全 文 ：第４３卷　第６期
２０１５年６月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４３ Ｎｏ．６
Ｊｕｎ．２０１５
网络出版时间：２０１５－０５－１１　１５：０３ ＤＯＩ：１０．１３２０７／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｎｗａｆｕ．２０１５．０６．０２０
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１５０５１１．１５０３．０２０．ｈｔｍｌ
葡萄风信子外植体直接再分化花芽和营养芽的研究
　［收稿日期］　２０１４－０９－０８
　［基金项目］　国家自然科学基金项目（３１１７０６５２）
　［作者简介］　刘妮妮（１９８９－），女，陕西榆林人，在读硕士，主要从事园林植物分子育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：１５１９１４６１９２７＠１６３．ｃｏｍ
　［通信作者］　刘雅莉（１９６０－），女，陕西西安人，教授，博士生导师，主要从事园林植物遗传育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｌ６１５１＠１２６．ｃｏｍ
刘妮妮ａ，ｂ，刘雅莉ａ，ｂ，娄　倩ａ，ｃ，杨慧萍ａ，ｂ
（西北农林科技大学ａ旱区作物逆境生物学国家重点实验室／农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，
ｂ林学院，ｃ园艺学院，陕西 杨凌７１２１００）
［摘　要］　 【目的】探索葡萄风信子直接再生花芽体系的建立，为葡萄风信子外植体直接再分化花芽研究提供参
考。【方法】以葡萄风信子‘亚美尼亚’花蕾外植体为材料，ＭＳ为基础培养基，在均添加０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ的条件下，分别
用不同质量浓度的６－ＢＡ（０，０．５，１，２，３，４ｍｇ／Ｌ）、ＧＡ３（０，０．５，１，２，３，４ｍｇ／Ｌ）和玉米素（０，０．０５，０．１，０．５，１，２ｍｇ／Ｌ）处
理，筛选出诱导花芽的最佳激素及最适质量浓度；以 ＭＳ＋６－ＢＡ（或玉米素）２ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ研究开花时花瓣切
片、花葶、叶片以及叶片诱导的愈伤组织诱导直接再分化花芽的情况。【结果】用 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ
处理葡萄风信子花蕾时，可在花蕾基部直接再分化出具有蓝色的花芽，且花芽分化率最高，达６０．２％。花葶、花瓣切片、
叶片和愈伤组织在同样条件下只能诱导产生愈伤组织、营养芽。说明花蕾是诱导花芽分化的最佳外植体，且最适培养基
为 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ。【结论】建立了葡萄风信子外植体直接再分化花芽体系。
［关键词］　葡萄风信子‘亚美尼亚’；直接再分化花芽；营养芽；组织培养
［中图分类号］　Ｓ６８２．２＋９ ［文献标志码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１５）０６－０１８７－０６
Ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｌｏｒａｌ　ａｎｄ　ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ　ｆｒｏｍ
ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅｎｉａｃｕｍ
ＬＩＵ　Ｎｉ－ｎｉ　ａ，ｂ，ＬＩＵ　Ｙａ－ｌｉ　ａ，ｂ，ＬＯＵ　Ｑｉａｎａ，ｃ，ＹＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｐｉｎｇａ，ｂ
（ａＳｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｃｒｏｐ　Ｓｔｒｅｓｓ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｉｎ　Ａｒｉｄ　Ａｒｅａｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，ｂ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，ｃ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，
Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅ－
ｎｉａｃｕｍｔｏ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｍ．ａｒｍｅｎｉａｃｕｍ
ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｗｉｔｈ　０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ，ｔｈｅ　ｂｕｄｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　６－ＢＡ
（０，０．５，１，２，３，４ｍｇ／Ｌ），ＧＡ３（０，０．５，１，２，３，４ｍｇ／Ｌ）ａｎｄ　ＺＴ（０，０．０５，０．１，０．５，１，２ｍｇ／Ｌ），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｔｏ
ｓｅｌｅｃｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｂｕｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｕｓｉｎｇ　ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ（ｏｒ　ＺＴ）＋０．１
ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ，ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄ，ｐｅｔａｌ　ｓｅｇｍｅｎｔ，ｐｅｄｉｃｅｌ，ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｆ　ａｎｄ
ｃａｌｕｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｆｌｏｗｅｒ　ｂｕｄ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｓｔｕｄｉｅｄ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｂｕｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｅｘ－
ｐｌａｎｔ　ｗａｓ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　６０．２％．Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｐｅｄｉｃｅｌ，ｓｌｉｃｅｄ　ｐｅｔ－
ａｌｓ，ｌｅａｆ　ａｎｄ　ｃａｌｕｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｃａｎ　ｏｎｌｙ　ｂｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｏ　ｆｏｒｍ　ｃａｌｕｓ　ａｎｄ　ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ．Ｓｏ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｅｘｐｌａｎｔ　ｉｓ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ，ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｉｓ　ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】
Ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　Ｍ．ａｒｍｅｎｉａｃｕｍｔｏ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｂｕｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅｎｉａｃｕｍ；ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ；ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
　　葡萄风信子（Ｍｕｓｃａｒｉ）是一种多年生春季球根
花卉，属于天门冬科风信子亚科葡萄风信子属。葡
萄风信子花期较长，其花序小而精致，花色呈现特殊
的蓝色，其繁殖方式主要是以退化的鳞茎进行无性
繁殖。此外，葡萄风信子是异花授粉植物，其总状花
序通常由顶端的不育花和中下部的可育花组成。可
育花为两性花，雌雄同体，其既能在蜜蜂等昆虫的帮
助下接受异花的花粉，少数情况也能通过自花授粉
正常繁殖后代［１］。一些品种还存在明显的不育性
状，如葡萄风信子‘白魔术’（Ｍ．ａｕｃｈｅｒｉ ‘Ｗｈｉｔｅ
Ｍａｇｉｃ’）。部分濒危品种如渐变葡萄风信子（Ｍ．
ｌａｔｉｆｏｌｉｕｍ）和天蓝葡萄风信子（Ｍ．ａｚｕｒｅｕｍ）等的
鳞茎在自然条件下几乎不产生子球或产生子球的速
度非常缓慢［２］。目前对该属物种的快繁和保护主要
依靠组织培养技术，针对许多品种的葡萄风信子材
料已先后建立了较成熟的快繁体系，如Ｍ．ｒａｃｅｍｏ－
ｓｕｍ［３］、Ｍ．ｍａｃｒｏｃａｒｐｕｍ［４］、Ｍ．ａｕｃｈｅｒｉ［５］、Ｍ．ａｚｕ－
ｒｅｕｍ［６］、Ｍ．ｍｉｒｉｕｍ［７］和 Ｍ．ｍｕｓｃａｒｉｍｉ［２］；关于利用
愈伤组织［８－９］和原生质体构建再生体系［１０］也有一些
报道，但是有关葡萄风信子直接再分化花芽的研究
尚未见报道。葡萄风信子的４０多个种展现出不同
程度的蓝色［１１］，为研究单子叶植物蓝色花形成机理
提供了理想的材料。但是通常情况下从播种到实生
苗开花至少需要３年的时间，生长周期较长，这在一
定程度上限制了对植物基因功能验证工作的进展，从
而限制了利用分子生物技术进行花色育种的进展。
植物外植体直接再生花芽是在离体条件下诱导
外植体经历脱分化和再分化过程后形成花器官。已
有报道称在布罗瓦利亚花［１２］、石龙芮［１３］、大蒜［１４］、
矮通泉草［１５］等植物的愈伤组织中得到了无叶花芽的
直接分化。外植体能否再分化出花芽与其自身的发
育、营养组分及激素的种类和用量有密切的关系，且
在其他条件相同的情况下，激素的种类和用量起着决
定性的作用。本研究利用葡萄风信子‘亚美尼亚’花
蕾、花葶、花瓣和幼叶为材料，诱导产生愈伤组织，研
究外源激素６－ＢＡ、ＧＡ３、玉米素用量及其与２，４－Ｄ配
比对这些材料诱导产生营养芽和花芽的影响，以期为
葡萄风信子外植体直接再分化研究提供参考。
１　材料与方法
１．１　材　料
以葡萄风信子‘亚美尼亚’（Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅｎｉａ－
ｃｕｍ）为材料，于２０１４－０３取材于西安植物园，并种植
于西北农林科技大学种质资源圃。分别采集盛花期
不同花序部位的花蕾及花葶、花瓣和幼叶。
１．２　方　法
１．２．１　材料消毒和培养　将所取材料先用自来水
冲洗干净，体积分数７５％ 酒精浸泡３０ｓ后，用质量
分数０．１％ 升汞（氯化汞，ＨｇＣｌ２）消毒，花蕾和花瓣
切片消毒５ｍｉｎ，花葶和幼叶消毒１０ｍｉｎ，然后用无
菌水冲洗４次，待用。花蕾和愈伤组织（由 ＭＳ＋
０．６ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ培养基诱导产
生）直接接种到诱花培养基，花葶和幼叶切成１ｃｍ
大小的切块后再分别接入诱花培养基，花瓣中间纵
切成两半接种。接种后的材料放入白天（２０±２）
℃，夜晚（２０±１）℃的环境中培养，２８～３０ｄ转接一
次。分别于添加不同外源激素的 ＭＳ培养基中培
养，每隔５ｄ将培养物从三角瓶中取出，在连续变倍
实体显微镜（ＳＭＺ１５００）下拍照记录其外观形态变
化。
１．２．２　６－ＢＡ对花蕾花芽和营养芽诱导的影响　以
ＭＳ为基本培养基，加入不同质量浓度的６－ＢＡ进行
处理，６－ＢＡ 质量浓度设置为０，０．５，１，２，３ 和４
ｍｇ／Ｌ，同时加入２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ。各处理的培养
基为蔗糖３０ｇ／Ｌ，植物凝胶３ｇ／Ｌ，ｐＨ　５．８。对照组
为不添加任何激素的空 ＭＳ。花蕾培养在内盛３０
ｍＬ培养基的玻璃瓶中，使用透气封口膜封口。培养
５０ｄ后，观察记录从花蕾上直接分化花芽的分化率。
１．２．３　ＧＡ３ 对花蕾花芽和营养芽诱导的影响　以
ＭＳ为基本培养基，加入不同质量浓度的ＧＡ３ 进行
处理，ＧＡ３ 质量浓度设置为０，０．５，１，２，３和４
ｍｇ／Ｌ，同时加入２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ。各处理的培养
基为蔗糖３０ｇ／Ｌ，植物凝胶３ｇ／Ｌ，ｐＨ　５．８。对照组
为不添加任何激素的空 ＭＳ。花蕾培养在内盛３０ｍＬ
培养基的玻璃瓶中，使用透气封口膜封口。培养５０ｄ
后，观察记录从花蕾上直接分化花芽的分化率。
１．２．４　玉米素（ＺＴ）对花蕾花芽和营养芽诱导的影
响　以 ＭＳ为基本培养基，加入不同质量浓度的玉
米素，玉米素质量浓度设置为０，０．０５，０．１，０．５，１和
２ｍｇ／Ｌ，同时加入２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ。各处理的培养
基为蔗糖３０ｇ／Ｌ，植物凝胶３ｇ／Ｌ，ｐＨ　５．８。对照组
为不添加任何激素的空 ＭＳ。花蕾培养在内盛３０ｍＬ
培养基的玻璃三角瓶中，用透气封口膜封口。培养５０
ｄ后，观察记录从花蕾上直接分化花芽的分化率。
８８１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４３卷
１．２．５　外植体诱导花芽和营养芽的比较　以ＭＳ＋
２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ和 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ
玉米素＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ为培养基，培养供试花
蕾、花瓣、花葶、幼叶及诱导的愈伤，６０ｄ后观察其
诱导组织情况。
１．２．６　分化率的计算　诱导形成花芽（营养芽、根）
分化率＝诱导形成花芽（营养芽、根）的外植体数／所
培养的外植体总数×１００％。
２　结果与分析
２．１　葡萄风信子花芽和营养芽发生的形态学观察
２．１．１　花　芽　观察结果显示，不同发育时期的葡
萄风信子花蕾外植体在附加２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ，０．１
ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ的 ＭＳ培养基上，只有含苞待放的花蕾
可以在其基部直接再生花芽（图１－Ａ，Ｂ），其他类型
的花蕾都出现褐化死亡现象。离体培养５～４０ｄ的
花蕾培养物在连续变倍实体显微镜下所观察到的形
态变化如图１－Ｄ－Ｉ所示。外植体接种５～１０ｄ，花
蕾基部和花葶、叶片切口处都可以形成愈伤组织（图
１－Ｄ），这些愈伤组织进一步发育形成白色或绿色的
原基状突起（图１－Ｅ，Ｆ）。培养２０ｄ后，原基进一步
长大并且有颜色形成（图１－Ｇ）。２５ｄ后，随着进一
步发育，花芽已长到肉眼可见，几片扁平状结构合起
来形成花蕾（图１－Ｈ）。４０ｄ后，扁平状合起来形成的
花蕾颜色进一步加深，顶端开裂，成簇的花芽向外翻
卷（图１－Ｉ）。对照组花蕾内子房逐渐膨大（图１－Ｃ）。
图１　离体培养葡萄风信子花蕾直接再分化花芽的显微形态观察
Ａ，Ｂ．花蕾外植体材料，箭头所示为诱导花芽的最佳部位，标尺＝１ｃｍ；Ｃ．对照组花蕾；
Ｄ－Ｉ．花蕾在 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ培养基中离体培养５，１０，１５，２０，２５，４０ｄ后的形态；标尺＝１ｍｍ
Ｆｉｇ．１　Ｍｉｃｒｏ－ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｄｉｒｅｃｔ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅｎｉａｃｕｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
Ａ，Ｂ．Ｅｘｐｌａｎｔｓ，ａｒｒｏｗ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ；Ｂａｒ＝１ｃｍ；Ｃ．Ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｄ－Ｉ．Ｍｉｃｒｏ－ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ
ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ　５，１０，１５，２０，２５，ａｎｄ　４０ｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｔ　ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ　ｍｅｄｉｕｍ；Ｂａｒ＝１ｍｍ
２．１．２　营养芽　葡萄风信子外植体在附加６－ＢＡ
和２，４－Ｄ的 ＭＳ培养基上可诱导营养芽和愈伤组织
的发生（图２－Ａ－Ｉ）。培养１周后花葶、叶片和花瓣
切片边缘均有愈伤组织形成，且愈伤组织表面光滑
稍透明；培养时间稍长还可以在外植体表面形成类
似的体表愈伤组织。观察这２种愈伤组织的特点发
现，其均呈肿胀状，因此统称为肿胀状愈伤组织。这
些愈伤组织在进一步培养以后表面逐渐形成许多顶
端稍尖的独立个体，完全不透明的乳白色个体为营
养芽原基，同时还具有绿色的不定芽（图２－Ｂ）。乳
白色原基进一步生长可形成幼叶，幼叶迅速伸长，顶
部由乳白色逐渐转变为浅绿色，叶形呈管状（图２－
Ｅ）。管状幼叶进一步伸长和加粗，除基部还保持白
色外其余部分由浅绿色转为深绿色。初代培养２个
月后即成为具有小鳞茎的幼苗（图２－Ｆ）。
９８１第６期 刘妮妮，等：葡萄风信子外植体直接再分化花芽和营养芽的研究
图２　葡萄风信子花蕾、花葶、幼叶、花瓣切片离体培养直接再生营养芽和愈伤组织
Ａ．花蕾直接再生不定芽和愈伤组织；Ｂ，Ｃ．花葶直接再生不定芽和愈伤组织；Ｄ，Ｇ．幼叶直接再生愈伤组织和根毛；
Ｅ，Ｆ．不定芽培养１～２个月后基部逐渐膨大开始发育成鳞茎；Ｈ．花瓣切块外植体；Ｉ．花瓣切块产生的愈伤组织。标尺＝１ｃｍ
Ｆｉｇ．２　Ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｒａｌ　ａｎｄ　ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ　ｆｒｏｍ　ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ，ｐｅｄｉｃｅｌ，
ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｆ　ａｎｄ　ｐｅｔａｌ　ｏｆ　Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅｎｉａｃｕｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
Ａ．Ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ；Ｂ，Ｃ．Ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　ｐｅｄｉｃｅｌ；Ｄ，Ｇ．Ｄｉｒｅｃｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ａｎｄ　ｒｏｏｔｓ　ｆｒｏｍ　ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｆ；Ｅ，Ｆ．Ｓｈｏｏｔｓ　ｆｏｒ　１－２ｍｏｎｔｈｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｕｌｔｕｒｅ；Ｈ．Ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　ｐｅｔａｌ；Ｉ．Ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　ｐｅｔａｌ．Ｂａｒ＝１ｃｍ
２．２　外源激素对葡萄风信子再分化花芽和营养芽
的影响
为了探索外源激素对离体培养再分化花芽的影
响，以葡萄风信子花蕾为外植体进行试验，在培养基
中均添加０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ，培养５０ｄ后，观察记录
从花蕾上直接分化花芽的分化率（表１）。表１结果
表明，单独使用２，４－Ｄ进行处理只能诱导愈伤组织
发生。向培养基中添加６－ＢＡ，且６－ＢＡ质量浓度小
于０．５ｍｇ／Ｌ时，培养的花蕾上无花芽形成，只有愈
伤组织和营养芽。在１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ
２，４－Ｄ培养基上，既有营养芽也有花芽，且花芽分化
率为３７．３％；在２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ培
养基上，花芽分化率最高，达６０．２％。进一步计算
比较可以看出，当６－ＢＡ质量浓度大于２ｍｇ／Ｌ时，
营养芽和花芽分化率均有随６－ＢＡ质量浓度升高而
下降的趋势，且分化的花芽和营养芽均不正常，经常
呈畸形或玻璃状。当培养基中添加ＧＡ３ 时，任何质
量浓度梯度中都至少有８０％的花蕾外植体分化形
成愈伤组织，１ｍｇ／Ｌ　ＧＡ３＋０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ为花
蕾愈伤组织诱导的最适培养基，但无营养芽和花芽
形成。玉米素和２，４－Ｄ配合使用时，外植体只能诱
导形成愈伤组织，当玉米素质量浓度高于０．１ｍｇ／Ｌ
０９１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４３卷
时，愈伤诱导率为１００％。
表１　外源激素对葡萄风信子花蕾直接再生花芽的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｏｎ　ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ　ｏｆ　Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅｎｉａｃｕｍ
外源激素种类
Ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ
ｈｏｒｍｏｎｅｓ
激素质量浓度／
（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
直接再分化率／％ Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
愈伤组织诱导率
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ
花芽分化率
Ｆｌｏｗｅｒ　ｂｕｄｓ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ
营养芽分化率
Ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ
根分化率
Ｓｈｏｏｔｓ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ
０　 ８２．４　 ０　 ０　 ３２．４
０．５　 １００．０　 １７．１　 ８．３　 １１．２
６－ＢＡ
１　 １００．０　 ３７．３　 ２１．５　 ０
２　 ２０．４　 ６０．２　 ３０．８　 ０
３　 ８６．７　 ２５．０　 １４．４　 ０
４　 ８０．０　 １０．０　 １０．０　 ０
０　 ８２．４　 ０　 ０　 ３２．４
０．５　 ８８．６　 ０　 ０　 ０
ＧＡ３ １　 １００．０　 ０　 ０　 ０
２　 ９５．３　 ０　 ０　 ０
３　 ８７．５　 ０　 ０　 ０
４　 ８０．０　 ０　 ０　 ０
玉米素
Ｚｅａｔｉｎ
０　 ８２．４　 ０　 ０　 ３２．４
０．０５　 ８５．７　 ０　 ０　 １１．２
０．１　 １００．０　 ０　 ０　 ０
０．５　 １００．０　 ０　 ０　 ０
１　 １００．０　 ０　 ０　 ０
２　 １００．０　 ０　 ０　 ０
　　注：２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ，培养５０ｄ后，观察记录从花蕾上直接再生花芽和不定芽的频率（被污染的材料未统计在内）；数值代表３次重复的平
均值。
Ｎｏｔｅ：２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ，ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　５０ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ（Ｔｈｅ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｃａｌｃｕｌａｔ－
ｅｄ）．Ｅａｃｈ　ｖａｌｕｅ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ　ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｏｆ　３ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．
２．３　葡萄风信子不同器官外植体直接再分化花芽
从表１可以看出，花蕾外植体在 ＭＳ＋６－ＢＡ　２
ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ培养基上能诱导出花芽，
且花芽分化率最高。因此，为了弄清从其他器官上
分离的外植体对再分化花芽的影响，选用 ＭＳ＋６－
ＢＡ　２ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ培养基对不同器官
上分离的外植体进行试验，进一步探讨葡萄风信子
各种器官再生花芽的能力；同时以玉米素２ｍｇ／Ｌ
和２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ的培养基对不同器官上分离的
外植体进行试验。结果（表２）表明，在附加６－ＢＡ　２
ｍｇ／Ｌ和２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上，只有花蕾可
以诱导形成花芽，幼叶、花葶、花瓣切片和愈伤组织
都只能诱导再分化营养芽和愈伤组织。玉米素２
ｍｇ／Ｌ和２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上，所有外植体
都只能再分化营养芽或愈伤组织。
表２　葡萄风信子不同器官离体培养再生诱导情况
Ｔａｂｌｅ　２　Ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｆｒｏｍ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｏｒｇａｎｓ　ｏｆ　Ｍｕｓｃａｒｉ　ａｒｍｅｎｉａｃｕｍｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
外植体类型
Ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
诱导物类型
Ｒｅｇｅｎｒａｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ
ＭＳ＋６－ＢＡ　２ｍｇ／Ｌ＋
２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ
幼花蕾 Ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄ 愈伤、营养芽、花芽Ｃａｌｕｓ，ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ，ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄｓ
花瓣切块Ｐｅｔａｌ　ｓｅｇｍｅｎｔ 愈伤、营养芽Ｃａｌｕｓ，ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ
花葶Ｐｅｄｉｃｅｌ 愈伤Ｃａｌｕｓ
幼叶Ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｆ 愈伤、营养芽Ｃａｌｕｓ，ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ
愈伤组织Ｃａｌｕｓ 愈伤、营养芽Ｃａｌｕｓ，ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ
ＭＳ＋玉米素（ＺＴ）
２ｍｇ／Ｌ＋
２，４－Ｄ　０．１ｍｇ／Ｌ
幼花蕾 Ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒａｌ　ｂｕｄ 愈伤、营养芽Ｃａｌｕｓ，ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ
花瓣切块Ｐｅｔａｌ　ｓｅｇｍｅｎｔ 愈伤、营养芽Ｃａｌｕｓ，ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ
花葶Ｐｅｄｉｃｅｌ 愈伤Ｃａｌｕｓ
幼叶Ｙｏｕｎｇ　ｌｅａｆ 愈伤Ｃａｌｕｓ
愈伤组织Ｃａｌｕｓ 愈伤、营养芽Ｃａｌｕｓ，ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｂｕｄｓ
３　讨论与结论
迄今为止，在葡萄风信子中已经清楚了诱导胚
状体、营养芽和根再分化生长素和细胞分裂素的最
佳配比［２，１６］，但对花芽分化的诱导尚未见报道，在其
他植物中虽然已有花芽分化的报道［１７］，但进展不
１９１第６期 刘妮妮，等：葡萄风信子外植体直接再分化花芽和营养芽的研究
大。从所用的外源激素来看，基本上是 ＫＴ（ｋｉｎｅｔ－
ｉｎ）或６－ＢＡ与ＩＡＡ的不同配比。Ｇｏｈ［１８－１９］研究表
明，６－ＢＡ可以促进杂种石斛兰整体植株的花芽发
端，诱导花芽发生。同时一些研究者发现，适当质量
浓度的６－ＢＡ能够促进植物的花芽分化，但当质量
浓度过高或过低时则抑制花芽分化［２０］。可见，不同
质量浓度的６－ＢＡ对花芽分化的影响不同，在使用
细胞分裂素时应选择合适的质量浓度。
本研究通过对葡萄风信子‘亚美尼亚’进行组织
培养，探讨了不同外植体和外源激素对其离体培养
直接再生花芽的影响，结果表明，当６－ＢＡ质量浓度
为２ｍｇ／Ｌ时，只有花蕾外植体能诱导直接再分化
花芽；ＧＡ３ 和玉米素不能诱导花芽。研究结果还表
明，ＭＳ培养基中仅附加２，４－Ｄ只能诱导外植体形
成愈伤组织；附加玉米素则能诱导外植体再分化直
接形成愈伤组织；附加 ＧＡ３ 只能诱导产生愈伤组
织；附加一定比例的６－ＢＡ与２，４－Ｄ除能诱导营养
芽外，还能诱导形成大量具有蓝色的不正常花芽。
试验中诱导葡萄风信子除花蕾外的外植体产生
不正常花芽，经过２次继代后长成畸形花芽。造成
此结果的原因可能有两种：一是高质量浓度６－ＢＡ
促进花芽分化，抑制其正常开花；二是葡萄风信子属
于球根花卉，自然状态下是在夏季花芽分化并经过
一段时间的低温春化处理后才正常开花，而本试验
中植物材料没有经过低温处理，因此只有花蕾外植
体才能诱导出花芽，其他外植体尚需进一步研究。
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ｈｙｂｒｉｄ　Ａｒａｎｄａ　ｄｅｂｏｒａｈ ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｂｏｔ，１９７５，３９：９３１－９３４．
［１９］　Ｇｏｈ　Ｃ　Ｊ．Ｈｏｒｍｏｎａｌ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｎ　ａ　ｓｙｍｐｏｄｉａｌ　ｏｒ－
ｃｈｉｄ　ｈｙｂｒｉｄ　Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ　Ｌｏｕｉｓａｅ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，１９７９，８２：
３７５－３８０．
［２０］　Ｎａｄｇａｕｄａ　Ｒ　Ｓ，Ｊｏｈｎ　Ｃ　Ｋ，Ｐａｒａｓｈａｒａｍｉ　Ｖ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｃｏｍｐａｒｉ－
ｓｏｎ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｎ　ｂａｍｂｏｏ：Ｂａｍｂｕｓａ
ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９９７，４８：１８１－
１８８．
２９１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４３卷