全 文 :19 89年第 2期
烟台大学学报 (自然科学与工程版 )
J o uz n目 o f Y an面 U n i v e r s: ty( N a ru目 灰 lo n e e a n d E n印 n e c r小 8 ) N o. 2 ]9 8 9
海洋浮游单胞藻在海产动物育苗中
生产性培养新方法的试验研究
宋志乐 赵玉 山
(山东省烟台市芝罕区水产局 )
摘 要
本文提 出 了一种在中继 培养以后 .以 l: l接种不施 肥培 养的新方法 .此法能 在两天 内培养出
育苗生产所要求的高浓度饵料液 ,饵料液的狱氮含量及三态氮总量较常规培养分别降低 约 70 倍及
10 倍 . 可节省营养盐用量 50 洲 . 此法适用于 目前北方常用的几种海洋浮游单胞藻 。
关键词 : 海洋浮游单胞藻 饵料培养方法 海产动物育苗
前 百
海洋浮游单胞藻是海产动物幼虫 : 体 ’ 鱿主要饵料 。 其常规培养方法 一 ` · 月 · ’ 二自五十年代一直
延用至 今 。 用这种方法培养出的饵料液其余氮 `剩余营养盐中的氮 夕高达 10 0。。。 g /叫 左右 . 以
硝酸按为氮肥时 , 饵料液的氨氮含量高达 10 0、 g /ml 以上 。
氨氮对海产动物幼虫 `体 )尤其是双壳类是有毒害 洋用的 。 饵料液中残存 N H , 氮的毒害是
目前海产动物人工育苗生产中令人担 心的问题之一 。 近年来 , 不少学者为提高少、 工育苗效果 ,
在加强对幼虫 (体 )的培育管理研究的同时 , 对饵料性单胞藻新种类的开发 、 培养 、 饵料效果以
及投饵量等进行了研究 ,并取得了一定的效果 二’ · ’ , ` , 5 · “ 〕。 但是 . 如何从生产性培养方法上进行改
进 , 以减少培育池水的氨含量 . 迄今尚未见有报导 。
为了培养出新鲜高密度且氨浓度低的 饵料液 , 作者于 1 98 4 年至 19 87 年对国内几种常用
的海洋浮游单胞藻的生产性培养方法进行 了研究 。
村料与方法
l 单 胞 藻 试 验 用 单 胞 藻 的 种 类 有 小球 藻 ( c M卯尸如 印 , . ) 、 亚 心 形 扁 藻 (网护~及心力从汀叻矛如 ) 、 新月菱形藻 (万“勿叻自 “ 山血” ` 刀 ) 、 三角褐指藻 (乃勿戌` 叱亡咖。 ,洲记口 , 别勿们 ) 、 球等鞭金藻
(饭兀分卿 笋么加刀 )和异胶藻 (万` 汗咖脚 印 . ) . 这些藻种皆取 自烟台市水产研究所 , 经常规大量培
养后 ,进行生产性试验 。
2 试剂及分析方法 使 用 N H’ N 0 3 、 K H ZP O ; 、 eF C 6 sH o , 作为单 胞 藻培养 液的营养盐 ; 使 用
K从。 ; 作为消毒剂 , 所用试剂以及用 于分析单胞藻样液及水样中 卜o ,一 N 、 N 0 2一 N 、 N H 3一 N 含
量的有关化学试剂均为分析纯级 。
收稿 日期 : 19 8 8 年 10 月 2 8 日
DOI : 10. 13951 /j . cnki . 37 -1213 /n. 1989. 02. 013
表 l、试验设计武 接 种 比 施 肥 量l I : l常规全 t施肥
2 l
:
l不施肥
3 1
.
3常规全量施肥
4 I
:
3不施肥
浓度
(
u g
/一 L
万木 c/ .曰
1吸 0 0 0
!20几 0
t弓叮 0 0
日 0 0 0
气口 }〕 J〕
、 ·之
、 C :一 、
_
,一 \ ·飞二
叹0 息1 0
2 00 0
以磺胺一蔡乙 二胺比色法测定 从 ) ,一 N ; 以
锌福还原法测定 N o :一 N ,以次氯酸盐氧化法测定
N H 。一 N . 用血球计数板测定单胞藻的密度 。 单胞
藻培养池为 2 . sm 又 l , o m 义 o . sn 飞的水泥池 ,
3
、 试验方法 取常规培养的供投喂 的饵料液 (停
肥 3 天 )作藻种 , 按表 1 设置 四个试验组 , 分别在
2
.
s m 义 1 . o m 义 0 . sm 的培养池中培养 ,且进行两
次重复试 验 。 常规 全量 施 肥组 扩加 培 养 液含
N H ; N o : 5 0 P P M ( 含 氮 17 . s m s / l ) , K H ZP o ;
S P PM
,
F e e , H so 7 0
.
S P P M 巨,〕 。 不施肥组 ,扩加培养
液为过滤海水 。
培养试验于每年五至六月份在饵
料室内进行 。以 自然光为光源 。 中
午水表面平均光强 为 1 3 0 0 LXu 。
海 水 盐 度 29 一 30 %。 , PH 值 为
7
.
9
, 硝酸氮 、亚 硝酸氮和按氮总
含 t 为 5 0 . 5 0 5/ 1 . 硅藻类培养水
温为 10 一 2 ℃ , 其它藻类为 10 一
29 ℃ 。 采用一次性接种扩培的方
法 . 以 后不再迫加培 养液 ,用木耙
人工搅池 。 所用器具均用 K N山。 。
严格消毒 。
在此六种藻中我们选择扁藻
0
圈 1 . 异胶蕊
2 1 佗 弓 ` 7 夭 数
接种施肥组细袍总 .N N O : 一 N 及 N H , 一 N 的变化
浓度
(
u
g
/ , t
万个口 . 日
性0 0 0 外
3 0口0
二U U日
及异胶藻 , 从接种开始 .连续五天
以上 测定 各试验 组的藻 细胞密
度 , N H : 一 N 、 N o : 一 N 和 N o : 一 N
的消长情况 。 为了避免藻种液 (常
规培 养供 投喂 饵料液停肥三天 )
的顺粒 和颜色影 响三态氮的分
析 , 测定前向祥液加入明矾母液
( 样液 明矾浓度 为 0 . 3%。 ) , 摇匀
沉淀 2 小时 ,取上清液进行分析 。
以加明矾水样 , 不加明矾水样及
藻种液为对照 。
`
! 0 0 0 二 、 结 果
天 致
图 2 . 异胶蕊 l : l接种不施肥组细施总 N . N。 : 一 N 及 N H 3一 N 的变化
8 2
试验结果见表 2 、表 3 、 表 4
和图 l一 4 . 从表图可以看出 :
浓度
(
u, / . t
万个 〔 , t )
1 6 On O
1性UO日
\ 息刀
、 、
\一…匕队lù卿ù盼
才勺口J \ 、
.一一一 、 、 、 之 一 、
天 数
图 3 . 异胶藻 : : 3接种施肥细胞总
N
.
N 0
3一 、 及 入 H: 一 N 的变化
, ” 0 Ok坟少
1 0 0 0
0 1 2
一
3
`
5 天数
图 4 . 异胶蔑 1 : 3接种不施肥组细胞
总 N . N O : 一 N 及 N H ,一 N 的变化
1 1
, 1接种常规施肥组 及不施肥组
的六种单胞藻 ,其生长速度基本一致 . 以第
一天 为 最 快 ( 常 规 施 肥 组 : 47 . 68 % 一
68
.
20 % ; 不施肥组 : 41 . 48 % 一 7 3 . 68 % ) ,
以后生长速度逐渐下降 。 在前两天内细胞
密度都增长了一倍以上 , 达到藻种液扩培
前的密度 , 即供投喂密度 。 但不施肥组生长
滞缓出现的时间较 常规 施肥组提前 l一 2
天 。 藻细胞的最大密度也较 常规施肥组
低 。
2 1 , 3 接种 常规施肥组的 六种单胞藻 .
生长速度不尽相同 。 小球藻 、 三角褐指藻 、
小新月菱藻和扁藻的生长速度以第一天为
快 ( 71 . 62 % 一 ] 1 0 . 0 % ) , 以后稍缓 。 球等
鞭金藻和异胶藻 . 最快的生长速度出现在
接种后的第三天 , 生长滞缓出现的时间较
晚需 J 一 5 天细胞密度方能达到种藻液扩
培前的密度 。 扁藻和异胶藻液 ,总氮含量很
高 ,接种时高达 1 5 0 0 0 0 5 / m l 以上 . 以 后下
降 速 度 也 很 慢 , 培 养 五 天 后 才 降 至
1 0 0 0 0拼g , `m l 左右 。
l , 3 接种不施肥组的六种单胞藻 , 除
异胶藻外 . 生长速度亦以第一天为最快 , 以
后 几天生长缓慢 。 但本组的各种藻类的生
长滞缓出现的时间 ,较前三组普遍提前 。在
实验期内细胞密度未曾达到供投喂水平 。
3 在 l , 1接种常规施肥组的扁藻和异胶
藻试验组 . 总、 氮减少以第三天幅度最大 , 但
培养到 第四天营养液总氮含量还分别高于
7 1 7 0、 g / m l 和 6 8 3 6。 ; / m l 。 在不施肥组中总
氮含量开 始便大幅度下降 ,接种后第二天
便分别降至 8 8 9“ g / m z和 9 7 20 9 / m l ,且 N o ,
氮 , N H 3 氮都呈急剧下降状态 。
在 1 : 3 接种常规施肥 的扁藻和异胶
藻 液 中 , 总 氮 含 量 很 高 , 接 种 时 高达
15 0 0 Do g /ml 以上 , 下降速 度很慢 , 培养五
天后仍高达 1 0 0 0 0“ g /而 左右 。 而不施肥组
接种时 的总氮含量很低 , 只有 2 0 8 6咚 /mI
和 1 8 9 8协s / m l , 经 三天 的培 养 , 就 消 耗到
2 0 2件g / m l 和 2 4 3件g / m l 。 其中 N H 3一 N 消
表 2部分种类各试驴组藻细胞生长繁殖情况
单位 :万个纭 抢 ,耐 , % 日
诀卜汾派 接种时 1 2 3 4 5 6
, 创 \ \ \ \ \ 飞
1
:
l 常 小球藻 C 们 2 6 9 3 9 08 1 13 7 1 2 58 1 2 96
接 规
种 施 V 68 . 2 0 3 1、 0 2 2 4 . 6 3 10 . 7 0 3 . 10肥 月三角褐藻 C 1 5 1 2 2 3 3 17 3 4 1 3 5 4 36 0
V
4 7
,
6 8 42
.
15 7
.
5 7 3
。
8 1 1
.
6 9
新月菱形藻 C 1 47 } 2 3 3 32 1 {, 3 30 4 3 5 4 5 6
V 「不淤丽一 3 7 . 7 7 2 1 . 5 0 1 1 . 5刁 } 4 . 8 2
球等鞭金藻 C 5 16 8 4 1 1 15 2 1 38 3 15日0 1毛3 8
V 6 2
。
9 8 3 6
.
9 8 20
.
0 5 1 4
.
9 7 3
。
0 2
不 小球藻 C 40 9 6 9 7 8 8 1 10 2 8 1 0 9 4
施 ·
肥 V 7 0 . 4 2 2 6 . 4 0 16 . 6 9 6 . 4 2
三 角褐藻 C 15 2 2 15 3 0 8 3 2 4 !3 3日
V 4 1
、
4 8 4 3
,
2 6 5
.
19 4
.
6 3
新 月菱形藻 C 14 7 2 4 3 3 17 3 6 2 3 7 4
V 6 5
.
3 1 3 0
.
4 5 1 4
.
2 0 3
.
3 1
球 等鞭 公茨 C 5 13 8 6 1 l ! 5 3 1 3 16 14 0 弓
V 6 7
.
8 4 3 3
.
9 1 1 1
.
1 4 6
.
8 4
l 一 3 常 小球藻 C 19 8 3 7 7 5 0 2 G 38 7 14 7 8 3 8 2 6
接 规
种 施 V 9 0 . 4 0 3 3 . 1旧 27 . 0 9 , 9 . 6 6 5 . 49肥 1 1 . 9 1 {
三角揭藻 C 8 0 1 4 7 2 4 5 2 9 3 32 4 3 4 6 3 72
V 8 3
.
7 5 6 6
. 任了 19 . 5 9 1 0 . 5 8 6 . 7 9 7 . 5 1
新 月菱形藻 C 7 4 1 27 19 8 2 3 2 26 5 3 0 4 3 35
V 7 1
.
6 2 5 5 9 1 17
、
[ 7 1 4
.
2 2 1 4
.
7 2 10
.
2 e
球等鞭金藻 C 2 5 7 3 6 1 5 4 0 8 5 4 1 17 9 1 3 5弓 1 4 77
V 4 0
.
4 7 4 9
.
58 5 8
.
15 38
.
0 6 15
.
0 1 8
.
9 2
不 小球藻 C 】9 8 3 6 2 4 6】 5 3 0 5 5 2
施
肥 V 82 . 8 3 2 7 . 3 5 14 . 9 7 4 1 5 一
三 角褐藻 兀一 ] 7 8 1 3 3 15 7 16 4
V 7 0
.
5 1 18
.
0 5 4 4 7
新月菱形藻 C 7 4 1 1 0 1 4 2 15 6 16 1
V
48
.
6 5 2 9
.
0 9 9
。
8 6 3
.
2 1
球等报金藻 C l —5 9 4 19 4 6 2 4 8 03 4 4
V
32 8 2 2 !
.
8 0 1 0 2弓 3 . 9 0
注 : C一细胞个数 . v — 每 日繁 敌 q 乙牧 ; 救据为三次试验 平均 教 .
. 口 . 曰
d `
8李
表 3扁藻各试驻组三氮含量及细胞生长繁殖情况
单位 :咯 /m一, 万个细胞 /m一, % /「l
月. . . .
介钾
,朴龚义 接种时 l 2 3 4 5l : l 常 ` N 0 3一 N 7 6 9 4 7 8 3 9 7 89 8 7 13 4 6 7 9 4
接 规
种 施 . N 0 2一 N 6 9 6 1 59 6 l 6 8
肥 .
N H -一 N 5 2 1 2 4 12 7 2 36 1 9 8 6 3 0 8
总 N 1 2 9 75 12 0 3 7 1 03 ] 8 8 18 1 7 17 0
总 N 减少 9 4 8 1 7 19 2 13 7 1 0 11
藻细胞 l 8 2 9 4 0 4 8 5 0 附壁
生长速度 6 1 . 11 3 7 . 4 3 2 0 . 0 0 4 . 17
不 N 0 3一 N 3 47 0 1 3 5 7 7 0 2 4 5 7 3 1 1
施
肥 N O ,一 N 7 3 1 0 8 13 6 9 4 3 5
N H
礴一 N 47 3 12 1 5 l 8 6
总 N 4 0 16 15 8 6 8 8 9 5 5 9 3 5 2
总 N 减少 2 4 3 0 6 9 7 3 3 0 2 0 7
藻细胞 l 9 3 3 3 9 . 3 4 6 始附壁
生 长速度 7 3 . 6 8 1 9 . 09 17 . 05
l : 3 常 N 0 3一 N 8 7 4 1 8 9 0 2 9 ? 14 8 14 7 79 3 8 77 1 4
接 规 ’
种 施 N 0 2一 N 5 3 5 6 69 5 l 7 4 1 03
肥
N H刁一 N 7 4 6 2 6 3 9 8 5 12 6 3 8 6 8 2 5 0 1 2 0 ) ]
总 N 1 6 2 5 6 1 5 3 56 14 4 0 9 1 2 0 6 6 1 05 1 3 98 28
总 N 减 少 9 0 0 9 4 7 2 3 4 3 1 5 5 3 6 85
藻细胞 l O 2 l ? 8 4 4 5 1 5 3
生长速度 1 1 0 . QO 3 3 . 3 3 5 7 。 14 15 。 9 1 3。 9 2
不 N 0 3一 N 17 7 3 4 8 7 2 3 2 14 4
施
肥 N O ?一 N 6 2 8 l 9 7 5 8
N H 刁一 N 2 5 1 8 4 0
总 N 2 0 8 6 5 7 6 3 3 3 2 0 2
总 N 减少 15 10 2 4 3 1 3 1
藻细胞 l 0 2 0 2 5 2 8 下沉
生 长速度 1 00 . 0 0 2 5 . 0 0 1 2 。 0 0子
~ 、 二 ~ 。 止 ~ ` 叻“ 布 一 ~ 2 1吐 : 衣甲狱 幻店刀 .咐 认石氏扳 廿 J卞工 日袱 。 ,
8 5
表 4异胶藻各试验组三氮含量及细胞生长策殖情况
单 位 唱 ` ml .万 个细弛 n ` l , % z [J
\ 辛运
接种时 1 2 3 4 5 6 7
}
}
l : l 常 、 0 3一 N 7 6 3 1 78 6 2 7 98 5 7 0 12 6 3 4 0 6 2 13 6 0 2 5
接 规
仲 粼 N O 了一 、 7 8 5 7 58 6 3 7 6 8 7 13 7
…
N H ,一 、 5 14 0 39 石5 2 5 29 【〕 9 0 4 2 0 18 5 4 2
总 习 12 8 4 9 l 】8 8 4 10 5 7 2 8 165 6 8 36 6 4 8 5 6 2 0 4
总、 、 减 少 96 5 】3 1 2 2 4 07 13 29 3 5 1 2 8 1
藻细胞 9 I R 1 4 7 9 2 0 4 0 2 4 4 R 2 8 30 29 2 8 3 0 7 5
生长速度 6 1 . 11 37 . 9 3 2 0 , 0 0 15 , 6 0 3 . 46 5 . 02
不 N O ,一 N 3 3 5 0 14 8 5 78 3 48 1 3 4 7 2 06
施
…肥 …N O Z一 N 8 4 12 2 15 4 10 9 4 I 8
` !
N H 4一 、 4 4 0 13 2 3 4 6 2 3
总 、 3 8 7 4 17 3 9 97 1 5 9 6 3 9 0 2 17
总, , 减少 2 1 2 5 7 6 9 3 7 5 2 0弓 1 7 3
藻细胞 9 6 9 】68 0 2 0 0 4 2 3 8 6 2 4 7 9 2 5 3 2 渐黄
`仁长速度 7 3 . 37 } 9 . 2 9 一 } 3 . 。弓 3 . 3 0 卫. 14
}
1 : 3 常 、 O 月一 、 8 1 8 5 1 8 40 0 知沁 一 弓2 7 4 1 3 一 ,。 8 0 0仓 7 9已5 7 9 4 7
接 规 l l
种 拖
祀 、 0 2一 、 3 7 柔4 产一 一 一 4 6 … 9 8 !朽 一
l 一 1 6 9 3 )
;一 5 5了 8 4 14 7 2了3 5 2 2 G5 l弓4 5 13 3 01 N H , 一 勺广一一— 15 1 5 2 14 8弓5 14 6 7 3 ! 2 4 6 7 { 09 8 5 10 3 0 5 9 下25 9 3 7 0{ 总 、总 N 减少 2 5 7 q , 邝 2卫0 6 1 4 8 2 6 8 0 58 e 3 5 5
藻细咆 55 C 6 7 5 8 ! 5 12 0 0 17 16 2 2 3 3 2 7 5 0 3 3 6 8
尘长速空 2 2 . 7 3 Z C . 7 4 47 . 2 1 43 . 0 0 3 0 . 13 2 3 . 1 5 2 2 4 7
不 N O 飞一 、 16 3 a 8 9? 4 10 17 0 4 7 8
施
肥 、 0 2一 污 4 7 7 2 9 9 7 3 2 0 6
N H : 一 、 2 13 】I 3 0
总 N 18 9 8 97 5 5 1 2 2 4 3 6 7 l 4
总 N 减少 9 2 3 46 3 2 6 3 17 6 5 3
藻细袍 55 0 6 13 82 5 108 3 12 2 8 1 3 0 5
生长速度 1 1 . 4 5 3 4 . 5 8 3 1 . 2 7 13 . 3 9 6 . 27 浅黄
注 : 表巾 数据 为两次试验的平均数
,
曰 . .甩
叫明
只 6
耗怠尽 。 表现出营养不足 。
三 、 讨 .论
1从实验结果来看 , 以 l : 1接种的两组试验 , 扩大培养两天 , 细胞密度都增加了一倍以上 ,达
到了接种前的藻种密度 (供投喂密度 ) 。 以 l : 3 接种的两组试验 , 扩大培养两天 , 细胞密度也
大都能增加一倍以上 。 但达到投喂密度施肥组需四天以上 , 不施肥组则生长不到这个密度便生
长停滞甚至死亡 。 l : 3接种的培养周期至少比 1 : l 接种的长一倍以上 , 这不仅降低了饵料室
的生产能力 , 而且在长时间的生产性培养期间很容易发生敌害生物的 污染 。 因此 , l : 1接种的
生产性培养方法 . 从生 产可投喂密度藻液所需的时间及藻液总氮含量低的角度上看 ,较 1 : 3
接种更为适宜 。
2 培养液中路呈现 富营养状态是有利于 藻类的生长繁殖的 。 但三氮含量高对育苗不利 . 据徐
应馥工等 ( 19 8田试验 , 认为 N H ; 一卜 对栉孔扇贝幼虫的安全浓度在 2 0 昭 /而 以下 . 汪心沉 t,]
等 ( 19 8 5) 认为 , N H ; 一 N 对牡妮幼虫的 E C : 值为 8 5 0阳 ,l/ 。 投喂常规饵料时 ,幼虫 (体 )培育池的
N H一 N 含量一般在 刊一 6 0 0阳 ,l/ 之间 ,也有时高达 90 0昭 l/ . 而使用 l : l 接种不施肥的生产
性培养方法培养饵料单胞藻时 ,两天后三氮总含量即可降到 90 0阳 /而 为 1 : 1 常规施肥组含
量的 l八 0 。 幼虫 (体 )培育池的 N H ; 一 N 含量 只有 2 . 8一 5 . 0 0 5,/ 1。 这种含量与一般海水相接近 .
因而是没有氨毒的 , 因此 , 使 用 1 : 1接种不施肥的生产性培养单胞藻劫方法 , 不仅可以消除
饵料液中的 、 H ; 一 N 对幼虫 `体 )的毒害 ,而且可以节省 50 多百的营养盐 用量 : 这对海产动物育
苗生产是很有意义的 :
3 1 9 8 5 年至 1 9 8丁年 , 作者使 用 ! : l 不施肥法培养以上几种单咆藻 洱料 , 在栉孔扇 贝 、 海湾
扇贝和虾夷 扇贝的少、 工育苗中 . 收到了良好的效果 。这种方法不仪能够在短对期内得到高密度
的新鲜饵料 ,无氨毒 . 同时也降低了饵料单胞藻的生产成本 . 在海产动物人工育苗生产中是行
之有效的 。
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A BS T R A C I
A st r u e t r u e m川 e l o r a d ist r i b众司 k n o w一司 g e bsae s y s te m o KBS / T H一 1 w sa in t r侧 u e e d an d t h e
e o m b i n a t i o n比 t w e e n P r o l o g a n d th e r e l a t io n a l d a t a bsae s y s t e m w a s d is e u, 沁 d
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P r o b le m o f o P t im i z a t i o n
w韶 d i s e u s s e d a l so .
K即 w o r d : K刃 o w l e d g e ab s e s y “ e m . D a t a ab se s y s t e m . P R O L O G . D i s t r i b “ t de 加` e ` y s te m .
H o r n o la u ` e
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.日 . 口口
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A N e w M e t h od
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u e i n g U n ie e l l u la r A l g a l C u l t u r e
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S o n g Z h i l e Z h a o Y u s h a n
( A q以 ti e P rod u比 B u rca u o r z 加 f u D ist r i e t 、 · a n如 S加川 d o n g )
A卫S T R A C T
A n e w m e th de
o f m as 讲目 u e t i o n o f a l g a e f cx川 f o r l a vr a l r` 甘 i n s w i t h l : 1 i n oc u la t ion r a ti o ,
w i t h o u t fe rt i l i z e r h as 比e n p u t f o r w ar d . u s i n g t h is m e t h川 2 d a y s w e r e e n o u 吕h f o r 讲od u c nU g a las l
c u lt u r e f o r fe 曰 i n s P u r D〔 ` e . hT e e o n t e n t o f N H一 N a n d t h e t o at I N 一 c o n te n t o f t h is a lga l e u lt ur e
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K e y w o 八七 : M a r in e u n i e e U u一a r . 1 , e . 月 , 一 f o《刁 e lu t u比 U vr a l er ar in . lO m冲 r让比 in v ert e b r a t。 ·
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