全 文 ：第３３卷第５期
２０１４年１０月
中 国 海 洋 药 物
ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＡＲＩＮＥ　ＤＲＵＧＳ
Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．５
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１４
野生与低盐养殖线性硬毛藻多糖的提取分离
及其理化性质比较研究△
＊
韩现伟，张玉倩，刘丽丽，祝贺，郎银芝，于广利＊
（中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室，山东省糖科学与糖工程重点实验室，
医药学院，山东 青岛２６６００３）
摘　要：目的 从野生和低盐养殖线性硬毛藻（Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ）中提取分离多糖并对其理化性质进行比较
分析。方法 以脱脂后的野生和低盐养殖线性硬毛藻为原料，依次经过冷水和热水提取，得到４种粗多糖
（ＷＣＬＣ、ＷＣＬＨ、ＣＣＬＣ和ＣＣＬＨ）。运用醋酸纤维素薄膜电泳（ＣＡＭＥ）、高效凝胶渗透色谱－多角度激光散
射（ＨＰＧＰＣ－ＭＡＬＬＳ）法、高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）、红外光谱法（ＩＲ）和核磁共振氢谱（１　Ｈ－ＮＭＲ）对其纯度、分
子量、单糖组成和结构特征进行分析。结果 粗多糖 ＷＣＬＣ、ＷＣＬＨ、ＣＣＬＣ和 ＣＣＬＨ 得率分别为２．３％，
１４．３％，３．２％和２６．３％；硫酸基含量分别为１１．４％，１３．０％，９．８％和１１．３％；分子量分别为１２９．５，６０２．３，
６２．８５和４８４．２ｋＤａ。ＣＡＭＥ和 ＨＰＧＰＣ结果显示２种热水提多糖 ＷＣＬＨ和ＣＣＬＨ的纯度较高；ＨＰＬＣ分析
表明，野生藻和低盐养殖藻多糖中主要含有阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖，但后者中葡萄糖含量较高，ＷＣＬＣ中
氨基葡萄糖含量比ＣＣＬＣ的高；１　Ｈ－ＮＭＲ分析表明，所有多糖中阿拉伯糖为β－构型，半乳糖为α－构型。结论
野生和低盐养殖线性硬毛藻多糖主要为硫酸阿拉伯半乳聚糖；低盐养殖线性硬毛藻多糖的硫酸基含量低于
野生线性硬毛藻，但其葡萄糖含量高于野生线性硬毛藻，表明低盐养殖后，不仅降低其硫酸基含量，而且也会
改变多糖中单糖比例。
关键词：线性硬毛藻；硫酸阿拉伯半乳聚糖；提取分离；理化性质比较
中图分类号：Ｒ９３１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００２－３４６１（２０１４）０５－０３１－０６
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｗｉｌｄ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｓａｌｉｎｉｔｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｇｒｅｅｎ
ｓｅａｗｅｅｄｓ　Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ
ＨＡＮ　Ｘｉａｎ－ｗｅｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｙｕ－ｑｉａｎ，ＬＩＵ　Ｌｉ－ｌｉ，ＺＨＵ　Ｈｅ，ＬＡＮＧ　Ｙｉｎ－ｚｈｉ，ＹＵ　Ｇｕａｎｇ－ｌｉ＊
（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｄｒｕｇｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ；Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，
Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６００３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｓａｌｉｎｉｔｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｇｒｅｅｎ
ｓｅａｗｅｅｄｓ　Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ，ａｎｄ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅｉｒ　ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｄｅ－
ｌｉｐｉｄｅｄ　ｗｉｌｄ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｓａｌｉｎｉｔｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｄ　ａｎｄ　ｈｏｔ　ｗａｔｅｒ．Ｆｏｕｒ
ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ｎａｍｅｄ　ＷＣＬＣ，ＷＣＬＨ，ＣＣＬＣ　ａｎｄ　ＣＣＬＨ）ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｉｒ
ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｐｕｒｉｔｙ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ，ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ
＊ △基金项目：国家海洋局公益专项（２０１００５０２４）；国家科技支撑计划（２０１３ＢＡＢ０１Ｂ０２）资助
　作者简介：韩现伟（１９８９－），女，硕士研究生，研究方向：糖化学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈａｎｘｉａｎｗｅｉ１９８９＠１２６．ｃｏｍ
＊通讯作者：于广利，男，教授，研究方向：糖化学与糖药物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｌｙｕ＠ｏｃｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　收稿日期：２０１４－０５－０５
DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2014.05.005
３２　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｆｅａｔｕｒｅｓ，ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｃｅｌｕｌｏｓｅ－ａｃｅｔａｔｅ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＣＡＭＥ），ｈｉｇｈ　ｐｅｒ－
ｆｏｒｍａｎｃｅ　ｇｅｌ　ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍｕｌｔｉａｎｇｌｅ　ｌａｓｅｒ　ｌｉｇｈｔ　ｓｃａｔｔｅｒ（ＨＰＧＰＣ－ＭＡＬＬＳ），ｈｉｇｈ　ｐｅｒ－
ｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ），ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＩＲ）ａｎｄ　ｐｒｏｔｏｎ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｏ－
ｎａｎｃｅ（１　Ｈ－ＮＭＲ）ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｒｕｄｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ＷＣＬＣ，
ＷＣＬＨ，ＣＣＬＣ　ａｎｄ　ＣＣＬＨ　ｗｅｒｅ　２．３％，１４．３％，３．２％ａｎｄ　２６．３％；ｔｈｅｉｒ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　１１．４％，
１３．０％，９．８％ａｎｄ　１１．３％；ｔｈｅｉｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｗｅｒｅ　１２９．５，６０２．３，６２．８５ａｎｄ　４８４．２ｋＤａ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ－
ｌｙ．Ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ＷＣＬＨ　ａｎｄ　ＣＣＬＨ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｈｏｔ　ｗａｔｅｒ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ．Ｔｈｅ
ＨＰＬＣ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｄａｔａ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｌ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ｍａｉｎｌｙ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　ａｒａｂｉｎｏｓｅ，ｇａｌａｃｔｏｓｅ　ａｎｄ　ｇｌｕ－
ｃｏｓｅ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　ａｐｐａｒｅｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ａｌｇａ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　ｔｙｐｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ
ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＷＣＬＣ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ＣＣＬＣ．Ｔｈｅ　１　Ｈ－ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｒａｂｉｎｏｓｅ
ａｎｄ　ｇａｌａｃｔｏｓｅ　ｗｅｒｅβａｎｄαｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｗｉｌｄ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｓａｌｉｎｉｔｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ
Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ａｒａｂｉｎｏ　ｇａｌａｃｔａｎ．Ｔｈｅ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ－
ｒｉｄｅ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｗｉｌｄ
ｔｙｐｅ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｓａｌｉｎｉｔｙ　ｃｏｕｌｄ　ｎｏｔ　ｏｎｌｙ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ，ｂｕｔ　ａｌｓｏ　ｃｈａｎｇｅ　ｔｈｅ
ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ　ｒａｔｉｏｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ；ｓｕｌｆａｔｅｄ　ａｒａｂｉｎｏ　ｇａｌａｃｔａｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
　　线性硬毛藻（Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ）隶属于绿
藻门、刚毛藻目、刚毛藻科、硬毛藻属，广泛分布于
印度东南地区，主要应用于食品、动物饲料和农
业［１］。文献报道，线性硬毛藻用途广泛，其甲醇提
取物具有抗菌和抗氧化的作用［１］，还可吸附水溶
液中的铜离子和锌离子［２］，起到净化水质的作用。
虽然Ｐｅｒｃｉｖａｌ等早在１９７９年发现线性硬毛藻中含
阿拉伯糖和半乳糖［３］，但关于该藻多糖提取分离
及其理化性质的研究还未见报道。
本文以野生和低盐养殖线性硬毛藻为原料，
采用水提方法得到水溶性多糖，并对其理化性质
和单糖组成进行了比较分析，进一步采用红外光
谱和核磁共振氢谱对其结构进行表征。
１　材料与方法
１．１　材料与仪器
野生线性硬毛藻（Ｗｉｌｄ　Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ）
采于２０１３年３月威海荣成天鹅湖；低盐养殖线性
硬毛藻由中国海洋大学水产学院李景玉教授实验
室将野生线性硬毛藻在０．５％的海水（蒸馏水稀释
海水后，盐度计校正）中养殖１个月；藻种由李景
玉教授鉴定。甘露糖（Ｍａｎ）、葡萄糖胺（ＧｌｃＮ）、鼠
李糖（Ｒｈａ）、葡萄糖醛酸（ＧｌｃＡ）、葡萄糖（Ｇｌｃ）、乳
糖（Ｇａｌ）、木糖（Ｘｙｌ）、阿拉伯糖（Ａｒａ）、岩藻糖
（Ｆｕｃ）等，重水（９９．９％）、氘代丙酮（９９．９％）、Ｆｏｌ－
ｌｉｎ－酚试剂、阿利新蓝及标准牛血清白蛋白，美国
Ｓｉｇｍａ公司；乙腈（色谱纯）和甲醇（色谱纯），美国
Ｍｅｒｃｋ公司；其他试剂均为国产分析纯；Ｚｏｒｂａｘ　Ｅ－
ｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ－Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）柱，美国
Ａｇｉｌｅｎｔ公司；ＳｈｏｄｅｘＯＨｐａｋ　ＳＢ　ＨＱ　８０４（８．０ｍｍ×
３００ｍｍ，１０μｍ）柱和ＳｈｏｄｅｘＯＨｐａｋ　ＳＢ　ＨＱ　８０２．５
（８．０ｍｍ×３００ｍｍ，６μｍ）柱，日本昭和电工；ＳＨ－
ＡＣ－１阴离子交换（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，１３μｍ）柱，
青岛盛瀚色谱技术有限公司；醋酸纤维素薄膜
（７ｃｍ×９ｃｍ），北京六一仪器厂；Ｎｉｃｏｌｅｔ　Ｎｅｘｕｓ
４７０型红外光谱仪，美国 Ｔｈｅｒｍｏ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ公司；
ＵＰＣ－９００型 ＫＴＡ　ｐｕｒｉｆｉｅｒ快速蛋白纯化系统，
美国ＧＥ公司；Ａｇｉｌｅｎｔ　１２６０型高效液相色谱仪，
美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司；ＤＡＷＮ　ＨＥＬＥＯＳ　ＩＩ型十八角
度激光散射仪，美国 Ｗｙａｔｔ公司；Ｅｌｘ８０８型酶标
仪，美国Ｂｉｏ－Ｔｅｋ公司；ＣＩＣ１００型离子色谱仪，青
岛盛瀚色谱技术有限公司；ＤＹＹ－ＩＩＩ型电泳槽，北
京六一仪器厂。
１．２　实验方法
１．２．１　粗多糖的提取分离
将野生与低盐养殖线性硬毛藻在４５℃下烘
干、粉碎，然后于７５℃下经８５％乙醇脱脂后，室
温下用蒸馏水提取３次，每次３ｈ，离心后合并上
５期 韩现伟，等：野生与低盐养殖线性硬毛藻多糖的提取分离及其理化性质比较研究 ３３　
清，经浓缩、醇沉、透析和干燥后，分别得到冷水提
取多糖 ＷＣＬＣ和ＣＣＬＣ；残渣继续在８５℃热水中
搅拌提取３次，每次３ｈ，同上操作，得到热水提取
多糖 ＷＣＬＨ和ＣＣＬＨ，经透析袋（ＭＷＣＯ　７０００）
对蒸馏水透析４８ｈ，浓缩冻干［４］。
１．２．２　理化性质分析
总糖含量采用硫酸苯酚法测定［５］，蛋白含量
采用Ｆｏｌｉｎ－酚法测定［６］，硫酸根含量采用离子色谱
法测定［７］。
１．２．３　醋酸纤维素薄膜电泳分析
取１０μＬ浓度为３ｍｇ·Ｌ
－１多糖样品水溶液
于加样槽中，用超级加样器移取０．５μＬ于薄膜上
点样，以０．４７ｍｏｌ·Ｌ－１甲酸－０．１ｍｏｌ·Ｌ－１吡啶
（ｐＨ　３．０）为电泳缓冲液，设定电流７ｍＡ，电泳
２０ｍｉｎ。电泳结束后用０．５％（质量体积比）的阿
利新蓝染色２０ｍｉｎ，再以２％（体积比）的醋酸溶
液脱色［８］。
１．２．４　分子量分析
采用高效凝胶渗透色谱与多角度激光光散射
器联用（ＨＰＧＰＣ－ＭＡＬＬＳ）法［９］进行分子量分析。
将样品用流动相配成３ｍｇ·ｍＬ－１溶液，色谱条
件：色谱柱：ＳＢＨＱ　８０４色谱柱与ＳＢＨＱ　８０２．５色
谱柱串联；流动相：０．１ｍｏｌ·Ｌ－１　Ｎａ２ＳＯ４溶液；流
速：０．６ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温：３５℃；进样量：１００μＬ；
检测器：示差检测器与十八角度激光散射仪联用。
１．２．５　单糖组成分析
称取多糖样品１～２ｍｇ于安瓿瓶中，加入
１ｍＬ浓度为２ｍｏｌ·Ｌ－１的三氟乙酸，封口，１１０℃
水解６ｈ。水解液用氮气吹干，采用ＰＭＰ柱前衍
生方法［１０］分析。色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＸＤＢ－Ｃ１８色谱
柱；流速：１ｍＬ·ｍｉｎ－１；流动相：０．１ｍｏｌ·Ｌ－１磷
酸盐缓冲液（ｐＨ　６．７）－乙腈（８３∶１７，体积比）；进
样量：１０μＬ；柱温：３０℃；检测波长：２４５ｎｍ。
１．２．６　红外光谱分析
将测定样品用Ｐ２Ｏ５干燥４８ｈ，取１～２ｍｇ样
品经ＫＢｒ压片，于４００～４０００ｃｍ－１范围内扫描，
记录红外光谱。
１．２．７　核磁共振氢谱分析
将６０ｍｇ多糖样品溶解于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸
中，７５℃搅拌降解１５ｍｉｎ，用０．２ｍｏｌ·Ｌ－１的氢
氧化钠中和使ｐＨ 至７，加入４倍无水乙醇，醇沉
物用超纯水溶解后旋转蒸发至干，再加入０．５ｍＬ
重水，重复交换３次。最后，用０．５ｍＬ重水溶解
并转移至核磁管中，以氘代丙酮为内标在２５℃下
测定１　Ｈ－ＮＭＲ。
２　结果与讨论
２．１　多糖的提取及其含量分析
野生和低盐养殖线性硬毛藻经８５％乙醇脱脂
后干燥后得到脱脂藻粉。藻粉分别经冷水和热水
提取，从野生和低盐养殖线性硬毛藻中分别得到
多糖 ＷＣＬＣ、ＷＣＬＨ 和ＣＣＬＣ和ＣＣＬＨ，它们的
得率和含量分析见表１。由表１可以看出，野生和
低盐养殖线性硬毛藻的热水提多糖得率均高于冷
水提多糖，其中二者的冷水提多糖得率相近，热水
提多糖得率以人工养殖线性硬毛藻较高；４种粗多
糖的糖含量和蛋白含量分别为５６．２％ ～７２．３％
和２．４％ ～１５．９％，其中以 ＣＣＬＨ 的糖含量最
高、蛋白含量最低；４种粗多糖的硫酸根含量为
９．８０％～１３．０％，其中野生硬毛藻多糖的硫酸基
含量高于养殖硬毛藻，热水提多糖的硫酸基含量
高于冷水提多糖。
表１　野生和低盐养殖硬毛藻多糖得率及理化性质分析
Ｔａｂｌｅ　１ Ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｗｉｌｄ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｓａｌｉｎｉｔｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａｌｉｎｕｍ
多糖
Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
得率ａ
Ｙｉｅｌｄ
糖含量ｂ
Ｓｕｇａｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ
蛋白含量ｃ
Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ
硫酸根含量
Ｓｕｌｆａｔｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ
ＷＣＬＣｄ　 ２．３０　 ５６．２　 ６．６　 １１．４
ＷＣＬＨｅ　 １４．３　 ６２．１　 ６．３　 １３．０
ＣＣＬＣｄ　 ３．２０　 ６８．３　 １５．９　 ９．８０
ＣＣＬＨｅ　 ２６．３　 ７２．３　 ２．４　 １１．３
　　ａ：以脱脂藻粉计；ａ，ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｄｅｆａｔｔｅｄ　ａｌｇａｅ　ｐｏｗｄｅｒ；ｂ：以阿拉伯糖为标准品；ｂ，ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ａｒａｂｉｎｏｓｅ；
　　ｃ：以牛血清白蛋白为标准品；ｃ，ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ；ｄ：冷水提多糖；ｄ，ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｏｌ　ｗａｔｅｒ；
　　ｅ：热水提多糖；ｅ，ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｏｔ　ｗａｔｅｒ．
３４　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
２．２　纯度分析
　　图１（左）１～４分别为 ＷＣＬＣ、ＷＣＬＨ、ＣＣＬＣ、
和ＣＣＬＨ的醋酸纤维素薄膜电泳（ＣＡＭＥ）结果。
由图可见，４种多糖的Ｒｆ值存在差异，即所带电荷
密度不同，其中，热水提取多糖 ＷＣＬＨ 和ＣＣＬＨ
的电泳条带较窄，表明其电荷均一。采用高效凝
胶渗透色谱－多角度激光散射（ＨＰＧＰＣ－ＭＡＬＬＳ）
法对４种多糖的分子量进行测定。由图１（右）及
表２可知，示差信号显示 ＷＣＬＣ中含有３个组分，
ＣＣＬＣ中有２个组分，表明冷水提取多糖 ＷＣＬＣ
和ＣＣＬＣ的纯度较低；热水提取多糖 ＷＣＬＨ 和
ＣＣＬＨ为单一对称峰形，并且其分子量的分布系
数Ｄ接近１，说明其纯度较高。
图１　４种多糖的醋酸纤维素薄膜电泳图（左）及其高效凝胶渗透色谱图（右）
Ｆｉｇ．１　ＣＡＭＥ（ｌｅｆｔ）ａｎｄ　ＨＰＧＰＣ（ｒｉｇｈｔ）ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
表２　４种多糖数均和重均分子量及分子量分布系数
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ－ａｖｅｒａｇｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ（Ｍｎ），ｗｅｉｇｈｔ－ａｖｅｒａｇｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ（Ｍｗ）
ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ（Ｄ）ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
样品
Ｓａｍｐｌｅ
ＷＣＬＣ
１　 ２　 ３
ＷＣＬＨ
ＣＣＬＣ
１　 ２
ＣＣＬＨ
Ｍｎ／ｋＤａ　 ９４８．１　 １２３．２　 ３７．４０　 ５７９．７　 ４７．０４　 ５２．６５　 ４４１．４
Ｍｗ／ｋＤａ　 １２４１　 １２９．５　 ３８．２９　 ６０２．３　 ６２．８５　 ５７．３９　 ４８４．２
Ｄａ １．３０９　 １．０５０　 １．０２４　 １．０３９　 １．３３６　 １．０９０　 １．０９７
　　　　　　ａ，Ｄ＝ Ｍｗ／Ｍｎ．
２．３　单糖组成分析
对比野生与低盐养殖线性硬毛藻的冷水提取
多糖 ＷＣＬＣ和ＣＣＬＣ的单糖组成分析结果可知
（见图２，左），两者均主要含有 Ｇｌｃ、Ｇａｌ、Ａｒａ。其
中，野生硬毛藻多糖中还含有ＧｌｃＮ、Ｒｈａ、ＧａｌＡ和
ＧａｌＮ，单糖组成较复杂。从野生与低盐养殖线性
硬毛藻的热水提取多糖 ＷＣＬＨ 和ＣＣＬＨ 的单糖
组成分析结果可以（见图２，右）看出，两者主要含
有Ａｒａ和Ｇａｌ，还含有少量的Ｇｌｃ、Ｘｙｌ、Ｒｈａ和Ｇｌ－
ｃＡ，且低盐养殖线性硬毛藻中Ｇｌｃ含量显著升高。
因此，海水盐度对线性硬毛藻多糖的单糖组成可能
有较大影响。
５期 韩现伟，等：野生与低盐养殖线性硬毛藻多糖的提取分离及其理化性质比较研究 ３５　
图２　４种多糖的单糖组成分析高效液相色谱图
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
２．４　红外光谱分析
由红外光谱图（见图３）可知，４种多糖在
３　４２５、２　９３４、１　６５５和１　２５０ｃｍ－１处均有吸收峰，
分别是糖环中Ｏ－Ｈ伸缩振动、Ｃ－Ｈ伸缩振动、Ｃ＝
Ｏ伸缩振动和Ｓ＝Ｏ的伸缩振动吸收峰；１　０１０～
１　１００ｃｍ－１之间的３个特征吸收峰为吡喃糖环的
伸缩振动峰。Ｆｅｒｎáｎｄｅｚ等从松藻属中提取的硫
酸化吡喃型阿拉伯聚糖在８５５～８３０ｃｍ－１范围内
有小的吸收峰，推断阿拉伯糖为β构型
［１１］。而红
外光谱结果显示野生与低盐养殖线性硬毛藻多糖
在８２８ｃｍ－１左右均有吸收峰，由此初步判断４种
多糖中的阿拉伯糖均为β构型。
图３　４种多糖的红外光谱图
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ＩＲ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
２．５　核磁共振氢谱分析
对纯度较高的热水提 取 多 糖 ＷＣＬＨ 和
ＣＣＬＨ进一步进行核磁共振氢谱分析，结果如图
所示（见图４）。由图可知，２种多糖的异头氢信号
均集中在δ５．０～５．４之间，且野生线性硬毛藻热
水提多糖 ＷＣＬＨ的异头氢信号更为复杂，表明该
区域的糖残基化学环境存在多样性，这可能与该
多糖有较多的硫酸基取代有关。已有文献报道，β－
Ｌ－吡喃－阿拉伯糖和α－Ｄ－吡喃－半乳糖的异头氢位
移大于５．０［１１－１３］。据此可以判断多糖中阿拉伯糖
为β－构型，半乳糖为α－构型。
３６　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
图４　ＷＣＬＨ（左）和ＣＣＬＨ（右）的核磁共振氢谱图
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　１　Ｈ－ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ＷＣＬＨ （ｌｅｆｔ）ａｎｄ　ＣＣＬＨ（ｒｉｇｈｔ）
３　结论
本文首次对野生和低盐养殖线性硬毛藻多糖
的理化性质进行了系统的研究，采用冷水和热水
提取得到４种粗多糖 ＷＣＬＣ、ＷＣＬＨ、ＣＣＬＣ和
ＣＣＬＨ。理化性质结果表明水环境含盐量影响线
性硬毛藻多糖中硫酸基的含量和单糖组成；
ＣＡＭＥ 和 ＨＰＧＰＣ 结 果 表 明 热 水 提 取 多 糖
ＷＣＬＨ和ＣＣＬＨ的纯度较高；单糖组成分析表明
养殖硬毛藻多糖的 Ｇｌｃ含量高于野生硬毛藻多
糖，而 ＷＣＬＣ中 ＧｌｃＮ的含量高于ＣＣＬＣ；ＩＲ和１
Ｈ－ＮＭＲ结果表明该藻类多糖中的阿拉伯糖和半
乳糖分别为β和α构型。本文首次从野生和低盐
养殖线性硬毛藻中获得硫酸阿拉伯半乳聚糖，虽
然该多糖抗凝血活性较低，但具有良好的促进
ＢａＦ３细胞增殖的活性，其深入的构效关系研究正
在进行。
参考文献
［１］　Ｓｅｎｔｈｉｌｋｕｍａｒ　Ｐ，Ｓｕｄｈａ　Ｓ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃ　Ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｅａｗｅｅｄ　Ｃｈａｅｔｏ－
ｍｏｒｐｈａ　ｌｉｎｕｍ　Ｆｒｏｍ　Ｇｕｌｆ　ｏｆ　Ｍａｎｎａｒ：Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ　Ｃｏａｓｔ　ｏｆ　Ｉｎ－
ｄｉａ［Ｊ］．Ｊｕｎｄｉｓｈａｐｕｒ　Ｊ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１２，５（２）：４１１－４１５．
［２］　Ａｊａｂｉ　Ｌ　Ｃ，Ｃｈｏｕｂａ　Ｌ．Ｂｉｏｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｕ２＋ａｎｄ　Ｚｎ２＋ｆｒｏｍ
ａｑｕｅｏｕｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ｂｙ　ｄｒｉｅｄ　ｍａｒｉｎｅ　ｇｒｅｅｎ　ｍａｃｒｏａｌｇａ　Ｃｈａｅｔｏ－
ｍｏｒｐｈａ　ｌｉｎｕｍ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍａｎａｇｅ，２００９，９０（１１）：
３４８５－３４８９．
［３］　Ｐｅｒｃｉｖａｌ　Ｅ．Ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｏｆ　ｇｒｅｅｎ，ｒｅｄ　ａｎｄ　ｂｒｏｗｎ
ｓｅａｗｅｅｄｓ：ｔｈｅｉｒ　ｂａｓｉｃ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ
［Ｊ］．Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｐｈｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｊ，１９７９，１４（２）：１０３－１１７．
［４］　Ｙｕ　Ｇ，Ｙａｎｇ　Ｂ，Ｒｅｎ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ
ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｆｕｒｃｅｌａｒｉａ　ｌｕｍ－
ｂｒｉｃａｌｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖ　Ｃｈｉｎａ，２００７，６（１）：１６－２０．
［５］　Ｄｕｂｏｉｓ　Ｍ，Ｇｉｌｅｓ　Ｋ　Ａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ　Ｊ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ
ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｇａｒｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ
［Ｊ］．Ａｎａｌ　Ｃｈｅｍ，１９５６，２８（３）：３５０－３５６．
［６］　Ｌｏｗｒｙ　Ｏ　Ｈ，Ｒｏｓｅｂｒｏｕｇｈ　Ｎ　Ｊ，Ｆａｒｒ　Ａ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｆｏｌｉｎ　ｐｈｅｎｏｌ　ｒｅａｇｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ
Ｃｈｅｍ，１９５１，１９３（１）：２６５－２７５．
［７］　马心英．利用离子色谱测定海带硫酸多糖中硫酸根的含量
［Ｊ］．曲阜师范大学学报（自然科学版），２００２，２８（２）：８４－
８６．
［８］　王皓，于广利，赵峡，等．污染肝素中多硫酸化硫酸软骨素的
分步醋酸纤维素薄膜电泳分析［Ｊ］．分析化学，２００９，３７
（８）：１１４７－１１５１．
［９］　李广生，赵峡，郝翠，等．不同方法对寡聚甘露糖醛酸铬配合
物分子量测定的影响［Ｊ］．中国海洋药物，２０１４，３３（１）：６－
１０．
［１０］　张惟杰．糖复合物生化研究技术［Ｍ］杭州：浙江大学出版
社，１９９４：３８－４０．
［１１］　Ｆｅｒｎáｎｄｅｚ　Ｐ　Ｖ，Ｑｕｉｎｔａｎａ　Ｉ，Ｃｅｒｅｚｏ　Ａ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｃｏａｇｕ－
ｌａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｕｎｉｑｕｅ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｐｙｒａｎｏｓｉｃ（１→３）－β－Ｌ－ａｒａ－
ｂｉｎａｎ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｄｉｒｅｃｔ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｒｏｍｂｉｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ
Ｃｈｅｍ，２０１３，２８８（１）：２２３－２３３．
［１２］　刘玉红，王凤山．核磁共振波谱法在多糖结构分析中的应
用［Ｊ］．食品与药品，２００７，９（０８Ａ）：３９－４３．
［１３］　Ｓａｓｓａｋｉ　Ｇ　Ｌ，Ｇｕｅｒｒｉｎｉ　Ｍ，Ｓｅｒｒａｔｏ　Ｒ　Ｖ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａ－
ｒｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｙｃａｎｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　Ｑ－ＨＳＱＣ　ＮＭＲ［Ｊ］．
Ｃａｒｂｏｈｙｄ　Ｐｏｌｙｍ，２０１３．