全 文 ：第３３卷第２期
２０１４年４月
中 国 海 洋 药 物
ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＡＲＩＮＥ　ＤＲＵＧＳ
Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．２
Ａｐｒｉｌ，２０１４
孔石莼多糖及其硫酸酯化衍生物
抗肿瘤活性的体外实验研究△
＊
王凯１，綦慧敏１，２＊，李玉磊１，徐海亭１，刘顺梅１
（１．潍坊医学院，山东 潍坊，２６１０５３；２．天然药物活性物质与功能国家重点实验室，
中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，北京１０００５０）
摘　要：目的 研究孔石莼多糖（Ｕ）及其硫酸酯化衍生物（ＨＵ）对不同肿瘤细胞株生长的影响。方法 利用体外
细胞培养模型，应用ＣＣＫ－８法分析孔石莼多糖Ｕ及其硫酸酯化衍生物对不同肿瘤细胞生长的影响。结果 孔
石莼多糖Ｕ及其硫酸酯化衍生物 ＨＵ对人肝癌细胞 ＨｅｐＧ２、人肺癌细胞ＳＰＣ－Ａ－１、人胃癌细胞ＣＤＸ２、人乳
腺癌细胞 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１均具有一定的抑制作用，但作用又有明显差异。对孔石莼多糖（Ｕ）进行硫酸酯化衍
生化后增强了对 ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、ＣＤＸ２及 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１肿瘤细胞的抑制作用。结论 孔石莼多糖（Ｕ）及其
硫酸酯化衍生物（ＨＵ）对不同肿瘤细胞生长具有一定的抑制作用，硫酸酯化孔石莼多糖（ＨＵ）对肿瘤细胞的
抑制作用强于孔石莼多糖（Ｕ）。
关键词：孔石莼多糖Ｕ；硫酸酯化衍生物；抗肿瘤；体外细胞培养
中图分类号：Ｑ－３１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００２－３４６１（２０１４）０２－０１９－０５
Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｕｌｖａ　Ｐｅｒｔｕｓａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ｏｎ　ａｎｔｉ－Ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
ＷＡＮＧ　Ｋａｉ　１，ＱＩ　Ｈｕｉ－ｍｉｎ１，２，ＬＩ　Ｙｕ－ｌｅｉ　１，ＸＵ　Ｈａｉ－ｔｉｎｇ１，ＬＩＵ　Ｓｈｕｎ－ｍｅｉ　１
（１．Ｗｅｉｆａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｗｅｉｆａｎｇ，２６１０５３；２．Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ　Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　Ｐｅｋｉｎｇ　Ｕｎｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ（Ｕ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｄｅｒｉｖａ－
ｔｉｖｅ（ＨＵ）ｏｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｃｅｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｏｄｅｌ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ＣＣＫ８ｔｅｓｔ　ｗａｓ
ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ（Ｕ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ（ＨＵ）ｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ
ｌｉｎｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ（Ｕ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ（ＨＵ）ｂｏｔｈ　ｓｈｏｗｅｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ
ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、ＣＤＸ２ａｎｄ　ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｖｅｒｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．Ｔｈｅ　Ｕｌｖａ
ｐｅｒｔｕｓａ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｍｏｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、ＣＤＸ２ａｎｄ
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ （Ｕ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ（ＨＵ）ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｃｅｌ
ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ．Ｔｈｅ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（ＨＵ）ｓｈｏｗｅｄ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｔｈａｎ　ｐｏｌ－
ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＵ．ｐｅｒｔｕｓａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｓｕｌｆａｔｅ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ；ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
＊ △基金项目：国家自然科学基金 （４１２０６１２９）；天然药物活性物质与功能国家重点实验室开放课题（ＧＴＺＫ２０１２０４）；山东省自然科学
基金（ＺＲ２０１２ＤＬ１３）；山东省高等学校科技计划项目（Ｊ１２ＬＭ５１、Ｊ１０ＬＣ２０）资助
　作者简介：王凯 （１９８６－），男，硕士研究生，主要从事海藻化学与海洋药物的研究，Ｔｅｌ：０５３６－８４６２４９３Ｅ－ｍａｉｌ：１３６２６３６３７９１＠１３９．
ｃｏｍ
＊通讯作者：綦慧敏，副教授，硕士生导师，主要从事海藻化学与海洋药物的研究，Ｔｅｌ：０５３６－８４６２４９３Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｆｑｉｈｕｉｍｉｎ＠１２６．ｃｏｍ
　　收稿日期：２０１３－１０－２１
DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2014.02.004
２０　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
　　孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｌｍ）属于绿藻门石
莼属，俗称海菠菜、海白菜等，广泛分布于西太平
洋沿海，是中国野生经济藻类中资源极为丰富的１
种，在黄渤海产量最大［１］。自古以来孔石莼在食
用和药用方面就有广泛的应用。《中华本草》记载
孔石莼“主风秘不通，五嗝气，并小便不利，脐下结
气”；“软坚散结，清热祛痰，利水解毒。用于喉炎，
颈淋巴结肿，水肿，疮疖及瘿瘤等”［２］。近年来发
现孔石莼多糖Ｕ在降血脂、抗病毒、抗氧化以及克
生作用等方面具有显著的生物活性。本课题组在
研究中发现孔石莼多糖 Ｕ 及其硫酸酯化衍生物
ＨＵ也具有一定的抗肿瘤活性。
采用体外培养细胞直接进行药物活性的检测
及相关作用机制的研究，是进行药物筛选最基本、
最常用的方法［３］，因此本研究利用ＣＣＫ－８法分析
测定孔石莼多糖 Ｕ及其硫酸酯化衍生物 ＨＵ 在
体外对肝癌细胞 ＨｅｐＧ２、乳腺癌细胞 ＭＤＡ－ＭＢ－
２３１、肺癌细胞ＳＰＣ－Ａ－１和胃癌细胞ＣＤＸ２的抗肿
瘤活性。
１　材料
１．１　孔石莼藻体
新鲜孔石莼于２０１２年９月采自中国青岛第
二海水浴场，除去泥沙与杂藻，自来水冲洗干净，
风干，密封于塑料袋中，阴凉干燥处放置。海藻经
中国科学院海洋研究所陆宝仁研究员鉴定为绿藻
石莼科石莼属孔石莼。
１．２　细胞
人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２）、人乳腺癌细胞株
（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、人肺癌细胞株（ＳＰＣ－Ａ－１）、人胃
癌细胞株（ＣＤＸ２），均培养于含有１０％胎牛血清的
ＲＰＭＩ１６４０培养液中，置３７℃ ＣＯ２培养箱中，密
闭培养。
１．３　试剂及仪器
ＣＯ２培养箱，Ｒｅｖｃｏ　ＥｌｉｔｅⅡ型，美国赛默飞世
尔科技公司 ；酶标仪，Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ　ＭＫ３型，赛默飞
世尔科技有限公司；超净工作台，ＳＷ－ＣＪ－１ＦＤ，苏
州净化设备工程有限公司；倒置显微镜，ＣＫ４０型，
日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司。ＲＰＭＩ１６４０培养基购自 Ｈｙ－
ｃｌｏｎｅ公司，新生牛血清购自杭州四季青生物工程
有限公司，胰蛋白酶购自索莱宝生物科技有限公
司，ＣＣＫ－８试剂盒购自碧云天生物技术研究所，其
他试剂均为国产分析纯。
２　实验方法
２．１　孔石莼多糖Ｕ的制备
依据文献［４］的方法提取制备孔石莼多糖Ｕ。
２．２　硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ的制备
依据文献［５－６］的方法，经适当的改进，制备硫
酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ。硫酸酯化试剂的制备：
在三口烧瓶中加入３００ｍＬ甲酰胺，然后将其置于
冰浴中，用滴液漏斗逐滴加入５０ｍＬ的氯磺酸。
滴加完毕，撤去滴液漏斗，继续在冰浴中搅拌至室
温，静置３０ｍｉｎ。将得到的透明溶液，倒入干燥的
棕色瓶子中贮存备用。精确称取４ｇ左右的孔石
莼多糖 Ｕ加入２４０ｍＬ的甲酰胺中，室温下搅拌
３０ｍｉｎ，使其溶解。少量多次加入硫酸酯化试剂，
在６０℃ 下搅拌反应４ｈ。反应完毕，在冷水浴中
冷却至室温，用３０％ ＮａＯＨ进行中和。加入预先
冷却好的８５％（最终浓度）乙醇中，沉淀过夜，无水
乙醇洗涤，再将沉淀溶于４００ｍＬ 的水中。在
３　６００Ｄａ（截留值）的透析袋中用自来水和蒸馏水
各透析４８ｈ，旋转浓缩，冷冻干燥得硫酸酯化孔石
莼多糖产品 ＨＵ。
２．３　孔石莼多糖 Ｕ及硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ
的分析
孔石莼多糖 Ｕ 及硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ
的总糖含量以鼠李糖为标准，采用苯酚－硫酸法
分析［７］；硫酸根含量以Ｋ２ＳＯ４为标准，采用氯化钡
－明胶法分析［８］；糖醛酸含量以葡萄糖醛酸为标
准，采用咔唑法分析［９］；灰分（中国药典２０００）与
酸不溶物 （中国药典２０００）含量采用重量法分析，
Ｎ含量采用自动分析测定仪测定；取少量在干燥
器中干燥保存的孔石莼多糖及硫酸酯化孔石莼多
糖 ＨＵ与溴化钾混合、研磨后压制成１ｍｍ左右
后的薄片，在 ＮｉｃｏｌｅｔＡｖａｔａｒ　３６０型红外光谱仪上
进行红外分析。在 Ｄ２Ｏ介质中用ＪＮＭ－ＥＣＰ６００
核磁共振仪进行１３Ｃ　ＮＭＲ核磁共振波谱分析。
２．４　细胞培养
取对数生长期的细胞，制成１×１０４～１×１０５·
ｍＬ－１的细胞悬液，以每孔１００μＬ的密度接种于
９６孔板内。隔天待细胞完全贴壁后，在３７℃、
５％ＣＯ２培养箱中分别培养２４ｈ，再向各孔中加
入Ｕ 药物溶液。所考察的药物浓度为０．８、０．４、
２期 王凯，等：孔石莼多糖及其硫酸酯化衍生物抗肿瘤活性的体外实验研究 ２１　
０．２、０．１、０．０５、０．０２５、０．０１２　５、０．００６　２５ｍｇ·
ｍＬ－１。同时考察相同浓度的 ＨＵ 的药物溶液。
以不加药的培养基作为阴性对照液，同时设置空
白对照组。培养４８ｈ，吸出药物溶液，ＰＢＳ洗涤２
遍。加入１０％的ＣＣＫ８液，继续培养１～３ｈ。用
酶联免疫检测仪于４５０ｎｍ处测定光密度值［１０］。
实验测定３次，计算其抑制率。
抑制率＝（１－Ａ实验／Ａ对照）×１００％
３　结果
３．１　孔石莼多糖 Ｕ及硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ
的分析
孔石莼多糖 Ｕ 及硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ
的总糖、糖醛酸、硫酸根、灰分、酸不溶物、Ｎ含量
分析结果如表１图１。
表１　Ｕ 和 ＨＵ的化学成分分析
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｕ　ａｎｄ　ＨＵ ／％ 干重
总　糖
Ｔｏｔａｌ　ｓｕｇａｒ
糖醛酸
Ｕｒｏｎｉｃ－ａｃｉｄ
硫酸根
Ｓｕｌｆａｔｅ
酸不溶物
Ａｃｉｄ－ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ
灰分
Ａｓｈ
Ｎ含量
Ｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ
Ｕ　 ４７．０　 ２３．２　 １９．５　 ０．３２　 ２９．９　 １．０
ＨＵ　 ４９．１　 ２０．２　 ３２．８　 ０．５１　 ３９．８　 ０．９
图１　孔石莼多糖Ｕ和硫酸酯化孔石莼
多糖 ＨＵ的红外图谱
Ｆｉｇ．１　Ｉｎｆｒａｒｅｄ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕ　ａｎｄ　ＨＵ
　　如图１所示３　４７８ｃｍ－１左右为羟基吸收峰，
２　９４０ｃｍ－１为Ｃ－Ｈ伸缩振动，１　６４１ｃｍ－１左右为
Ｃ－６位上糖醛酸中Ｃ＝Ｏ伸缩振动吸收峰，８５０和
１　２６０ｃｍ－１是硫酸根的特征信号。通过测定硫酸
根的含量，可确定硫酸酯化的反应是成功的。而
且，硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ与孔石莼多糖 Ｕ相
比没有出现新的吸收峰。这就说明，除了发生硫
酸酯化反应没有其它的反应发生。
孔石莼多糖Ｕ和硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ在
硫酸酯化后，与硫酸根直接相连的碳原子会向低场
方向移动，而Ｃ－１和 Ｃ－４则位移到较高的区域。
ＨＵ的１３Ｃ　ＮＭＲ表明，硫酸酯化后在７４．７，７６．１和
７８．９出现了３个新的峰，它们可以分别归属于碳的
硫酸酯化基团，Ｃ－２（Ｒ　ａｎｄ　Ｒ′），Ｃ－２（Ｉ）和Ｃ－３（Ｉ）。
另外在７０．３，７２．１和７２．９分别属于未被取代的Ｃ－
２（Ｒ　ａｎｄ　Ｒ′），Ｃ－２（Ｉ）ａｎｄ　Ｃ－３（Ｉ）也可以被观察到。
这些结果表明Ｃ－２（Ｒ，Ｒ′ａｎｄ　Ｉ）和Ｃ－３（Ｉ）的羟基
部分被硫酸酯化［１１－１２］。
表２　孔石莼多糖Ｕ及硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ的１３　Ｃ核磁共振波谱
Ｔａｂｌｅ　２　１３　Ｃ　ＮＭＲ　ｏｆ　Ｕ　ａｎｄ　ＨＵ（δ）
样　品
Ｓａｍｐｌｅｓ
糖残基
Ｒｅｓｉｄｕｅｓａ
化学位移
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｈｉｆｔｓ
Ｃ－１ Ｃ－２ Ｃ－３ Ｃ－４ Ｃ－５ Ｃ－６ Ｃ－２ｂ　 Ｃ－３ｂ
Ｕ　 Ｇ　 １０６．４　 ７６．８　 ７６．８　 ８１．５　 ７８．４　 １７８．３
Ｒ　 １００．４　 ７１．５　 ８１．５　 ７９．０　 ７０．４　 １９．６
Ｉ　 １０４．１　 ７４．０　 ７４．８　 ８１．１　 ７４．０　 １７８．３
Ｒ＇ １０１．１　 ７１．５　 ８１．５　 ７９．０　 ７０．４　 １９．６
ＨＵ　 Ｇ　 １０６．０　 ７６．８　 ７６．８　 ８１．７　 ７８．２　 １７８．０
Ｒ　 ９９．２　 ７０．３　 ８０．７　 ７９．７　 ７０．５　 １９．５　 ７４．７
Ｉ　 １０３．０　 ７２．１　 ７２．９　 ８０．４　 ７２．１　 １７８．２　 ７６．１　 ７８．９
Ｒ′ １００．１　 ７０．３　 ８０．７　 ７９．７　 ７０．５　 １９．５　 ７４．７
ａＧ：β（１→４）－Ｄ－葡萄糖醛酸；Ｒ：α（１→４）Ｌ－鼠李糖－３－硫酸盐（－β－ｄ－葡萄糖醛酸）：Ｉ：（１→４）－α－Ｌ－艾杜糖醛酸；Ｒ′：１→４－α－Ｌ－鼠李糖－３－硫酸
盐（－α－Ｌ－艾杜糖醛酸）；ｂ修饰峰信号。
ａＧ：β（１→４）－ｌｉｎｋｅｄβ－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ；Ｒ：α（１→４）－ｌｉｎｋｅｄα－ｌ－ｒｈａｍｎｏｓｅ－３－ｓｕｌｆａｔｅ（ｌｉｎｋｅｄ　ｗｉｔｈβ－ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）；Ｉ：（１→４）－ｌｉｎｋｅｄ
α－ｌ－ｉｄｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ；Ｒ′：（１→４）－ｌｉｎｋｅｄα－ｌ－ｒｈａｍｎｏｓｅ－３－ｓｕｌｆａｔｅ（ｌｉｎｋｅｄ　ｗｉｔｈα－ｌ－ｉｄｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）．
ｂ　Ｓｉｇｎａｌｓ　ｏｆ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ．
２２　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
３．２　孔石莼多糖Ｕ及其硫酸酯化衍生物 ＨＵ对
肿瘤细胞的抑制作用
由表３知Ｕ和 ＨＵ对人肝癌细胞 ＨｅｐＧ２、人
肺癌细胞ＳＰＣ－Ａ－１、人胃癌细胞ＣＤＸ２、人乳腺癌
细胞 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１均具有一定的抑制作用，但作
用又明显差异。在所考察的剂量下，本研究发现
除ＨＵ对ＳＰＣ－Ａ－１的抑制作用呈现剂量依赖关系
之外，Ｕ 和 ＨＵ 对 ＨｅｐＧ２、ＣＤＸ２、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１
没有明显的剂量依赖关系。
从表中可以看出 Ｕ 和 ＨＵ 对 ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－
Ａ－１、ＣＤＸ２及 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１作用效果虽然不同，
但是在给受试药物的最大剂量下，其细胞抑制率
均＜５０％，说明 Ｕ 和 ＨＵ 对 ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、
ＣＤＸ２及 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１没有明显的细胞毒作用。
另外，从表中还可以看出，在相同的剂量下 ＨＵ对
ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、ＣＤＸ２及 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１的抑制
作用 强 于 Ｕ，在 剂 量 是 ５０ μｇ／ｍＬ 时，ＨＵ
（４５．７３％）对肝癌细胞 ＨｅｐＧ２的抑制作用明显强
于Ｕ（２２．１１％）（Ｐ＜０．０１）。在剂量１００μｇ／ｍＬ，
ＨＵ（３４．２１％）对肺癌细胞的抑制作用明显强于Ｕ
（２４．２０％）（Ｐ＜０．０１），这说明对孔石莼进行硫酸
酯化衍生化后增强了其对 ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、
ＣＤＸ２及 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞的抑制作用。
表３　Ｕ和 ＨＵ对 ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、ＣＤＸ２、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１体外培养细胞抑制率（ｎ＝３，ｘ±ＳＤ）
Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｕ　ａｎｄ　ＨＵ　ｏｎ　ＨｅｐＧ２、ＳＰＣ－Ａ－１、ＣＤＸ２、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１
受试样品
Ｓａｍｐｌｅｓ
剂量／μｇ·ｍＬ
－１
Ｄｏｓｅ
细胞抑制率Ｃｅｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ／％
ＨｅｐＧ２ ＳＰＣ－Ａ－１ ＣＤＸ２ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１
孔石莼多糖Ｕ
８００　 ３５．９１±１．１０　 ４３．２６±３．２８　 ４２．４９±４．１６　 ３８．１９±４．０２
４００　 ３２．１９±６．０９　 ２９．９２±６．０１　 ４０．２１±１．０７　 ４３．８１±８．０１
２００　 ２５．１４±２．５２　 ２２．７４±７．２９　 ２０．７１±５．０３　 ２５．３６±５．７５
１００　 ３４．５２±１．９２　 ２４．２０±１．８０　 １７．７５±６．６２　 ２２．３７±７．９４
５０　 ２２．１１±０．９６　 １９．５８±２．６７　 １２．５２±７．４０　 ２８．６５±１．３１
２５　 ２６．６６±４．３４　 １７．２５±４．４６　 ３２．４９±４．５６　 ２４．６１±２．３２
１２．５　 ２４．００±４．８３　 １５．４３±３．２９　 ２８．５３±１．９７　 ２３．６８±６．９９
６．２５　 ３０．５９±６．９２　 １４．７８±７．３１　 ３０．７０±６．２０　 ２１．３９±２．５６
孔石莼多糖硫
酸酯化衍生物
ＨＵ
８００　 ４７．５３±８．７６　 ４６．５２±４．０１　 ４５．６０±７．８１　 ３８．８５±２．７７
４００　 ４９．６９±３．２９　 ４３．２１±２．５４＊ ４５．１９±７．０８　 ３７．８２±０．７９
２００　 ４２．０９±７．０３　 ３７．８０±８．７２　 ３７．５０±７．８９＊ ３３．２７±５．４７
１００　 ５０．４７±５．１９＊ ３４．２１±１．７９＊＊ ４２．６０±６．１９　 ３１．７５±１．０７
５０　 ４５．７３±２．０４＊＊ ２５．２８±８．１４　 ３８．９７±１１．４９＊ ２４．６５±０．６７＊
２５　 ３９．５４±７．５６　 ２４．６２±６．１０　 ２８．６９±５．４３　 ３２．５０±１．８７＊
１２．５　 ３１．０５±４．５９　 ２１．３３±１．５６　 ２７．３８±４．１５　 ４０．９５±７．５７
６．２５　 ２２．０８±１．６８　 １２．５９±９．６２　 ２０．０７±９．１３　 ３５．７１±４．３５＊＊
　　与孔石莼多糖组相比＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。
４　讨论
癌症是严重威胁人类生命的常见病和多发
病，其死亡率仅次于心血管病而位居第二［１３］。对
抗肿瘤药物的研究是当今的１个热点，随着分子
肿瘤学研究的深入，抗肿瘤天然药物研发过程中
体外抗肿瘤实验已成为必不可少的一部分。在本
实验中，选用４种与临床应用有较好一致性的肿
瘤细胞株进行细胞毒性试验，以提高孔石莼多糖
抗肿瘤研究的可信度。在研究中发现在体外培养
条件下孔石莼多糖 Ｕ 及其硫酸酯化衍生物 ＨＵ
２期 王凯，等：孔石莼多糖及其硫酸酯化衍生物抗肿瘤活性的体外实验研究 ２３　
对人肝癌细胞 ＨｅｐＧ２、人肺癌细胞ＳＰＣ－Ａ－１、人胃
癌细胞ＣＤＸ２、人乳腺癌细胞 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１均具
有一定的抑制作用。这与卞俊［１４］等发现的孔石莼
多糖在小鼠体内具有显著的抗肿瘤作用相一致。
孔石莼多糖是从绿藻孔石莼中提取的１种天然的
海洋植物多糖，在剂量分别为５０、２５、１２．５μｇ／ｍＬ
时，发现硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ对人胃癌细胞
的抑制率分别为３８．９７％、２８．６９％、２７．３８％，其结
果均高于孙雅洁［１５］等在研究青蒿素对人胃癌细胞
时的抑制率（３４．６２％、２５．５２％、２３．３０％）。在剂
量分别为１００、５０、２５、１２．５、６．２５μｇ／ｍＬ时，孔石
莼多糖 Ｕ和硫酸酯化孔石莼多糖 ＨＵ对肝癌细
胞的抑制率都明显强于符涛［１６］等在研究姜黄素对
人肝癌细胞时的抑制率。本研究结果表明，对孔
石莼多糖进行硫酸酯化后，明显增强了其抗肿瘤
效应，这说明本实验通过改造孔石莼多糖的结构
来增强其抗肿瘤效应是切实可行的，但还需要进
行更深入的研究，以阐明其抗肿瘤的作用机制。
参考文献：
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