全 文 ：第 7 1卷第 1期 厦 门 水 产 学 院 学 报 v ol 门 7 N0 1
99 5 1年 6 月 JO U R N A LO F I A XME N F I S H E R I E S C O L LE G E J u n . 1995
活体生物酶分离石花菜原生质体的研究
陈菊琦
( 厦门水产学院养殖系 , 厦门 3 6 10 2 1 )
摘典 : 利用我国生物资源获取廉价酶源 , 并首次研制成功适用于多种经济红藻原生质体分离
的新型混合酶— 活体生物酶混合液 。 酶解小石花菜。 “ id u m dl va ir ca ut m 3~ 3 . h5 可获得大量成活原生质体 。 原生质体产率为 2 x l护 个 /克鲜藻 , 成活率为 5 ~ 60 % ; 分离细胞原生
质浓厚 。 经培养可迅速分裂 , 并形成两类细胞团 : 多细胞团和愈伤组织状细胞团 。 文中对这
两类细胞团的形成过程作了详细描述 。 并认为它们在现代化海藻生产中 , 可作为繁殖石花菜
营养细胞的来源 。 新型混合酶的研制成功 , 为经济红藻的细胞分离与细胞培养开拓了宽阔的
道路 , 对推进我国海藻生物工程的发展将有极其重要的意义 。
关镇词 : 廉价酶源 , 活体生物酶 , 石花菜属 , 原生质体 , 微繁殖 , 琼胶
应用酶法技术 , 设法从藻体上获得具有活力的原生质体 , 是人们实施改 良海藻 、 培
育新品种中的一项至关重要的基础工作 , 同时也是进行海藻细胞培养和生物工程的实验
基础 。 当今 , 国内外开展红藻原生质体分离技术的研究工作 , 已受到现有商品酶的限制 ,
致使除紫菜属以外的多数经济红藻原生质体的分离 , 迟迟未能获得成功 ; 另一方面 , 国
内外对开发生物酶方面的研究报导甚少 。 面对这种情况 , 为 了开展工作 , 我们选择了走
自力更生解决工具酶的道路 : 即开发利用我国生物资源 , 获取廉价酶源 , 并研制可用于
紫菜以外的 , 多种经济红藻原生质体分离的新型混合酶 。 无疑 , 这一创新的工作是十分
必要的 , 也是极其有价值的 。 为此 , 我们从海洋到陆地广为开发可利用的酶源生物 .1[ ’ 3 , 并
针对不同环境下的生物 , 建立其相应的酶提取工艺 。 在此基础上进一步调配 、 并研制成
功新型混合酶 。 经酶解实验结果表明 , 廉价的新型混合酶不仅可代替多种昂贵的进 口酶 ,
取得酶解鹤鸽菜 、 分离原生质体的成功闭 , 同时 , 该混合酶还可有效地酶解多种产胶红藻 ,
并获得它们的大量成活原生质体 , 使得这方面的工作出现了可喜的前景 。
现本文先将廉价的活体生物酶混合液 , 应用于酶解制作琼胶的原藻— 石花菜属
( G el id l’u m ) , 成功获得小石花菜 ( G . dl v ar i o ut m ) 大量成活原生质体的实验结果 , 以及
原生质体的培养结果 , 报告如下 。
1 材料和方法
海藻采集与处理
收稿日期 : 1 9 9 4一 1 2一 1 0
厦 门 水 产 学 院 学 报 第 7 1卷
小石花菜 G . 成 v a i rca ut m 于 9 1年 3一 5 月间和 9 2年同期 , 从厦门鼓浪屿中潮带的岩
石和藤壶上出现的小石花菜群落中采来 。 挑选不具抱子囊和囊果的年幼藻株 , 放入装有
海水的烧杯里 。 借用 电动磁力搅拌器的搅拌力 , 将藻体的泥砂除去 , 并多次换海水至水
清澈藻体洗净为止 。 然后用锐利刀片将藻垛成 0 . s m m Z大小的藻块 。 用筛绢网兜住碎藻
块 , 于海水中滤去碎屑后 , 过两遍消毒过滤海水 , 沥干 。 再移入 7%0 K l 消毒海水中 , 浸
泡消毒 10 m in , 吸去多余的水分后 , 备用 。
1
.
2 原生质体的制备
1
.
2
.
1 工具酶 将新鲜的粒花冠小月螺等酶源生物取 回 , 经 1~ 2 天饥饿处理后 , 在实
验室内分别粗提其消化酶 。 将这些廉价获取的酶液 , 按适当比例混合 , 以粒花冠小月螺
消化酶为主 , 其他生物酶为辅 , 配制成活体生物酶混合液即为新型混合酶 。 其 P H 值为 6 .
5 左右 , 勿需另作调正 , 此酶液经 。 . 6 拜M 直径的微孔沪膜抽沪灭菌后 , 可直接用作酶解
小石花菜等多种产胶红藻分离原生质体的工具酶 。
1
.
2
.
2 酶解条件 于 5 m l 的活体生物酶混合液中 , 加入葡萄糖渗透剂 , 配成 0 . 8~ I M
的葡萄糖酶液 , 待葡萄糖完全溶解后 , 投入 0 . 5 克小石花菜碎藻块并摇匀 。 放于恒温水
浴锅中 , 在 26 ~ 27 C 下进行黑暗酶解 。 酶解过程 中 , 用玻棒不时搅拌 , 约 0 . h5 左右用玻
棒蘸取少许藻块作镜检 , 以观察细胞解离状况 。 酶解时间 3~ 3 . s h 为宜 。
1
.
2
.
3 原生质体的收集与计数 酶解 3 h 左右 , 在酶液中或在藻块附近能观察到有脱落
的藻细胞 , 从此时起 , 用 3 0 目筛绢双层过滤收集 。 尚未完全解离的藻块倒回酶液中再
行酶解 0 . s h 进行收集 。 将两次收集到的含有细胞的滤液合并于 1个离心管中 , 自然沉淀
2 0 m in 后 , 用长型毛细吸管自上而下地吸取上层至中层的悬浮液 , 置于另 1 支离心管 , 弃
去原离心管下层的大块杂质 。 然后用手摇离心机离心 3m in , 以沉淀或聚集石花菜分离细
胞 。 再用经 N a CI 调制 、 比重为 1 . 0 25 的高渗消毒海水洗涤离心 3 次 , 以澈底除去酶液及
糖液 。 最后 , 离心管底部收集到的淡红色沉淀物 , 即为聚集的小石花菜原生质体或称分
离细胞 。 再加入少许高渗消毒海水到一定刻度 , 摇匀 、 向管内细胞液的中层处取 1 滴悬
浮液 , 滴在血球计数板上计数 , 并以此数据换算出在相同条件下 , 1克鲜藻中获得的原生
质体个数 , 作为原生质体产率 。
1
.
3 原生质体的培养和观察
1
.
3
.
1 培养条件 将上述收集到的大量小石花菜原生质体 , 加入适量培养液 , 摇匀后 ,
即成细胞悬浮液 。 将此悬浮液一部分滴在琼脂板上 (事先在洁净玻片上铺薄薄一层海水
配制的 2%琼脂培养基 ) , 一部分滴在载玻片上 , 均盖于中型培养皿里 , 静置 32 ~ 40 h 待
细胞附着 。 然后 , 对载有细胞的琼脂板 , 则用滴加培养液的方式 , 使细胞进入液体—半固体的双层培养 。 每隔 2~ 3 天滴加 1 次 , 以琼脂板之大面不蒸发干为准 。 对载有细胞
的载玻片则直接入浴进行培养 。 培养液 : 在 M E S 培养液的基础上 , 每升添加 0 . 5 m g .2
4一 D 、 N A A 以及少量的多种维生素 。 培养皿中的培养液约 7 ~ 10 天更换 1 次 。 光照 : 培
养开始时光强为 60 0 L X 逐渐增至 1 0 0 0 L X 。 培养皿外表遮有深绿色塑料膜 (用塑制 1 . 25
L 绿色饮料瓶剖开后 , 于热水浴 中展平即可 ) , 以利于细胞内藻红素的形成 。 每天 12 h 光
照 12 h 黑暗 。 培养温度 : 恒温室内 2 0 一 C 士 I C ; 实验室内 2 ~ 26 ℃ 。
1
.
3
.
2 观察方法 自滴片之 日起 , 每 日 2 次观察 , 并记录培养过程中细胞的变化情形及
第 1期 活体生物酶分离石花菜原生质体的研究
出现变化的起始时间 。 并挑选有代表性的典型且清晰的个体做定点跟踪观察 。 必要时作
显微测量 、 显微摄影和生物绘 图 。
2酶解效果与培养结果
. 1 2活体生物酶混合液的酶解效果
以活体生物酶混合液为工具酶 , 酶解小石花菜碎藻块 , 1 . s h 以后才开始有些软化 ,
在显微镜下观察 , 此时藻块边缘的 1 ~ 2 层细胞其胞壁渐疏松 。 2一 2 . h5 后 , 3 ~ 4 层细胞
的胞壁疏松 , 且原生质体有一定的收缩 (见图 ) 。 3 h 以后 , 有 5 ~ 6 层细胞的胞壁疏松 ,
并有少数的细胞掉落在酶液中 。 收集于离心管底部的小石花菜原生质体呈现淡红色 。 经
血球计数板观察计数 、 换算 , 每克鲜藻原生质体产率为 2 x 1 0 6 个 。 在显微镜下观察这些
原生质体 , 多数呈淡红至红色 , 少数呈无色 ; 均有浓厚的原生质 。 细胞大小不一 , 最大
者 25 拌M , 最小者 5 拼M 左右 。 与活藻株徒手切片的各部位细胞对比可知 , 位于皮层的表
面细胞最小 , 酶解分离后 , 乃为小而圆的红色细胞 ; 位于皮层以内至髓部的细胞 , 酶解
分离后 , 多数呈淡红色 , 少数呈无色 , 并且由于胞间连丝的关系 , 细胞的一端普遍有一
突起 , 以不同的侧面滞留于玻片 , 而使多数的分离细胞或原生质体 , 呈不规则的形态或
似梨形 (见示意图 ) 。 在这一点上 , 与其他海藻基本为圆形的分离细胞 , 则有些不同 , 这
或许是石花菜属皮层部位 , 分离细胞的形态特征吧 。 收集到的分离细胞 , 经显微测量和
计数 , 细胞直径 8~ 12 拼M 的约占 60 % ; 5 ~ 7拌M 的约占 30 % ; 12 产M 以上的约占 10 % 。
刚收集到的原生质体 , 其成活率为 70 ~ 75 % , 在待其附着的一段时间里 , 淡绿色的死细
胞出现较多 , 加入培养液以后 , 则基本上遏止了细胞的继续死亡 。 此后 , 成活率一般可
维持在 5 ~ 60 % 。 另外 , 我们还对细毛石花菜 G . 。 ir an l e 进行了试验 , 酶解 3 . s h 也同
样获得大量成活的原生质体 , 每个高倍镜视野可观察到 20 一 30 个红色的分离细胞或原生
质体 。 它的细胞直径一般比小石花菜的略小 , 以直径为 5~ 7 产M 者居多 。 其分离细胞的
形态及颜色等均同小石花菜 。
.2 2 小石花菜原生质体的培养结果
小石花菜原生质体 , 于 91 年分离培养 3 批 , 培养观察时间最长的达 3 个多月 ; 92 年
分离培养 6 批 , 培养观察时间最长的 , 达 6 个多月之久 。 现将观察到的情况总结于下 。
小石花菜原生质体在适宜培养条件下 , 可立即进行细胞分裂 。 由于分裂方式的不同
而产生形态构造截然不同的两类细胞团 。
2
.
2
.
1 多细胞团的形成 那些来 自皮层表面的 , 具色素的小圆形的分离细胞 , 经 3 ~ 7 天
培养 , 观察到细胞进行 “ 外生式 ” 的不等分裂 , 并 出现具 2一 4 个少数细胞的细胞团 (见
图 ) 。 它的形成 : 起初先由 1 个红色的分离细胞 , 分裂为大小不等的 2 个细胞 (见图 ) , 然
后这两个新生的细胞于不同的时间再进行分裂… …于是观察到具有更多细胞的细胞团出
现 。 新生的细胞如此不断地进行 “ 外生式 ” 的分裂 , 使许多大小不等的红色细胞聚合在
一起便形成多细胞团 。 在镜下观察 ,组成细胞团的这些细胞只是表面相互靠在一起 ,有几
处存在着细胞间隙 。 因此每个细胞都清楚可见 。 这些细胞的形态 ,像母细胞一样基本为圆
厦 门 水 产 学 院 学 报 第 17 卷
形 , 细胞的直径约在 5一 15 拜M 之 间 , 颜色偏红 ,深浅不一 。 经 1 个月的培养 , 细胞团可繁
殖到 30 ~ 40 个细胞 。 培养 4 个月后 ,还观察到有少数细胞能从细胞团中 , 单个地脱落在附
近 (测量这些脱落的细胞直径为 5 ~ 7 . 5 拼M 不等 ) 。 随后几天 , 在有分布着单个细胞的位
置上 ,发现有许多约 2拌M 左右等同大小的圆形 、 红色的小细胞 。 推测这些红色的小细胞是
由脱落的单个细胞里形成并释放出来的 ,并有很强的繁殖能力 , 以致后来在琼脂板上发展
成有上百个红色的小细胞 。 若以肉眼观察 ,琼脂板上显现出一片红色的培养物 。
2
.
2
.
2 愈伤组织状细胞团的形成 培养实验中 , 除分离的皮层表面细胞形成多细胞团以
外 , 还观察到有具色素的 (有色的 ) 和不具色素的 (无色的 ) 两种愈伤组织状细胞团 。 它
们分别那些具色素的和不具色素的 , 形态不甚规则的分离细胞形成 。 现以具色素的为例 ,
将愈伤组织状细胞团的形成过程描述如下 : 原生质体经 1 ~ 2 天培养 , 细胞普遍明显长大 ,
并长出胞壁 。 细胞的颜色由原来的淡红色转为红色 。 第 2~ 3 天观察到 : 有的细胞 , 其内
部的色素体和原生质呈现不均匀分布 , 并逐渐聚集 , 开始出现大小不等 、 为数不定的红
色原生质块 (见图 ) , 少则有 2 ~ 4 块的 , 多则有 5~ 7 块的 , 或更多的 。 接着 , 内部的红
色原生质块 , 有先后地各自形成 1个 “ 内生式 ” 的 , 具壁的新生细胞 , 于是 出现与原生
质块有等同数目细胞的细胞团 。 同样地 , 仍在 1~ 2 天内 , 随着新生细胞的长大 , 其内部
的色素体 、 原生质又经 1 次以上类似地聚集 、 形成数个红色的原生质块 。 接着 , 这些红
色原生质块又各 自形成新的细胞… …细胞如此 “ 内生式 ” 的迅速繁殖 , 致使观察者逐渐
看不清细胞团内部的情况 。 培养 1周左右 , 载片上或琼脂板上一个个结构紧密 、 外部形
态不规则 , 颜色呈绛红色 , 有的甚至趋于紫黑色的愈伤组织状细胞团便形成了 。 再发展
下去 , 它的体积不断增长 , 其表面有的呈隆起 ; 有的较平展 。 经 2 周培养 , 愈伤组织状
细胞团的个体大小 , 长与宽可长到 2 5拼M x 17 拼M 左右 , 经 1个月培养 , 可长到 50 拼M X
40 拌M , 最大者达到 70 拼M x 80 拼M 左右 。 培养 1个半月的愈伤组织状细胞团 , 已成为肉
眼可见的深紫色小块状物 。 由于愈伤组织状细胞团内的细胞无规则繁殖的结果 , 有时还
会出现似 “ 芽 ” 的形态 , 经 3~ 4 个月的连续观察 , 始终未见到这 “ 芽 ” 有分化 。
培养中 , 愈伤组织状细胞团的出现相当普遍 。 个体大小悬殊甚大 。 那些无色的愈伤
组织状细胞团的形成过程推测与上述的相似 , 不过似 “ 芽 ” 的情形不十分明显 ; 除此之
外 , 培养到 4 个月以后 , 在有的无色愈伤组织状细胞团 , 变得逐渐清楚起来 , 观察到 , 其
内形成许许多多几乎等同大小的细胞 ( 3 . 5 ~ 4 胖M ) , 以后这些无色透亮的小细胞便脱落
出来 , 随着小细胞的脱落 , 无色愈伤组织状细胞团便逐渐解体 。
3 讨论
石花菜是制作琼胶的主要原料 。 琼胶在食品工业 、 医药工业 、 微生物学 、 生物化学
等的科研中 , 用途十分广泛 。 故石花菜向来以重要经济红藻著称而引起人们的关注 。 石
花菜长期以来 , 多以组织培养的切段或切 片再生和营养繁殖作为实现其增产的途径阮 5〕。
近年来 , P ol en 一 F ul le r ( 1 98 7) 曾提出 , 利用海藻上的致病细菌 、 真菌 、 变形虫分解马尾
藻 、 巨藻 、 紫菜的细胞壁陈 7二。 川村嘉忘 ( 1 9 9 0) 应用细菌粗酶酶解紫菜 , 分离出紫菜原
第 1 期 活体生物酶分离石花菜原生质体的研究
生质体单离细胞 sj [。 … … 由此表明 , 开发廉价酶源是当今科技发达 国家正在探索中的课
题 。 而本研究则在开发多种廉价酶源的基础上 , 并进一步研制成新型混合酶 , 才使细胞
壁组成成分复杂的石花菜得以酶解成功 。 这再次显示活体生物酶的特有活力和新型混合
酶的巨大应用价值 。 同时也应验了研制新型混合酶的前期工作 , 对不同环境下的生物 , 其
酶提取工艺和方法是得当的 ; 对酶源生物的选择 、 搭配 、 生物酶酶液的浓度 , 酶液之间
的配比是适宜的 。 有关新型混合酶的主要酶源生物 , 以及配制的主要方法 , 前文阁已简要
叙述 , 在此不再赘述 。 从我们积累的研究资料显示 , 作为新型混合酶辅助酶源生物的种
类并非唯一 , 到 目前为止 , 在厦门地 区至少发现有 2 种以上 。 可以预言 , 随着辅助酶源
生物因地制宜地开发 , 将 出现适合不同沿海地区使用的新型混合酶 。
P ol en 一 F ul le r ( 1 9 8 7) 在江篱等产胶红藻的组织切片中 , 在皮层细胞上发现有愈伤组
织的形成 , 但频率低 〔s 二。 而在小石花菜原生质体的培养中 , 则可获得为数可观的愈伤组织
状细胞团 。 实验表明 , 培养中所观察到的这两类细胞团 , 就其本身来说 , 都具有迅速分
裂 、 快速繁殖的特点 。 因此 . 通过它们可有效地大量生产或繁殖遗传上一致的原种石花
菜细胞 。 并且 , 这两类细胞团的生长速度比原石花菜藻株的生长速度快得多 。 这样一来 ,
人们可望通过细胞培养获取琼胶的一种新型的企业化的生产工艺 ,也许即将变为现实 : 即
应用新型混合酶 , 将石花菜碎藻块酶解 , 获得其原生质体 ; 然后通过细胞培养的 “ 微繁
殖 ” 法 , 获得大量细胞团 ; 再以此细胞团的干品为原料 , 进一步提取特殊的天然物质—琼胶 。
随着人类的进步 , 医药科技研究的发达 , 对琼胶的用量 日益增多 。 但石花菜资源有
限 , 欲求从根本解决 , 有赖于利用该法获得的石花菜原生质体 , 开展体细胞克隆变异技
术 , 选育优 良品种 ; 通过原生质体融合及细胞培养技术 , 开发不同品种和物种的石花菜
新杂种 ; 甚至用细胞核移植技术 、 重组 D N A 技术 、 转移优 良性状的基 因等多条途径 , 以
期实现石花菜品种的改 良 , 达到增进品质 、 提高产量的 目的 。
4 结束语
海藻细胞的酶法分离技术是现代生物技术领域中的一项发展中的高新技术 。 该技术
的进步与发展 , 将影响海藻科学各个领域的深入研究 , 它对海藻栽培业的革新 、 海藻工
业和海洋药物的生产都有重要意义 。 历史进入 90 年代以来 , 发展高新技术已成为国内外
经济 、 技术竞争的焦点和关键 , 为此 , 当今的海藻科技工作者 , 对开发廉价酶源 、 并能
形成效益的酶法分离技术及其研究工作 , 必须给予高度的重视 。
本研究研制的新型混合酶 , 所用的生物材料 , 资源丰富 ; 价格低廉 ; 制作方法简便 。
该混合酶初步可应用于除紫菜以外的几种经济红藻原生质体的分离 ,尤其是产胶红藻 , 并
达到经济 、 便利 、 高效的 目的 。 目前 , 这一高新技术 , 有待广泛应用于有经济价值的红
藻与褐藻 , 相信会越发显现活体生物酶的特有活力 , 路子越走越宽广 。 如果我们能做到
这一点 , 我国的海藻高新技术及其产业必将出现前所未有的生机勃勃 , 海藻科学事业可
望在世界上领先步入崭新的繁荣时期 。
第 1 期 活体生物酶分离石花菜原生质体的研究
生质体单离细胞 j[s 。 … … 由此表明 , 开发廉价酶源是当今科技发达 国家正在探索中的课
题 。 而本研究则在开发多种廉价酶源的基础上 , 并进一步研制成新型混合酶 , 才使细胞
壁组成成分复杂的石花菜得以酶解成功 。 这再次显示活体生物酶的特有活力和新型混合
酶的巨大应用价值 。 同时也应验了研制新型混合酶的前期工作 , 对不同环境下的生物 , 其
酶提取工艺和方法是得当的 ; 对酶源生物的选择 、 搭配 、 生物酶酶液的浓度 , 酶液之间
的配比是适宜的 。 有关新型混合酶的主要酶源生物 , 以及配制的主要方法 , 前文阁已简要
叙述 , 在此不再赘述 。 从我们积累的研究资料显示 , 作为新型混合酶辅助酶源生物的种
类并非唯一 , 到 目前为止 , 在厦门地 区至少发现有 2 种以上 。 可以预言 , 随着辅助酶源
生物因地制宜地开发 , 将 出现适合不同沿海地区使用的新型混合酶 。
P ol en 一 F ul le r ( 1 9 8 7) 在江篱等产胶红藻的组织切片中 , 在皮层细胞上发现有愈伤组
织的形成 , 但频率低 〔s 二。 而在小石花菜原生质体的培养中 , 则可获得为数可观的愈伤组织
状细胞团 。 实验表明 , 培养中所观察到的这两类细胞团 , 就其本身来说 , 都具有迅速分
裂 、 快速繁殖的特点 。 因此 . 通过它们可有效地大量生产或繁殖遗传上一致的原种石花
菜细胞 。 并且 , 这两类细胞团的生长速度比原石花菜藻株的生长速度快得多 。 这样一来 ,
人们可望通过细胞培养获取琼胶的一种新型的企业化的生产工艺 ,也许即将变为现实 : 即
应用新型混合酶 , 将石花菜碎藻块酶解 , 获得其原生质体 ; 然后通过细胞培养的 “ 微繁
殖 ” 法 , 获得大量细胞团 ; 再以此细胞团的干品为原料 , 进一步提取特殊的天然物质—琼胶 。
随着人类的进步 , 医药科技研究的发达 , 对琼胶的用量 日益增多 。 但石花菜资源有
限 , 欲求从根本解决 , 有赖于利用该法获得的石花菜原生质体 , 开展体细胞克隆变异技
术 , 选育优 良品种 ; 通过原生质体融合及细胞培养技术 , 开发不同品种和物种的石花菜
新杂种 ; 甚至用细胞核移植技术 、 重组 D N A 技术 、 转移优 良性状的基 因等多条途径 , 以
期实现石花菜品种的改 良 , 达到增进品质 、 提高产量的 目的 。
4 结束语
海藻细胞的酶法分离技术是现代生物技术领域中的一项发展中的高新技术 。 该技术
的进步与发展 , 将影响海藻科学各个领域的深入研究 , 它对海藻栽培业的革新 、 海藻工
业和海洋药物的生产都有重要意义 。 历史进入 90 年代以来 , 发展高新技术已成为国内外
经济 、 技术竞争的焦点和关键 , 为此 , 当今的海藻科技工作者 , 对开发廉价酶源 、 并能
形成效益的酶法分离技术及其研究工作 , 必须给予高度的重视 。
本研究研制的新型混合酶 , 所用的生物材料 , 资源丰富 ; 价格低廉 ; 制作方法简便 。
该混合酶初步可应用于除紫菜以外的几种经济红藻原生质体的分离 ,尤其是产胶红藻 , 并
达到经济 、 便利 、 高效的 目的 。 目前 , 这一高新技术 , 有待广泛应用于有经济价值的红
藻与褐藻 , 相信会越发显现活体生物酶的特有活力 , 路子越走越宽广 。 如果我们能做到
这一点 , 我国的海藻高新技术及其产业必将出现前所未有的生机勃勃 , 海藻科学事业可
望在世界上领先步入崭新的繁荣时期 。
第 1期 活体生物酶分离石花菜原生质体的研究
参 考 文 献
1陈菊琦 . 粒花冠小月螺消化酶对海藻解壁作用的研究. 厦门水产学院学报 , 19 91 , 12 ( 2) : 21 一 26
3 陈菊琦 . 大瓶螺消化酶对海藻解壁作用的研究 . 厦门水产学院学报 , 19 91 , 13 ( 1 ) : 1一 5
3 陈菊琦 . 活体生物酶分离鹤鸽菜原生质体的研究 . 厦门水产学院学报 , 1 9 9 3 , 巧 ( 1 ) : 1一 7
4 裴鲁青 . 大石花菜切段再生育苗初步研究 . 浙江水产学院学报 , 19 8 , 7 (2 ) : 9 一 10 5
5 裴督青 . 大石花菜切段再生育苗的进一步研究 . 浙江水产学院学报 , 1 9 89 , 13 ( 3) : 2 30 一 238
6 P o ln e一 F u ll e r · M i e r o o g a n is m a s d ig e s t o r s o f eS a w e e d e e l ls · H y d r o b i o l o g ia . 1 9 87 , 1 5 1 / 1 52 : 4 0 5一 40 9
7 P o l n e 一 F u l le r . 以 g e s t io n o f s e a w e e d b y t h e m a r in e a m o e b a T r ie h o s p h a e r i u m . H y d r o b i o lo g ia . 1 9 9 0 ,
2 0 4 / 20 5
: 4 0 9一 4 1 3
8 川村嘉应 . 细菌粗酶酵素忆上石 / ’ ) 内丫 口 + 丫于又 卜翠雄细胞内作出 . 佐贺水拭研辍 . 1 99 0 , 12 :
1 0 1一 1 0 7
S t u d i e s o n G e l i d i娜 P r o t o P l a s t I s o l a t i o n b y U s i n g
t h e V i a b l e E n z y m e
C h e n J
u q i
( D e p a r tm e n t o f A q u a e u l t u r e
,
X i a m e n F i s h e r i e s C o l l e g e
,
X i a m e n 3 6 1 0 2 1 )
A b s t r a e t : T h i s P a P e r d e a l s w i t h t h e t e e h n iq u e o f m a k i n g u s e o f t h e b i o l o g i e a l r e s o u r c e s
o f o u r e o u n t r y a n d o f h a v i n g s u e c e s f u l l y P r o d u e e d f o r t h e f i r s t t im e i n e x P e n s i v e e n z y m e
s o u r c e s , i n d e v e l o P i n g a n e w t y P e o f m i x e d e n z y m e — v i a b l e e n z y m e m i x e d l iq u i d ,w h i e h e a n e f f e c t i v e l y d e e o m P o s e m a n y k i n d s o f r e d A l g a e w i t h e e o n o m i e v a l u e · A l a r g e
a m o u n t o f s u r v i v a l P r o t o P las t s e a n b e e x t r a e t e d b y e n z y m i s i n g G e l id i姚 d i叨 ir c a t娜 f o r
3— 3 . 5 h o u r s , w i t h f r e s h A l g a e , t h e r e g e n e r a t i n g r a t e o f p r o t o p l a s t 15 2 X l o 6 i n d / g ;a n d i t s s u r v i v a l r a t e 15 5 5一 6 0% . T h e i s o l a t e d p r o t o p l a s m i e e e l l s a r e d e n s e . T h r o u g h e u l -
t i v a t i o n
,
t h e s e e e l l s w i l l d i v i d e r a P i d l y a n d f o r m t w o s o r t s o f e e l l m a s s e s
: e a l l u s t i s s u e 一
I i k e e e l l m a s s e s a n d m u l t i c e l l u l a r m a s s e s
.
I n t h i s P a P e r t h e f o r m i n g P r o e e s s o f t h e s e t w o
s o r t s o f e e l l u l a r m a s s e s h a s b e e n d e s e r i b e d i n d e t a i l
, a n d t h e y c a n b e r e g a r d e d a s a s o u r c e
o f P r o P a g a t i n g n u t r i e n t e e l l s i n t h e m o d e r n A l g a e P r o d u e i n g t e c h n iq u e
.
T h e s u c e e s s i n
t h e d e v e l o Pm e n t o f t h i s n e w t y P e o f m i x e d e n z y m e o P e n s u P a b r o a d w a y f o r t h e c e l l u l a r
i s o l a t i o n a n d c e l l u l a r e u l t i v a t i o n o f e e o n o m ic r e d A l g a e ; i t w i l l a l s o b e o f v i t a l s i g n i f i
-
c a n c e i n P u s h i n g o n t h e d e v e l o Pm e n t o f t h e b i o l o g i e a l e n g l n e e r i n g o f A l g a e i n o u r e o u n
-
t r y
·
K e y w o r d s : i n e x p e n s i v e e n z y m e s o u r e e s
, v i a b l e e n z y m e
,
G e l i d i u m
,
P r o t o Pl a s t
,
m i e r o P r o p
-
a g a t l o n
, a g a r