全 文 ：第 42 卷 第 5 期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vol． 42 No． 5
2014 年 5 月 JOUＲNAL OF NOＲTHEAST FOＲESTＲY UNIVEＲSITY May 2014
1)林业公益性行业科研专项(201204609)、国家“863”计划项
目(SS2013AA100706)、北京市园林局育种项目(YLHH201300103)。
第一作者简介:崔祺，女，1987 年 12 月生，北京林业大学园林学
院，硕士研究生。
通信作者:贾桂霞，花卉种质创新与分子育种北京市重点实验室
(北京林业大学)、国家花卉工程技术研究中心(北京林业大学)、北
京林业大学园林学院，教授。E － mail:gxjia@ bjfu． edu． cn。
收稿日期:2013 年 8 月 29 日。
责任编辑:任 俐。
“OT”杂种系百合‘Bay watch’离体再生体系的建立1)
崔 祺 贾桂霞
(北京林业大学，北京，100083) (花卉种质创新与分子育种北京市重点实验室(北京林业大学))
摘 要 为建立百合高效的离体再生体系，比较了“OT”杂种系百合‘Bay watch’的鳞片、花器官作为外植体
时的不定芽诱导和植株再生能力，综合 5 种外植体分化再生的结果，选择花丝作为最佳外植体材料，结果表明，最
适培养基为 MS + 0． 5 mg·L －1 NAA + 0． 5 mg·L －1 6 － BA + 0． 2 mg·L －1 2，4 － D，不定芽诱导率高达 88． 89%。采
用两种方式对组培苗进行继代培养，筛选出了直接诱导小鳞茎的适宜培养基配方为 MS +(0． 1 ～ 0． 5)mg·L －1
NAA + 1． 0 mg·L －1 6 － BA;诱导小鳞片分化不定芽的适宜培养基为 MS + 0． 2 mg·L －1 NAA + 0． 005 mg·L －1 TDZ;
诱导生根过程中，适宜的生根培养基为 1 /2 MS + 0． 1 mg·L －1 IBA。
关键词 百合;‘Bay watch’;组织培养;植物生长调节剂
分类号 Q813． 1 + 2;Q949． 71 + 8． 23
Establishing Ｒegeneration System for Lilium OT Hybrids‘Bay watch’/Cui Qi(Beijing Forestry University，Beijing
100083，P． Ｒ． China);Jia Guixia(Beijing Key Laboratory of Ornamental Plants Germplasm Innovation ＆ Molecular
Breeding，Beijing Forestry University)/ / Journal of Northeast Forestry University． － 2014，42(5)． － 34 ～ 38
We studied the different shoots and plant regeneration ability of Lilium‘Bay watch’from the bulb scales and different
parts of floral organ to establish an efficient regeneration system for Lilium． The filament is the most appropriate among all
kinds of explants，and the optimal medium for shoot regeneration of filament is MS medium supplemented with 0． 5 mg·L －1
NAA，0． 5 mg·L －1 6 － BA and 0． 2 mg·L －1 2，4 － D in which the filament has the highest induction rate of 88． 89% ．
During the secondary culture，two different treatments were conducted on the test-tube plantlets． The optimal medium for little
bulb inducement from the test-tube plantlets is MS medium supplemented with 0． 1 －0． 5 mg·L －1 NAA and 1． 0 mg·L －1 6 －
BA． The suitable medium for shoots proliferation from the bulb scale of the test-tube plantlets is MS medium supplemented with
0． 2 mg·L －1 NAA and 0． 005 mg·L －1 TDZ． It is beneficial for root growth with 0． 1 mg·L －1 IBA in 1 /2 MS medium．
Keywords Lilium;‘Bay watch’;Tissue culture;Plant growth regulators
百合(Lilium spp．)属于百合科(Liliaceae)百合
属(Lilium)多年生具有地下鳞茎的草本植物，是重
要的商品花卉和园林绿化植物。传统的百合繁殖方
法主要包括分球、扦插鳞片等，繁殖系数较小，且种
植多代以后种性退化，甚至积累病毒，严重影响百合
的产量和质量，组织培养以其繁殖速度快、繁殖系数
高、去病毒等优点，近几年来在百合的种球繁殖、种
质保存、脱毒复壮、转基因体系的构建上广为应用。
百合的许多器官、组织都可作为外植体进行诱
导分化和植株再生，如鳞片、叶片、子房、种子、花梗、
花托、花瓣、珠芽、花柱、花丝、花药、胚等［1 － 4］。在百
合组织培养中，外源生长调节剂合适的质量浓度和
种类的适宜配比不仅可以诱导细胞分裂和生长，而
且能控制细胞分化和形态建成［5］。近年来，关于百
合的组织培养研究最多的是东方百合、亚洲百合、麝
香百合及野生百合的一些种，从中可发现不同基因
型百合、同一基因型百合的不同外植体分化再生能
力以及所需的最适生长调节剂种类和质量浓度有一
定的差异［1 － 5］，因此，为加快百合的繁殖速度提高繁
殖系数，针对不同品种和品系百合的分化再生仍需
不断实践探索。
“OT”杂种系百合为东方百合与喇叭百合杂交
而成的一系列百合新品种，主要特征为花大、芳香、
抗性强，适宜我国大部分地区种植，其种植面积与市
场需求不断扩大［6］。‘Bay watch’为“OT”杂种系百
合中近期筛选出的优良新品种，其生长迅速、栽培期
短、保鲜期长、花大味香、茎秆粗壮，对病虫害的抗性
较强，是比较有发展前景的百合新品种。目前，有关
“OT”型百合的组织培养研究较少，品种‘Bay
watch’国内更是尚未报道，而高效离体再生体系的
建立是指导种球自主繁育、种质保存、基因转化等技
术的关键。本研究从外植体种类的选择和外源生长
调节剂配比入手，较为系统地探讨了不同生长调节
剂组合及配比对‘Bay watch’的鳞片、花器官诱导分
化以及组培苗增殖、生根的影响，旨在建立便捷高效
的再生途径，为“OT”型百合生产扩繁、遗传转化等
技术提供理论基础。
1 材料与方法
供试材料为北京市顺义区利松花卉种植中心栽
种的‘Bay watch’品种，取其鳞茎、花梗、未开放的花
DOI:10.13759/j.cnki.dlxb.20140522.018
蕾作为外植体材料。
试验所用基本培养基均为 MS 培养基，其中含
30 g·L －1蔗糖和 6． 5 g·L －1琼脂粉，并附加不同种
类和质量浓度的植物生长调节剂 6 － BA、NAA、2，4
－ D、TDZ。培养基 pH 值 5． 85，121 ℃高压灭菌 20
min。培养条件为温度 25 ℃，光照强度 2 000 lx，光
照时间 12 h·d －1，70% ～80%的相对空气湿度。
不同外植体初代诱导培养的比较:将外植体用洗
洁剂浸泡 10 min，在流水下用轻柔毛刷刷洗。在超净
台中，将鳞片、花梗和花蕾放入 75%的乙醇中浸泡 1
min后，用质量分数为 25%的次氯酸钠溶液处理鳞片
和花梗，处理时间分别为 25、15 min，花蕾不经次氯酸
钠处理，之后用无菌水多次清洗所有外植体材料。花
丝、花柱、子房、花梗分别切成 0． 5 ～ 0． 7 cm 的小段，
鳞片切成 0． 8 cm ×0． 8 cm方块，将所有外植体接入培
养基 MS +1． 0 mg·L －16 － BA + 1． 0 mg·L －1NAA +
1． 0 mg·L －12，4 － D(表 1)，试验采用单因素随机区
组设计，每处理接种 30个外植体，3次重复。
不定芽诱导率 =(产生不定芽的外植体数 /未
发生污染的试验外植体总数)× 100%;
污染率 =(发生污染的外植体数 /试验的总外
植体数)× 100%。
花丝诱导分化培养基的筛选:以 MS 为基本培
养基，将花丝接种到添加不同质量浓度 6 － BA(0．
5、1． 0、2． 0 mg·L －1)、NAA(0． 2、0． 5、1． 0 mg·L －1)
和 2，4 － D(0． 2、0． 5、1． 0 mg·L －1)的培养基中进行
诱导培养，采用 L9(3
4)正交试验设计筛选适宜花丝
分化的生长调节剂的质量浓度及配比(表 1)。每处
理接种 30 个外植体，3 次重复，接入 50 d 后统计花
丝分化与不定芽生长情况。
表 1 花丝培养正交试验设计 mg·L －1
水平
因 素
NAA(A) 6 － BA(B) 2，4 － D(C)
1 0． 2 0． 5 0． 2
2 0． 5 1． 0 0． 5
3 1． 0 2． 0 1． 0
直接诱导小鳞茎增殖培养基的筛选:将初代培
养诱导出的组培苗，接种到添加不同质量浓度 6 －
BA(0． 5、1． 0、2． 0 mg·L －1)与 NAA(0． 1、0． 3、0． 5
mg·L －1)的培养基中进行增殖培养，共设计 9 种培
养基配方，每处理接种 30 株苗，3 次重复，接入 45 d
后统计不同生长调节剂质量浓度处理下小鳞茎的增
殖系数与生长情况。增值系数 =转接 45 d 后小鳞
茎总数 /初始组培苗数。
组培苗小鳞片诱导不定芽分化培养基的筛选:
将继代培养 3 次生长壮实的组培苗小鳞茎的外层和
中层鳞片剥下，切取基部为外植体，在 MS 基本培养
基中添加不同质量浓度的 TDZ(0． 002、0． 005、0． 01
mg·L －1)和 NAA(0． 1、0． 3、0． 5 mg·L －1)，共设计
9 种培养基配方，每处理接 30 个外植体，3 次重复，
30 d后统计不定芽的诱导率。不定芽诱导率 =(分
化出芽的鳞片数 /鳞片总数)× 100%。
组培苗生根壮苗培养基的筛选:将增殖培养后的
组培苗分成单苗接在添加了不同质量浓度 NAA(0、
0． 1、0． 5 mg·L －1)、IBA(0、0． 1、0． 5 mg·L －1)的 1 /2
MS培养基上进行生根培养，30 d后统计生根率。
数据处理:通过 Microsoft Excel 2010 和 IBM
SPSS 19 对数据进行方差分析和因素内多重比较。
2 结果与分析
2． 1 不同外植体诱导愈伤组织及分化不定芽的差异
‘Bay watch’是一种较容易分化再生的百合品
种，试验中各外植体均能经过愈伤组织途径诱导出
芽(表 2)。从形成愈伤所需时间来看，花梗诱导愈
伤组织所需时间最短，鳞片、花丝、花柱次之，子房诱
导愈伤组织所需时间相对较长。不同外植体形成的
愈伤组织形态有所不同，鳞片接种 30 d 左右开始出
现淡黄色颗粒状愈伤组织，之后愈伤组织逐渐增多，
40 d左右愈伤组织逐渐分化成绿色小芽。子房和花
柱诱导的愈伤组织多为绿色的致密型愈伤组织，花
丝诱导的愈伤组织多为乳白色至淡黄绿色的疏松颗
粒型愈伤组织，而花梗诱导的愈伤组织为黄色膨大
块状愈伤。不同部位的外植体对不定芽诱导率有极
显著性影响，不定芽诱导率从高到低依次是鳞片、花
丝、花梗、子房、花柱。综合 5 种不同外植体来看，鳞
片灭菌较困难，污染率相对较高，而选取的花蕾未曾
裂口，灭菌过程简单，灭菌效果好，污染率较低，在 4
种花器官中，花丝分化能力最强，接种后 1 个月左右
便可形成愈伤组织且在很短时间内就继续分化长出
不定芽，不定芽生长健壮，花丝较适合做初代培养的
材料，因此，在下一步试验中，对花丝分化诱导的最
佳生长调节剂配比进行了筛选。
2． 2 诱导花丝分化不定芽最适培养基的筛选
在花丝离体培养过程中，不同生长调节剂及其
质量浓度配比的培养基均能诱导出愈伤组织，接种
30 d左右部分培养基中的花丝开始出现愈伤组织，
先从切口处形成，不久在花丝边缘也开始出现，愈伤
组织色黄白、呈颗粒状，培养 50 d 后大部分花丝愈
伤组织在切口或边缘长出不定芽(表 3)。极差分析
表明，各因素对花丝不定芽诱导效应由大到小的排
序为 6 － BA、NAA、2，4 － D(表 4)，6 － BA 对花丝不
53第 5 期 崔 祺等:“OT”杂种系百合‘Bay watch’离体再生体系的建立
定芽诱导影响极显著(F0． 01 = 6． 010 ＜ F6 － BA = 49．
015＊＊)，NAA(F0． 05 = 3． 550 ＞ FNAA = 0． 562)和 2，4 －
D(F0． 05 = 3． 550 ＞ F2，4 － D = 0． 460)影响不显著，随着
6 －BA质量浓度的升高，不定芽诱导率随之降低，不同质
量浓度6 －BA处理间存在显著性差异，6 －BA质量浓度
为0．5 mg·L －1时诱导不定芽效果最优(表 5)。正交试
验结果筛选出的最优生长调节剂组合为 A2B1C1，即诱导
花丝不定芽最佳培养基为MS +0． 5 mg·L －1NAA +0． 5
mg·L －16 －BA +0．2 mg·L －12，4 －D。
表 2 不同外植体诱导愈伤组织及分化不定芽的比较
外植体类型 灭菌难度 污染率 /% 形成愈伤组织所需时间 /d 形成愈伤组织的特点 不定芽诱导率 /% 分化出芽所需时间 /d
鳞片 较难 (25． 51 ± 5． 20)a 30 ～ 50 淡黄色颗粒状愈伤 (57． 34 ± 3． 35)a 40 ～ 60
花丝 容易 (4． 50 ± 2． 39)c 30 ～ 40 白色颗粒状愈伤 (43． 71 ± 6． 04)b 40 ～ 55
花柱 容易 (3． 12 ± 1． 42)c 35 ～ 45 淡绿色颗粒状愈伤 (12． 45 ± 2． 00)e 45 ～ 55
子房 容易 (6． 34 ± 2． 68)bc 40 ～ 60 淡绿色颗粒状愈伤 (28． 55 ± 2． 13)d 70 ～ 90
花梗 容易 (10． 78 ± 2． 04)b 25 ～ 40 黄色膨大块状愈伤 (40． 87 ± 7． 21)c 35 ～ 60
注:污染率和不定芽诱导率为平均值 ±标准差;同列数据小写字母表示 p = 0． 05 显著水平，相同字母之间表示差异不显著，不同字母之间
表示差异显著。
表 3 不同质量浓度生长调节剂对花丝不定芽诱导的影响
试验
编号
试验因素 /mg·L －1
NAA(A) 6 － BA(B)2，4 － D(C)
不定芽诱
导率 /%
A1 0． 2 0． 5 0． 2 (88． 89 ± 5． 09)a
A2 0． 2 1． 0 0． 5 (33． 33 ± 8． 82)def
A3 0． 2 2． 0 1． 0 (17． 78 ± 1． 92)f
A4 0． 5 0． 5 0． 5 (78． 89 ± 17． 10)ab
A5 0． 5 1． 0 1． 0 (51． 11 ± 8． 39)cd
A6 0． 5 2． 0 0． 2 (24． 44 ± 8． 39)ef
A7 1． 0 0． 5 1． 0 (68． 89 ± 13． 47)bc
A8 1． 0 1． 0 0． 2 (40． 00 ± 12． 02)de
A9 1． 0 2． 0 0． 5 (28． 89 ± 10． 18)ef
注:不定芽诱导率为平均值 ±标准差;同列数据小写字母表示 p
=0． 05 显著水平，相同字母之间表示差异不显著，不同字母之间表
示差异显著。
表 4 不同质量浓度生长调节剂对花丝不定芽诱导的极差
分析
指标 NAA(A) 6 － BA(B) 2，4 － D(C)
K1 140． 00 236． 67 153． 33
K2 154． 44 124． 44 141． 11
K3 137． 78 71． 11 137． 78
X1 46． 67 78． 89 51． 11
X2 51． 48 41． 48 47． 04
X3 45． 93 23． 70 45． 93
Ｒ 5． 55 55． 19 5． 18
注:K代表各水平之和;X代表各水平的平均值;Ｒ代表极差。
表 5 不同质量浓度 6 － BA 对花丝不定芽诱导影响的多重
比较分析
水平 6 － BA质量浓度 /mg·L －1 不定芽平均诱导率 /%
1 0． 5 (78． 89 ± 10． 00)a
2 1． 0 (41． 48 ± 8． 98)b
3 2． 0 (23． 69 ± 5． 59)c
注:不定芽平均诱导率为平均值 ±标准差;同列数据小写字母表
示 p = 0． 05 显著水平，相同字母之间表示差异不显著，不同字母之间
表示差异显著。
2． 3 组培苗继代增殖培养基的筛选
为寻求一条更为高效快速的增殖途径，本研究
以组培苗作为材料，采用常规的继代增殖方法即组
培苗直接诱导小鳞茎，以及剥离小鳞片诱导基部分
化不定芽这两种途径进行扩繁增殖。
2． 3． 1 组培苗直接诱导小鳞茎增殖培养基的筛选
转接的无菌苗经过 40 d 左右增殖培养后，长成
7 ～ 10 cm的小植株，在无菌苗鳞茎周围新生了一些
小鳞茎，不同生长调节剂配比对组培苗直接诱导小
鳞茎增殖情况见表 6。方差分析表明，6 － BA 对小
鳞茎增殖系数影响存在极显著性水平(F0． 01 = 6． 010
＜ F6 － BA = 9． 623＊＊)，NAA(F0． 05 = 3． 55 ＞ FNAA = 1．
441)影响不显著。当 6 － BA 质量浓度在 0． 5 ～ 1． 0
mg·L －1时，随着质量浓度的增加增殖倍数随之增加;
6 －BA质量浓度在 1． 0 ～2． 0 mg·L －1时随着质量浓度
的增加增殖倍数随之降低。不同质量浓度 6 －BA处理
间存在显著性差异(表 7)，当 6 － BA 质量浓度为 1． 0
mg·L －1时与不同质量浓度 NAA搭配对小鳞茎的增殖
效果均好，直接诱导小鳞茎增殖的适宜培养基为 MS +
(0． 1 ～0． 5)mg·L －1NAA +1． 0mg·L －16 －BA。
表 6 不同质量浓度生长调节剂对无菌苗继代增殖的影响
试验
编号
6 － BA质量浓度 /
mg·L －1
NAA质量浓度 /
mg·L －1
小鳞茎增
殖系数
A1 0． 5 0． 1 (2． 22 ± 0． 27)c
A2 0． 5 0． 3 (2． 32 ± 0． 19)c
A3 0． 5 0． 5 (2． 45 ± 0． 18)c
A4 1． 0 0． 1 (2． 98 ± 0． 24)b
A5 1． 0 0． 3 (3． 28 ± 0． 14)a
A6 1． 0 0． 5 (3． 12 ± 0． 81)ab
A7 2． 0 0． 1 (2． 60 ± 0． 22)bc
A8 2． 0 0． 3 (2． 70 ± 0． 24)bc
A9 2． 0 0． 5 (3． 17 ± 0． 71)ab
注:小鳞茎增殖系数为平均值 ±标准差;同列数据小写字母表示
p = 0． 05 显著水平，相同字母之间表示差异不显著，不同字母之间表
示差异显著。
63 东 北 林 业 大 学 学 报 第 42 卷
表 7 不同质量浓度 6 － BA 对无菌苗直接诱导小鳞茎影响
的多重比较分析
水平 6 － BA质量浓度 /mg·L －1 小鳞茎平均增殖系数
1 0． 5 (2． 33 ± 0． 12)b
2 1． 0 (3． 13 ± 0． 15)a
3 2． 0 (2． 82 ± 0． 30)a
注:小鳞茎平均增殖系数为平均值 ±标准差;同列数据小写字母
表示 p = 0． 05 显著水平，相同字母之间表示差异不显著，不同字母之
间表示差异显著。
2． 3． 2 组培苗小鳞片诱导不定芽分化培养基的筛选
以‘Bay watch’组培苗小鳞片基部为外植体时，
接种 15 d左右可直接诱导分化不定芽，30 d 后不同
处理下不定芽诱导统计情况(表 8)。
表 8 不同处理对小鳞片基部分化诱导的影响
试验
编号
TDZ质量浓度 /
mg·L －1
NAA质量浓度 /
mg·L －1
不定芽诱
导率 /%
A1 0． 002 0． 1 (75． 11 ± 5． 26)e
A2 0． 002 0． 2 (74． 22 ± 6． 61)e
A3 0． 002 0． 3 (80． 25 ± 2． 10)de
A4 0． 005 0． 1 (87． 62 ± 2． 18)bc
A5 0． 005 0． 2 (95． 08 ± 2． 64)a
A6 0． 005 0． 3 (91． 27 ± 1． 84)ab
A7 0． 010 0． 1 (89． 99 ± 2． 50)ab
A8 0． 010 0． 2 (82． 71 ± 1． 60)cd
A9 0． 010 0． 3 (78． 90 ± 2． 69)de
注:不定芽诱导率为平均值 ±标准差;同列数据小写字母表示 p
=0． 05显著水平，相同字母之间表示差异不显著，不同字母之间表示
差异显著。
小鳞片在 9 种培养基上均能分化出不定芽，只
是在分化快慢、不定芽数、不定芽长势等方面有所区
别，其中 4、5、6 号出芽较快、生长壮实，1、2、9 号不
定芽少、生长较弱。方差分析结果表明，TDZ 对小
鳞片不定芽诱导影响极显著(F0． 01 = 6． 010 ＜ F2，4 － D
= 41． 517＊＊)，NAA(F0． 05 = 3． 550 ＞ FNAA = 0． 117)影
响不显著，对不同质量浓度的 TDZ 进行多重比较分
析(表 9)，结果表明，不同质量浓度 TDZ 处理之间
差异显著，其中 0． 005 mg·L －1 TDZ 为最佳质量浓
度。虽然不同质量浓度 NAA 处理对‘Bay watch’小
鳞片基部诱导分化无显著性影响，但是与 0． 005 mg
·L －1TDZ的不同组合结果显示，以 0． 005 mg·L －1
TDZ和 0． 2 mg·L －1NAA生长调节剂组合对小鳞片
基部诱导率最高，为 95． 08% ± 2． 64%，因此，此组
合为小鳞片基部不定芽诱导的最适培养基配方。
表 9 不同质量浓度 TDZ 小鳞片不定芽诱导率影响的多重
比较分析
水平 TDZ质量浓度 /mg·L －1 不定芽平均诱导率 /%
1 0． 002 (76． 52 ± 5． 18)c
2 0． 005 (91． 32 ± 3． 77)a
3 0． 010 (83． 87 ± 5． 28)b
注:不定芽平均诱导率为平均值 ±标准差;同列数据小写字母表
示 p = 0． 05 显著水平，相同字母之间表示差异不显著，不同字母之间
表示差异显著。
2． 4 小鳞茎的生根培养
本试验在 1 /2 MS 培养基中分别添加 4 种不同
质量浓度的 NAA和 IBA，以未添加植物生长调节剂
的 1 /2 MS为对照，进行生根培养基的筛选。接种 7
d后就可看到组培苗下部出现白色突起，30 d 时根
系长势良好，不同质量浓度 NAA和 IBA生根结果如
表 10 所示。在生根培养基中，5 种培养基皆能达到
90%以上的生根率，未添加生长素的 1 号培养基根
系较细，根毛多;添加 NAA 的 2 号和 3 号培养基根
系生长良好，根毛也较多;4 号和 5 号培养基的根系
生长较好，根系数量多，颜色为绿色，根毛较少，根尖
发白，表明根系活力较强，但从根系数量及生根率来
看，4 号更优于 5 号，所以适合‘Bay watch’组培苗生
根的培养基为 1 /2 MS + 0． 1 mg·L －1 IBA。
表 10 不同质量浓度生长调节剂对组培苗生根的影响
试验
编号
NAA质量浓
度 /mg·L －1
IBA质量浓
度 /mg·L －1
生根
率 /%
平均根
数 /个
根系质量
A1 0 0 90． 12 3． 25 根系较细，毛状根较多
A2 0． 1 0 95． 33 4． 19 根系一般，毛状根较多
A3 0． 5 0 100． 00 5． 67 根系粗壮，毛状根较多
A4 0 0． 1 100． 00 5． 78 根系粗壮，毛状根较少
A5 0 0． 5 96． 74 5． 43 根系粗壮，毛状根较少
3 结论与讨论
本研究以‘Bay watch’不同部位外植体为材料
成功建立了其组培再生体系，且不同部位外植体在
同一培养基及培养环境条件下，诱导愈伤组织的能
力不同，分化出的愈伤组织形态及类型也不同。在
此前赵德萍等［7］对东方百合‘Sorbone’花萼、花瓣诱
导培养基筛选以及柳玉晶等［8］对东方百合‘Berni-
ni’花瓣、花丝、花柱组织培养的研究中都得到类似
的结论，并且百合的花丝诱导产生愈伤组织及不定
芽的能力最好［8 － 9］，与本研究结论一致。翟彦等［9］
和唐东芹等［10］从花丝诱导出愈伤组织，且愈伤组织
大都表现为浅黄色、质地紧密的颗粒状小凸起，即表
现为胚性状态，该愈伤组织可以多次继代培养且质
量增加较快，但是在本研究中花丝一旦形成愈伤组
织后，出芽较快，所以如何长时间维持花丝的愈伤组
织状态，需要进一步研究。
为寻求一条高效快速的增殖途径，本试验采用
了两种不同的继代培养方式对组培苗进行扩繁，即
直接诱导小鳞茎和小鳞片分化不定芽。试验发现，
将小鳞片剥离后接入分化培养基中，分化效果好，诱
导周期短，不定芽生长健壮，1 个月后即可获得一批
长势健壮的再生苗，并且剥离鳞片后的母体植株，其
茎尖组织在培养基中继续分化生长，因此，在组培苗
鳞茎较大的情况下要想短期内获得较高的繁殖系数
73第 5 期 崔 祺等:“OT”杂种系百合‘Bay watch’离体再生体系的建立
可采用这种方式进行扩繁。在直接诱导小鳞茎的研
究中发现，NAA与 6 － BA之间的比值介于 0． 1 ～ 0．
5 时有利于组培苗基部分化形成小鳞茎，进而提高
组培苗的增殖系数。有研究表明，高质量浓度的 6
－ BA有利于鳞茎基部胚性愈伤组织的形成，这些胚
性愈伤进一步分化出不定芽可以提高组培苗的增殖
系数［11］。但在本研究中，当 6 － BA 质量浓度过高
时，组培苗基部愈伤组织分化出的小苗生长细弱且
丛生，并且有畸形苗和玻璃化苗，由此看来较高质量
浓度的 6 － BA会抑制‘Bay watch’小苗的生长。本研
究在直接诱导小鳞茎中获得的最高增殖系数为 3． 28，
而张彦妮等［12］在毛百合的继代培养中获得的增殖系
数高达 7． 8，这可能是由于所选用培养基的类型、材料
的基因型及其生理状态的差异造成的，为提高继代
增殖系数有必要对组培苗继代培养时间以及生长调
节剂种类、质量浓度做进一步的筛选。
TDZ是一种新型的植物生长调节剂，其活性要
比 6 － BA 高得多［13］，在预试验中采用了 0． 5 mg·
L －1的 TDZ配合不同质量浓度的 NAA 诱导组培苗
小鳞片分化不定芽，试验发现每块鳞片不定芽诱导
数量较多，平均 4 ～ 7 个，但不定芽丛生化比较严重，
叶片较短，生长缓慢，进而采用了较低质量浓度的
TDZ，结果显示，低质量浓度的 TDZ可诱导鳞片分化
出单芽，每块鳞片单芽诱导数量平均为 3 ～ 5 个，虽
然数量较高质量浓度 TDZ的少，但单芽能迅速长成
小鳞茎，且小鳞茎生长壮实，鳞片抱合紧密，并获得
了高达 95． 08%的分化率。康大力等［14］发现适量质
量浓度的 TDZ 对细胞色素积累有明显影响;本研
究也发现了这个问题，高质量浓度 TDZ(0． 5 mg·
L － 1)条件下生长的不定芽颜色偏黄，而低质量浓
度 TDZ(0． 002 ～ 0． 01 mg·L － 1)条件下不定芽颜色
较为浓绿。当前在百合转基因中最为常见的是使用
愈伤组织作为转化材料［15 － 17］而百合的组培苗小鳞
片分化生长快、繁殖系数高，可获得大量再生植
株［18］，作为遗传转化的受体材料具有很大的优势，
所以下一步试验可将目的基因直接导入小鳞片中通
过诱导分化获得转基因植株。植物的无根子球和
小苗要发育成完整植株，需要进行生根培养，百合
在组织培养中一般极易生根，在本试验的生根培
养中，IBA较 NAA对根系的诱导效果好，以低质量
浓度的 IBA 最优，组培苗生根率高，根系粗壮，根
毛少，适合炼苗移栽。
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