全 文 ：文章编号:1001-4829(2006)04-0751-03
　　收稿日期:2005-12-02
　　基金项目:云南省自然科学基金(2003C0028Q)
作者简介:张艺萍(1977-),女 ,云南大理人 ,硕士 ,主要从事组
培技术和病害方面的研究 , ＊为通讯作者。
百合叶片离体不定芽发生和快繁技术研究
张艺萍 ,屈云慧＊ ,熊　丽 ,吴学尉
(云南省农业科学院花卉研究所 ,云南 昆明　650205)
摘　要:以百合叶片为材料 ,建立了百合叶片不定芽发生 、植株再生和微繁的技术体系。研究了不同消毒时间 、不同激素及其组合
对叶片不定芽发生 、增殖和生根的效应。结果显示 ,用 0.1 %的氯化汞对叶片消毒 5 min效果较好, 污染率为 36 %,萌动率为 75
%,诱导率为 68.8 %。MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5 mg/ L是叶片不定芽发生的适宜培养基;MS+6-BA 1.0 mg/ L+NAA 0.1 mg/L
是不定芽增殖的适宜培养基;MS+NAA 0.1 mg/ L是生根的适宜培养基。
关键词:百合;叶片;不定芽;快繁
中图分类号:S682.2 　　　文献标识码:A
Research on adventitious shoot regeneration and micropropagation
from leaves of lily
ZHANG Yi-ping , QU Yun-hui＊, XIONG Li ,WU Xue-wei
(Flower Research Institute of Yunnan Academy of Agricultural Sciences ,Yunnan Kunming 650205 , China)
Abstract:Adventitious shoot formation , plant regeneration and micro-propagation were established in lily leaf in vitro.Effect of dif ferent sterilized
time , kinds of hormone and its combination on adventitious shoot formation, plant regeneration and root regeneration were studied.The results showed
that explant sterilized in 0.10 % aqueous mercuric chloride for 5 min had bet ter effect , and 36 % of contamination rate , 75 % of germinating rate ,
68.8 % of inducement rate ,MS+6-BA 2.0mg/ L+NAA 0.5mg/ L was suitable for adventitious shoot formation f rom the leaf , the shoots grew well
in MS+6-BA 1.0 mg/ L+NAA 0.1 mg/ L medium , MS+NAA 0.1 mg/ L was the best medium for root regeneration.
Key words:li ly;leaves;adventit ious shoot;micro-propagation
　　百合(Lily),学名 Lilium.,为百合科百合属多年
生球根类草本植物。全世界约有 100多种 ,中国栽
培约有 60多种[ 1] 。百合切花是目前世界上发展最
快的花卉之一 ,市场前景广阔 。百合以有性方式(种
子繁殖)和无性方式进行繁殖 ,而以无性繁殖为主 ,
生产上主要靠扦插繁殖和分球繁殖等方式繁殖。而
组织培养的方法也是目前运用较多的方法之一。组
织培养中常用百合鳞片作为外植体 ,还有用花丝 、花
梗 、花托 、花柱 、花葶 、柱头 、带叶茎段 、子房 、珠芽 、
根 、茎尖等作为外植体培养成功的[ 2～ 9] ,而用叶片作
为外植体进行直接再生体系的研究较少 ,所报道的
多是用组培苗的叶片进行诱导[ 10～ 11] 。本研究直接
用采自田间的百合叶片作为外植体来进行再生体系
的研究 ,为百合的优良株系扩繁和野生百合资源的
保存奠定了基础 ,并建立了快繁体系 。
1　材料与方法
1.1　材料
品种“Acapulco” ,田间叶片 。
1.2　方法
将叶片在流水下冲洗 1 ～ 2 h ,然后用棉花蘸 75
%的酒精擦洗叶片表面 ,再用 0.1 %的氯化汞溶液
消毒 3 ～ 9 min ,用无菌水洗 4遍 ,将叶片放在滤纸上
吸干水分后切成 2 cm×2 cm的小块 ,平放接种于诱
导培养基 M1 、M2 、M3 、M4 上 ,每处理 5 瓶 ,每瓶 5
块;随后将诱导出的不定芽转接至 MS+6-BA 2 ～ 3
mg/L +NAA 0.1 ～ 0.5mg/L 的培养基上 ,共设 13个
处理 ,每个处理接 10个不定芽 ,重复 3次 ,摸索适宜
不定芽增殖的培养基;将苗高为 2 cm 左右的苗转接
至MS+NAA 0.05 ～ 0.15 mg/L 的培养基中 ,共设 3
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2006年 19卷 4期
Vol.19　　No.4 　　　　　　　　　　　　　　
西　南　农　业　学　报
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
DOI :10.16213/j.cnki.scjas.2006.04.048
个处理 ,每个处理接 10棵苗 ,重复 3次 ,探求适宜的
生根培养基 。以上培养基加入蔗糖浓度为 3 %,琼
脂浓度为 0.5 %,pH 值均为 5.8 ,培养室温度 24 ℃
±1 ℃,光照强度2000 lx ,10 h/d。
2　结果与分析
2.1　不同消毒时间对百合叶片再生植株的影响
用0.1 %氯化汞对百合叶片消毒 5 min时获得
较好效果 ,其污染率为 36 %,萌动率为 75 %,诱导
率为 68.8 %。当消毒时间为7 min时 ,污染率较低 ,
为24 %,但由于消毒时间长 ,不仅杀死了微生物 ,同
时也导致外植体损伤 ,使萌动率 、诱导率降低 ,而消
毒9 min时 ,则全部外植体褐化死亡 。
2.2　不同培养基对百合叶片再生植株的影响
在M1(MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+KT
0.5 mg/L)、M2(MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/
L)、M3(MS +6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L)、M4
(MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L)4种不同的
培养基上进行芽的诱导分化 ,观察得知 ,叶片在M2培
养基中经 20 d左右开始发芽生长;在M1 、M3培养基
中经25 d左右才有绿色突起 ,之后有小芽生长;在M4
培养基中全部外植体褐化死亡。由此可知 ,M2是适
宜诱导百合叶片再生植株的培养基 ,再生率为55 %。
高浓度的 6-BA 且与 NAA 的比例合适就比较容易诱
导出芽 ,KT对诱导出芽也有一定的效果。
2.3　不同培养基对百合不定芽增殖的影响
在1(MS +6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1mg/L), 2
(MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L), 3(MS +6-
BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L),4(MS+6-BA 2.0 mg/
L+NAA 0.15 mg/L), 5(MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA
0.2 mg/L),6(MS +6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.05 mg/
L),7(MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L),8(MS+
6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.15 mg/L),9(MS+6-BA 2.5
mg/L+NAA 0.2 mg/L), 10(MS+6-BA 3.0 mg/L +
NAA 0.05 mg/L),11(MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1
mg/L),12(MS+6-BA 3.0 mg/L +NAA 0.15 mg/L),
13(MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L)等 13种不
同的培养基上培养看不定芽增殖的效果 。接种 20 d
后观察结果 ,从增殖倍数来看 ,1号培养基的增殖效
果最好 ,增殖倍数达 2.95。12号培养基的增殖效果
最差 ,增殖倍数为 1.28。6-BA 和 NAA 的浓度与比
例是影响增殖的主要因素 , 6-BA 浓度越高 ,越不利
于不定芽的增殖 ,而 6-BA和 NAA 的比例为 10∶1时
较有利于不定芽的增殖。
2.4　不同培养基对百合不定芽生根的影响
在 1(MS +NAA 0.05 mg/L), 2(MS +NAA 0.1
mg/L),3(MS+NAA 0.15 mg/L)3种不同的培养基上
培养看生根的效果 。接种 20 d 后观察结果 ,从生根
率 、最大根长来看 ,在 2号培养基上生根效果最佳 ,
生根率达90.0 %,最大根长为 2.30 cm ,较适宜后期
的栽培 ,且根健壮 。
3　讨　论
　　百合育种工作中选育出来的优良株系和野生的
百合资源数量有限 ,很难进行下一步的筛选和资源
保存 ,所以采用叶片作为外植体是较好的选择。其
优点是取材容易 ,繁殖周期短 ,节省培养基 。
氯化汞是植物组织培养中常用的一种外植体消
毒剂 ,其使用浓度和消毒时间对外植体的萌动有很
大的影响 。本实验以 0.10 %氯化汞对百合叶片消
毒 5 min为最佳。消毒时间过短 ,达不到抑菌效果;
消毒时间过长 ,又会对外植体产生一定的伤害 ,从而
使萌动率降低。
百合不定芽的产生受 6-BA 和 NAA 的影响 ,当
6-BA 2.0 mg/L ,NAA 0.5 mg/L时 ,最适宜诱导百合
不定芽的产生 ,6-BA的影响较NAA 大 ,这与其它植
物组织培养相同[ 12～ 15] 。
罗凤霞用新铁炮百合的叶片作为外植体 ,其诱
导率为 11.43 %[ 16] 。而本研究中的诱导率为 68.8
%,说明消毒的时间和所用的培养基有利于百合叶
片的诱导。马纯艳用有斑百合的叶片培养植株成
功[ 17] ,但未建立起快繁体系 。本研究筛选出了适宜
百合增殖和生根的培养基 ,建立了工厂化生产的快
繁体系 。这对百合优良株系的快繁和百合资源的保
存具有重要意义。
参考文献:
[ 1] 郑爱珍 ,张　峰.百合的繁殖方法[ J] .北方园艺 , 2004(4):43.
[ 2]姚连芳 ,周俊国 ,殷桂琴.百合组织培养试验研究[ J] .贵州农业科
学 ,1999 , 27(3):47-48.
[ 3] 唐东芹 ,钱虹妹 ,黄丹枫.百合基因转化胚性愈伤组织受体系统的
建立[ J] .浙江林学院学报 , 2003, 20(3):273-276.
[ 4] 吴若菁 ,阮少宁.百合胚状体形成途径及植株的再生研究[ J] .福
建林学院学报 , 2003 ,23(4):322-325.
[ 5] 白美发.青山百合的组织培养与快速繁殖[ J] .贵州农业科学 ,
2003 , 31(6):25-26.
[ 6] 李　睿.麝香百合的组织培养与快速繁殖[ J] .甘肃林业科技 ,
2003 , 28(2):13-14.
[ 7]林天照 ,张春镇 ,危天进.麝香百合花梗的离体培养研究[ J] .福建
热作科技 , 2003 , 28(3):5-6.
[ 8]丁　兰 ,赵庆芳 ,谢　晖.泰伯百合的离体快繁[ J] .西北师范大学
学报, 2003 , 39(3):65-67.
[ 9] 赵庆芳 ,李巧峡 ,丁　兰.西伯利亚百合的组织培养和离体快繁
[ J] .甘肃科学学报 , 2003, 15(4):52-55.
[ 10] 马　惠 ,郭扶兴 ,周俊彦.百合叶片愈伤组织的诱导和植株再生
[ J] .植物生理学通讯 , 1992, 28(4):284-287.
752 西　南　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　19卷
[ 11]张　君 ,武丽敏 ,王　雷.麝香百合组培快繁技术初步研究[ J] .
吉林农业大学学报 ,2002 , 24(1):53-54 , 81.
[ 12] 胡国富 ,李凤兰 ,袁 强.北青兰(Dracocephalum argunense)叶片组
织培养的研究[ J] .东北农业大学学报 , 2004 ,35(2):195-198.
[ 13] 臧运祥 ,张 松 ,郑伟尉.垂吊型矮牵牛叶片培养不定芽发生和微
繁研究[ J] .核农学报 ,2004 , 18(1):18-21.
[ 14] 卢其能.龙牙百合的组织培养和快速繁殖研究[ J] .江西农业学
报 , 2002, 14(4):43-46.
[ 15] 王　磊 , 李红双 ,蔺　娜.悬铃木叶片再生体系的建立[ J] .林业
科学, 2004 , 40(1):58-63.
[ 16] 罗凤霞 ,徐桂华 ,金丽丽.新铁炮百合微繁的研究[ J] .沈阳农业
大学学报 , 2000 , 31(3):254-257.
[ 17] 马纯艳.有斑百合叶片的组织培养[ J] .沈阳师范学院学报 ,
2002 , 20(3):219-221.
(责任编辑　王家银)
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7534期 张艺萍等:百合叶片离体不定芽发生和快繁技术研究