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半叶紫菜游离丝状体培育技术



全 文 :《水产养殖》2016年第 3期
半 叶 紫 菜 游离丝状体培育技术
唐兴本 1,陈百尧 1,连绍兴 2,薛学坤 3,龚琪本 1,安健 1,伏光辉 1,孙苗苗 1
(1.连云港市海洋与水产科学研究所,江苏 连云港 222046;2.中科院海洋研究所,山东 青岛 266071;
3.连云港市海洋与渔业局,江苏 连云港 222000)
中国是世界紫菜的主要生产国和出口国,而主
要栽培种类只有条斑紫菜和坛紫菜两个品种, 养殖
品种相对比较单一, 而紫菜新品种的开发和利用首
要解决的一个问题是苗种培育,也就是解决紫菜丝
状体的质与量的问题。
我国的半叶紫菜主要分布在山东青岛至辽宁
大连的黄海西部海区,通过培养半叶紫菜的游离丝
状体,用游离丝状体接种贝壳进行半叶紫菜苗种培
育,或者将半叶紫菜游离丝状体培养成熟,直接用
游离丝状体在半叶紫菜网帘上采集壳孢子,培养半
叶紫菜的游离丝状体,在一定程度上可以及时、足
量、高质量的解决网帘上半叶紫菜海上养殖的苗种
供应问题。
迄今为止,对半叶紫菜叶状体的研究比较多,
也有个别丝状体培育成苗的研究, 但未见关于半叶
紫菜游离丝状体培育技术方面的系统报道。
1 使用种菜、工具、用水的准备
1.1 种菜准备
2013年 2月 15日上午,在山东省青岛市附近
岛屿的岩石上,找到有半叶紫菜叶状体的岩石,先
铲掉岩石上的藤壶、牡蛎壳,捡掉杂草、块状物,反
复用干净的海水尽可能的清除岩石和半叶紫菜叶
状体上的浮泥,将全部的紫菜叶状体采集放在水桶
里,到一个安全方便的地方,再次挑选长度大于 10
cm的叶状体,要求叶状体完整、无畸形、无病斑、无
难以去除的附着物、表面具光泽,把叶状体放在装
水的带盖的塑料桶内,之后运到江苏连云港的省紫
菜良种繁育场,待处理。
1.2 器具消毒准备
处理种菜、果孢子的用具有解剖盘、解剖刀、毛
笔、纱布、脱脂棉、解剖剪刀、镊子、一次性手套、玻
璃培养皿、50 mL三角烧瓶 20个等;扩增的用具有
量筒、量杯,100 mL、250 mL、500 mL 三角烧瓶,
3 000 mL、10 000 mL细口玻璃瓶等;消毒用具有酒
精灯、酒精喷壶、烧水的锅、电炉、70%的消毒酒精
等。
小型器皿放在烧水的锅内沸水消毒;不能加热
的器具酒精消毒;三角烧瓶蒸煮消毒;必要时用酒
精喷壶消毒;房间用紫外线消毒,在半叶紫菜送到
良种室前,做好上述消毒准备工作。
1.3 培养海水的准备
所用海水符合养殖用水要求,盐度 28,经过黑
暗沉淀,再经 90 ℃加温消毒处理,在半叶紫菜到良
种室前,准备好两份海水备用,一份是 10 000 mL
加热消毒的海水,一份是 10 000 mL添加营养盐的
培养液,前一份是处理种菜使用,后一份是将果孢
子培养成游离丝状体时使用。
2 制作半叶紫菜游离丝状体
2.1 处理种菜
2月 16日上午,在保种室的操作车间的操作
台上,先选择个体大的半叶紫菜叶状体,平摊在解
剖盘里,用脱脂棉蘸取消毒海水,反复正反两面擦
洗半叶紫菜叶状体,操作 2~3次。然后,在白瓷盘中
装消毒海水,用毛笔仔细逐个正反两面洗刷叶状体
2~3次。用消毒镊子夹半叶紫菜叶状体放入带盖的
广口瓶中,注入消毒海水,加盖,往复振荡广口瓶,
doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2016.03.013
技术与经验
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《水产养殖》2016年第 3期
洗涤半叶紫菜叶状体。之后从广口瓶中取出叶状
体,用滤纸吸掉藻体上海水,将紫菜叶状体平摆在
洗刷并消毒的笊帘中,用消毒纱布盖在叶状体上,
进行阴干刺激 24 h。
2.2 种菜放散果孢子
2月 17日,在多个三角烧瓶内,分别添加 40
mL培养液。
将种菜平摊在解剖盘中,用解剖刀在半叶紫菜
叶状体的端部和前部,各取 5 cm2大小的叶状体小
块,用镊子夹入 50 mL的三角烧瓶中,每个瓶子 1
块,共在 20个小三角烧瓶中投放半叶紫菜叶状体
小块。每个三角烧瓶加上标签,纪录紫菜种的名称、
来源时间与地点、性状等,整个操作争取在在无菌
的条件下进行。将三角烧瓶放在僻静的地方,3~5 d
摇动瓶子 1次,一方面促进壳孢子大量放散,另一
方面让果孢子均匀的沉淀于瓶底,3月 20日用镊子
把种菜取出。这期间,光线强度为 50~200 lx,水温
15~20 ℃,盐度 28。
3 半叶紫菜游离丝状体的扩增
3.1 刚接种丝状体的换瓶
4月 30日—5月 10日,挑选、整理三角烧瓶内
游离丝状体,将肉眼观察有明显绿藻、硅藻、蓝藻等
污染以及肉眼还没有观察到丝状体的瓶子,全部清
理。通过统计,20个 50 mL的三角烧瓶,硅藻污染 7
个,肉眼看不到游离丝状体的 5个,蓝藻污染的 1
个,破碎瓶子 1个,成功培育出无污染的游离丝状
体 6个,成功率 30%。
在室内操作台上,准备 10个 100 mL三角烧瓶
和 2 000 mL加热处理的海水,在 2 000 mL海水中
加入营养液制成培养液。由于大部分半叶紫菜游离
丝状体贴附在三角烧瓶底部或瓶壁,操作时用消过
毒的毛笔将藻丝刷离瓶底或瓶壁,然后将藻丝及其
原培养液倒入准备好的 100 mL三角烧瓶中,加入
新的培养液到 100 mL。用白纸封口放在适当位置,
贴上预先准备好的标签,这样一个换瓶子的操作就
结束了,在这里要特别说明的是整个操作要做到相
互隔离,即每一个换瓶操作的器皿、工具、一次性手
套等都是专用的,共同使用的器具在进行下一个操
作时,要重新消毒处理;其二,在每一个换瓶操作
中,每一个环节都要注意消毒处理,尽量减少每个
环节出现丝状体污染的可能性。
营养液的肥料主要为硝酸钠、磷酸二氢钾、柠
檬酸铁、碘化钾等,施肥量为氮 14×10-6、磷 7×10-6、
铁 1×10-6、钾 0.1×10-6,由于培养期间,培养液会不
断的蒸发,为了稳定培养液的盐度,在换水间隔期
间,根据实际情况,在培养液中加入一定量的蒸馏
水。在此期间,光线强度为 150~300 lx,水温 15~20
℃,盐度 28。
3.2 游离丝状体的扩种培养
5月 25日以后,开始了半叶紫菜游离丝状体的
扩增操作,由于半叶紫菜养殖试验、推广尚处于探
索阶段,该良种场主要进行了半叶紫菜游离丝状体
保种和小规模的扩增,用果孢子培育的良种游离丝
状体数量也有限,具体扩增的方法参照条斑紫菜游
离丝状体培育的相关技术操作。
4 半叶紫菜游离丝状体的保种
4.1 半叶紫菜游离丝状体保种方法
保种主要参照条斑紫菜游离丝状体的保种方
法。一级保种:将纯净游离丝状体分装于试管或小
三角烧瓶中,置于展示柜中,进行长年保存。二级保
种:取部分一级保存的游离丝状体,分装于 100 mL
三角烧瓶内,置于 10~15 ℃、100~120 lx环境中培
养,控制游离丝状体低速增长,保证随时扩增需要。
4.2 半叶紫菜游离丝状体保种效果
采取液相低温保存半叶紫菜游离丝状体。从目
前的情况看,保存的半叶紫菜游离丝状体,绝大多
数形态结构正常、状态良好,保持原种品系特性。
5 半叶紫菜游离丝状体的形态特点
对半叶紫菜游离丝状体、坛紫菜游离丝状体、
条斑紫菜游离丝状体培育形态进行了观察,并将它
们的形态特点进行了比较,形成了一点粗浅的认
识。
半叶紫菜游离丝状体适应温度范围比较广,生
长迅速,紫黑色,为豆粒状的舒展开来的藻丝团,无
明显杂藻、无不健康藻丝团;坛紫菜游离丝状体适
应温度高、盐度高,生长不成团,而是成单丝,长长
的,容易缠在散气石、气管等地方;条斑紫菜游离丝
状体适应温度偏低,适应环境能力因产地不同而不
同,该保种室的游离丝状体,以日本的条斑紫菜游
离丝状体适应环境能力最强,生长速度最快。
(收稿日期:2015-07-09)
技术与经验
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