全 文 ：·基础研究·
白黎芦醇与 !氟尿嘧啶联用对人胃癌细胞增殖的影响!
张生军 #，袁江涛 #，刘敏丽 $，张才全 %
延安大学附属医院，#普外科，$病理科，陕西省延安市 &#’(((；%重庆
医科大学附属第一医院普外科，重庆市 )(((#’
张生军!，男，#*&% 年生，陕西省延安市人，汉族，$((! 年重庆医科大学
毕业，硕士，讲师，主要从事胃肠肿瘤方面的研究。
中图分类号+,$-’.*# 文献标识码+/ 文章编号+#’&#!*$’0$((’1$%(#$&(%
收稿日期+$((’()#& 修回日期+$((’()#* 0(’!(%$’&- 2 34·51
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张生军，袁江涛，刘敏丽，张才全;白黎芦醇与 EN氟尿嘧啶联用对人胃癌细胞增殖
的影响P.Q;中国临床康复，5GGH，+GJ58KL+5MNO PRRR;S%4>T=;>1?Q
摘要
目的：体外观察药用植物中提取的白黎芦醇与 !氟尿嘧啶联用对人胃
癌 4@R&*(# 细胞增殖的干预。
方法：实验于 $((%() 2 $(()(! 在重庆医科大学完成。!实验设空白对
照组、白藜芦醇治疗组、!氟尿嘧啶治疗组、药物联合作用组。白藜芦醇
（购自美国 4HC<9公司），配制成 ##.%’ <<>A 2 W的储备液，) ]保存备用。
!氟尿嘧啶0南通精华制药厂生产1。人胃癌细胞株 4@R&*(#（重庆医科
大学病理生理教研室提供）。人胃癌癌细胞株 4@R&*(# 接种于含体积
分数为 (.# 新生牛血清的 ,FV[L#’)( 培养液中进行培养，取对数生长
期的 4@R&*(# 细胞制成 !‘#(& W#的悬液，每孔 $(( #W 加入 *’ 孔培养
板中。$白藜芦醇治疗组按 !个不同浓度分别加在 *’孔板内，每孔加药
量 $( #W，使白黎芦醇的终浓度为 $-.)，!’.-，##%.’，$$&.$，)!).) #<>A 2 W。
同理 !氟尿嘧啶治疗组的终浓度为 )-，*’.#，#*$.$，%-).)，&’-.- #<>A 2 W。
药物联合作用组分别加入白藜芦醇、!氟尿嘧啶各 #(( #W，两药合用比
例为 #e#，每种单药剂量浓缩 # 倍。空白对照组则加入等量相同的培养
液，不含任何药物。每种剂量 % 个平行孔。%采用四甲基偶氮唑盐法观
察不同浓度白黎芦醇、!氟尿嘧啶单独或联合应用对人胃癌 4@R&*(#
细胞生长的抑制作用，并利用中效原理判定两药合用的效果。
结果：!药物抑制率测定结果：随着药物浓度的增加，白黎芦醇、!氟尿
嘧啶单用及联合作用 &$ G 时对人胃癌 4@R&*(# 细胞的抑制率均相应
增加。白黎芦醇与 !氟尿嘧啶单用、联合作用 &$ G 时的回归方程及
对 4@R&*(#细胞中效剂量的测定结果：白黎芦醇与 !氟尿嘧啶各自单用
时对 4@R&*(#细胞的中效剂量分别为 #(&.(- #<>A 2 W和 #-(.(’ #<>A 2 W；
联合用药时为 #*%.&) #<>A 2 W，其中白黎芦醇为 &#.*- #<>A 2 W，!氟尿
嘧啶为 #$#.&’ #<>A 2 W；白黎芦醇单用是合用的 #.)* 倍，!氟尿嘧啶单
用是合用的 #.)- 倍。对于 4@R&*(# 细胞，抑制效应大于 (.-! 时合用指
数 f #，即两药合用时产生协同作用。
结论：在体外联合应用白黎芦醇与 !氟尿嘧啶，两种药物很小剂量就能
达到各自单用但需很大剂量时才能产生的效果。两药联合应用抑制效
应大于 (.-! 时能够产生协同作用。
主题词：药物协同作用；氟尿嘧啶 2投药和剂量；抗肿瘤联合化疗方案 2
治疗应用；胃肿瘤 2药物疗法
E 引言
白黎芦醇是一种广泛存在于葡萄、花生和多种药
用植物中的非黄酮类多酚化合物，目前至少在 $# 个
科、%# 个属的 &$ 中植物中被发现g-h。研究显示其药理
作用广泛，主要表现在防治心血管疾病和抗肿瘤作用
上g#-h。
资料显示白黎芦醇是一种天然的肿瘤化学预防
剂，对肿瘤的起始、促进、发展三个阶段均有抑制作用：
能够抗突变、抗氧化、抑制自由基并诱导&期药代酶
（抗起始活性）等g!h，但其具体的作用机制仍有待于进一
步研究。综合国内外文献发现，研究白黎芦醇对胃癌作
用的报道以及白黎芦醇与其他抗肿瘤药联合治疗胃癌
的报道较少。本实验用四甲基偶氮唑盐法测定白黎芦
醇、!氟尿嘧啶单用及联合应用对人胃癌细胞株
中国临床康复 第 +G卷 第 58期 $((’(’$(出版
1)!232 4&+%.5 &0 15!!-.5 62).7!5!$.$!&8 4+2 9: 9::; <&5’ =: >&’ 9? +5M
!# $%&$’()*% +# *$’$,&- . /
!!!#$%&’(&)* ’(+,,-./-,01234&)* 张生军0等1白黎芦醇与 (’氟尿嘧啶联用对人胃癌细胞增殖的影响
2+&)-$ 的干预，根据 +345678988: 中效原理定量分
析两药合用时的相互效果，以评价白黎芦醇对胃肿瘤
应用抗肿瘤药物治疗的可行性与应用前景。
! 材料和方法
设计：随机区组设计。
单位：延安大学附属医院普外科与病理科，重庆
医科大学附属第一医院普外科。
材料：实验于 *--;’-, . *--,’-( 在重庆医科大学
完成。实验设空白对照组、白藜芦醇治疗组、(’氟尿嘧
啶治疗组、药物联合作用组。实验药物：白藜芦醇（购自
美国 <=>8公司），配制成 $$1;% >>49 . ?的储备液，, @
保存备用，实验时用生理盐水稀释到所需浓度。(’氟
尿嘧啶A南通精华制药厂生产B，处理细胞时用生理盐
水稀释到所需剂量。主要试剂和仪器：人胃癌细胞株
2+&)-$（重庆医科大学病理生理教研室提供）；/CD!6
$%,- 干粉培养基（美国 2州四季青公司生产）；四甲基偶氮唑盐（美国 G<=>8 公
司）；二甲基亚砜（化学纯，重庆东方试剂厂）；超净工
作台（上海净化设备厂）；+H*孵育箱（IJ?1?KL*;--
型，美国）；倒置显微镜（#（L<46/8O *(-- 型，美国）；)% 孔及 *, 孔培养板（美国
+4GP8Q公司）。
设计、实施、评估者：实验设计为第一作者，干预
实施为第一、二、三作者，评估为第四作者，全部经过
系统培训，未使用盲法评估。
方法：
细胞培养：人胃癌癌细胞株 2+&)-$ 接种于含体
积分数为 -1$ 新生牛血清的 /CD!6$%,- 培养液中，置
;& @、体积分数为 -1-( 的 +H*培养箱中培养，传代时
用质量浓度为 $ = . ?的胰酶溶液消化，锥虫蓝拒染法
记数活细胞数。每两三天传代 $次。
四甲基偶氮唑盐法检测药物效应R*S：!取对数生长
期的 2+&)-$细胞制成 (T$-& ?’$的悬液，每孔*-- ?
加入 )%孔培养板中。#白藜芦醇治疗组按 (个不同浓
度分别加在 )% 孔板内，每孔加药量 *- ?，使白黎芦
醇的终浓度为 *U1,，(%1U，$$;1%，**&1*，,(,1, >49 . ?。
同理 (’氟尿嘧啶治疗组的终浓度为 ,U，)%1$，$)*1*，
;U,1,，&%U1U >49 . ?。药物联合作用组分别加入白藜
芦醇、(’氟尿嘧啶各 $-- ?，两药合用比例为 $V$，每
种单药剂量浓缩 $倍。空白对照组则加入等量相同的
培养液，不含任何药物。$每种剂量 ; 个平行孔。在
+H*孵箱中培养 &* 3后，每孔中加入 ( = . ?的四甲基
偶氮唑盐 *- ?继续培养 , 3，弃上清，加入 *-- ?
二甲基亚砜，微量振荡至四甲基偶氮唑盐完全溶解，
于自动酶标读数仪 (&- N>处测定各孔吸光度值。
药物联合作用效应计算：!根据吸光度值计算细
胞存活率，细胞存活率（W）X药物组平均吸光度值 .空
白对照组平均吸光度值T$--W。按文献R)S计算药物抑
制效应，药物抑制率X$’细胞存活率。#将中效方程药
物抑制率 .细胞存活率XAY . Y>B>两边取对数，得 94=A药
物抑制率 .细胞存活率BX94=AY . Y>B>X>94=Y’>94=Y>，设
EX>，8X’>94=Y>，ZX94=A药物抑制率 .细胞存活率B，[X
94=Y，则 ZXE[\8 A其中 Y 为药物剂量，Y> 为中效剂
量，即药物抑制率为 (-W时的药物剂量 !+(-，> 为斜
率，相当于 E，8 为截距B，利用此回归方程计算出白黎
芦醇、(’氟尿嘧啶单独应用及联合应用时的 Y>A!+(-B
R94=Y>X’8 . >S。$先计算出达到各种抑制效应（药物抑
制率X-1$，-1*，-1;，-1,，-1(，-1%，-1&，-1U，-1)）时两种药
物单独应用及联合应用所需的药物剂量（Y）：YXY>
A药物抑制率 .细胞存活率B$ . E，再计算出两种药物联
合应用在各种效应时的合用指数（+!）。结果判断：+!
] $，表示两种药物合用产生协同作用；+!X$，表示两种
药物合用产生相加作用；+! ^ $，表示两种药物合用产
生拮抗作用。
主要观察指标：!白黎芦醇和 (’氟尿嘧啶单用、
联合作用 &* 3时的药物抑制率测定结果。#白黎芦醇
与 (’氟尿嘧啶单用、联合作用 &* 3 时的回归方程及
对 2+&)-$细胞中效剂量的测定结果。
统计学分析：由第一作者采用 C $-1- 软件包
进行处理分析，四甲基偶氮唑盐原始结果以 561 表示，
组间比较行单因素方差分析。
结果
*1$ 白黎芦醇和 (’氟尿嘧啶单用、联合作用 &* 3时对
人胃癌 2+&)-$细胞的抑制情况 随着药物浓度增
加，白黎芦醇、(’氟尿嘧啶单用及联合作用 &* 3 时对
人胃癌 2+&)-$细胞的抑制率均相应增加，见表 $。
*1* 白黎芦醇与 (’氟尿嘧啶单用、联合作用 &* 3
时的回归方程及对人胃癌 2+&)-$ 细胞中效剂量的
测定结果 !白黎芦醇与 (’氟尿嘧啶各自单用时对
2+&)-$ 细胞的中效剂量分别为 $-&1-U >49 . ? 和
$U-1-% >49 . ?；联合用药时为 $);1&, >49 . ?，其中白黎
芦醇为 &$1)U >49 . ?，(’氟尿嘧啶为 $*$1&% >49 . ?；白
黎芦醇单用是合用的 $1,) 倍，(’氟尿嘧啶单用是合用
的 $1,U倍。#对于 2+&)-$细胞，抑制效应大于 -1U(
时 +! ] $，即两药合用时产生协同作用；而抑制效应小
表 $ 白黎芦醇和 (’氟尿嘧啶单用、联合作用 &* 3 时对人胃癌
2+&)-$ 细胞的抑制率 AWB
(’氟尿嘧啶（>49 . ?）
-
*U1,
(%1U
$$;1%
**&1,
,(,1,
&%U1U
%U1%-
’
’
’
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-
*(1(%
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’
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’
’
%)1U(
’
白黎芦醇
（>49 . ?）
!#
于 !#$时 %& ’ (，即两药合用时产生拮抗作用。见表 )。
! 讨论
由胃癌引起的死亡居各种恶性肿瘤的首位，患者
就诊时往往已是中、晚期，对于可行手术切除的胃癌患
者，根治术后影响患者预后的主要因素是术后复发和
转移。除部分早期胃癌手术切除不需辅助抗肿瘤药物
治疗外，绝大多数可切除的胃癌患者需要辅助抗肿瘤
药物治疗，而!期及非根治术后以及术后复发或转移
的患者应用抗肿瘤药物治疗已成为治疗的主要手段。
本实验用四甲基偶氮唑盐法测定白藜芦醇、$*氟尿嘧
啶单用及联合应用对人胃癌细胞株 +,%-.!( 的干预，
以评价白藜芦醇在胃肿瘤抗肿瘤药物治疗中的应用前
景。实验结果显示在体外两种药物很小剂量联合应用
就能达到各自单用且需很大剂量时才能产生的效果，
为白黎芦醇日后应用临床以及减少 $*氟尿嘧啶等常
规抗肿瘤药物的毒副作用提供实验依据。
白黎芦醇是一种广泛存在于葡萄、花生和多种药
用植物中的非黄酮类多酚化合物，目前至少在 )( 个
科、/( 个属的 -) 中植物中被发现0#1。研究显示其药理
作用广泛，主要表现在防治心血管疾病和抗肿瘤作用
上0(2#1。资料显示白黎芦醇是一种天然的肿瘤化学预防
剂，对肿瘤的起始、促进、发展三个阶段均有抑制作用，
能够抗突变、抗氧化、抑制自由基并诱导期药代酶
（抗起始活性）等。综合国内外文献发现，研究白黎芦醇
对胃癌作用的报道以及白黎芦醇与其他抗肿瘤药联合
治疗胃癌的报道较少。
本实验结果显示白黎芦醇对人胃癌细胞株
+,%-.!( 的抑制作用呈明显的剂量依赖性，这与有关
文献报道白黎芦醇对肿瘤细胞抑制作用呈剂量依赖性
是一致的0(!1。实验还发现白黎芦醇3$*氟尿嘧啶对两细
胞株的抑制作用亦呈剂量依赖性。对两株细胞，单用两
种药时中效剂量（-) 4）对 +,%-.!( 细胞分别是：白黎
芦醇 (!-!# #567 8 9、$*氟尿嘧啶 (#!!: #567 8 9，合用
时为 (./-; #567 8 9 <$*氟尿嘧啶 ()(-: #567 8 93 白
黎芦醇 -(.# #567 8 9=，白黎芦醇单用时的剂量是合用
的 (;. 倍，$*氟尿嘧啶单用的剂量是合用的 (;# 倍。
文献报道，白黎芦醇的中效剂量在 ))>(-$ #567 8 9之
间0(!1，本实验结果与文献报道基本一致。提示：合用时
降低了两药各自的剂量，减轻了抗肿瘤药物的副作
用，但抑制效应不变，即两种药物很小剂量联合应用
就能达到各自单用且需很大剂量时才能产生的效果。
这充分说明联合用药的优点是小剂量、高效应，从而使
药物不良反应减少。对于 +,%-.!( 细胞，抑制效应大
于 !#$时 %& ? (，即两药合用时产生协同作用；而抑制
效应小于 !#$时 %& ’ (，即合用时产生拮抗作用。合用
指数表明对于 +,%-.!(细胞，白黎芦醇3$*氟尿嘧啶
都是在低剂量时表现为拮抗作用（%& ’ (），高剂量表
现协同作用（%& ? (）。因此在一定剂量的抗肿瘤药物
治疗中，可以考虑两药联合应用，以减少 $*氟尿嘧啶
等常规抗肿瘤药物的毒副作用，使患者的生活质量得
到提高0((，()1。
参考文献
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赵霞，陆阳，陈泽乃白黎芦醇的化学药理研究进展0W1中草药，(..#，).（()）：
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汤为学，骆云鹏，王瑞雪人实体瘤抗癌药物敏感实验 _@@法的建立0W1重庆
医科大学学报，(..)，(-（$）：(!/*$
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房殿春重视胃癌基因不稳的研究0W1重庆医学，)!!/，/)（.）：(()(*)
朱文钿V张文V赵志毅V等 食道、胃术后早期肠内营养支持对患者康复效果的
影响0W1中国临床康复V)!!/V-<(=R(;:
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表 ) 白黎芦醇与 $2氟尿嘧啶单用、联合作用 -) 4 时的回归方程及对
人胃癌 +,%-.!( 细胞的中效剂量测定结果
组别 回归方程 中效剂量（#567 8 9） 相关系数<‘=
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白藜芦醇治疗组
$2氟尿嘧啶治疗组
药物联合作用组
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