全 文 ：收稿日期:2007-09-12
*四川教育厅自然科学研究基金资助项目(2005A165)和四川省科技厅应用基础研究资助项目(05JY-029)
作者简介:陈封政(1972-)男,四川达县人,乐山师范学院化学与生命科学学院副教授,研究方向:天然药物的活性成
分的提取分离与鉴定。
乐山师范学院学报
JournalofLeshanTeachersColege
第22卷 第12期
2007年12月
Vol.22,No.12
Dec.2007
濒危植物桫椤叶和茎干中可溶性糖和总黄酮含量的研究*
陈封政1 李书华 1 雷明容 2
(1乐山师范学院 化学与生命科学学院,四川 乐山 614004;2内江市农业局 土肥站,四川 内江 641000)
摘 要:采用分光光度法测定了桫椤叶和茎干中可溶性糖和总黄酮的含量,其中桫椤叶中可溶性糖为 21.42%,总黄酮
含量为6.24%;桫椤茎干中可溶性糖为4.08%,总黄酮含量为5.39%。
关键词:桫椤叶;桫椤茎干;可溶性糖;总黄酮
中图分类号:Q946 文献标识码:A 文章编号:1009-8666(2007)12-0050-02
桫椤(AlsophilaSpinulosa)又称刺桫椤,树蕨,蕨树,山
棕(四川),水桫椤,大贯众(干茎),龙骨风(髓),属真蕨纲
桫椤科桫椤属,是一种树形蕨类的植物[1]。桫椤最早出现在
距今 3亿年前的泥盆纪、繁盛于 1.4亿年前的白垩纪[2],是
当时草食类恐龙的主要食物,但后因第四纪冰川时期地壳
变化,其生长面积大量缩小。后来又由于人类活动的影响,
几乎濒于灭绝。1984年国家环保局将其列为国家一级保护
植物,1999年8月,国务院批准的《国家重点保护野生植物
名录》(第一批)中,将桫椤科所有植物列为国家二级重点
保护植物[3]。
桫椤在古化石方面具有重要的研究价值,此外它还具
有重要的药用价值。桫椤的茎经过干燥后,称为大贯众,其
髓称为龙骨风,皆可入药[1]。目前对桫椤的研究大多数还仅
限于其生态分布,生长环境等方面,有关其化学成分方面
的研究尚未见报道。我们在对桫椤叶的化学成分进行预试
研究时发现叶中含有丰富的黄酮类成分,对叶的化学成分
采用醇提得浸膏,然后采用系统溶剂分离法[4]时发现,水液
具有很强的甜味,粘性也很大,预示该水液中含有较多的
可溶性糖。如此高含量的可溶性糖在植物的叶中是很少
见。可溶性糖是易消化吸收的营养物质,而黄酮类成分则
具有多种生物活性,唐栩[5]研究了桫椤叶和茎中黄酮的抗
肿瘤活性,发现与化学药物联用时具有明显的增效减毒作
用。于是我们对桫椤叶和茎干中可溶性糖和总黄酮含量进
行了测定,现报道如下。
1 材料
桫椤叶和茎干(AlsophilaSpinulosa):于 2005年 3月 5
日采自四川省乐山市五通桫椤谷,野生;芦丁对照品(含
量≥98%),购自 Sigma公司;葡萄糖(含量≥99.5%),购自
四川省医药公司;721-分光光度计(上海精密科学仪器有
限公司),UV-762紫外可见分光光度计(上海精密科学仪
器有限公司);电子天平(FC204,上海精科实业有限公司);
恒温水浴锅(H·H·S21-6C,上海医疗器械五厂);植物粉碎
机(FZ102,天津市泰斯特仪器有限公司);试剂均为分析
纯。
2 实验方法与结果
2.1 糖和黄酮的预试
按照文献[6]制备预试液进行桫椤叶和茎干中可溶性糖
和黄酮的预试试验,结果显示均含有可溶性糖和黄酮类化
合物。
2.2 可溶性糖的含量测定
2.2.1 标准曲线的制备
精确称取分析纯的干燥至恒重的葡萄糖 0.1096克,用
50
蒸馏水定容到 100mL,从中吸取 1、2、4、6、8、10mL分别移
入 100mL容量瓶中,蒸馏水定容后从中分别取 2mL移入
50mL容量瓶中,蒸馏水定容,即为葡萄糖标准溶液。吸取
系列标准溶液 1mL放入 10mL刻度试管中,分别向试管中
加入 6mL0.4%蒽酮浓硫酸液,5分钟后在紫外分光光度计
上 于 650nm处 测 吸 收 值 。 得 糖 的 回 归 方 程 为 :A=
0.018278C+0.005389(r=0.9983)
2.2.2 样品溶液的制备和可溶性糖的含量测定
参照文献[7]。称取桫椤叶粉400.2mg,403.6mg,408.8mg
和桫椤茎粉末410.4mg,405.2mg,409.7mg,分别用15mL80%
的乙醇转入离心管中,搅匀后置于 85℃水浴锅中保温
30min,离心。重复提取一次,然后用少量 80%的乙醇洗涤
残渣,合并滤液和洗涤液,真空浓缩至 5mL左右,用蒸馏水
转移定容为50mL。取1mL上述溶液,再次用蒸馏水定容为
50mL,即为样品溶液。
取 1mL样品溶液,加 6mL0.4%的蒽酮硫酸溶液,摇匀
后放置6min,在650nm处测定吸收值。测定结果见表1。
2.3 黄酮含量的测定
2.3.1 标准曲线的制备
精密称取 120℃干燥至恒重的芦丁 200mg,置 100mL
容量瓶中,加乙醇适量,置水浴上微热使其溶解,冷却,加
乙醇至刻度,摇匀,精密量取上述试液 10.0mL,置 100mL
容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀即得。每lmL含无水
芦丁 0.2mg。精密量取上述标准溶液 0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、
1.8mL,分置于 50mL容量瓶中,各加水 l2mL,分别加入 5%
NaNO2溶液 2mL,摇匀,放置 6min;然后分别加入 10%A1
(NO3)3溶液 2mL,摇匀,放置 6min;再分别加人 4%NaOH溶
液 20mL,最后分别加水至刻度,摇匀,静置 15min,在
509.5nm波 长 处 测 定 吸 收 值 。 得 回 归 方 程 为 :C=
0.082768*A+0.000973,(r=0.9996)。
2.3.2 样品溶液的制备和含量测定
以芦丁为对照品,采用 NaNO2、A1(NO3)3和 NaOH显色
测定吸光值。分别称取桫椤叶粉末 513.3mg,512.5mg,
511.6mg和桫椤茎粉末 506.7mg,504.2mg,507.3mg,各加入
80mL80%的甲醇,80℃水浴循环回流 4h,取 1mL回流提取
液,各加水12mL,加入5%的NaNO22mL,摇匀,放置6min,
加入10%的 Al(NO3)3溶液 2mL,放置 6min,然后加入 4%的
NaOH20mL,用水定容为 50mL,摇匀,放置 15min后,在
509.5nm处测定吸收值。测定结果见表2。
3 讨论
3.1 桫椤叶中可溶性糖含量高达 21.42%,这有别于一般
植物和人类的食物,如水稻含可溶性糖一般为 1%~1.6%
左右,小麦含可溶性糖一般为 2%~3%左右。推测桫椤叶中
可溶性糖通过体内转运转化,形成了桫椤髓中高含量的淀
粉[1]。
3.2 桫椤叶和茎干中总黄酮含量分别为 6.24%和 5.39%,
而其黄酮具有抗肿瘤活性[5],两者均具有较大的开发价值。
但由于桫椤是国家重点保护植物,桫椤髓(龙骨风)的资源
有限,而桫椤叶是可以再生的,故在一定程度上桫椤叶可
以替代龙骨风使用。
表1 桫椤叶、茎中可溶性糖的分光光度吸收值及含量
称样量(mg)
400.2
403.6
408.8
410.4
405.2
409.7
吸收值
0.0956
0.0957
0.0962
0.0231
0.0224
0.0229
含量
21.58%
21.42%
21.27%
4.13%
4.02%
4.09%
平均含量 RSD(%)
桫椤叶
桫椤茎
21.42%
4.08%
0.75
1.47
参考文献:
[1]王用平.待开发的活化石——桫椤[J].中国野生植物,1990(1):21-22.
[2]傅立国.中国植物红皮书——稀有和珍稀植物(第1卷)[M].北京:科学出版社,1991.
[3]曾联盟.桫椤:孑遗世上的木本蕨类植物[J].森林与人类,2003,23(3):32-33.
[4]肖崇厚.中药化学[M].上海:上海科学技术出版社,2000:22-23.
[5]唐栩.黄酮类化合物DO1抗肿瘤的药理作用研究[D].广州:中山大学,2003.
[6]谭仁详.植物成分分析(第1版)[M].北京:科学出版社出版,2002:679-689.
[7]张志良.植物生理学实验指导(第2版)[M].北京:高等教育出版社,1990:160-162.
表2 桫椤叶、茎中总黄酮的分光光度吸收值及含量
称样量(mg)
513.3
514.5
511.6
506.7
504.2
507.3
吸收值
0.0852
0.0851
0.0846
0.0721
0.0716
0.0726
含量
6.25%
6.23%
6.23%
5.34%
5.33%
5.51%
平均含量 RSD(%)
桫椤叶
桫椤茎
6.24%
5.39%
0.16
1.86
51