全 文 ：西北农业学报　2008 , 17(6):6-11
Acta A griculturae Boreali-occidentalis Sinica
苦马豆素抗血清治疗山羊甘肃棘豆中毒的
血清学和免疫学指标评价①
杨合生 ,童德文＊ ,赵红妮 ,徐登攀 ,乔济洪 ,王彦峰
(西北农林科技大学动物医学院 ,陕西杨凌　1712100)
摘　要:通过检测苦马豆素抗血清治疗山羊甘肃棘豆中毒的血清学和免疫学指标 ,评价苦马豆素抗血清对山
羊疯草中毒的治疗效果。将 18 只山羊随机分为对照组(A 组 , 6 只)、攻毒治疗组(B 组 , 6 只)和攻毒组(C 组 ,
6 只),其中 B 、C 组山羊于第 1天拌精料饲喂甘肃棘豆草粉 ,开始攻毒剂量为 10 g/(kg · d);C 组山羊(第 55
天)出现死亡时停止攻毒。攻毒后第 21 天 , B 组山羊颈部肌肉注射苦马豆素抗血清 , 每只山羊每次 0.25 mL/
(kg· d), 连续注射 4 d。各组山羊于攻毒前进行第 1 次采血 ,以后每隔 7 d 采血 1 次 , 共采血 8 次。结果显
示 ,攻毒后第 7 天 , B 、C 组山羊 AKP 活性和 AMA 活性分别上升和下降 , 且均与 A 组差异极显著(P<0.01);
第 14 天 , B 、C 组山羊血清 LDH 活性明显高于 A 组(P<0.05);第 21 天 , B 、C 组山羊的 E-玫瑰花环率明显低
于 A 组(P<0.05)。对 B 组山羊注射苦马豆素抗血清 , 治疗后(第 28 天)首次检测结果显示 , B组山羊 AKP、
AM A 和 BUN 活性较 C 组均表现为差异极显著(P<0.01);第 35 天(第 2 次检测), B 组山羊血清中苦马豆素
浓度明显低于 C 组(P<0.01),而 E-玫瑰花环率明显高于 C 组(P<0.05);第 42 天 , B 组山羊 LDH 活性显著
低于 C 组山羊(P<0.05)。研究证实 ,苦马豆素抗血清能够有效治疗甘肃棘豆对山羊肝脏 、心脏和肾脏等组
织器官造成的损伤 ,可用于治疗山羊疯草中毒。
关键词:SW 抗血清;疯草中毒;治疗;山羊
中图分类号:S852.4　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1004-1389(2008)06-0006-06
Serological and Immunological Evaluation about Effects of Serum against
Swainsonine on Goats Poisoned by O.kansuensis Bunge
YANG He-sheng , TONG De-wen＊ , ZHAO Hong-ni , XU Deng-pan ,
QIAO Ji-hong and WANG Yan-feng
(College of Veterinary Medicin e , Northw est A&F University , Yangling Sh aanxi 712100 , China)
Abstract:The sero logical and immunolog ical index w as detected to evaluate the effects of se rum a-
gainst sw ainsonine treated on goats poisoned by O.kansuensis Bunge.Eighteen goats we re randomly
separated into control g roup(g roup A , 6 goats), poisoning and curing g roup(g roup B , 6 goats)and
poisoning g roup (group C , 6 goats).Goats in g roup B and g roup C w ere fed 10 g/(kg ·d)pow er of
O.kansuensis Bunge every mo rning at the fi rst day and the duration of poisoning w as 55 day s w hen
goat in g roup C w as dead.On the day 21 af ter poisoning , goats in g roup B w ere t reated 0.25 mL/(kg
·d)by injecting se rum against sw ainsonine w hich its titer w as 211 , and four days , continuously.
Blood samples w ere co llected befo re the poisoning , and then once every 7 day s , eight times in all.The
results suggested that the change of serum alkaline phosphatase(AKP)in g roup B and C was ext reme-
ly signif icant higher than that in g roup A on the day 7(P<0.01), and from the change o f serum a-
①收稿日期:2008-03-25　　修回日期:2008-06-20
基金项目:教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET-07-0701);霍英东教育基金项目(91033)
作者简介:杨合生(1980-),男 ,在读硕士研究生 ,专业方向:动物病理学。
＊通讯作者:童德文(1967-),男 ,安徽安庆人 ,教授 ,博士 ,博士生导师 ,主要从事动物病理学与毒理学教研工作。
E-mail:tdw 4114@nw suaf.edu.cn
mannosidase(AMA), g roup A was ex t remely signif icant highe r than that in g roup B and group C (P
<0.01).The changes of serum lactate dehydrogenase(LDH)of g roup B and group C w as significant
higher than that in group A on the day 14(P<0.05), the change of E-ro set te in g roup B and g roup C
were signif icant low er than that in g roup C(P<0.05)on the day 21.By inject ing SW anti-serum ,The
changes o f serum A KP in group B w as(P<0.01)signif icant lower than g roup C a t the f irst detection
af ter t reatment(on the day 28), and as to AMA , g roup C w as(P <0.01)significant low er than that
in g roup B , and larg e difference (P<0.05)also came from the changes of blood urea ni trog en(BUN)
between g roup B and group C.On the day 35 , the change about concentrat ion of SW , E-ro set te rate
between g roup B and g roup C w ere significant difference (P<0.05), also w as t rue in the change of
serum LDH on the day 42 , Those resul ts in this expe riment indicated that serum against sw ainsonine
had good effect to cure locodisease of go ats , and also could prevent ti ssues f rom Oxytropis kansuensis
Bunge injuring during the se day s , showing its g ood value of application.
Key words:Serum against sainsonine;Locodisease;T reatment;Goats
　　疯草(Locoweed)是豆科棘豆属(Oxy tropis)
和黄芪属(Astragalus)有毒植物的统称 ,其主要
有毒成分是吲哚兹啶生物碱 —苦马豆素(Sw ain-
sonine , SW)[ 1-2] ,SW 抑制溶酶体 a-甘露糖甙酶
而使机体甘露糖的代谢发生异常 ,大量蓄积在细
胞内而引致细胞的空泡变性 ,并最终导致细胞死
亡[ 3-4] 。SW还能抑制高尔基体甘露糖甙酶 Ⅱ ,
改变糖蛋白的合成 、组装 、转运 ,导致细胞粘附分
子 、激素 、膜受体功能的改变和丧失[ 3-5] 。家畜疯
草中毒症状主要包括反应迟钝 ,目光呆滞 ,步态蹒
跚 ,运动失调 ,后肢弯曲外展 ,后躯偏向一侧 ,头部
水平震颤或摇动 ,瘫痪 ,直至死亡[ 2 , 6-8] ,此外 ,还
常常造成母畜流产 、不孕 ,胎儿畸形和公畜不育 ,
影响动物繁殖和畜种改良[ 9-10] ,每年都给我国草
原畜牧业带来巨大经济损失[ 11] 。疯草除含有 SW
外 ,研究表明 ,疯草还富含粗蛋白 、粗脂肪 、矿物质
和多种氨基酸 ,营养成分几乎与苜蓿相当 ,是一种
潜在的牧草资源 。在生物活性方面 ,疯草表现出
很强的抗逆性(抗寒冷 、抗干旱 、抗风沙),特别适
应在我国西部草原生长[ 11-12] 。为了控制家畜疯
草中毒 ,目前主要采取机械挖除和化学防除等方
法对疯草进行控制[ 12] ,但是迄今为止 ,还没有特
效治疗家畜疯草中毒的方法。
本研究将 SW 与牛血清白蛋白(Bovine Ser-
um Albumin , BSA)化学合成为 SW-BSA , 并将
SW-BSA 制备成疫苗免疫家兔 ,获得高效价苦马
豆素抗血清 ,然后用苦马豆素抗血清治疗山羊的
疯草中毒 ,通过检测血清学和免疫学指标 ,评价苦
马豆素抗血清的治疗效果 ,为免疫学治疗家畜疯
草中毒奠定基础。
1　材料与方法
　材料
1.1.1　试验动物　12 只家兔 ,体重(1.2±0.25)
kg ,购于杨凌秦丰兔厂;18 只健康莎能山羊 , 6月
龄 ,体重约(20.5±4.65)kg ,购于西北农林科技
大学莎能种山羊场。
1.1.2　甘肃棘豆草　2004年 8 月采集于青海省
湟中县 ,干燥粉碎 ,阴凉处保存备用 。
1.1.3　SW-BSA 　西北农林科技大学动物医学
院病理实验室提供[ 13-14] 。
1.1.4　主要仪器和试剂　MULTISKAN MK3
酶联免疫测定仪 , Speco rd 50型(德国 Jena)紫外
分光光度计。弗氏完全佐剂(Freund s Complete
Adjuvant , FCA),弗氏不完全佐剂(Freund s In-
complete Adjuvant , FIA), 对-硝基苯-α-D-甘露
糖糖苷和α-甘露糖糖苷酶购于 Sigma 公司 ,羊抗
兔 IgG-H RP 购于西安鼎国生物技术有限责任公
司 ,其余试剂均为国产分析纯 。
　方法
1.2.1　苦马豆素抗血清的制备　12只家兔购回
后接种兔三联苗(每只皮下注射 1 mL),驱虫后 7
d ,随机分为对照组 6只 ,免疫组6只 ,进行第 1次
免疫 ,18.0 mg SW-BSA 用 3 mL 注射用生理盐
水配成抗原液后与等体积的 FCA 注射器对抽至
完全乳化 ,免疫组家兔 4点皮下注射 ,每只 1 mL
(每只家兔的抗原量为 3 mg),以后每隔 2周免疫
1次 。第 2次免疫 ,27.0 mg SW-BSA 用 3 mL 注
·7·6 期 杨合生等:苦马豆素抗血清治疗山羊甘肃棘豆中毒的血清学和免疫学指标评价
射用生理盐水配成抗原液后与等体积的 FIA 完
全乳化 ,免疫组家兔 4点皮下注射 ,每只 1 mL
(每只家兔的抗原量为 4.5 mg);第 3次免疫 ,36.
0 mg 免疫原直接用 6 mL 注射生理盐水稀释 ,免
疫组家兔 4点皮下注射 ,每只 1 mL (每只家兔的
抗原量为 6.0 mg);第 4 次免疫 , 72.0 mg SW-
BSA 用 6 mL 注射生理盐水直接稀释 ,免疫组家
兔 4点皮下注射 ,每只 1 mL (每只家兔的抗原量
为 12.0 mg)。第 2次免疫后 7 d 开始采血检测 ,
以后每隔 7 d 对所有家兔空腹耳缘静脉采血 1
mL ,37℃放置 1 h 后 , 4℃过夜分离血清 , 间接
ELISA 法检测血清中抗体效价。
1.2.2　山羊甘肃棘豆草粉攻毒试验　18只莎能
山羊购回后当日驱虫 1次 ,7 d后再次驱虫1次 ,并
随机分为对照组(A 组 ,6只),攻毒治疗组(B组 , 6
只)和攻毒组(C 组 ,6只),临床观察 1 周后开始攻
毒 ,攻毒开始的当天记为第 0天。每日清晨 ,按 10
g/(kg ·d)甘肃棘豆草粉拌精料饲喂 B组山羊和 C
组山羊进行攻毒[ 14] 。所有试验山羊于第 1天攻毒
前进行第 1次空腹采血 ,1 份肝素抗凝 , 1 份全血
(分离血清),以后每 7天采血 1次 ,直到 C 组山羊
出现死亡(第 55天),共采血 8次 。
1.2.3　抗血清治疗山羊疯草中毒试验　在攻毒
后第 14天 , B组山羊与 C 组山羊开始出现中毒症
状 ,第 21天采血后 , B组山羊按 0.25 mL/(kg ·
d)在饲喂前颈部肌肉注射苦马豆素抗血清 ,每天
1次 ,连续 4 d。
1.2.4　血清生化指标的测定　血清乳酸脱氢酶
(Lactate dehydrogenase , LDH),采用顺向反应比
色法;血清碱性磷酸酶(Alkaline pho sphatase ,
AKP),采用磷酸苯二钠法;血清–α–甘露糖甙
酶(α– Mannosidase , AMA),采用比色测定法;
血清尿素氮(Blood urea nit rogen , BUN),采用二
乙酰一肟法[ 15-16] 。
1.2.5　血清中苦马豆素浓度的测定　血清中苦
马豆素浓度的测定参照文献[ 17-18]进行。
1.2.6　免疫学检测(E-玫瑰花环试验)　参照文
献[ 19]进行 ,计数 200个淋巴细胞 ,凡 1个淋巴细
胞结合 3个绵羊红细胞或以上者为 1个玫瑰花环
阳性细胞 ,计算玫瑰花环形成率。
1.2.7　统计方法　应用 SPSS 12.0 软件 ,采用
单因子方差分析并结合 LSD法对试验数据进行
统计分析 ,数据均用“平均值±标准差”来表示 。
2　结果与分析
　苦马豆素抗血清的制备
第 4次与第 5次采血检测家兔血清抗体效价
基本保持不变 ,在第 5 次采血检测后 ,大量采血 ,
共制备效价为 211的血清 135 mL。
　血清生化指标的测定结果
2.2.1　LDH 活性测定结果　图 1-Ⅰ表明 ,第
14天 B组与 C 组山羊 LDH 活性开始升高 ,并显
著高于 A组山羊(P <0.05), B组和 C 组山羊之
间 LDH 活性差异不显著(P >0.05),这种情况一
直持续到第35天 。第 42天 ,C组山羊 LDH 活性
极显著高于 A组和 B 组山羊(P <0.01), B组山
羊显著高于 A组山羊(P<0.05)。第 49天 , B组
与 C 组山羊 LDH 活性都升高 ,均极显著高于 A
组山羊(P<0.01),B组和 C 组山羊之间 LDH 活
性差异不显著(P>0.05)。
2.2.2　AKP 活性测定结果　图 1-Ⅱ表明 ,第 7
天B组与 C组山羊 AKP 活性开始升高 ,极显著高
于A 组山羊(P<0.01)。第 14天 , B组和 C 组山
羊AKP 活性有所降低 ,但仍极显著高于 A 组山羊
(P<0.01),B组山羊和C组山羊之间AKP活性差
异不显著(P>0.05),这种情况持续到第21天。第
28天 ,A 组 、B 组和 C组山羊之间 AKP 活性都存
在着极显著的差异(P<0.01)。第 35天 ,B组山羊
AKP活性极显著低于 C组山羊(P<0.01),但仍显
著高于 A组山羊(P<0.05),C 组山羊 AKP 活性
仍然极显著高于 A组山羊(P<0.01)。第 42天 ,A
组 、B组和C 组山羊之间 AKP 活性存在极显著的
差异(P<0.01),这种差异一直持续到试验结束 ,其
中C组山羊在试验结束时 ,AKP 活性上升到试验
中的最高水平。
2.2.3　AMA 活性测定结果　由图 1-Ⅲ可见 ,从
第7天开始 ,B组和 C组山羊 AMA活性极显著低
于A组山羊(P<0.01),从第 14天到第21天 ,B组
山羊和 C组山羊 AMA活性略有回升 ,但仍然极显
著低于 A组山羊(P<0.01),B组与 C 组山羊之间
AMA 活性差异仍不显著(P>0.05)。第 28天 , B
组山羊AMA活性显著高于C组山羊(P<0.05),B
组和 C组山羊 AMA 活性极显著低于A 组山羊(P
<0.01)。第 35天 , A 组 、B组和 C 组各组山羊之
间的 AMA活性存在极显著的差异(P<0.01)。第
42天 ,B组和 C组山羊 AMA 活性极显著低于 A
·8· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　17 卷
组山羊(P<0.01),B组AMA活性仍然显著高于C
组山羊(P<0.05),这种差异一直持续到试验结束 。
2.2.4　BUN活性测定结果　由图1-Ⅳ可见 ,第 1
天开始 ,各组 BUN活性差异不显著(P>0.05),直
到第28天 ,C组山羊BUN 活性才显著高于A组山
羊(P<0.05),B组山羊BUN活性显著低于C组山
羊(P<0.05),A组山羊与 B组山羊的 BUN 活性
不存在显著的差异(P >0.05)。第 35天 , A 组 、B
组和 C组山羊 BUN 活性均存在着显著差异(P <
0.05)。第42天 , B组山羊和 C 组山羊 BUN 活性
均极显著高于 A 组(P<0.01), B组山羊 BUN 活
性与C组山羊不存在显著差异(P>0.05),这种情
况一直持续到第 49天。
图 1　各组山羊血清学指标变化
Fig.1　Temporal changes of serum
图 2　E-玫瑰花环率和 SW含量变化结果
Fig.2　Temporal changes of E-rosette rate and sainsonine concentration in blood of goats
·9·6 期 杨合生等:苦马豆素抗血清治疗山羊甘肃棘豆中毒的血清学和免疫学指标评价
　 -玫瑰花环试验结果
图2-Ⅰ表明 ,从第 1天开始 ,B组和C 组山羊
的 E-玫瑰花环率呈下降的趋势 ,第 21天 ,B组和 C
组山羊 E-玫瑰花环率显著低于 A 组山羊(P<0.
05),B组与 C组山羊 E-玫瑰花环率差异不显著(P
>0.05)。第 28天 ,B组和 C组山羊 E-玫瑰花环率
差异不显著(P>0.05),两组都极显著低于 A组(P
<0.01)。第 35天 ,各组山羊之间 E-玫瑰花环率差
异极显著(P <0.01)。第 42天 , B组和 C 组山羊
E-玫瑰花环率的差异不显著(P>0.05),但两组都
显著低于 A组(P<0.01),这种情况一直持续到第
49天 ,并且 B组山羊和 C组山羊 E-玫瑰花环率
均降到试验中的最低水平 。
　血清中苦马豆素浓度的测定结果
苦马豆素浓度的测定结果见图 2-Ⅱ ,从第 7
天开始 ,B组和 C 组山羊的血清中苦马豆素浓度
呈下降的趋势 ,两组山羊之间的差异不显著(P>
0.05),直到第 35天 ,B组山羊血清中苦马豆素浓
度才显著低于 C 组山羊(P <0.05),第 42 天 ,两
组之间的差异不显著(P >0.05),第 49 天 , B 组
山羊和 C组山羊血清中苦马豆素的浓度均下降
到试验中的最低水平 。
3　讨论与结论
　血清学指标
甘肃棘豆的主要有毒成分为 SW ,动物采食
甘肃棘豆后 ,毒素在 7 d 左右引起机体的酶发生
改变[ 8 , 20] ,这与本试验山羊血清酶测定结果一致 。
LDH 活性升高提示肝脏 、肾脏 、心肌等部位组织
器官受到侵害[ 20] 。B组与 C组山羊 LDH 活性在
42天出现显著的差异 ,这说明 SW 抗血清避免了
毒素对肝脏 、肾脏 、心肌等器官的侵害。在 49天 ,
B组与 C 组山羊 LDH 活性差异不显著 ,可能由
于 SW抗血清在这些组织中的浓度减小所造成
的。AKP 是家畜疯草中毒中最早发生改变的 、极
具有诊断意义的一种酶[ 21] , B 组与 C 组山羊
AKP 活性在第 7天就显著高于 A 组山羊 ,这说
明毒素已经开始侵害肝脏 、肾脏和骨组织等器官 ,
这与相关的研究是一致的[ 17 , 21-22] 。第 14 天 , B
组山羊与 C 组山羊 AKP 活性出现了轻微的下
降 ,这可能是机体调动全身力量积极防御的结果;
第 28天 , B组与 C 组山羊之间 AKP 活性差异极
显著 ,这说明注射到动物体内的 SW 抗血清起到
了治疗作用 ,有效地防止了毒素对肝脏 、肾脏和骨
组织所造成的损伤 ,并且 B组山羊 AKP 活性开
始下降 ,这说明由毒素所造成的组织损伤开始康
复。SW可以抑制 AMA 的活性[ 2-3] ,第 28天 , B
组山羊 AMA 活性显著高于 C 组山羊 ,第 35天 ,
这种差异达到极显著 ,说明 SW 抗血清可以很好
地抑制由 SW 毒素引起的 AMA 活性的降低 ,发
挥了治疗作用。 BUN 活性变化提示肾脏受
损[ 21] ,第 28天 ,B 组山羊与 C 组山羊 BUN 活性
存在显著性差异 ,A 组山羊与 B组山羊 BUN 活
性差异不显著 ,这种情况一直持续到第 35天 ,这
说明 SW 抗血清对进入动物体内的 SW 毒素有着
清除与中和的能力 ,可以避免毒素对器官造成的
损伤 。
　 -玫瑰花环试验
E-玫瑰花环率的变化提示机体免疫力的变
化 ,第 21天开始 ,B组山羊与 C组山羊的 E-玫瑰
花环率均显著低于 A 组山羊 ,第 35天 ,B 组山羊
和 C组山羊 E-玫瑰花环率出现显著的差异 ,这说
明 ,SW 抗血清可以有效的减缓 E-玫瑰花环率的
降低速度 ,阻止进入机体的毒素侵害免疫系统。
　血清苦马豆素浓度
血清苦马豆素浓度变化显示 ,从第 1天开始 ,
B组和 C 组山羊血清苦马豆素浓度呈下降的趋
势 ,这可能是由于机体对苦马豆素代谢能力逐渐
增强的缘故 , 与相关的试验研究的结果是一致
的[ 17-18] ,第 35天 ,两组山羊血清苦马豆素浓度出
现显著的差异 ,这说明抗血清可以有效地降低血
液中苦马豆素浓度 ,第 42 天 ,两组山羊血清苦马
豆素浓度差异不显著 ,这可能由于 SW 抗体在血
液中的有效浓度不能长期维持 ,使 SW 抗血清无
法持续的发挥对 SW毒素的中和作用。
　结论
在治疗后的首次检测中 , B组山羊 AKP 活性
极显著低于 C 组山羊 , B 组山羊 BUN 活性极显
著低于 C组山羊 ,B 组山羊 AMA 活性极显著高
于 C组山羊 ,治疗后的第 2次检测中 ,B组山羊血
清中苦马豆素浓度极显著低于 C 组山羊 , E-玫瑰
花环率 B组山羊显著高于 C 组山羊 , LDH 活性
在治疗后的第 3次检测中 , B 组山羊显著低于 C
组山羊。本研究表明 ,SW 抗血清对于治疗山羊
疯草中毒表现出了很好的疗效 ,可以用于治疗山
羊的疯草中毒 ,同时也显示出其理想的实践应用
价值 ,为免疫学治疗家畜疯草中毒奠定了一定的
基础 。
·10· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　17 卷
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