C3,即浓度为 200mg/L
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第 29卷 第 4期 2010年 4月 种 子 (Seed) Vol.29 No.4 Apr. 2010
的 GGR6,处理时间 4h。
表 5 公式评分法极差分析
因素
A B C 综合评分
Kj1* 75.1 104.5 79.8
Kj2 82.3 96.5 73.5
Kj3 86.4 42.8 90.5
kj1 25.03 34.83 26.60
kj2 27.43 32.17 24.50 ∑ =243.8
kj3 28.80 14.27 30.17
Rj 3.77 20.56 5.67
优方案 A3 B1 C3
注:*其中 Kj1、Kj2、Kj3分别为因素 1水平 、2水平 、 3水平的试
验之和 , kj1、kj2、kj3分别为因素 1水平 、 2水平 、 3水平的试
验平均值 , Rj为极差。
3 讨 论
3.1 小黄花茶扦插形成不定根的机制
根据植物扦插不定根形成的部位可分为两种类
型:一种是皮部生根型 ,即以皮部根原基生根为主 ,从
插条的皮孔 、节(芽)等处发出很多不定根 。另一种是
愈伤组织生根型 ,即以先形成愈伤组织 ,再从愈伤组织
中分化出根 ,这种生根方式需要的时间长 ,生长较为缓
慢 。诱生根原基常生于插穗下部的愈伤组织 ,即在适
宜条件下由插穗基部形成不规则的 、具有不同木质化
程度的薄壁细胞 ,起源于维管形成层部位的幼嫩细胞 ,
皮层和髓部的各种细胞也可能参与愈伤组织的形
成 [ 6] 。小黄花茶作为木本植物中比较难生根的类型 ,
多采用切口生根 ,不同激素和浓度处理 ,在适宜的温
度 、湿度条件下 ,可促进插穗下切口形成愈伤组织再生
根 。本试验调查数据发现(见表 2), 1、2、4、5号处理
的少量插穗既有皮部生根 ,也有愈伤组织生根 ,说明
IBA、NAA激素不仅促进切口处愈伤组织的形成 ,也能
促进皮部的少量的愈伤组织形成。而 IBA+NAA
(1∶1)混合激素处理中出现了没有在切口处形成愈伤
组织和不定根 ,而只在切口上部的皮部出现愈伤组织
后形成不定根。这种情况较少 ,可能是由于切口处丧
失了形成愈伤组织和生根的能力 ,而只作用于皮部。
各种浓度 GGR6处理都没有出现在切口上部的皮部
出现愈伤组织和不定根的情况 ,说明 GGR6主要促进
的是切口处形成愈伤组织和不定根的形成 ,关于小黄
花茶扦插形成不定根的生理机制 ,有待进一步研究 。
3.2 小黄花茶扦插成活的关键技术
小黄花茶扦插试验结果证实 ,不同外源激素对插
穗产生不定根具有很好的促进作用。表 4方差分析结
果表明 ,激素浓度对小黄花茶生根率有至关重要的影
响 。适宜的浓度为 200 ~ 300mg/L。在本试验中小黄
花茶扦插中插穗都不同程度的出现了假活现象 。如果
愈伤组织过于发达 ,不定根无法从膨大且紧密的愈伤
组织处发出 ,推迟生根时间 ,甚至不能发根[ 7] ,称为假
性成活苗。这种苗由于长时间无法从膨大的愈伤组织
上产生不定根 ,最终会死亡 。由表 3可知 , 9号处理出
现了较多的假活现象 ,比例达到 15.56%;其次是 5号
处理(14.44%)。这两个处理虽然采用了不同的激
素 ,但所用激素浓度较高(500 mg/L),这也许是导致
假活现象增加的原因。形成的愈伤组织 ,不一定能分
化出不定根 ,说明愈伤组织的形成和不定根的产生是
彼此独立的过程 。因此 ,降低假性成活率对提高小黄
花茶的扦插生根率至关重要。
3.3 其他因素对小黄花茶扦插的影响
在本试验中反映出了明显的边缘效应 ,即扦插在
边缘的插穗死亡数明显高于中间部分 ,原因可能是边
缘土壤保水能力差 ,温度变化大 。所以 ,生产实践中不
能忽视边缘保护行的作用 ,应增设 2 ~ 3行保护行。同
时由于夏季气温高 ,扦插中一定要注意保水和降温 ,这
对小黄花茶生根率的提高有重要的影响。
小黄花茶插穗长期生长在被棚膜覆盖的苗床里 ,
很难适应自然生态条件 ,为了使扦插苗适应变换的自
然气候 ,顺利越冬 ,当扦插苗出根后就要适时进行炼
苗 。当气温达到扦插苗正常生长温度 ,保留遮荫网 ,揭
开棚膜两端进行炼苗 ,夜晚气温降低后再将棚膜盖上。
通过一段时间的锻炼 ,再将薄膜全部揭掉 ,这样扦插苗
就完全处在自然状态下生长 ,直至扦插苗移栽 。
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问题探讨 张 婷 等:小黄花茶插繁殖技术研究