全 文 ：第 1 4卷 第 2期
19 9 0年 6月
水 生 生 物 学 报
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}研究 简报 ;乌叻叻叨叻叻的少
葡萄藻三个品系脂类物质含 t 的比较研究
许常虹 俞敏娟
( 中国科学院水生生物研究所 , 武汉 )
C O M P A R A T IV E S T U D Y O F N E U T R A L L IP I O
C O N T E N T S F R O M T H R E E S T R A IN S O F
B O T R Y O C O C C 之15 B R A U浑1
X u C h a n g h u n g a n d Y u M i n i u a n
( I , s , i z o t o o f H y d r o b i o l o 考夕, A c a d 。 。 i。 5 1 , 蔺: a , w , 而 a , )
关链词 葡萄藻 ( Y N 卜 z A , Y N b一 B 和 Y N I卜 IC ) , 中性脂类物质 , 尼罗红
K e y 丫丫o r d o B o 了r 夕o c o c c “ : b r 。 。 n i i N e u t r a l l i p i d c o n t e n : s , N i l e R e d f l u e r e s e e n t d y e
葡萄藻作为一种新的再生性能源的研究 , 已
引起了不少学者的重视 。 其中较为关键的是对葡
萄藻所含脂类物质的研究。 过去通常采用重量法
及各类色谱法测定植物中的脂类物质 ` ’ , ’ ,` , ’ 1 。 这
些方法不但繁琐 , 而且均需一个较长时间的提取
过程 。 近年来国外采用一种新型染料— 尼 罗红 , 并结合荧光显微分光光度法可以直接检测出
细胞中脂类含量 t , 1 ,其方法较为灵敏 、 简便 。 本项
研究利用尼罗红荧光测定法对采自云南的葡萄藻
的三个品系进行了脂类物质的测定 , 比较了它们
所含脂类物质的含量及不同生长时期藻体所含脂
类物质含量的变化 ,并与常用的重 量法进行比较 ,
确认了应用尼罗红染色法测定藻类中性脂类含量
的可行性 。 并讨论了用“ 尼罗红荧光法” 筛选含高
月旨类新品系的可能性 。
材 料 和 方 法
藻种 葡萄藻 , 1 9 8 7年采自云南 、 抚仙湖品系
( Y N b
一
I A , Y N b一 I B 和 Y N b 一 I C ) 。
试剂 0 . 4陌 /ml 尼罗红乙醇液 。 . 2 m ol / L
的磷酸缓冲液 ( PH 7 . 0 ) ; 3% 的醋酸液 。
培养 单种分离培养和 , 0 m l 的批量培养 ,
采 用 C h u 2 3 培养基和 C h u 13 x 4 培养基 , 温度
为 2 3一 2 7℃ , 光强为 斗 0 0 0一 5 o o o l x , 培养时间为
7一 2 5 天 。
染色 用 3 % 醋酸固定葡萄藻样品 (藻浓缩
液 : 固定液为 1 : I v / v ) 。 3 天后 , 除去固定液后
用 l : l 的尼罗红染色液和磷酸缓冲液染色 , 10 分
钟后用磷酸缓冲液洗 3 遍 ,最后制片 。
荧光测 t 将制好的样片用荧光显微分光光
度计 ( U N I v A R ( R e i e h e r卜 J u n g , A u s t , i a ) )测量 。
测量时用落射照明用泵灯 ( C s 2 0 0 一 4 p h i l i p s ) 。
物镜 4 0 火 、 目镜 l o x 。 激发光波为 4 5 0一朽夕n m ,
发射光波 : 6 o o n m 。 每个样品分别测 5 5 个细胞 ,
并重复 。 此项测定由武汉大学测试中心承担 。
脂类提取 (重量法 ) 将葡萄藻样品 Y NI 卜
I A , Y N卜 I B 和 Y N 卜 I C 冰冻干燥后称重 , 用 己
烷抽提 三次 ,过滤 ,除去己烷溶剂 ,再加 1 : 10 的三
氯甲烷和丙酮溶液 (按 1 : 10 的体积比 ) ,置 4℃ 低
温下 4 8小时后离心 ,除去残滓 , 干燥 , 称重 。
1 9 8 9 年 9 月 1 8 日收至J}。
许常虹等 : 葡萄藻三个品系脂类物质含量的比较研究 1 8 7
~ 喊
程中体内脂类含量的变化 。 它的确是一种比较理
想的中性脂类物质的测定方法 。 目前 , 关于葡萄
藻脂类的绝对量以及整个群体整体脂类的测量尚
需进一步探索 。
尼罗红荧光法的应用已经从不同的方面显出
它的优越性 〔卜 , , ’ 1 。 我们从尼罗红荧光法测定葡
ǐ”é-七n认ó戈ó1qVà
口扒-`u田召三4u创。的.ìo,一J之4司1国ǎ过若减理ù划兴卿粼友异
结 果
1
. 三种不同品系的荀萄燕脂类物质的含 I
尼罗红荧光法 用荧光显微分光光度计测定
葡萄藻 Y N b 一 I A , Y N b 一 I B 和 Y N b一 C 3 个品系
的中性脂类含量的结果为 Y N b 一 lc 的脂类含量最
高 , Y N b一 I A 和 Y N b一 lB 的脂类含量均明显 低 于
Y N b
一
1C
, 而且后两者间相差不明显 (图 1 ) 。 经 F
值检验和 D u n e a n 检验证明 , Y N b 一 I C 与 Y N b -
I A 及 Y N 卜一 lc 与 Y N b一 1B 间的脂类含量具有极
显著的差异 , 而 Y N b一 lA 与 Y N b一 lB 之间差异
不显著 。
皿纽法 我们以重量法作对比 , 测定了这 3
个品系的脂类含量 。 从表 1可见 , Y N卜 lc 的
脂类含量仍居 3 个品系的首位 , 明显高 于 品 系
Y N b
一
1A 和 Y N b一 I B , 其含量达到了藻体干重的
斗3 . 3 7% 。 而 Y N b一 A 和 Y N b 一 I B 之间无明显
差别 , 其脂类含量分别为 3夕 . 夕5% 。 和 3 8 . 9 6% 。
结果与荧光测定的结果一致 。
由此可见 ,葡萄藻中 , 品系不同 , 它们所含有
的脂类物质的量也不同 , 实验证明了尼罗红荧光
法测定葡萄藻的脂类含量是可行的 。
2
. 丫踢一 1c 有萄燕品系脂类含 t 的变化
用尼罗红荧光法测定了脂类含量较高的品系
Y N h
一
lC 在不同的生长时期中的脂类物质含量的
变化 。 从图 2 可见 Y N b一 1c 的脂类含量随着生长
时间的延长而不断增加 , 到 14 一 21 天时达到最
高 ,随着时间进一 步延长又由高点明显下降 。 经
F值检验和 D u cn : n 检验表明 , Y N b一 1c 的脂类
含量在不同的生长时期是明显不同的 , 只有在生
长初期和生长期末所含脂类的量无显著差异 。
1 2 3
样品 S a m p le s咬N u m b e r )
残
图 1 3 种不同葡萄藻品系的脂类含最
厂 19 . 1 T h e C o n t七 n t s o f n e u t r a l l玉P i d s f r o口
t h r e e s t r a i o s o f B o ,护夕o c o c c “ 5 b r o 。 。 1 1 ( q u a ·
n t i t a t e d b犷 s p e e t r o nz i c r o s c o p e )
国— Y N b一 I A ; 忍翻— Y N b一 I B ;〔二〕— Y N b 一 I C
挤
讨 论
尼罗红 ( iN le eR d ) 是一种具较强荧光特性
的染料 。 它具有较强的疏水性 , 依溶剂疏水程度
不同呈现不同的荧光颜色 (从金黄色到红色 ) 。 但
在水溶剂中 , 它的荧光完全淬灭 。 另外尼罗红具
有光化学稳定性 。 它特有的激发光波长范围可以
排除一些生物分子对测定的干扰 。 已经作为一种
独特的方法用于中性脂类等物质的测定〔 ’ , ” 。
本项研究的结果证明 , 尼罗红荧光法可以直
接用于葡萄藻的脂类测定 ,是一种微量 、 迅速灵敏
的有效方法 。 它既可以测定葡萄藻不同品系的脂
类物质的含量 , 又可以测定葡萄藻在不同生长过
犷节气r 旅 `布飞犷笼气犷扁、 麟禁川 ,
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葡萄藻
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1i p i d ,
Y N b
一
i n v a r i o u s P e r i o d s o f g r o w t h
萄藻细胞中脂类含量的实验证明 , 尼罗红可以直
接作为葡萄藻新品系筛选的特异指标 , 使葡萄藻
1 8 8 水 生 生 物 学 报 1 4 卷
的筛选过程更加迅速准确 。 为此 , 尼罗红不仅作
为疏水性分子的探针 , 而且可以作为脂类物质含
量的一种指标 , 用以含多量脂类物质的微型生物
新品种的筛选 , 为探索和研究新的再生能源提供
了捷径 。
衰 1
T a b
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1 T h e ` o n t e n t s o f
3 种不网品系的有萄班的份类含 , (盆 t 法 )
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一 I A Y N b 一 I B Y N b
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样 品
S a m P l e s
藻干重 (克 )
D r y w e i g h t ( g )
脂类提取物 (克 )
0
。
1 1 26 0
.
6 , 4 8 0
.
2 4 4 5
0
.
0 4 5 0 0
.
2 5 5 1 0
。
10 6 8
N e u t r a l l i p i d ( g )
总脂类百分含量 (% )
T o t a l n e u t r a l l i P i d
4 3
。
3 7
3 9
。
9 5 3 8
。
9 6
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r y w o i g h t )
参 考 文 献
汇5 ]
【 1 〕 许常虹 , 俞敏娟 , 1 , 8 8。 成油藻— 布郎葡萄藻的研究 。 水生生物学报 , 1 2 ( 一) : , o一 , 3。
1 2 ] B
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