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栅藻LX1在水产养殖废水中的生长、脱氮除磷和油脂积累特性



全 文 :第 33 卷第 6 期
2012 年 6 月
环 境 科 学
ENVIRONMENTAL SCIENCE
Vol. 33,No. 6
Jun.,2012
栅藻 LX1 在水产养殖废水中的生长、脱氮除磷和油脂
积累特性
马红芳1,2,李鑫2,胡洪营2,3* ,于茵2,巫寅虎2
(1. 华侨大学土木工程学院,厦门 361021;2. 清华大学环境学院,北京 100084;3. 清华大学深圳研究生院,深圳
518055)
摘要:利用高含油脂微藻处理废水,可以实现废水处理与生物柴油生产的耦合,已成为废水处理领域新的研究方向.研究了 1
株高含油脂的淡水栅藻 LX1(Scenedesmus sp. LX1)在水产养殖废水中的生长、脱氮除磷和油脂积累特性.结果表明,栅藻 LXl
在该废水中的内禀生长速率、最大种群密度和最大种群生物量增长速率分别为 0. 44 d -1、7. 46 × 106 个·mL -1和 0. 82 × 106
个·(mL·d)- 1 .培养至稳定期后,栅藻 LXl对废水中的氨氮、亚硝态氮、硝态氮和磷的去除率分别为 95. 5%、96. 3%、85. 8%和
98. 8%;其生物量干重为 0. 38 g·L -1,单位藻细胞油脂含量高达 31. 6% . 因此,栅藻 LXl在水产养殖废水的净化和资源化方面
具有较大优势,适于作为耦合工艺的优选藻种.
关键词:栅藻 LX1;水产养殖废水;生长特性;脱氮除磷;油脂含量
中图分类号:X714 文献标识码:A 文章编号:0250-3301(2012)06-1891-06
收稿日期:2011-08-10;修订日期:2011-10-11
基金项目:国家杰出青年科学基金项目(50825801) ;华侨大学侨办
科研基金项目(10QZR08)
作者简介:马红芳(1969 ~) ,女,硕士,副教授,主要研究方向为水污
染控制,E-mail:hf_ma2003@ yahoo. com. cn
* 通讯联系人,E-mail:hyhu@ tsinghua. edu. cn
Growth, Removal of Nitrogen and Phosphorus, and Lipid Accumulation
Property of Scenedesmus sp. LX1 in Aquaculture Wastewater
MA Hong-fang1,2,LI Xin2,HU Hong-ying2,3,YU Yin2,WU Yin-hu2
(1. College of Civil Engineering,Huaqiao University,Xiamen 361021,China;2. School of Environment,Tsinghua University,Beijing
100084,China;3. Graduate School at Shenzhen,Tsinghua University,Shenzhen 518055,China)
Abstract:Treating wastewater by high-lipid-content microalgae,which can couple with wastewater treatment and biodiesel production,
has become a new research direction in the wastewater treatment field. A high-lipid-content freshwater microalgae,Scenedesmus sp.
LX1 was studied concerning its growth,removal efficiencies of nitrogen and phosphorus,and lipid accumulation property while growing
in aquaculture wastewater. Results showed that the specific growth rate,maximum population density and maximum population growth
rate of Scenedesmus sp. LX1 were 0. 44 d -1,7. 46 × 106 cells·mL -1 and 0. 82 × 106 cells·(mL·d)- 1,respectively. At stationary phase
of training,removal efficiencies of ammonia,nitrite,nitrate and phosphorus by Scenedesmus sp. LX1 were 95. 5%,96. 3%,85. 8%
and 98. 8%,respectively. Its biomass[dry weight]was 0. 38 g·L -1,algae lipid content was up to 31. 6% . In general,Scenedesmus
sp. LX1 has larger advantage in aquaculture wastewater depuration and resource utilization respect,and it can be used as the preferred
algae species for coupling process.
Key words:Scenedesmus sp. LX1;aquaculture wastewater;growth property;removal of nitrogen and phosphorus;lipid content
我国是水产养殖大国,产量多年居世界首位.高
密度的水产养殖方式满足了人们对水产品不断增长
的需求,但产生的富含氮、磷污染物的养殖废水却逐
渐成为新的污染源[1 ~ 3]. 基于水资源短缺和环境污
染日趋严重的双重原因,养殖废水的净化处理和资
源化利用受到了广泛关注.目前,国内对水产养殖废
水的净化和回用尚处于起步阶段,应用较多的是以
生物膜法为主体的传统污水处理工艺[4 ~ 6]. 虽然该
类传统工艺能有效地去除悬浮物和有机物,但仍存
在处理成本高、氮化合物去除效果有限、除磷率很
低、有污泥产生等诸多不足[7 ~ 9].因此,寻求高效、低
成本、环境友好的水产养殖废水处理技术具有重要
的现实意义.
微藻具有低成本高效净化废水的潜能,也是制
备生物柴油的理想原料[10]. 因此,在生活污水及水
产养殖废水的处理[11 ~ 15] 和生物柴油的生产
中[16,17],微藻技术受到了越来越多的关注.然而,在
利用微藻处理水产养殖废水的已有研究中,未充分
考虑收获后藻细胞的利用价值,使净化系统的经济
性和环境效益受到抵减. 而微藻生物柴油的研究也
多是基于利用营养液培养藻细胞的单一系统,存在
着高成本、浪费淡水资源等不足[18].胡洪营等[19]提
DOI:10.13227/j.hjkx.2012.06.011
环 境 科 学 33 卷
出了将微藻脱氮除磷与高价值生物质生产耦合的理
念,以污水为基质培养微藻,在净化水质的同时,可
获得高价值的藻细胞生物质用以生产生物柴油,从
而克服了单一系统的局限性. 根据耦合系统对藻种
筛选提出的更高要求[18,19],Li 等[20]分离出 1 株淡
水栅藻 LX1(Scenedesmus sp. LX1).本研究分析了栅
藻 LX1 在水产养殖废水中的生长、脱氮除磷特性及
油脂积累特性,以考察其在水产养殖废水净化和能
源资源生产耦合中的应用潜力.
1 材料与方法
1. 1 试验材料
1. 1. 1 试验废水
试验废水采自北京市密云县某养鱼场换排废
水,经 0. 45 μm 滤膜过滤细菌、藻类和其他悬浮固
体物后使用,主要水质如表 1 所示.
表 1 试验废水及水质
Table 1 Wastewater samples and related water quality in this study
NH +4 -N /mg·L -1 NO -2 -N /mg·L -1 NO -3 -N /mg·L -1 PO3 -4 -P /mg·L -1 COD /mg·L -1 pH
5. 75 ± 0. 09 0. 63 ± 0. 01 20. 15 ± 0. 30 2. 86 ± 0. 08 26 ± 1. 03 7. 76 ± 0. 19
1. 1. 2 试验藻种
研究用的栅藻 LXl藻种由清华大学环境学院环
境生物研究所分离获得. 藻种保存于稀释 50%的
BGl1 培养基中.接种前将保存的藻种转移到 250 mL
锥形瓶(内有 100 mL 的 mBGl1 液体培养基[21],其
中 NaNO3 91. 1 mg·L
-1,K2HPO4·3H2O 11. 0 mg·L
-1)
进行扩大培养,置于温度为 25℃,光照强度2 000 lx,
相对湿度 75%,光暗比 14 h∶ 10 h 的人工气候箱中
培养使之处于对数增长期.
1. 2 试验方法
1. 2. 1 藻种接种及培养
向 500 mL锥形瓶中加入 200 mL 废水. 取 5. 0
mL试验藻种接种至废水中,接种藻液密度为 2. 3 ×
105 个·mL -1,放入人工气候箱培养.培养条件同上,
每日人工摇动数次,保证微藻正常生长.试验设 2 个
平行样.
1. 2. 2 藻细胞计数
采用血球计数板计数藻细胞数目,然后换算出
培养液中的藻细胞密度.
1. 2. 3 藻细胞总油脂含量测定
取 40 mL 藻液入 50 mL 离心管,在 12 000
r·min -1条件下离心 15 min,弃去上清液,将藻细胞
和部分残留上清液转至 10 mL 离心管,继续在
12 000 r·min -1条件下离心 15 min得到浓缩样品,然
后按照文献[22]中的有机溶剂萃取法步骤测定.
1. 2. 4 藻细胞干重测定
取适量藻液,用经过烘干的 0. 45 μm 滤膜过
滤,将带有藻体的滤膜放置到烘箱中,115℃条件下
烘干 24 h,称取滤膜前后质量变化,即藻细胞干重.
1. 2. 5 水质指标测定
用 0. 45 μm 滤膜过滤水样,然后测定滤液中
NH +4 -N、NO

2 -N、NO

3 -N、PO
3 -
4 -P、pH 和 COD 值. 水
质指标测定均采用国家环境保护总局颁布的标准方
法[23],NH +4 -N采用纳氏试剂光度法,NO

2 -N采用 N-
(1-萘基)-乙二胺光度法,NO -3 -N采用紫外分光光度
法,PO3 -4 -P采用钼锑抗分光光度法,pH 测定采用梅
特勒 SG2 型 pH计,COD采用重铬酸钾法.
1. 3 藻生长特性分析
有限环境下,种群的生物量增长具密度制约性,
Logistic模型是描述该规律的经典模型[22].
N = K
1 + ea-rt
(1)
ln K
N -( )1 = a - rt (2)
dN
dt = rN 1 -
N( )K = rN K - N( )K (3)
式中,t 为培养时间(d) ;K 为最大种群密度
(个·mL -1) ;N为 t时刻的种群密度(个·mL -1) ;a
为常数,表示曲线对原点的相对位置;r为种群的内
禀生长速率(d -1) ,指单个个体潜在的最大增长速
率.式(1)表示藻种群生物量随时间的变化;式(2)
是式(1)的线性表达式;式(3)表示藻生物量的增
长速率随藻密度的变化,当藻密度为最大密度一半
时,生物量的增长速率最大,即 Rmax = rK /4.
每隔一定的时间,测定藻细胞数作为藻的生物
量 N,利用式(2)对数据拟合,求得种群的内禀生长
速率 r,并按照式(3)计算不同时间的藻生物量增长
速率
dN
dt,绘制藻生物量和藻生物量增长速率随时间
的变化曲线.
2 结果与分析
2. 1 栅藻 LXl在水产养殖废水中的生长特性
2981
6 期 马红芳等:栅藻 LX1 在水产养殖废水中的生长、脱氮除磷和油脂积累特性
藻生物量和藻生物量增长速率随时间的变化曲
线如图 1 所示. 由图 1 可知,栅藻 LXl 在培养初
图 1 栅藻 LXl在废水中的生长特性
Fig. 1 Growth property of Scenedesmus sp. LX1 in wastewater
期藻细胞增值较慢,一方面是因为藻细胞基数较小,
另一方面可能由于栅藻对水产养殖废水水质有个适
应过程.随着培养时间的进行,藻生物量增长速率逐
渐增大,到第 8 d左右达到最大值,此后生长速率呈
现下降趋势.数据拟合得到的试验水质条件下栅藻
LXl的相关生长模型参数如表 2 所示.
从表 2 可看出,栅藻 LXl 在水产养殖废水中的
种群内禀生长速率为 0. 44 d -1,培养至稳定期时,藻
生长达到的最大种群密度为 7. 46 × 106个·mL -1,最
大 种 群 生 物 量 增 长 速 率 为 0. 82 × 106
个·(mL·d)- 1 .与模拟城市污水二级出水培养体系
相比,生长参数基本处于或接近该范围,与稀释50%
的BG11 培养基条件相比,尽管该水产养殖废
水的营养含量较低,但生长参数仍处于同一数量级,
表 2 栅藻 LXl在水产养殖废水及其它水质中的生长模型参数
Table 2 Growth parameters of Scenedesmus sp. LX1 in aquaculture wastewater and other water quality
培养体系水质
种群内禀生长速率
/d - 1
最大种群密度 K × 106
/个·mL -1
最大生物量增长速率 × 106
/个·(mL·d)- 1
文献
水产养殖废水 0. 44 ± 0. 05 7. 46 ± 0. 40 0. 82 ± 0. 19 本研究
模拟城市污水二级出水 0. 42 ~ 0. 43 7. 72 ~ 12. 6 0. 83 ~ 1. 34 [21]
稀释 50%的 BGl1 培养基 0. 38 12. 0 1. 1 [22]
说明栅藻 LXl在水产养殖废水中也能较好生长.
2. 2 栅藻 LXl对废水中氮磷的去除特性
2. 2. 1 氮的去除特性
栅藻 LX1 在水产养殖废水的培养过程中,不同
形态氮的浓度变化如图 2 所示,培养 16 d 后的去除
率如表 3 所示.
图 2 栅藻 LXl对废水中不同形态氮的去除特性
Fig. 2 Removal property of different nitrogen in wastewater
by Scenedesmus sp. LX1
表 3 稳定期栅藻 LXl对废水中不同形态氮的去除率 /%
Table 3 Removal efficiency of ammonia,nitrite,nitrate by
Scenedesmus sp. LX1 at stationary phase of training /%
氨氮 亚硝态氮 硝态氮 总无机氮
95. 5 96. 3 85. 8 88. 0
从图 2 可以看出,氨氮、亚硝态氮、硝态氮的含
量均呈下降趋势,说明这 3 种形态的氮都可作为栅
藻 LX1 的氮源,但是其下降表现出不同的变化趋
势.前 4 d氨氮降解最快,由最初的 5. 75 mg·L -1降
到第 4 d的 0. 21 mg·L -1,去除率为 96. 4%,而亚硝
态氮和硝态氮的含量变化不明显. 第 4 ~ 8 d 期间,
硝态氮的降解速度明显加快,至第 8 d 时含量降为
9. 56 mg·L -1,去除率为 52. 6%,亚硝态氮相对而言
变化较小.从第 8 d开始一直到培养结束,氨氮含量
变化不明显,而硝态和亚硝态氮却均有较高的去除.
另外,培养至第 1 d 时,亚硝态氮的含量明显升高,
由最初的 0. 63 mg·L -1升高到 1. 90 mg·L -1,之后逐
渐下降,培养至第 12 d 左右,水中亚硝态氮含量才
开始低于初值.
由表 3 可见,尽管变化趋势不同,但栅藻 LX1
对不同形态的氮都有较高的去除率.培养至 16 d 稳
定期时,对氨氮、亚硝态氮和硝态氮的去除率分别为
95. 5%、96. 3% 和 85. 8%,浓度分别降到 0. 16、
0. 07 和 2. 86 mg·L -1 .总无机氮也有 88. 0%的去除
率,浓度由最初的 26. 53 mg·L -1降为 3. 19 mg·L -1 .
2. 2. 2 磷的去除特性
栅藻 LX1 对废水中溶解性磷的去除效果见
图 3.
从图 3 可以看出,在培养前期栅藻 LX1 对溶解
磷的去除速率很快,第 5 d 开始,当磷降低到 0. 5
3981
环 境 科 学 33 卷
图 3 栅藻 LXl对废水中溶解性磷的去除特性
Fig. 3 Removal property of dissolving phosphate in
wastewater by Scenedesmus sp. LX1
mg·L -1以下时,磷的去除速率明显降低. 试验至第
16 d 时,废水中的磷降至 0. 03 mg·L -1,去除率为
98. 8% .与李鑫等[21]和 Li 等[24,25]研究结果类似,
LX1 对废水中的磷有较好的去除效果.
要使废水处理和能源资源生产有效耦合,单有
高的去除率还不够,能以废水为营养源获得性能优
越的产油能源微藻是从事耦合基础研究和规模化生
产的关键.为此,本研究在考察栅藻 LXl生长和氮磷
去除特性的同时还进行了其油脂生产能力的分析.
2. 3 栅藻 LXl的油脂生产能力
微藻的油脂生产能力可用微藻油脂生成总量表
征.而微藻油脂生成总量是由藻细胞生物量和单位
藻细胞的油脂含量决定的[26],即微藻油脂生成总量
=藻细胞生物量 ×单位藻细胞油脂含量.因此,藻生
物量的积累量和单位藻细胞的油脂含量是体现产油
能源微藻应用价值的 2 个重要指标.
为了解栅藻 LXl在净化水产养殖废水时的油脂
生产能力,在培养 18 d 后,测定了藻生物量干重和
油脂总产量,分别为 0. 38 g·L -1和 0. 12 g·L -1,由此
计算出单位藻细胞的油脂含量为 31. 6% .一般微藻
在培养过程中藻细胞的典型生物量(干质量)范围
为 0. 3 ~ 0. 5 g·L -1[18],常见的高含油脂藻种的油脂
含量普遍处于 20% ~ 50%的范围,栅藻 LXl 在生活
污水二级处理出水中生长时的油脂含量为 33%及
以上[19,20,27].可以看出,栅藻 LXl在净化水产养殖废
水时,藻生物量的积累量和单位藻细胞的油脂含量
均处于较高水平,具备能源资源生产潜力.
3 讨论
3. 1 栅藻 LXl对不同形态氮的去除特性
栅藻 LX1 在净化水产养殖废水时,3 种形态氮
的去除有明显的先后特性. 氨氮的含量优先快速下
降,其次为硝态氮,最后是亚硝态氮.分析原因,一方
面可能是栅藻 LX1 对 3 种形态氮的吸收有选择性.
藻细胞优先利用水中的氨氮和其他还原态氮,当氨
氮浓度很低时才吸收利用水中的硝态氮[28 ~ 30].另一
方面,藻类光合作用产生氧气,在亚硝化菌和硝化菌
的作用下会促进氨氮转化为亚硝态氮和硝态氮,导
致培养初期氨氮含量的快速减少. 尽管试验所用废
水经过 0. 45 μm滤膜过滤,但培养体系仍存在有亚
硝化菌和硝化菌的可能. 在本研究培养条件下,3
种形态氮之间的相互转化对其去除有无显著影响,
尚待进一步试验验证和探讨.
本研究中,亚硝态氮的含量在第 1 d 明显升高,
可能是栅藻对硝态氮的利用形式造成的.硝态氮在进
入藻体后,先由硝酸还原酶还原成亚硝态氮,然后再
通过亚硝酸还原酶和谷氨酸合成酶最后合成有机物
质,细胞内的一些亚硝态氮会随着藻的生长释放到藻
体外.同时,培养液中的亚硝态氮也会被藻利用进入
藻体细胞[31].硝酸还原酶是一种底物诱导酶,当培养
液中亚硝态氮浓度较低,而硝态氮浓度相对较高时,
可诱导藻的硝酸还原酶活性增加[32],产生更多的细
胞内亚硝态氮进入培养液中,使培养液中的亚硝态氮
含量上升.只有当水中的硝态氮浓度较低时,藻细胞
才开始大量利用亚硝态氮.本试验从第 8 d 开始,随
着硝态氮含量的下降,水中亚硝态氮的去除速率明显
加快,至第 12 d左右时低于废水初值.
3. 2 栅藻 LXl处理水产养殖废水的优势
传统的污水处理工艺净化水产养殖废水存在众
多不足.胡海燕[7]认为,采用污水处理工艺和设备
处理水产养殖废水,没有针对其废水特点,将很多的
能量和材料浪费在水体充氧上,导致处理成本偏高.
张寒冰等[5]研究也表明,没有曝气条件下生物膜法
对氨氮、亚硝酸氮的去除率仅为 35%和 76% . 方圣
琼[8]和何洁[9]等报道了生物滤池会使水中硝酸盐
含量增加,硝酸盐的毒性虽比氨氮和亚硝酸盐低,但
过度积累同样会影响鱼类生长. 许多研究均证明了
传统的生物膜法工艺除磷率很低或无除磷能力,处
理废水进入环境后会造成富营养化现象[4,5,9].
利用微藻净化水产养殖废水具有低成本去除氮
磷的优势.胡海燕[7]研究指出,螺旋藻对水产养殖
废水氨氮的去除效果优于其他所选藻种,适于低氨
氮养殖废水的处理.栗越妍等[12]研究表明蛋白核小
球藻、斜生栅藻、月牙藻和螺旋鱼腥藻均可去除水产
养殖废水中的无机氮和溶解性磷,最大去除率分别
为 51. 9%、60. 9%、43. 3%、30. 2% 和 22. 7%、
4981
6 期 马红芳等:栅藻 LX1 在水产养殖废水中的生长、脱氮除磷和油脂积累特性
76. 1%、54. 6%、49. 5%,各藻种对硝态氮、氨氮和
亚硝态氮的最大去除率分别为 64. 8%、15. 4%和
98. 3% .陈春云等[13]也研究了小球藻对水产养殖废
水中氮磷的去除,氨氮和磷酸盐的去除率分别达到
80%和 85%以上.上述研究虽在水产养殖废水净化
方面取得了一定效果,但均没有对产生的藻体价值
进行资源化研究,而藻体与污泥一样,排入到环境中
易产生二次污染,并没有从根本上消除环境污染,也
折扣了净化系统的经济效益.
本研究中,栅藻 LXl 对水产养殖废水中的氮磷
都有很好的去除效果,氨氮、亚硝态氮、硝态氮和磷
的去 除 率 分 别 为 95. 5%、 96. 3%、 85. 8% 和
98. 8%,与上述处理方法和藻种比较,具有明显的净
化优势.同时,栅藻 LXl 在净化水产养殖废水时,能
以废水为营养源积累较高的生物量和油脂含量,藻
生物量干重和单位藻细胞的油脂含量分别为 0. 38
g·L -1和 31. 6%,具备能源资源生产潜力. 由此可
见,栅藻 LXl适于作为水产养殖废水净化和能源资
源生产耦合工艺的优选藻种,同步实现废水治理和
能源资源的生产.随着水产养殖业的快速集约发展
和能源形势的严峻,栅藻 LXl 处理水产养殖废水具
有重要的现实意义和广阔的应用前景.
4 结论
(1)栅藻 LXl在水产养殖废水中的种群内禀生
长速率为 0. 44 d -1,最大种群密度为 7. 46 × 106
个·mL -1,最大种群生物量增长速率为 0. 82 × 106
个·(mL·d)- 1 .
(2)栅藻 LXl 对水产养殖废水中的氨氮、亚硝
态氮、硝态氮和磷的去除率分别为 95. 5%、96. 3%、
85. 8%和 98. 8%,具有很好的脱氮除磷效果.
(3)栅藻 LX1 净化水产养殖废水时,3 种形态
氮的去除具有明显的顺序性,依次为氨氮、硝态氮、
亚硝态氮.
(4)栅藻 LXl 的生物量干重为 0. 38 g·L -1,藻
细胞油脂含量为 31. 6%,具备能源资源生产潜力.
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《环境科学》多项引证指标名列前茅
2011 年 12 月 2 日,中国科学技术信息研究所在中国科技论文统计结果发布会上公布了 2010 年度中国
科技论文统计结果. 统计结果显示 2010 年度《环境科学》多项引证指标位居环境科学技术、安全科学技术类
科技期刊前列.
综合评价总分 86. 5,排名第一(排名前三名的期刊分别是《环境科学》86. 5,《中国环境科学》77. 9,《环
境科学学报》77. 3).
总被引频次5 197,排名第一(排名前三名的期刊分别是《环境科学》5 197,《环境科学学报》3 914,《农业
环境科学学报》3 700).
影响因子 1. 125,排名第三(排名前三名的期刊分别是《环境科学研究》1. 531,《中国环境科学》1. 457,
《环境科学》1. 125).
综合评价总分是根据中国科技期刊综合评价指标体系,计算多项科学计量指标(总被引频次、影响因
子、他引率、基金论文比、引文率等) ,采用层次分析法确定重要指标的权重,分学科对每种期刊进行综合评
定,计算出每个期刊的综合评价总分.这项指标屏蔽了各个学科之间总体指标背景值的差异,使科技期刊可
以进行跨学科比较.根据发布的统计结果,2010 年度《环境科学》综合评价总分 86. 5,在被统计的 1998 种核
心期刊中名列第 27 位,在被统计的 36 种环境科学技术、安全科学技术类期刊中名列第一.
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