全 文 ：第二军医大学 学报 1夕兴 )年第 n卷第 5期 如9
中国商陆皂试诱生淋巴 因子的能力及其抗肿瘤细胞效应
的研究
徐志工 郑玲莉 杨嗣冲 周正芳 (免疫学教研室 )
提要 采用中国商陆皂贰诱导 3 0例正常人脾细胞 , 发现中国商陆皂贰 不 仅能 乒生 r 干扰 素 (I 1了N甲 ) ,
还能诱生白细胞介素 双 I L -2 )及淋巴毒素 (班 ) 。 实验还证明此含有数种淋 巴 因 一了 f混 台淋叹因 子 . M L f )的
制品 , 对人的 S p C -3 (人肺癌细胞株 ) , H el a 细胞 (人宫颈癌细胞株 ) 、 SM M C产 7 721 ( 气、 万:癌细胞株 )、 J u r k at
及 M of 以细胞 (人 T 淋巴细胞白血病细胞株 )等均有不同程度的细胞毒性作用 , 有兴趣的是 M I F 对人的
正常细胞 (邵 SH 细胞株 )无毒性作用 。
关键词 下一 干扰素 ; 白细胞介素全 淋 巴毒素 ; 混合淋 巴因 子
中国商陆皂贰 (E )S l[] 是中药商陆块根
的提取成分 , 有扶正固本的功效 , 以往的工作
证明, 该成分在体外能刺激人脾淋巴细胞产
生卜干扰素 ( I F N刁 )阴 , 我们设想在人自然
IF N即 ( n H I F N斗 )制品 中是否还存在其他
淋巴因子 , 并对 n IH F N即 的抗人肿 瘤 细
胞作用进行了研究 。
1 材料和方法
1
.
1 材料 人脾细胞 : 手术切除的正常人
外伤脾分离获得 ; 中国商陆 : 本校药学院植
化教研室提供 ; 标准重组白介素 2 ( rI L一 2l
日本大坂大学吉崎教授赠送 ; 四甲基偶氮
哇盐 (M T T ) : lF uk a A G 瑞士产品 ; 检测细
胞: 人羊膜细胞 (W IS H株 ) 、 (汀L L 一2( 检测
IL 一 的 IL一依赖株) 、 L斌 检测 L T 的小
鼠成纤维细胞) ; 肿瘤细胞株 : SM M C一7 721
(人肝癌细胞株 ) 、 S P C一3( 人肝癌细胞株 ) 、
elH
a 细胞 (人 宫颈癌细胞株 ) 、 Jur k a t 及
M ol t礴细胞株 (人 T 淋 巴细胞性白血病细
胞株)。
LZ 方法
L2
.
1 M L F 的产生 按本室常规方法 田
L2
.
2 IF N习 活性检测 采用微量 细胞病
变抑制法 , 即将待测样 品从 1 :l o 开始倍
比稀释 , 加人 96 孔微量 细胞培养板中 , 每
个稀释度 3个复孔 , 每孔再 加传代 W I SH
细胞 , 置 37 ℃ , 5% C O : 孵箱中培养 2 4 h
以水泡性 口炎病毒 (V S劝攻击 , 设细胞对照
和病毒对照 , 待病毒对照孔 的细胞病变达
书+ 一 + 抖+ 时记录结果 。 凡能保护 50%
以上 W』SH 细胞不出现细胞致病效应的样
品最高稀释度的倒数 , 即为 IF N协, 的活性
单位 。
L 2
.
3 IL 一2 的 活 性 检测 按 M os r n a n
法 团 稍加改 良 。 将待测样品和标准 rI L 空
作倍比稀释 , 加 人 96 孔细胞培养板 中 , 每
孔 10 川. 再加 C l , L L一细胞悬喇 l x 105 /
而 ) 10 川 /孔 , 设细胞对照 , 每个稀释度 3
个复孔 , 置 5% C O : 孵箱 , 37℃培养 30一
32 h 吸去 上清 10 川, 每孔加 M丁 r 溶液
50 川( 1 m g /而) , 于振荡器上振荡 1而 n,
再培养 -2 3 h离心 5而 (n 2仪旧 r/而 )n 吸
去上清液 , 每孔加酸化 异丙醇 10 风 采用
酶联检测仪测 O D 值 , 通过与标 准 rI L一2
的比较计算出样品中 I L一 的活性单位 。
L .2 4 L T 活 性检测 待测样品连续倍比
稀释 , 加人 9 6 孔细胞培养板中 , 再加 玩刀
4 10
第二 军医大学学报 1 9剑 )年第 n卷第 5期
细胞悬液 (Zx r o乍 d ), 设细胞对照 , 置 5%
C q 温箱 , 37 ℃培养 4 8 玩弃上清 , 采用结
晶紫染料摄人法染色 , 待干后每孔加 10 川
3 % 醋酸 , 充分振荡置酶联检测仪上测 O D
值 , 根据 O D 值与标本稀释度的相关性 , 按
LT 活性单位的定义 (抑制或杀伤 50% 靶
细胞的 L T 的稀释度的倒数 )计算 L T 的活
性单位 。
样品经 p H 2 16 玩 5此 30 而 n 处理后
再测 IF N即、 I L一2及 L T 的活性单位 。
1
.
2
.
5 M L F 制品对肿瘤细胞毒性效应 的
测定 基本方法与 L T 活性检测相 同 。 样
品以 1 : 2 开始倍比稀释 , 加人 % 孔细胞培
养板中(每个稀释度 3个复孔 ) , 再分别加人
各种肿瘤细胞悬液 (细胞数 2 x 1O5 /时 ) , 设
细胞对 照 , 置 5% C q 温箱 中 37 ℃培养
48 一 72 h 。 悬浮生长的肿瘤细胞以台盼蓝
染色计数着色细胞 (死细胞 )的百分率 。 贴
壁生长的肿瘤细胞在倒置显微镜下观察细
胞病变 , 以破坏 50 % 以上肿瘤细胞的样品
最高稀释度为细胞毒效应强度 。
样品经 PH 2 16 玩 5北 30 而 n 处理后 ,
再分别测定对各种肿瘤细胞的毒性效应 。
经 PH 2 16 h 及 56℃ 3 0而 n 处理后 IF N 一
下活性全部丧失 , IL一 2 活性无影响 (p H Z及
56 ℃处理 尸> .0 0孰 L T 的 活性部分丧失
(P < .0 0 5) (表 1) 。 中国商陆皂贰诱生淋巴
因子的能力个体差异很大 , 其范围为 I F N 一
7 l a X〕一 6 《 X〕U /间 ; IL佗卜 16 . 8 U /d ;
L T S一 12 8 U /间 。
2
.
2 M L F 制品对人 的各种肿瘤细胞的毒
性效应 人的各种肿瘤细胞对 M L F 制品
的敏感性不同 。 按能破坏 50% 以上肿瘤细
胞的 M L F 制 品最高稀释倍数计算 , 人肺
癌细胞 31 . 3 倍 , 人肝癌细胞 19 . 86 倍 ; H d a
细胞 2 7 . 22 倍 。 M L F 制品经 PH Z 16 h 及
5 6℃ 30 而 n 处理后 , 对肿瘤细胞的毒性效
应均显著降低 (附图) 。 对 M of t礴 和 Jur k a t
细胞的毒性效应 分别 为 47% 与 巧 . 8%
(表 2 ) 。 M L F 制品对正常细胞一笼羊膜细胞
(iw SH株 )无毒性作用 (附图)
。
表 2 混合淋巴因子制品对不贴壁肿瘤细胞的
细胞毒性
T a b
.
2 C y t仗。
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2
.
1 M L F 制品中各种淋 巴因子的活性及
其对 p H 和温度的敏感性 M L F 制品中
含 I F N即 32 69 . 6士 16 34 . 4 U / lm : I L佗
64
.
8士 40
.
8 U /而 ; L T 54 . 4土科 . 6 U / d .
又:=f SD 4 7刀士 5 3 巧 . 8 士 1. 3
表 1 中国商陆皂贰诱生的、几 F 的活性及其对酸和温度的敏感性
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第二军医大学学报 19男) 年第 n 卷第 5 期
4 11
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5 6 ℃ 3 0 m in
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附图 中国商陆诱生的混合淋巴因子的抗肿瘤
细胞活性
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.
A刀 t i t. 川旧 r aCt iv yt of 所 i回理 ign 加1 万
3 讨 论
3
.
1 中国商陆皂贰是一种 T 淋巴细胞分裂
原。 M o s m a n 报道 [’1 小 鼠 IF N 即 、 I L -2
及 L T 是由 T H I (T ,辅助细胞 )合成的 。 中
国商陆皂贰能诱生 IF N协 ,、 IL -2 及 L T ,
据此推测 , 中国商陆皂贰是一种 T 淋巴细
胞分裂原 。
3
.
2 小剂量M L F制品 有协同撇中瘤作用 。
IF N 即 、 I L-2 及 L T 等淋巴因子具有多种
生物学活性 , 特别是它们的抗肿瘤作用 , 日
益广泛地受到重视 , 许多学者提出小 剂 量
淋巴因子联合应用 , 不仅可提高抗肿 瘤 效
果, 而且副作用小 。 吨ha 报道 阎 低 剂量
IF N协 )和 I L-2 合用 , 有显著的抗肿瘤活
性, 认为 IF N协, 和 I L-2 在体内对 N K 细
胞活性增强有相加作用 。 T s uj imo ot 报道 61[
IF N勺 , 和 L T 合用 , 能显 著增强 L T 抗肿
瘤效果 。 M of t礴 和 H d a 细胞对 L T 有抗
性或耐受性 , 若将 I F N勺与 L T 合用 , 可提
高敏感性 。 我们的实验结果得 到 了证实 ,
M L F 制品稀释 27 . 2 2倍仍能杀伤 50% 以
上的 H el a 细胞 , 未稀释 的 M L F 制品平均
可杀伤 4 7% 的 M o lt礴 细胞 (表 2) . M L F
制品经 PH 2 16 h 及 5 6℃ 30 而 n 处理后 ,
IF N即 失去 活性 , 抗肿瘤活 性明显降低 。
由此推测 I F N协,能诱导 L T 和 I L一 受体
的表达 , 从而增强 了 M L F 的抗肿瘤效应 。
3
.
3 M L F 比纯化的单一淋巴因子抗肿瘤
作用强 。 国内外均有文献报道 以幻粗制的
人 IF N即 (即 M L F 制品或 n班 F N 即 )抑
制 肿瘤细 胞 生 长 的 作 用 比重粗 IF N即
( lr F N即 ) 大 1-5 18 倍 , rI F N即的 抗 肿 瘤
作用又 比 r 1F N -[ 以 强 5 一 10 倍 , 说明 M L F
制 品抗 肿瘤 作 用 优 于 rI F N即 , 更优于
rI F N -[ :
。 显然 , 这是由于粗制 IF N协,中含有
有 I L一 及 L T 等淋巴因子相互协同作用的
结果 。
I L一 经 56 ℃ 30 而 n 处理后 , 其活性
未降低 (尸 > .0 0 5) , 可能是 56℃ 30 而 n 破坏
了 M L F 中的 I L一 抑制物 , 但对 I L一 的
活性无影响 。
中国商陆皂贰分子量小 , 无抗原性 , 无
副作用 , M L F 制品中测 不出商陆皂贰 。 当
前在高度纯化的基因工程混合淋巴因子尚
不能提供临床应用 的情况下 , 中国商陆皂
贰诱生的 M L F 制品 , 联合化学药物或中
药治疗肿瘤具有较好的临床使用的价值 。
参 考 文 献
1
. 易杨 华 等 。 中 国 商陆有效成份的 研究 . 药 学 学 报
19 ;84 1义1 1 ) : 825 .
2 杨用坤等 . 两种商陆体外诱生免疫干扰索的 作用 . 第
二军医大学学报 19叭 7( 4) : 25 .8
3
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4 1 2
第二军医 人学学报 19 )〕年第 1 卷第 5 期
卵巢癌术后阴道残端复发性癌一例报告
黄鸿英 赵亚南 荆 清 ( 长海医院妇产科 )
余友渔 ( 长海医院放疗科 )
1 临床资料
患者 , 女 , 56 岁 , 已婚 , 工人 , 上海籍 , 因腹胀两个月 于 198 年 1 月 16 日人 院 , 同年 12 月 21 日因
晚期卵巢癌合并腹水行剖腹探查术 . 术中见腹腔右侧卵巢癌肿约 12 c m x 12 c m x 12 c m 大小 , 圆球形 , 并
见广泛浸润转移 , 多个脏器及腹膜 、 子宫直肠窝等均见有灰白色米粒至核桃大小不等结节多个 . 大网膜与
胃粘成团块 , 约 7 cm x 6 c m x 3 `m , 呈手掌状 . 肝脏可触及多个结节
. 即行全子宫及双侧附件和 癌肿大部
切除术 . 术后病理 : 右侧卵巢泵液性乳头状囊腺癌 1 级 、 左侧卵巢单房性粘液性囊腺瘤 、 肠系膜淋巴结结核
钙化 。 术前 1周行腹腔穿刺 , 抽出腹水后 , 注人顺铂 、 乡 f u 及环磷酞胺进行化疗一次 . 术中腹腔化疗一次,
给予顺铂 40 gm . 术后继续给予丝裂霉素
、
5-F
u 及环磷酞胺行腹腔化疗二次 , 又给予更生霉素 、 5一F u 及
环磷酸胺全身化疗二次 . 198 9年 4 月 B 超盆腔探查见 4 . 2 cm x 3
.
o cm
x l
.
7 c m 低回声团块 . 提示阴道残
端有实质性肿块 。 妇科检查 : 阴道残端有一 Z cm x 3 c m 菜花样组织 , 质脆 , 易出血 , 盆底组织增厚
. 即行活
检 病理报告为阴道残端乳头状腺癌 (来 自卵巢 ) . 于 份89 年 4 月 18 日再次人院 。 经给予三苯氧胺 、 更生
霉素 、 s f u 以及环磷酞胺全身化疗和 阴道残端癌块局部给予消瘤芥 、 更生霉素及环磷酞胺后 , 肿块未见
缩小反有增大趋势 , 于 5 月 24 日在局麻下行双侧骼内动脉插管 , 注人更生霉素 3 0 咫、 5一f u sX( ) m g 及丝
裂霉素 6 mg ,仃动脉内化疗
.
6 月 5 日始进行直线加速器照射 , 用 10 M V X 线盆腔前后相对射野 , 每周 5
认 , 共 照射 2 6次 , 盆腔中线达 5 2田 cG y 。 妇科检查 阴道残端癌块 已 消失 。 为加强疗效 , 又 于 阴道内
用 180 k V X 线照射 6次 , 4 80 cG y 。 7月 27 日 B 超复查盆腔内未见明确肿块
。 妇科检查证实盆腔内及阴
道残端的癌块均消失 。
2 讨 论
晚期卵巢癌的手术治疗 ,术后 5年生存率往往很低 , 但卵巢癌的治疗原则是最大限度地切除肿块 , 争
取切净 ,尽量延长生命 . 对 于晚期腹腔有广泛转移粘连患者 , 术后阴道残端癌块复发的处理更是棘手的
间题 。 若进一 步手术切除 , 吻合 口则难以愈合 , 易造成腹腔液及脏器外漏 , 以致不能站立及行走 , 给患者带
来极大的痛苦 。
本例晚期卵巢癌患者手术后复发阴道残端癌 , 我们给予局部 、 全身化疗的基础上联合应用直线加速器
体外照射 、 深部 X 线阴道内照射及双侧骼内动脉插管化疗 , 使阴道残端复发性癌块得以完全消失 , 疗效明
显 。 因此 , 我们认为对于晚期卵巢癌术后复发阴道残端癌块的患者除了采取局部及全身化疗 的同时 , 再加
以直线加速器体外照射 ,深部 X 线阴道内照射及双侧铭内动脉插管化疗等综合治疗 , 可提高疗效 .
关键词 卵巢癌 ; 阴道残端癌
( 19 89年 9月 27 日收稿 ; 1990 年 5 月 18 日修回 )
* * * * * * * 卒 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 甲 * * * * * * 牙* * * * * 举 * * . * * * * * * 诊* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *
S A渺 民 e t al : S u o以万 s仙 het ar yP of N K才e s is atn t 7 . A没卿 , al 玖 e t 滋 I n et优场加 n s址 P of h u力习 n IFN e
p ul 、 n o n ar y m c at s ast es b y ht e s yn e卿 m of IF N今 下 iw th LT an d m o n co 丫 e c y ot t o范n · J xE p M de
娜 ht T N r 即 d 几刁 in I n K尤 . C滋毗 r R上 5 19 8 ; 48 : 19叭 15女 828 .
2 2撼 8. 刘沪 丽等 。 人 ?一干 扰家与人 犷干扰素的 抗肿瘤 细胞
6 T 5峥。 ot o M , 改 滋 . I F N 护 en han 氏 5 ex p I’es is on of 增殖作 用比较 . 中国免疫学杂志 19 ;89 5( 增刊 ) : .6
喊 l ul ar 了以沈 pot sr for T N F . J lm m皿 01 19 86 ; 136 :
24 L
1 1尧幻 年 1 月 18 日收稿 ; 19以) 年 7 月 25 日修回 )
4 09
第二军医大学学报 1 9男〕年第 n卷第 5期
S t诫 s o enC a稗i bl i ty O fESC ul en tiOS e d (SE )i nI n duC i ng
ki n es an dI ts A n ti tu “ OI r cA ti v i ti es
u X Z h咖雌 et al (D P e a叮” l en to fl加橄碑o nli现声 )
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( 326 .9 6 士 16 .34 4 U / d )
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闭 15 ) .
地 y ” . 八 15 in t e fer r o n 下 ( IFN 即 ) ; ient ir e iuk n一 ( I L-2 ) ; l叨旧 P h o t明 n (LT ) :
而 x ed l加的pho ik en (M工 F )
( O吻 an l 叭 ic le o n P 刃` e 40 9 )
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