全 文 ：2008年 10 月　第 10 卷　第 10 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Oct.2008　Vol.10　No.10
[ 通讯作者] 　＊张春丽 , E-mail:zhangcl@sinopharmtcm.com
浙贝母药材中贝母素甲含量
的测定方法比较研究
孙国英 , 殷米来 , 李秋怡 , 张春丽＊ , 黄超
(国药控股深圳中药有限公司 ,广东　深圳　518029)
[ 摘要] 目的:比较高效液相色谱法与薄层色谱扫描法测定浙贝母药材中贝母素甲含量的结果差异。方法:分
别采用 2种方法测定浙贝母中贝母素甲的含量 , 比较 2 种方法对测定结果的精密性与准确性及对不同批药材测定结
果的差异。结果:通过方法比较 , 采用高效液相色谱法测定结果的精密性与准确性均较好 , 且采用高效液相色谱法
测定结果偏高。结论:采用高效液相色谱法测定能更好地控制本品质量。
[ 关键词] 浙贝母;贝母素甲;高效液相色谱法;薄层色谱扫描法
浙贝母为百合科植物浙贝母 F ri ti l laria thun-
bergii M iq.的干燥鳞茎 , 具有清热散结 、 化痰止咳
的功能[ 1] 。浙贝母含量测定方法在 2000年版 《中国
药典》 中并未收载 , 在 2005年版 《中国药典》 中采
用高效液相色谱法对其进行贝母素甲的含量测定 ,
在 2005年版 《中国药典》 执行前 , 有研究单位采用
薄层色谱扫描的方法对其进行含量测定 , 本文旨在
对 2种方法的测定结果进行比较研究。
1　仪器与试药
1.1 仪器
Aglient 1200HPLC , All tech 3300ELSD , Shi-
madzu 9301 薄层扫描仪 , Sa rto rius BP-211D 电子
天平 。
1.2 样品与试剂
浙贝母药材(购至甘肃陇源药材有限公司 ,经深
圳市药检所中药室熊英主任鉴定为百合科植物浙贝
母 Frit i llaria thunbergi i Miq.的干燥鳞茎);贝母
素甲(购至中国药品生物制品检定所 ,批号 110750-
200506);乙腈(Merck 公司 ,色谱纯);重蒸水(自
制);其他试剂均为分析纯。
2　实验方法和结果
2.1 薄层色谱扫描法[ 2-3]
取浙贝母药材粉末(过四号筛)2g , 精密称定 , 置
烧瓶中 , 加浓氨试液 4mL 浸润 1h , 精密加入三氯甲
烷-甲醇(4∶1)混合溶液 40mL , 混匀 , 置 80℃水浴中
加热回流 2h , 滤过 , 滤渣用上述混合溶液洗涤 2次 ,
每次 10mL , 洗液并入滤液中 , 蒸干 , 残渣加三氯甲
烷溶解并定容至 2mL , 作为供试品溶液。另取贝母素
甲对照品 , 加三氯甲烷制成每 0.8mg·mL-1的溶液 ,
作为对照品溶液。照薄层色谱法[ 4] 试验 , 吸取供试品
溶液 4μL , 对照品溶液 4 , 6μL , 分别点于同一用 2%
氢氧化钠溶液制备的硅胶 G薄层板上 , 以醋酸乙酯-
甲醇-浓氨(22∶2∶5)放置分层后的上层溶液为展开剂 ,
展开 , 取出 , 晾干 , 喷以碘化铋钾试液至斑点显色清
晰 , 立即在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板 , 周围用
胶布固定 , 照薄层色谱法[ 4] 进行扫描 , 波长:λS =
525nm , λR =700nm , 测定供试品吸收度积分值与对
照品吸收度积分值 , 用外标两点法计算 , 即得 。薄层
图谱见图 1。
图 1　薄层扫描测定浙贝母药材中贝母素甲的 TLC图
2.1.1样品测定重复性
取浙贝母药材 , 照上述薄层色谱扫描法平行制
备 6份供试品溶液 , 测定其贝母素甲的含量分别为
0.75 , 0.72 , 0.73 , 0.66 , 0.68 , 0.71mg·g-1 , 平
均含量 0.71 mg·g -1 , RSD为 4.67%。
2.1.2加样回收试验
取 2.1.1中同批浙贝母药材 1.0g , 加入贝母素
甲对照品适量 , 按 2.1中的方法制备加样供试品溶
液 , 用薄层扫描法测定回收率 , 结果见表 1。
2.2 高效液相色谱法[ 1]
2.2.1色谱条件及系统适应性试验　以十八烷基硅
烷键 合 硅 胶 为 填 充 剂 , 以 乙 腈-水-二 乙 胺
(70∶30∶0.3)为流动相 , 蒸发光散射检测器。理论
·31·
DOI :10.13313/j.issn.1673-4890.2008.10.010
2008年 10 月　第 10 卷　第 10 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Oct.2008　Vol.10　No.10
塔板数按贝母素甲峰计算应不低于 2 000。
2.2.2对照品溶液制备　精密称取贝母素甲对照品 ,
加甲醇制成含贝母素甲 0.2mg·mL-1的溶液 , 即得 。
表 1　薄层扫描法测定浙贝母中贝母素甲
含量加样回收率结果
加入量/
mg
测得量/
mg
测定结果/
%
平均回收率/
% RSD/ %
0.40 0.381 95.3
0.40 0.386 96.5
0.40 0.376 94.1
0.40 0.401 100.3
0.40 0.370 92.4
0.40 0.397 99.2
96.3 3.13
2.2.3供试品溶液制备　取浙贝母药材粉末(过四号
筛)2g , 精密称定 , 置烧瓶中 , 加浓氨试液 4mL 浸
润 1h , 精密加入三氯甲烷-甲醇(4 ∶1)混合溶液
40mL , 称定重量 , 混匀 , 置 80℃水浴中加热回流
2h , 放冷 , 再称定重量 , 加上述混合溶液补足减失
的重量 , 滤过。精密量取续滤液 10mL , 置蒸发皿
中蒸干 , 残渣加甲醇溶解并转移至 2mL 容量瓶中 ,
加甲醇至刻度 , 摇匀 , 即得。
2.2.4测定法 　分别精密吸取对照品溶液 10 ,
20μL , 供试品溶液 10μL , 注入液相色谱仪 , 测定 ,
用外标两点法对数方程计算 , 即得。高效液相测定
图谱见图 2 ～ 3。
图 2　贝母素甲对照品溶液 HPLC图
图 3　浙贝母药材供试品溶液 HPLC图
2.2.5线性关系考察 　精密称取贝母素甲对照品适
量 , 加甲醇制成含贝母素甲 1.0mg·mL-1的溶液 ,
再分别稀释制得浓度为 0.02 , 0.05 , 0.10 , 0.20 ,
0.40 , 0.80mg·mL-1的对照品溶液 。分别精密吸取
上述 7种对照品溶液 20μL , 注入液相色谱仪 , 记录
峰面积。以峰面积的自然对数值为纵坐标 , 贝母素
甲进样量的自然对数值为横坐标 , 绘制标准曲线 ,
进行回归分析 , 得回归方程:Y =1.241 0X +
6.004 , r=0.999 96。结果 表明 , 贝 母素甲在
0.40 ～ 20.00μg 线性关系良好。结果见图 4。
图 4　高效液相色谱法测贝母素甲标准曲线
2.2.6精密度试验　取浓度为 0.20mg·mL-1的对照
品溶液 , 照 2.2 中的色谱条件和方法 , 重复进样 6
针 , 分别记录峰面积 , 取其自然对数 , RSD 为
0.07%。结果表明 , 仪器精密度良好。
2.2.7重复性试验 　取 2.1.1 中同批浙贝母药材 ,
分别按 2.2中的方法进平行制备 6 个供试品溶液 ,
用高效液相色谱方法测定 , 计算其含量 , RSD 为
2.18%, 结果表明 , 样品测定重复性良好。
2.2.8稳定性试验　取 2.2.3 中 1 个供试品溶液 ,
分别于 0 , 2 , 4 , 8 , 12 , 24h时进样 , 记录峰面积 ,
计算其含量 , RSD为 2.18%。结果表明 , 供试品溶
液在 24h内基本稳定。
2.2.9加样回收率试验　取与上述 2.1.1中同批浙
贝母药材 1.0g , 加入贝母素甲对照品溶液适量(含
贝母素甲0.40mg), 分别 2.2 中的方法制备加样供
试品溶液 , 每种方法平行制备 6个供试品溶液 , 测
定结果见表 2。
表 2　高效液相色谱法测定浙贝母中贝母素
甲含量加样回收率结果
编号 加入量/
mg
测得量/
mg
测定结果/
%
平均回收率/
% RSD/ %
1 0.40 0.401 100.2 99.8 1.24
2 0.40 0.398 99.6
3 0.40 0.395 98.7
4 0.40 0.406 101.4
5 0.40 0.396 99.1
6 0.40 0.403 100.7
2.3 不同方法 10批药材测定结果比较
取 10个批号的浙贝母药材 , 分别按 2.1及 2.2中的
方法进行样品测定 , 测定结果见表 3 。
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表 3　不同方法 10 批药材测定结果比较
/mg·g-1
编号 贝母素甲含量薄层色谱扫描法 高效液相色谱法 结果差异
1 0.71 0.83 0.12
2 1.15 1.37 0.22
3 0.85 0.94 0.09
4 0.92 1.08 0.16
5 1.07 1.21 0.14
6 1.22 1.43 0.21
7 0.87 1.02 0.15
8 1.13 1.25 0.12
9 0.77 0.92 0.15
10 0.96 1.14 0.18
2.4 结果
从上述研究结果来看 , 高效液相色谱法从测定
的精密性 、结果的准确性方面均比薄层色谱扫描法
好 , 薄层扫描测定结果比正确值偏低。
3　讨论
采用薄层色谱扫描法测定浙贝母药材中贝母素
甲的含量 , 操作繁琐 , 外界因素对测定结果影响较
大 , 特别是显色时间方面难把握 , 重现性不理想。
所以采用 2005 年版药典方法简便 、 快速 、 重现性
好 , 用以控制浙贝母的质量更为可靠。
研究表明采用高效液相色谱法测定时供试品溶
液的处理是关键 , 操作过程中溶剂易挥发 , 在处理
过程中易造成系统误差 , 因此在操作过程中应注意
供试品溶液处理的平行性 。
在计算浙贝母中贝母素甲的含量时 , 采用干燥
品计 , 测定不同批药材之间的水分基本差异较小 ,
但不同批次之间贝母素甲的含量差异较大。
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[ 4] 国家药典委员会.中国药典(一部)[ S] , 2005:附录Ⅵ B.
(收稿日期　2008-08-27)
A Comparison of Various Methods in Determination of Peimine in the Bulbus Frit il lariae Thunbergii
Sun Guoying , Yin Milai , Li Qiuyi , Zhang Chunli , Huang Chao
(S inopharmtcm Co.Ltd., S henZhen , GuangDong 518029 , China)
[ Abstract] Objective:To compare the difference of Peimine content in the Bulbus Fritillariae Thunbergii by HPLC and
TLC-scanning respectively.Methods:To determine the Peimine content in the Bulbus Fritillariae Thunbergii by HPLC and TLC-
scanning respectively.To compare the precision and accuracy of the two methods and the diversity o f Peimine s content in different
ba tches o f medicinal materials.Results:HPLC method are be tte r than TLC-scanning.And the Peimine content is also higher.Con-
clusion:HPLC can control the quality o f sample better.
[ Key Words] Bulbus Fri ti l lariae Thunbergi i;Peimine;HPLC;T LC-scanning
(上接第 10 页)
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(收稿日期　2007-10-24)
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