全 文 ：NaHCO3浓度对塔胞藻 、小球藻和
新月菱形藻生长的影响
梁　英 , 　麦康森 , 　孙世春 , 　梁广尧
(青岛海洋大学 海水养殖教育部重点实验室 ,山东　青岛 266003)
摘　要:在温度为(22±1)℃, 盐度为 28 的条件下 , 用不同浓度的 NaHCO3(0 , 100 , 200 , 400 ,
800 , 1 200 和 1 600 mg/ L)对青岛海洋大学微藻种质库保存的塔胞藻(Pyramidomonas sp.)、小
球藻(Chlorella spp.)和新月菱形藻(Nitzschia closterium)进行培养。 实验结果表明 , NaHCO3
浓度对 3种海洋微藻生长的影响差异显著 , 经过6 d的培养 , 塔胞藻和小球藻的细胞浓度都在
NaHCO3浓度为 1 200 mg/L时达到最大值;新月菱形藻的细胞浓度在 NaHCO3 浓度为 400 mg/ L
时达到最大值。
关键词:塔胞藻;小球藻;新月菱形藻;NaHCO3
中图分类号:Q949.2　　文献标识码:A　　文章编号:1000-7199(2001)02-0071-06
微藻是贝类育苗中的主要饵料 ,也是虾蟹育苗前期的重要饵料。微藻培养的好坏直
接关系到育苗的成败 。但在育苗中往往出现生产池污染严重 ,藻种又不能及时供应的情
况。为加速藻种生长 ,有些生产单位采取充气培养法 ,常引起藻种污染 ,导致饵料缺乏 ,甚
至使育苗失败。在藻种培养液中加适量的NaHCO3 ,为微藻提供光合作用所需要的碳源 ,
可加速藻种生长 。NaHCO3 对海洋微藻生长的影响 ,国内研究较少 , 目前仅见戴玉蓉
(1997)研究 1种浓度的NaHCO3对 5种海洋微藻生长影响的报道[ 1] 。我们用不同浓度的
NaHCO3 对青岛海洋大学微藻种质库保存的 3种海洋微藻进行培养 ,以确定每种微藻生长
所需的最佳NaHCO3 浓度 。
1　材料与方法
1.1　主要材料及试剂
实验所 用微藻藻种 均取自青岛 海洋大学微 藻种质库 , 种 类为:塔胞藻
(Pyramidomonas sp.)、小球藻(Chlorella spp.)和新月菱形藻(Nitzschia closterium)。
主要试剂有:硝酸钠(NaNO3)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)、硅酸钠(Na2SiO3)、硫酸锌(Zn-
SO4.4H2O)、硫酸铜(CuSO4.5H2O)、氯化锰(MnCl2.4H2O)、柠檬酸铁(FeC6H5O7.5H2O)、钼
第 19 卷第 2期　　　　　　　　　　　　黄　渤　海　洋　　　　　　　　　　　19(2)pp.71～ 76
2001 年 6月　　　　JOURNAL OF OCEANOGRAPHY OF HUANGHAI &BOHAI SEAS　　　　June , 2001
收稿日期:2000-06-20　　2000-07-07
　基金项目:国家 863高新技术发展计划资助项目(863-819-02-01)
　作者简介:梁英(1967-),女 ,副教授 ,在职博士生 ,现主要从事生物饵料研究。
酸钠(NaMoO4.2H2O)、乙二铵四乙酸钠(Na2EDTA)、氯化钴(CoCl2.6H2O)、维生素 B12 、维生
素H (生物素)、维生素 B1、碳酸氢钠(NaHCO3),均为分析纯。
1.2　微藻的培养
NaHCO3 设 7个浓度水平 ,分别为A0(0 mg/L), A1(100 mg/L),A2(200 mg/L),A3(400
mg/L),A4(800 mg/L),A5(1 200 mg/L),A6(1 600 mg/L),每个水平 2个平行组 。实验在 3
L 的细口瓶中进行 ,每个瓶中加培养液 2 000 mL ,藻种 50 mL。均采用 F/2培养基培养[ 2] 。
连续光照(日光灯强度为 5 000 lx)。温度为(22±1)℃。盐度为 28。
1.3　微藻生长情况的测量
每日取样计数 ,用 721型分光光度计 ,在 630 nm处 ,用1 cm 比色皿以蒸馏水为参比测
量吸光度值 ,每个样品测 4次。
2　结 果
NaHCO3 对 3种微藻生长的影响见表 1 ～表 4和图 1 ～图 3。表 1为 3种海洋微藻第 6
天生长结果 ,可以看出 ,在第 6天 ,当 NaHCO3 浓度为 01 200 mg/L时 , 塔胞藻和小球藻的
细胞浓度都随着 NaHCO3 浓度的增加而增加 ,在 1 200 mg/L 时达到最大值 ,分别比对照组
(A0浓度)增加了 77.7 %和86.4 %。新月菱形藻在 NaHCO3浓度为 0400 mg/L 时 ,细胞
浓度随着NaHCO3浓度的增加而增加 ,在400 mg/L 时达到最大值 ,比对照组增加了 45.71
%。之后随着NaHCO3浓度的增加 ,细胞浓度逐步下降 。
表 1　3种微藻第 6 天生长结果
Table 1　The growth results of three microalgal species on the 6th day
NaHCO3 浓度
/mg·L -1
塔胞藻 小球藻 新月菱形藻
吸光度/(x±s) 增长率/ % 吸光度/(x±s) 增长率/ % 吸光度/(x±s) 增长率/ %
0 0.157±0.004 — 0.228±0.003 — 0.175±0.000 —
100 0.189±0.004 20.38 0.318±0.004 39.47 0.211±0.023 20.57
200 0.213±0.002 35.67 0.305±0.005 33.77 0.219±0.019 25.14
400 0.236±0.005 50.32 0.353±0.003 54.82 0.255±0.023 45.71
800 0.255±0.001 62.42 0.388±0.004 69.74 0.254±0.019 45.14
1 200 0.279±0.009 77.70 0.425±0.006 86.40 0.234±0.003 33.71
1 600 0.247±0.003 57.32 0.387±0.004 69.74 0.208±0.032 18.86
　　　　　　注:增长率=(实验组吸光度-对照组吸光度)/对照组吸光度×%
图1是 NaHCO3 对塔胞藻生长的影响 ,可以看出 ,与对照组相比 ,从第 3天开始 ,实验
组细胞浓度有所增加 ,从第 5天开始 ,实验组细胞浓度明显(P <0.05)高于对照组 。
72　　　　　　　　　　　　　　　　黄　渤　海　海　洋　　　　　　　　　　　　　　　　19 卷
表 2　3 种微藻第 6 天生长结果方差分析
Table 2　Variance analysis for the growth results of three microalgal species on the 6th day
藻种名称 差异源 SS df MS F P F crit
塔胞藻 组间 0.042 754 6 0.007 126 372.932 1＊ 3.29×10-20 2.572 712
组内 0.00 0401 21 1.91×10-5
总计 0.043 155 27
小球藻 组间 0.104 095 6 0.017 349 970.910 1＊ 1.53×10-24 2.572 712
组内 0.000 375 21 1.79×10-5
总计 0.104 471 27
新月菱形藻 组间 0.018 997 6 0.003 166 9.405 085＊ 4.57×10-5 2.572 712
组内 0.007 070 21 0.000 337
总计 0.026 066 27
　　　　注:＊表示组间差异极显著(P <0.01)
表 3　3 种海洋微藻的 LSD值
Table 3　The LSD value for three microalgal species
藻种名称 LSD0.05 LSD0.01
塔胞藻 0.007 3 0.011 0
小球藻 0.020 0 0.027 4
新月菱形藻 0.027 0 0.037 0
表 4　NaHCO3 对 3种微藻第 6天生长结果多重比较(LSD检验)
Table 4　Multivariate analysis for the growth results of three microalgal species on the 6th day
藻种名称 NaHCO3 浓度/mg·L -1
吸光度平均值 差　　数　　阵
塔胞藻 A5(1 200) 0.279 0.122＊＊ 0.09＊＊ 0.066＊＊ 0.043＊＊ 0.032＊＊ 0.024＊＊
A4(800) 0.255 0.098＊＊ 0.066＊＊ 0.042＊＊ 0.019＊＊ 0.008
A6(1 600) 0.247 0.090＊＊ 0.058＊＊ 0.034＊＊ 0.011＊
A3(400) 0.236 0.079＊＊ 0.047＊＊ 0.023＊＊
A1(100) 0.213 0.056＊＊ 0.024＊＊
A2(200) 0.189 0.032＊＊
A0(0) 0.157
小球藻 A5(1 200) 0.425 0.197＊＊ 0.120＊＊ 0.107＊＊ 0.072＊＊ 0.038＊＊ 0.037＊＊
A4(800) 0.388 0.160＊＊ 0.083＊＊ 0.070＊＊ 0.035＊＊ 0.001
A6(1 600) 0.387 0.159＊＊ 0.082＊＊ 0.069＊＊ 0.034＊＊
A3(400) 0.353 0.125＊＊ 0.048＊＊ 0.035＊＊
A2(200) 0.318 0.090＊＊ 0.013
A1(100) 0.305 0.077＊＊
A0(0) 0.228
新月菱形藻 A3(400) 0.255 0.080＊＊ 0.047＊＊ 0.044＊＊ 0.036＊ 0.021 0.001
A4(800) 0.254 0.079＊＊ 0.046＊＊ 0.043＊＊ 0.035＊ 0.02
A5(1 200) 0.234 0.059＊＊ 0.026 0.023 0.015
A2(200) 0.219 0.044＊＊ 0.011 0.008
A1(100) 0.211 0.036＊ 0.003
A6(1 600) 0.208 0.033＊
A0(0) 0.175
　　注:＊表示差异显著(P <0.05);＊＊表示差异极显著(P <0.01)
732期　　　　　梁　英 , 等:NaHCO3浓度对塔胞藻 、小球藻和新月菱形藻生长的影响　　　　　
图2是 NaHCO3 对小球藻生长的影响 。与对照组相比 ,从第 2天开始 ,A4 ,A5 ,A6浓
度的实验组细胞浓度有所增加 ,从第 4天开始 ,实验组细胞的浓度明显地(P <0.01)高
于对照组 。
图3是 NaHCO3 对新月菱形藻生长的影响 。与对照组相比 ,从第 2天开始 ,A5 ,A6浓
度的实验组细胞浓度有所增加 ,从第4天开始 ,除 A6(1 600 mg/L)浓度外 ,其余浓度的实
验组细胞浓度明显(P <0.05)高于对照组 。
图 1　NaHCO3的不同浓度对塔胞藻生长的影响
Fig.1　Effect of NaHCO3 concentration
on the growth of Pyramidomonas sp.
根据 4个平行组数据 ,对 3种微
藻第 6天生长结果进行方差分析和多
重比较。表 2是 3种微藻第 6天生长
结果方差分析 ,结果表明 , 塔胞藻 、小
球藻和新月菱形藻的 P 值分别为 3.29
×10-20 ,1.53×10-24和 4.57×10-5 ,均
小于 0.01 。表明 NaHCO3 浓度对 3种
微藻第 6天生长结果的影响均差异极
显著(P <0.01),本文采用 LSD法进
行多重比较 ,结果见表 3和表 4。表 3
是 3种微藻第6天生长结果的 LSD值 ,
表4 是 NaHCO3 对 3种微藻第 6天生
长效果多重比较(LSD检验)。
由表4可以看出 ,除了 A4 浓度和
图 2　NaHCO3的不同浓度对小球藻生长的影响
Fig.2 Effect of NaHCO3 concentration
on the growth of Chlorella spp.
A6浓度对塔胞藻的生长效果差异不显
著外 ,其余各浓度之间均差异显著或极
显著(P <0.05或 P <0.01)。对小球
藻的多重比较结果表明 ,除了 A4 浓度
和A6浓度 、A1 浓度和 A2浓度对小球
藻的生长效果差异不显著外 ,其余各浓
度之间均差异显著或极显著(P <0.05
或 P <0.01)。对新月菱形藻而言 ,A3 ,
A4 ,A5 ,A2浓度的生长效果高度显著地
高于A0浓度(P <0.01);A1 ,A6 浓度
生长效果显著地高于 A0浓度(P <0.
05);A3 ,A4 浓度的生长效果高度显著
地高于 A6和 A1 浓度(P <0.01), 也
显著地高于 A2浓度(P <0.05);其余
各组差异不显著 。
74　　　　　　　　　　　　　　　　黄　渤　海　海　洋　　　　　　　　　　　　　　　　19 卷
图 3　NaHCO3 的不同浓度对新月菱形藻生长的影响
Fig.3　Effect of NaHCO3 concentration
on the growth of Nitzschia closterium
3　讨 论
本实验结果表明 ,3种海洋微藻都
能吸收利用 NaHCO3 作为光合作用的
碳源。但培养效果因种而异。在培养
液中添加不同浓度的 NaHCO3 对塔胞
藻和小球藻的生长效果较好 ,培养过
程中 ,除 A6 浓度(1 600 mg/L)瓶底沉
淀较多外 ,其余各瓶沉淀较少 ,生长良
好。而用 NaHCO3 培养新月菱形藻时
发现 ,随着培养天数的增加 ,实验组各
瓶沉淀和结块现象都比较严重 ,这可
能是由于藻种不同所致。也说明了在
新月菱形藻的培养液中添加NaHCO3效果不理想 。
在微藻培养液中加 NaHCO3 补充了其中溶解 CO2 的不足 ,促进了微藻的生长繁殖 。
这一方法的优点是避免了因充气补充CO2可能产生的污染 ,且操作简便 、经济实用。但应
注意的是 ,随着藻类的生长 ,NaHCO3 在CO2不断被吸收的同时 ,游离的CO32-会和海水中
大量存在的Ca2+结合 ,形成 CaCO3沉淀 ,并沉附在藻液内和瓶壁四周 ,影响光照和藻类繁
殖。因此 ,必须及时扩种 ,以免藻种老化 。
关于在微藻培养液中添加NaHCO3 的效果 ,不仅不同藻种对NaHCO3 的需求不同 ,而
且不同培养条件和生长阶段所需量也不相同 ,因此 ,尚需进一步研究 。
参考文献:
[ 1] 戴玉蓉 ,卢敬让.NaHCO3 在单胞藻藻种培养中的作用[ J] .齐鲁渔业 , 1997 , 14(5):20-21.
[ 2] 陈明耀.生物饵料培养[ M] .北京:农业出版社 , 1995.65-71.
752期　　　　　梁　英 , 等:NaHCO3浓度对塔胞藻 、小球藻和新月菱形藻生长的影响　　　　　
Effect of NaHCO3 Concentration on the Growth of
Pyramidomonas sp., Chlorella spp.and
Nitzschia Closterium
LIANG Ying1 , 　MAI Kang-sen1 , 　SUN Shi-chun1 , 　LIANG Guang-yao1
(1.Key Laboratory of Mariculture , State Ministry of Education ,
Ocean University of Qingdao , Qingdao 266003 , China)
Received June 20 , 2000;revised July 7 , 2000
Abstract:3 marine algal species (Pyramidomonas sp., Chlorella spp.and Nitzschia
closterium)coming from theMicroalgae Culture Center , Ocean University of Qingdao were cultured
in different solutions with graded levels of NaHCO3(0 ,100 ,200 ,400 ,800 ,1 200 and 1 600 mg/L)
and under conditions of temperature of(22±1)℃ and salinity of 28.It is shown from the experi-
ment results that the NaHCO3 concentrations had significant influences on the growth of the 3 algal
species , and after 6 days of culture , the optimal NaHCO3 concentrations for the highest cell density
of Pyramidomonas sp., Chlorella spp.andNitzschia closterium were 1 200 mg/L and 400 mg/L ,
respectively.
Key words:Pyramidomonas sp.;Chlorella spp.;Nitzschia closterium ;NaHCO3
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